1.一種轉(zhuǎn)錄因子HOXB9第27位乙?;稽c的特異性抗體的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:
1)人工合成SEDAPPAKFPSGQYAS序列多肽,并將K位點進行乙?;幚?;
2)利用步驟1)合成的多肽免疫兔獲得多克隆抗血清,酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)測定血清中抗體滴度,并對抗體進行純化處理,即得到所述特異性抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟1)所述的K位點的乙酰化處理使用的乙?;笧镻CAF。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟2)中的免疫兔的具體過程為:分別于初次免疫后再進行三次加強免疫,用250μg 27Ace-HOXB9多肽與等體積的弗氏不完全佐劑混勻,背部皮下多點注射;第三次加強免疫前取耳血,分離血清作為免疫后血清,采用ELISA測定血清中的抗體效價,當抗體滴度達到106數(shù)量級時,頸動脈放血,收集血清,即獲得所述的多克隆抗血清。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟2)中所述的ELISA測定血清中抗體滴度,具體方法為:吸取適量0.1 mol/L,pH 9.5的碳酸緩沖液,稀釋步驟1)所述多肽至5mg/L,每孔50μl加入96孔板,4℃包被過夜;第二天移去包被液,稀釋緩沖液洗3次,每次5min;3%牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA),37℃封閉2 h,依次與梯度稀釋的兔抗血清、辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗兔二抗,37℃分別反應1h;稀釋緩沖液洗3次,每次5min;底物液避光顯色15min后,每孔加入50μl,2mol/L硫酸終止反應,酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測儀讀取490nm吸光度值進行分析。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟2)中所述的抗體純化處理的具體方法為:取Protein A珠子加入兔抗血清2ml中充分混合,室溫孵育2h,PBS洗三次;加入450μl的甘氨酸,靜置2min,洗脫至預先加有50μlTris緩沖液的管中,立即顛倒混勻,重復洗脫5管,即得到所述特異性抗體。
6.一種轉(zhuǎn)錄因子HOXB9第27位乙?;稽c的特異性抗體,其特征在于,所述特異性抗體由如權(quán)利要求1-5所述的制備方法制得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)錄因子HOXB9第27位乙?;稽c的特異性抗體,其特征在于,所述抗體能夠有效判斷包括人食管癌、胃癌、肝癌、腎癌和結(jié)腸癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤的預后。