本發(fā)明涉及卵黃抗體的制備領(lǐng)域，具體涉及一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液及其制備方法。

背景技術(shù)：

卵黃抗體又稱卵黃免疫球蛋白, 在特異性抗原激下由禽類 B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并轉(zhuǎn)移到卵黃中的多克隆抗體。以其性質(zhì)穩(wěn)定、特異性強(qiáng)、制備簡(jiǎn)單、成本低、可規(guī)?；a(chǎn)而倍受關(guān)注。 目前已有大量添加卵黃抗體的產(chǎn)品如發(fā)酵酸奶、功能性食品、衛(wèi)生消毒產(chǎn)品及化妝品等上市銷售。卵黃抗體應(yīng)用于醫(yī)療診斷及治療通過臨床驗(yàn)證也顯示出良好效果。卵黃抗體的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大, 可以作為親和配基, 催化抗體等。卵黃抗體在食品、醫(yī)藥、生物等方面的應(yīng)用越來越廣泛, 其作用機(jī)理逐漸被闡明和完善。 口服卵黃抗體已被證明能有效替代抗生素治療因耶爾森菌、腸毒性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、幽門螺桿菌等感染引起的胃腸道疾病。卵黃抗體可能主要通過以下作用環(huán)節(jié)達(dá)到抗菌的作用：特定病原菌針對(duì)病原菌的菌毛和鞭毛卵黃抗體可黏附于細(xì)菌的菌毛和鞭毛上, 使病原菌不能黏附于腸道黏膜上皮細(xì)胞, 妨礙其運(yùn)動(dòng)、游走; 一部分卵黃抗體在腸道消化酶作用下, 降解為可結(jié)合片段, 被腸道吸收后進(jìn)入血液能與特定病原菌黏附因子結(jié)合, 使病原菌不能黏附易感細(xì)胞而失去致病性。卵黃抗體也顯示較好的抗真菌、抗病毒效果。 白色假絲酵母菌是條件致病真菌, 能夠?qū)е驴谇缓完幍鲤つじ腥尽?抗白色假絲酵母菌卵黃抗體可與白色假絲酵母菌特異性結(jié)合, 抑制其游動(dòng)、生長(zhǎng)和繁殖，阻斷白色假絲酵母菌黏附素與機(jī)體組織、細(xì)胞中的受體結(jié)合，在無血清的環(huán)境中抑制白色假絲酵母菌生物被膜的形成，同時(shí)還能吸引巨噬細(xì)胞, 加強(qiáng)吞噬作用, 消除局部感染, 阻止病原的播散而達(dá)到治療目的。

但是，現(xiàn)有的卵黃抗體溶液的提取方法還需進(jìn)一步提高，隨著生物酶技術(shù)的不斷發(fā)展，如何采用生物酶技術(shù)進(jìn)行高免蛋黃抗體的提取，對(duì)于卵黃抗體溶液的發(fā)展與應(yīng)用具有很重要的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有的技術(shù)問題，提供一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液及其制備方法，以便采用生物酶技術(shù)進(jìn)行高免蛋黃抗體的提取，提高提取效率與精細(xì)度。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液，其特征在于，其是采用生物酶解法對(duì)高免雞蛋的蛋黃進(jìn)行提取制備而成，其中，所述的生物酶解法所添加的酶至少包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，該溶液是先經(jīng)過生物酶解后過濾，再利用乙醇提取得到的高免雞蛋提取卵黃抗體溶液。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，該卵黃抗體溶液是經(jīng)過多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，其包括以下步驟：

（1）選取高免雞蛋，將蛋黃與蛋清進(jìn)行分離；

（2）稀釋：用1:8倍的蒸餾水稀釋高免雞蛋卵黃，并調(diào)節(jié)PH為5.5-6.0；

（3）酶解：將所述步驟（2）稀釋后的蛋黃液中加入卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶，其中，卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶的比例為1:0.8-0.9，且加入后使得卵磷脂酶的濃度為0.08%-0.09%，在溫度為35-45℃下酶解2-4h；

（4）微波處理：用體積濃度為80-85%的乙醇作為溶劑，并采用微波處理，微波的功率為400W，然后將提取液加熱至50℃，用微波處理10min；

（5）離心處理：將微波處理的提取液置于離心機(jī)中，離心3min；

（6）得到粗卵黃提取液：將離心處理后的提取液用普通濾膜進(jìn)行過濾，取濾液：

（7）細(xì)化提取：在所述步驟（6）得到的濾液加入0.5倍體積的乙醇，然后攪拌均勻，之后置于超高壓處理袋中，封口，之后以不同壓力加壓10-15min；

（8）再次離心處理：將所述的步驟（7）中加壓后的溶液置于離心機(jī)中再離心5min；

（9）將所述步驟（8）離心后的溶液利用多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，所述步驟（7）中超高壓力的范圍為350-600Mpa，且以每次增壓50Mpa的方式進(jìn)行不同壓力處理。

進(jìn)一步，作為優(yōu)選，所述步驟（4）中還包括中和調(diào)節(jié)PH的步驟，使得溶液的PH為7.0-7.2。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明采用生物酶解的方法對(duì)高免蛋卵黃抗體進(jìn)行提取，并輔以微波處理，提取效率高，此外，本發(fā)明通過超高壓的處理，能夠進(jìn)一步提高卵黃抗體的提取率，之后，本發(fā)明利用多空纖維超濾膜，可以使得提取的抗體溶液精度更高，更精細(xì)，對(duì)于治療因耶爾森菌、腸毒性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、幽門螺桿菌等感染引起的胃腸道疾病具有很好的作用。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例一

一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液，其是采用生物酶解法對(duì)高免雞蛋的蛋黃進(jìn)行提取制備而成，其中，所述的生物酶解法所添加的酶至少包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶。該溶液是先經(jīng)過生物酶解后過濾，再利用乙醇提取得到的高免雞蛋提取卵黃抗體溶液。該卵黃抗體溶液是經(jīng)過多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

本發(fā)明提供了一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

（1）選取高免雞蛋，將蛋黃與蛋清進(jìn)行分離；

（2）稀釋：用1:8倍的蒸餾水稀釋高免雞蛋卵黃，并調(diào)節(jié)PH為5.7；

（3）酶解：將所述步驟（2）稀釋后的蛋黃液中加入卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶，其中，卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶的比例為1:0.8，且加入后使得卵磷脂酶的濃度為0.08%，在溫度為35℃下酶解4h；

（4）微波處理：用體積濃度為80%的乙醇作為溶劑，并采用微波處理，微波的功率為400W，然后將提取液加熱至50℃，用微波處理10min，微波處理后進(jìn)行中和調(diào)節(jié)PH，使得溶液的PH為7.0；

（5）離心處理：將微波處理的提取液置于離心機(jī)中，離心3min；

（6）得到粗卵黃提取液：將離心處理后的提取液用普通濾膜進(jìn)行過濾，取濾液：

（7）細(xì)化提取：在所述步驟（6）得到的濾液加入0.5倍體積的乙醇，然后攪拌均勻，之后置于超高壓處理袋中，封口，之后以不同壓力加壓10min，超高壓力的范圍為350-600Mpa，且以每次增壓50Mpa的方式進(jìn)行不同壓力處理；

（8）再次離心處理：將所述的步驟（7）中加壓后的溶液置于離心機(jī)中再離心5min；

（9）將所述步驟（8）離心后的溶液利用多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

實(shí)施例二

一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液，其是采用生物酶解法對(duì)高免雞蛋的蛋黃進(jìn)行提取制備而成，其中，所述的生物酶解法所添加的酶至少包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶。該溶液是先經(jīng)過生物酶解后過濾，再利用乙醇提取得到的高免雞蛋提取卵黃抗體溶液。該卵黃抗體溶液是經(jīng)過多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

本發(fā)明提供了一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

（1）選取高免雞蛋，將蛋黃與蛋清進(jìn)行分離；

（2）稀釋：用1:8倍的蒸餾水稀釋高免雞蛋卵黃，并調(diào)節(jié)PH為6.0；

（3）酶解：將所述步驟（2）稀釋后的蛋黃液中加入卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶，其中，卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶的比例為1: 0.9，且加入后使得卵磷脂酶的濃度為0.09%，在溫度為45℃下酶解4h；

（4）微波處理：用體積濃度為85%的乙醇作為溶劑，并采用微波處理，微波的功率為400W，然后將提取液加熱至50℃，用微波處理10min，微波處理后進(jìn)行中和調(diào)節(jié)PH，使得溶液的PH為7.2；

（5）離心處理：將微波處理的提取液置于離心機(jī)中，離心3min；

（6）得到粗卵黃提取液：將離心處理后的提取液用普通濾膜進(jìn)行過濾，取濾液：

（7）細(xì)化提?。涸谒霾襟E（6）得到的濾液加入0.5倍體積的乙醇，然后攪拌均勻，之后置于超高壓處理袋中，封口，之后以不同壓力加壓13min，超高壓力的范圍為350-600Mpa，且以每次增壓50Mpa的方式進(jìn)行不同壓力處理；

（8）再次離心處理：將所述的步驟（7）中加壓后的溶液置于離心機(jī)中再離心5min；

（9）將所述步驟（8）離心后的溶液利用多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

實(shí)施例三

一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液，其是采用生物酶解法對(duì)高免雞蛋的蛋黃進(jìn)行提取制備而成，其中，所述的生物酶解法所添加的酶至少包括酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶。該溶液是先經(jīng)過生物酶解后過濾，再利用乙醇提取得到的高免雞蛋提取卵黃抗體溶液。該卵黃抗體溶液是經(jīng)過多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

本發(fā)明提供了一種生物酶解高免雞蛋提取卵黃抗體溶液的制備方法，其特征在于：其包括以下步驟：

（1）選取高免雞蛋，將蛋黃與蛋清進(jìn)行分離；

（2）稀釋：用1:8倍的蒸餾水稀釋高免雞蛋卵黃，并調(diào)節(jié)PH為5.8；

（3）酶解：將所述步驟（2）稀釋后的蛋黃液中加入卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶，其中，卵磷脂酶和膽固醇酯水解酶的比例為1:0.9，且加入后使得卵磷脂酶的濃度為0.085%，在溫度為42℃下酶解3h；

（4）微波處理：用體積濃度為83%的乙醇作為溶劑，并采用微波處理，微波的功率為400W，然后將提取液加熱至50℃，用微波處理10min，微波處理后進(jìn)行中和調(diào)節(jié)PH，使得溶液的PH為7.0；

（5）離心處理：將微波處理的提取液置于離心機(jī)中，離心3min；

（6）得到粗卵黃提取液：將離心處理后的提取液用普通濾膜進(jìn)行過濾，取濾液：

（7）細(xì)化提?。涸谒霾襟E（6）得到的濾液加入0.5倍體積的乙醇，然后攪拌均勻，之后置于超高壓處理袋中，封口，之后以不同壓力加壓15min，超高壓力的范圍為350-600Mpa，且以每次增壓50Mpa的方式進(jìn)行不同壓力處理；

（8）再次離心處理：將所述的步驟（7）中加壓后的溶液置于離心機(jī)中再離心5min；

（9）將所述步驟（8）離心后的溶液利用多空纖維超濾膜進(jìn)行過濾后得到的精細(xì)的卵黃抗體溶液。

本發(fā)明采用生物酶解的方法對(duì)高免蛋卵黃抗體進(jìn)行提取，并輔以微波處理，提取效率高，此外，本發(fā)明通過超高壓的處理，能夠進(jìn)一步提高卵黃抗體的提取率，之后，本發(fā)明利用多空纖維超濾膜，可以使得提取的抗體溶液精度更高，更精細(xì)，對(duì)于治療因耶爾森菌、腸毒性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、幽門螺桿菌等感染引起的胃腸道疾病具有很好的作用。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。