本發(fā)明涉及一種體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基，尤其涉及一種從絨毛白蠟胚性愈傷組織誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚的培養(yǎng)基，即絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基；屬于白蠟組織培養(yǎng)技術(shù)。

背景技術(shù)：
絨毛白蠟(FraxinusvelutinaTorr.)為木犀科(oleaceae)白蠟屬(Fraxinus)落葉喬木，是我國(guó)北方重要的造林樹(shù)種，尤其在鹽堿地區(qū)是重要的耐鹽堿喬木樹(shù)種，耐鹽堿，抗旱澇，耐瘠薄，抗逆性強(qiáng)，適應(yīng)范圍廣，且具有美觀、速生、材優(yōu)等特性，在園林綠化、用材林、防護(hù)林建設(shè)中廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，初步建立了絨毛白蠟植物組織培養(yǎng)技術(shù)體系，陳之群等(2006)以絨毛白蠟莖段為外植體，通過(guò)腋芽增殖途徑獲得再生植株；王磊等(2008)以絨毛白蠟成熟胚和莖段為外植體，研究了其組織培養(yǎng)和植株再生技術(shù)，平均增殖系數(shù)為3.59，存在繁育增殖率低及生根率低等缺陷。迄今為止，有關(guān)植物組織培養(yǎng)技術(shù)的各類(lèi)文獻(xiàn)中，尚未見(jiàn)關(guān)于絨毛白蠟體胚誘導(dǎo)的研究報(bào)道。體胚誘導(dǎo)組織培養(yǎng)技術(shù)體系不僅是轉(zhuǎn)基因最理想的受體系統(tǒng)，也是種苗快速繁育的有效方法之一。開(kāi)發(fā)一種從絨毛白蠟胚性愈傷組織誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚的培養(yǎng)基，即絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基有望為快速繁育和創(chuàng)制絨毛白蠟優(yōu)良新種質(zhì)提了新途徑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)的培養(yǎng)基，用于絨毛白蠟優(yōu)良種質(zhì)大規(guī)模繁育生產(chǎn)和新種質(zhì)創(chuàng)制研究。本發(fā)明所述的絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基，是將6-芐基腺嘌呤(6-BA)，萘乙酸(NAA)，2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，蔗糖和瓊脂，溶解于MS鹽分+B5有機(jī)基本培養(yǎng)基中制得，其pH值為5.2–5.4；其特征在于：所述絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分用量以1L有機(jī)基本培養(yǎng)基的加入量計(jì)為：其中，上述MS鹽分+B5有機(jī)基本培養(yǎng)基的組分為：KNO31900mg·L-1，NH4NO31650mg·L-1，MgSO4·7H2O370mg·L-1，KH2PO4170mg·L-1，CaCl2·2H20440mg·L-1，MnSO4·4H2O22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O8.6mg·L-1，H3BO36.2mg·L-1，KI0.83mg·L-1，NaMoO4·2H2O0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O0.025mg·L-1，Na2-EDTA37.3mg·L-1，F(xiàn)eSO4·7H2027.8mg·L-1，維生素B110mg·L-1，維生素B61mg·L-1，葉酸0.5mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2.0mg·L-1。上述的絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選的實(shí)施方式是：所述絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分用量以1L有機(jī)基本培養(yǎng)基的加入量計(jì)為：本發(fā)明公開(kāi)的絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，MS鹽分+B5有機(jī)為基本培養(yǎng)基，提供植物組織生長(zhǎng)的所需無(wú)機(jī)和有機(jī)營(yíng)養(yǎng)元素，添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6-芐基腺嘌呤(BA)，萘乙酸(NAA)和2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)促進(jìn)形成體胚的作用；添加高濃度的蔗糖提供組織生長(zhǎng)發(fā)育的碳素營(yíng)養(yǎng)；添加瓊脂是固化培養(yǎng)基，起支撐作用。上述絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基各組分的用量配比是發(fā)明人進(jìn)行大量試驗(yàn)摸索總結(jié)得出的，實(shí)驗(yàn)證實(shí)：該培養(yǎng)基具有較好的誘導(dǎo)效果，利用本培養(yǎng)基絨毛白蠟離體葉片體胚的誘導(dǎo)率可達(dá)到79％，適合絨毛白工廠化育苗生產(chǎn)，有望為快速繁育和創(chuàng)制絨毛白蠟優(yōu)良新種質(zhì)提供新途徑。附圖說(shuō)明圖1.葉片。圖2.體胚和體胚萌發(fā)苗。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步闡明：實(shí)施例1：絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分用量以1L有機(jī)基本培養(yǎng)基的加入量計(jì)為：將上述6-芐基腺嘌呤(6-BA)，萘乙酸(NAA)，2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，蔗糖和瓊脂，溶解于MS鹽分+B5有機(jī)基本培養(yǎng)基中即制得絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其pH值為5.2–5.4。實(shí)施例2：絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分用量以1L有機(jī)基本培養(yǎng)基的加入量計(jì)為：將上述6-芐基腺嘌呤(6-BA)，萘乙酸(NAA)，2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，蔗糖和瓊脂，溶解于MS鹽分+B5有機(jī)基本培養(yǎng)基中即制得絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其pH值為5.2–5.4。實(shí)施例3：絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分用量以1L有機(jī)基本培養(yǎng)基的加入量計(jì)為：將上述6-芐基腺嘌呤(6-BA)，萘乙酸(NAA)，2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，蔗糖和瓊脂，溶解于MS鹽分+B5有機(jī)基本培養(yǎng)基中即制得絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其pH值為5.2–5.4。上述實(shí)施例1-3中，MS鹽分+B5有機(jī)基本培養(yǎng)基的組分為：KNO31900mg·L-1，NH4NO31650mg·L-1，MgSO4·7H2O370mg·L-1，KH2PO4170mg·L-1，CaCl2·2H20440mg·L-1，MnSO4·4H2O22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O8.6mg·L-1，H3BO36.2mg·L-1，KI0.83mg·L-1，NaMoO4·2H2O0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O0.025mg·L-1，Na2-EDTA37.3mg·L-1，F(xiàn)eSO4·7H2027.8mg·L-1，維生素B110mg·L-1，維生素B61mg·L-1，葉酸0.5mg·L-1，肌醇100mg·L-1，甘氨酸2.0mg·L-1。實(shí)施例4：絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基效果驗(yàn)證試驗(yàn)方法及結(jié)果：試驗(yàn)材料：以山東省林業(yè)科學(xué)研究院林木遺傳育種所培養(yǎng)的無(wú)菌試管苗絨毛白蠟葉片作為外植體供體。葉片處理：將葉片從基部剪下，在每個(gè)葉片上剪2-3個(gè)傷口，近軸面朝上置于上述實(shí)施例1-3所述3種體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每一培養(yǎng)皿(直徑60mm)中放入6-10片葉片。培養(yǎng)條件：暗培養(yǎng)，晝溫度25±2℃，夜溫度18±2℃。培養(yǎng)20天后，絕大多數(shù)絨毛白蠟離體葉片生成體胚，此時(shí)轉(zhuǎn)入體胚萌發(fā)培養(yǎng)基為MS鹽分+B5有機(jī)+30g·L–1葡萄糖+5.0g·L–1瓊脂，pH值5.8，轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)(晝溫度25±2℃，夜溫度18±2℃，14小時(shí)光照/10小時(shí)黑暗，光密度為100–120μmol·m-2·s-1)，培養(yǎng)4周后，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：由表中結(jié)果分析得出如下結(jié)論：實(shí)施例2中的體胚誘導(dǎo)率最高為78％；實(shí)施例1和實(shí)施例3的體胚誘導(dǎo)率分別為42％和56％。綜合以上分析，得出絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選的實(shí)施方式是：所述絨毛白蠟離體葉片體胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組分用量以1L有機(jī)基本培養(yǎng)基的加入量計(jì)為：