一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法，該青稞成熟胚誘導培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎，添加麥芽糖和2,4-二氯苯氧乙酸，麥芽糖濃度為30g/L，2,4-二氯苯氧乙酸濃度為6-10mg/L為培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH為5.8-6.0；然后加入瓊脂或植物凝膠固化，瓊脂或植物凝膠與培養(yǎng)液的重量比＝0.55％或0.35％；最后在1.1個大氣壓、121℃條件下滅菌20min得到。
【專利說明】一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002]青棵(Hordeum vulgare L.var.nudum Hook.f.)屬禾本科大麥屬，因其內(nèi)外稃與穎果分離，籽粒裸露，故稱裸大麥，屬大麥變種，是青藏高原最具特色的農(nóng)作物(吳昆侖，趙媛等，2012)。傳統(tǒng)常規(guī)育種存在著周期長、改良進程緩慢等缺點，利用轉(zhuǎn)基因手段將特定的外源基因?qū)肭囡?，從而定向改良青稞品種，為青稞遺傳育種提供了一條新途徑。然而建立便攜、高效和穩(wěn)定的組織培養(yǎng)體系是限制其轉(zhuǎn)基因技術發(fā)展的一個最主要因素(陶麗莉等.2008)。成熟胚存在取材方便，不受季節(jié)限制，一次收獲可大量持續(xù)穩(wěn)定供應等優(yōu)點，因此成為目前研究者進行突破的熱點。
[0003]目前為止，青稞組織培養(yǎng)方面的研究較少。而在大麥組織培養(yǎng)方面的研究表明，以成熟胚為外植體時，其大麥生根長芽現(xiàn)象明顯，從而限制了成熟胚組織培養(yǎng)的發(fā)展(Han etal, 2011 ;藍慶等，2012)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述現(xiàn)有技術存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法，用于誘導獲得青稞成熟胚的愈傷組織。本發(fā)明方法可以明顯抑制青稞成熟胚愈傷誘導過程中的生根長芽現(xiàn)象，能夠獲得質(zhì)量較好的青稞愈傷組織。
[0005]為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案為:
[0006]一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基，該青稞成熟胚誘導培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎，添加麥芽糖和2，4- 二氯苯氧乙酸，麥芽糖濃度為30g/L，2，4- 二氯苯氧乙酸濃度為6-10mg/L為培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH為5.8-6.0 ;然后加入瓊脂或植物凝膠固化，瓊脂或植物凝膠與培養(yǎng)液的重量比=0.55%或0.35%;最后在1.1個大氣壓、121°C條件下滅菌20min，得到。
[0007]進一步的，利用所述培養(yǎng)基進行青稞成熟胚愈傷組織誘導的方法為:挑選飽滿的青稞種子，用蒸餾水清洗后，用75%酒精浸泡2-3min，用蒸餾水清洗2_3次；用5%次氯酸鈉溶液浸泡15min，蒸餾水清洗3-5次；無菌蒸餾水浸泡18_24h ;用5%次氯酸鈉溶液浸泡IOmin,無菌蒸餾水清洗3-5次；用解剖針挑取青稞成熟胚，并將其刮碎后接種于上述培養(yǎng)基上，于23-25°暗培養(yǎng)10-15d，得到青稞成熟胚初代愈傷組織。
[0008]相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明提供的抑制發(fā)芽/生根的青稞成熟胚誘導培養(yǎng)基中碳源為麥芽糖，與傳統(tǒng)培養(yǎng)基中常用的蔗糖和葡萄糖相比，可以使培養(yǎng)基保持較高的滲透壓，提高青稞成熟胚的愈傷組織。同時本發(fā)明比較了 2-10mg/L2，4-二氯苯氧乙酸的添加對 青稞出愈率的影響，發(fā)現(xiàn)10mg/L的濃度可以有效抑制青稞發(fā)芽/生根。傳統(tǒng)的表面消毒采用較高濃度次氯酸鈉(15-50%)處理30min，本發(fā)明中僅用5%次氯酸鈉消毒10-15min，即可有效控制污染，同時由于降低次氯酸鈉溶液、縮短處理時間從而減小次氯酸鈉對成熟胚的損傷，從而提高出愈率。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1為使用葡萄糖，蔗糖，麥芽糖為碳源的青稞成熟胚愈傷組織出愈率。
[0010]圖2為不同2，4- 二氯苯氧乙酸濃度所得青稞愈傷組織生長圖。
【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明方案做進一步詳細描述:
[0012]一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基，該青稞成熟胚誘導培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎，添加麥芽糖和2，4- 二氯苯氧乙酸，麥芽糖濃度為30g/L，2，4- 二氯苯氧乙酸濃度為6-10mg/L為培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH為7.8 ;然后加入瓊脂或植物凝膠固化，瓊脂或植物凝膠與培養(yǎng)液的重量比=0.55%或0.35% ;最后在1.1個大氣壓、121°C條件下滅菌20min，得到。
[0013]進一步的，利用所述培養(yǎng)基進行青稞成熟胚愈傷組織誘導的方法為:挑選飽滿的青稞種子，用蒸餾水清洗后，用75%酒精浸泡2-3min，用蒸餾水清洗2_3次；用5%次氯酸鈉溶液浸泡15min，蒸餾水清洗3-5次；無菌蒸餾水浸泡18_24h ;用5%次氯酸鈉溶液浸泡IOmin,無菌蒸餾水清洗3-5次；用解剖針挑取青稞成熟胚，并將其刮碎后接種于上述培養(yǎng)基上，于23-25°暗培養(yǎng)10-15d，得到青稞成熟胚初代愈傷組織。
[0014]試驗例1:
[0015]以MS培養(yǎng)基為 基礎培養(yǎng)基，添加2mg/L2，4_ 二氯苯氧乙酸，分別以蔗糖、葡萄糖和麥芽糖為碳源為青稞成熟胚愈傷誘導培養(yǎng)基，結(jié)果表明以麥芽糖為碳源時，青稞成熟胚的出愈率明顯高于葡萄糖和蔗糖為碳源時的出愈率(如圖1所示)。
[0016]試驗例2:
[0017]以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基，以麥芽糖為碳源，分別添加2，4，6，8，10mg/L2，4_ 二氯苯氧乙酸為青稞成熟胚愈傷組織誘導培養(yǎng)基，結(jié)果表明，隨著2，4- 二氯苯氧乙酸濃度的升高，愈傷組織的生根長芽得到明顯抑制(如圖2所示)。
[0018]以上所述，僅為本發(fā)明的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動想到的變化或替換，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應該以權(quán)利要求書所限定的保護范圍為準。
【權(quán)利要求】
1.一種青稞成熟胚愈傷組織的誘導培養(yǎng)基，其特征在于，該青稞成熟胚誘導培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎，添加麥芽糖和2，4- 二氯苯氧乙酸，麥芽糖濃度為30g/L，2，4- 二氯苯氧乙酸濃度為6-10mg/L為培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH為5.8-6.0 ;然后加入瓊脂或植物凝膠固化，瓊脂或植物凝膠與培養(yǎng)液的重量比=0.55%或0.35%;最后在1.1個大氣壓、121°C條件下滅菌20min,得到。
2.利用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基進行青稞成熟胚愈傷組織誘導的方法，其特征在于，所述方法為:挑選飽滿的青稞種子，用蒸餾水清洗后，用75%酒精浸泡2-3min，用蒸餾水清洗2-3次；用5%次氯酸鈉溶液浸泡15min，蒸餾水清洗3_5次；無菌蒸餾水浸泡18_24h ;用5%次氯酸鈉溶液浸泡lOm in，無菌蒸餾水清洗3_5次；用解剖針挑取青稞成熟胚，并將其刮碎后接種于上述培養(yǎng)基上，于23-25°暗培養(yǎng)10-15d，得到青稞成熟胚初代愈傷組織。
【文檔編號】A01H4/00GK103960131SQ201410203262
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】蔣禮玲, 危文波, 吳昆侖, 姚曉華 申請人:青海省農(nóng)林科學院