一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，是在組培苗快繁增殖培養(yǎng)過程中，以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，利用4種植物生長調節(jié)劑不同濃度配比，大幅度提高了絨毛白蠟組培苗的增殖倍數(shù)；以大量元素減半的1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加2種生長素和1種細胞分裂素及低糖度的組合誘導組培苗生根獲得完整植株。本發(fā)明方法有效解決了絨毛白蠟增殖率低的問題，實驗統(tǒng)計：試管苗的增殖率由原來最高的3.59倍提高到10倍以上，增殖系數(shù)提高2～3倍，實現(xiàn)了絨毛白蠟快繁增殖的目的。應用本發(fā)明方法在短時間內能獲得大量的種苗，可充分滿足大面積鹽堿地造林的需要。
【專利說明】一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，尤其涉及一種利用4種植物生長調節(jié)劑不同濃度配比提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，屬于生物【技術領域】。

【背景技術】
[0002]絨毛白臘^61111:1118為木犀科(01080080)白臘屬(辦^^皿8111111.)落葉喬木，原產于北美，抗逆性強，主要應用于園林綠化、鹽堿地造林和用材樹種。早在1911年引種到濟南(孟昭和等，2001), 1953年被轉引到天津(楊瑞興等，1996)，80年代后在華北華東地區(qū)廣泛栽培。
[0003]土壤鹽潰化是影響農林業(yè)生產和生態(tài)環(huán)境的重要因素。全球鹽潰土約占陸地面積的三分之一，我國鹽潰土面積約1億卜!!!2 (張世功等，2000)。隨著工業(yè)污染的加劇及化肥使用不當?shù)仍颍勾紊}潰化的土地面積還在繼續(xù)擴大，而且有逐年增加的趨勢(中國統(tǒng)計局，1997)。這些鹽堿土地主要分布在新疆、甘肅、山東、河北、東北等沿海地區(qū)以及內陸干旱、半干旱地區(qū)(曹福亮，2000)。鹽堿地是潛在的土地資源，如何開發(fā)鹽堿地和撂荒土地發(fā)展林業(yè)、改善生態(tài)環(huán)境是當代林業(yè)迫切需要解決的重大課題。由于絨毛白蠟抗逆性較強，分布范圍廣，對鹽堿地等不良環(huán)境表現(xiàn)出極強的適應能力，因此目前已成為我國部分沿海城市以及鹽堿地區(qū)造林和綠化的優(yōu)良樹種(楊瑞興等，1996)。
[0004]國內關于白蠟生態(tài)特性、生長習性方面的研究較多，主要側重于白蠟的耐鹽堿性、苗木繁育、造林技術等方面。樊寶敏(1992)報道，絨毛白蠟對呈堿性反應的濱海鹽土較為敏感；孟康敏(1999)對5個濱海鹽堿地引種的樹種幼苗進行盆栽耐鹽性試驗，根據(jù)耐鹽性生理指標進行綜合分析，結果表明絨毛白蠟耐鹽力最強；王友平等(2009)研究了鹽潰生境下1-3年生絨毛白蠟不同營養(yǎng)器官中鹽離子分布規(guī)律。陳之群等(2006)以絨毛白蠟幼嫩莖段為材料研究了其組織培養(yǎng)和植株再生技術；燕麗萍等(2013)開發(fā)堿絨毛白蠟耐鹽30^標記，應用于輔助選擇育種中。近年來國外報導多集中在歐洲白蠟(匕6X^181010、美國白￠￠1 811161108118)、青、花白臘等(八 1~1~111已邑8 1,61: , 1992 ；311乂611~8 02, 61: 3,1,1993出誦社七X 6七￡11, 1992 ^1111 18,6^ &1，1997)，通過腋芽增殖獲得再生植株的報道。國內外對絨毛白蠟組培快繁的文獻較少，且文獻報道增殖率低，王磊等(2008)用絨毛白蠟成熟胚和莖段進行培養(yǎng)繁殖體，平均增殖系數(shù)為3.59，因此提高絨毛白蠟組培快繁增殖率，為迅速擴大絨毛白蠟優(yōu)良品系的無性繁殖，滿足大面積鹽堿地造林需要，具有重要的意義。


【發(fā)明內容】

[0005]針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的是提供一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，以解決絨毛白蠟增殖率低的問題。
[0006]本發(fā)明所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，步驟包括:(1)無菌苗建立，
(2)快繁增殖；(3)組培苗生根；(4)煉苗移栽；
[0007]其特征在于:
[0008]步驟(I)所述無菌苗建立的方法是:選取無病蟲害籽粒飽滿的種子，去掉種皮，滅菌后接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，置于組培室，晝夜光照周期培養(yǎng)條件為:白天光照強度為2000?3000Lux，光照時間12?14h.cf1，溫度25±1°C ;夜間溫度18±1°C ；7?1d后種子萌發(fā)，獲得無菌苗；
[0009]其中:所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方是:WPM+6-BA0?0.3mg噸―1+蔗糖25?35g -Γ1+瓊脂 4 ?5g.L-1, pH 值 5.8 ?6.0 ;
[0010]上述WPM 培養(yǎng)基的組分是=NH4NO3 400mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 556mg.?ΛK2SO4 990mg.ΙΛ CaCl2.2Η20 96mg.?Λ ΚΗ2Ρ04 170mg.?Λ Na2MoO4.2Η20 0.25mg.?ΛMgS O 4.7Η20 370mg.?Λ MnS04.4Η20 22.4mg.?Λ ZnS04.7Η20 8.6mg.?Λ CuS04.5Η200.25mg.ΙΛ FeS04.7Η20 27.8mg.?Λ Na2-EDTA 37.3mg.L—1，鹽酸硫胺素 1.0mg.L'煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比 P多酉享 0.5mg.L-1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.I71。
[0011]步驟(2)所述快繁增殖的方法是:將步驟(I)獲得的無菌苗剪成I?2cm長帶芽莖段，轉接于快繁增殖培養(yǎng)基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，25?30d后誘導形成叢生芽，增殖倍數(shù)8?10倍；
[0012]其中:所述快繁增殖培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，于基本培養(yǎng)基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)、玉米素(ZT)、6_芐氨基腺嘌呤出-BA)、萘乙酸(NAA)四種植物生長調節(jié)劑制成，該快繁增殖培養(yǎng)基配方是:WPM+TDZ0.5?2.0mg.Γ'+ΖΤΙ.0?2.0mg *L ^Θ-ΒΑΟ.5 ?1.5mg.L ^NAA0.5 ?1.0mg *L 1+25 ?35mg.L 1 鹿糖 +4 ?5mg *L 1瓊脂，pH值5.8?6.0 ;
[0013]步驟(3)所述組培苗生根的方法是:待步驟(2)培養(yǎng)的試管苗長到3?5cm時，將其切成單株，接種到生根培養(yǎng)基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，15?20d后獲得生根植株，其生根數(shù)4?6條,根長I?3cm ；
[0014]其中:所述生根培養(yǎng)基配方是:l/2WPM+0.7?2.1mg.L_1IBA+0.01?0.03mg.L ^AA+0.1 ?0.2mg/L ZT+18 ?25g.L1 鹿糖+4 ?5g.L1 瓊月旨，pH 值 5.7 ?5.9 ；
[0015]上述1/2WPM是指培養(yǎng)基的組分中WPM大量元素減半及其余為WPM全量元素，其具體組分為:NH4NO3 400mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 556mg.?Λ K2SO4 990mg.?Λ CaCl2.2Η2096mg.I/1，ΚΗ2Ρ04 170mg.I/1，Na2MoO4.2Η20 0.25mg.I/1，MgSO4.7H20370mg.I/1，MnS04.4Η20 22.4mg.L—1，ZnS04.7H20 8.6mg.L—1，CuS04.5H200.25mg.L—1，F(xiàn)eS04.7H2027.8mg.I71, Na2-EDTA 37.3mg.I/1,鹽酸硫胺素 1.0mg.L—1,煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比P多酉享0.5mg.L—1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.L-1 ；
[0016]步驟(4)所述煉苗移栽的方法是:把步驟(3)中已生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應I?2d，然后用清水逐棵洗去苗根部殘留的培養(yǎng)基，并將其移栽到裝有輕型基質的無紡布營養(yǎng)杯中，放置于遮光度60%?70%遮蔭網(wǎng)塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對濕度在80%以上，煉苗8?1d后，棚內逐漸通風，再繼續(xù)培養(yǎng)10?12d，移栽于大田；
[0017]其中:所述無紡布營養(yǎng)杯中的輕型基質的成分以體積比計為:蛭石:珍珠巖:草炭土 =2: 3: 5，且在無紡布營養(yǎng)杯中輕型基質上面還撒放一層厚度為1.5?2cm的細沙。
[0018]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，步驟(I)、(2)或(3)所述晝夜光照周期培養(yǎng)條件優(yōu)選為:白天光照強度2500LUX，光照時間13h.cf1，溫度25°C ;夜溫度18°C。
[0019]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基或快繁增殖培養(yǎng)基中，瓊脂優(yōu)選4.5g.ΙΛ蔗糖優(yōu)選30g.ΙΛ pH值優(yōu)選5.8。
[0020]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，步驟(2)所述的快繁增殖培養(yǎng)基配方優(yōu)選是:WPM+TDZ1.5mg.L'ZTl.5mg.L_1+6-BAl.0mg.I^+NAA0.7mg.L_1+30mg.L-1 蔗糖 +4.5mg.L-1 瓊脂，pH 值 5.8 ?6.0。
[0021]上述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法中，步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基配方優(yōu)選是:1/2WPM+1.0mg.L_1IBA+0.02mg.L_1NAA+0.15mg.L_1ZT+20g.L-1 蔗糖 +4g.L-1 瓊脂，pH 值 5.7。
[0022]本發(fā)明提供的提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，是在組培苗快繁增殖培養(yǎng)過程中，以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，利用4種植物生長調節(jié)劑不同濃度配比，大幅度提高了絨毛白蠟組培苗的增殖倍數(shù)；以大量元素減半的1/2WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加2種生長素和I種細胞分裂素及低糖度的組合誘導組培苗生根，以獲得完整植株。本發(fā)明方法有效解決了絨毛白蠟增殖率低的問題，經(jīng)實驗統(tǒng)計:試管苗的增殖率由原來最高的3.59倍提高到10倍以上，增殖系數(shù)提高2?3倍，實現(xiàn)了絨毛白蠟快繁增殖的目的。應用本發(fā)明方法在短時間內能獲得大量的種苗，可充分滿足大面積鹽堿地造林的需要。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1無菌苗建立。
[0024]圖2增殖培養(yǎng)。
[0025]圖3生根培養(yǎng)。
[0026]圖4煉苗移栽。

【具體實施方式】
[0027]下面結合實施例對本
【發(fā)明內容】
作進一步闡明:
[0028]實施例1
[0029]挑選飽滿無病蟲害的絨毛白蠟種子，剝去種皮放于無菌的玻璃瓶中，用70%乙醇滅菌20秒，再用0.1 %氯化汞滅菌6分鐘，然后用無菌水洗滌4次，在無菌條件下接種到WPM+0.3mg Ll-BA+t 5g L—1瓊脂+30g L—1蔗糖萌發(fā)培養(yǎng)基中(pH值5.9)，培養(yǎng)條件為晝溫度25°C，夜溫度18°C，光照強度2500LX，光照時間13h.dl培養(yǎng)條件下同)，7d后種子萌發(fā)，獲得無菌苗。
[0030]將無菌苗剪成Icm 長帶芽莖段，轉接于 WPM+TDZ0.5mg.171+ZT2.0mg ?Γ'+Θ-ΒΑΟ.5mg -U1+MA0.5mg ?r1+25mg -Γ1蔗糖+4mg -Γ1瓊脂增殖培養(yǎng)基中(pH值6.0)，以上述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，25d后誘導形成叢生芽，增殖倍數(shù)8倍。
[0031]待試管苗長到3cm，將其切成單株，接種到生根培養(yǎng)基中(1/2WPM+0.7mg ?PlBA+O? Olmg -Γ'ΝΑΑ+Ο.lmg/L ZT+18g.L—1 蔗糖 +4.5g.L—1 瓊脂，pH 值 5.8)，培養(yǎng)條件同上為晝夜光照周期培養(yǎng)，培養(yǎng)15d獲得生根植株，生根數(shù)4條，根長1cm。
[0032]把生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應Id后，用鑷子將苗輕輕夾出，快速放到盛有清水的容器中，用清水洗去根部殘留的培養(yǎng)基，并將其移栽到裝有輕型基質(所述基質購于壽光市恒先育苗基質加工廠)的無紡布營養(yǎng)杯中，放置于遮光度60 %?70 %遮蔭網(wǎng)塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對濕度在80 %以上，煉苗8(1后，棚內逐漸通風，再繼續(xù)培養(yǎng)10山移栽于大田，成活率89%以上。
[0033]實施例2
[0034]挑選飽滿無病蟲害的絨毛白蠟種子，剝去種皮放于無菌的玻璃瓶中，用70%乙醇滅菌30秒，再用0.1 %氯化汞滅菌7分鐘，然后用無菌水洗滌5次，在無菌條件下接種到-1+0.11118/16-8^+4^/1瓊脂+25^/1蔗糖萌發(fā)培養(yǎng)基中(邱值5.8)，培養(yǎng)條件為晝溫度251，夜溫度181，光照強度2500匕，光照時間13卜-11 (培養(yǎng)條件下同)，9(1后種子萌發(fā)，
獲得無菌苗。
[0035]將無菌苗剪成1.50111長帶芽莖段，轉接于191+1021.5呢5呢-1^+6-8^1.0呢-1^+^0.7呢-1^+30^噸―1蔗糖+4.5呢噸―1瓊脂增殖培養(yǎng)基中(邱值5.8)，以上述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，30(1后誘導形成叢生芽，增殖倍數(shù)10倍。
[0036]待試管苗長到50111，將其切成單株，接種到生根培養(yǎng)基中(1/2191+1.-1^18^+0.02呢.1^^+0.15^/1 21+20^.[-1蔗糖+?.[-1瓊脂，邱值5.7)，培養(yǎng)18(1獲得生根植株，生根數(shù)6條，根長2(3?。?！，培養(yǎng)條件為步驟(1)所述晝夜光照周期培養(yǎng)。
[0037]把生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應2(1后，用鑷子將苗輕輕夾出，快速放到盛有清水的容器中，用清水洗去根部殘留的培養(yǎng)基，移栽到裝有輕型基質的無紡布營養(yǎng)杯中，放置于遮光度60%?70%遮蔭網(wǎng)塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對濕度在80%以上，煉苗10(1后，棚內逐漸通風，再繼續(xù)培養(yǎng)12山栽植于大田，成活率92%以上。
[0038]實施例3
[0039]挑選飽滿無病蟲害的絨毛白蠟種子，剝去種皮放于無菌的玻璃瓶中，用70%乙醇滅菌25秒，再用0.1 %氯化汞滅菌8分鐘，然后用無菌水洗滌6次，在無菌條件下接種到1^1+5.0^/1瓊脂+358/1蔗糖萌發(fā)培養(yǎng)基中(邱值6.0)，培養(yǎng)條件為晝溫度251，夜溫度181，光照強度2500匕，光照時間131^(1—\培養(yǎng)條件下同)，10(1后種子萌發(fā)，獲得無菌苗。
[0040]將無菌苗剪成2。111長帶芽莖段，轉接于191+11)22.0呢0呢-1^+6-8^1.5?80呢-1^+35^噸―1蔗糖+5呢噸―1瓊脂增殖培養(yǎng)基中(邱值5.7)，以上述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，35(1后誘導形成叢生芽，增殖倍數(shù)9倍。
[0041]待試管苗長到40111，將其切成單株，接種到生根培養(yǎng)基中(1/2191+2.1呢-1^18^+0.03呢.1^^+0.2111^/1 21+25^.[-1 蔗糖 +5^.[-1 瓊脂，邱值 5.9)，培養(yǎng) 20(1 獲得生根植株，生根數(shù)5條，根長3(3111，培養(yǎng)條件為晝夜光照周期培養(yǎng)。
[0042]把生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應1(1后，用鑷子將苗輕輕夾出，快速放到盛有清水的容器中，用清水洗去根部殘留的培養(yǎng)基，移栽到裝有輕型基質的無紡布營養(yǎng)杯中，放置于遮光度60%?70%遮蔭網(wǎng)塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對濕度在80 %以上，煉苗9(1后，棚內逐漸通風，再繼續(xù)培養(yǎng)11山栽植于大田，成活率85 %以上。
[0043]本發(fā)明方法實施例中采用的培養(yǎng)基及其配方是:
[0044]胃？1培養(yǎng)基的組分為:順4吣3 400^ ? 08(^03)2 ? 4??！20 556^ ? ^1,尺2304990呢.[―1，03012.2！！20 96呢.[―1，狃2？04 170呢.[―1，琴。04.2??！20 0.25呢.[―1，
0 4 ? 7?。?0 370^ ? 171，1=304 ? 4??！20 22.4呢 ? 171，2=304 ? 7??！20 8.6呢 ? 171，011804 ? 5?。?00.25mg.ΙΛ FeS04.7H20 27.8mg.?Λ Na2-EDTA 37.3mg.L—1，鹽酸硫胺素 1.0mg.L'煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比 P多酉享 0.5mg.L-1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.I71。
[0045]1/2WPM是指培養(yǎng)基的組分中WPM大量元素減半及其余為WPM全量元素，其具體組分為:NH4NO3 200mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 278mg.?Λ K2SO4 495mg.?Λ CaCl2.2Η2048mg.L-1，ΚΗ2Ρ04 85mg.L-1，Na2MoO4.2Η20 0.25mg.L-1，MgS O 4.7H20370mg.L-1，MnS04.4Η2022.4mg.ΙΛ ZnS04.7H20 8.6mg.?Λ CuS04.5H200.25mg.?Λ FeS04.7H20 27.8mg.?ΛNa2-EDTA 37.3mg.L—1,鹽酸硫胺素 1.0mg.L—1,煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比P多醇 0.5mg.L—1,肌醇 10mg.L-1,甘氨酸 2.0mg.L'
[0046]萌發(fā)培養(yǎng)基配方是:WPM+6-BA0?0.3mg.L—1+蔗糖25?35g.L—1+瓊脂4?5g.ΙΛ pH 值 5.8 ?6.0 ;
[0047]快繁增殖培養(yǎng)基配方是:WPM+TDZ0.5?2.0mg.L_1+ZT1.0?2.0mg *L ^Θ-ΒΑΟ.5 ?1.5mg.L ^NAA0.5 ?1.0mg *L 1+25 ?35mg.L 1 鹿糖 +4 ?5mg *L 1瓊脂，pH值5.8?6.0 ;
[0048]生根培養(yǎng)基配方是:1/2WPM+0.7 ?2.1mg.L_1IBA+0.01 ?0.03mg.L_1NAA+0.1 ?0.2mg/L ZT+18 ?25g.L-1 鹿糖 +4 ?5g.L-1 瓊脂，pH 值 5.7 ?5.9 ;
[0049]上述無紡布營養(yǎng)杯中的輕型基質的成分以體積比計為:蛭石:珍珠巖:草炭土 =2:3: 5，且在無紡布營養(yǎng)杯中輕型基質上面還撒放一層厚度為1.5?2cm的細沙。所述輕型基質可購于壽光市恒先育苗基質加工廠。
【權利要求】
1.一種提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，步驟包括:(1)無菌苗建立，(2)快繁增殖;(3)組培苗生根；(4)煉苗移栽； 其特征在于: 步驟(I)所述無菌苗建立的方法是:選取無病蟲害籽粒飽滿的種子，去掉種皮，滅菌后接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，置于組培室，晝夜光照周期培養(yǎng)條件為:白天光照強度為2000?3000Lux，光照時間12?14h.cf1，溫度25±1°C ;夜間溫度18±1°C ；7?1d后種子萌發(fā)，獲得無菌苗； 其中:所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基配方是:WPM+6-BA0?0.3mg.Γ1+蔗糖25?35g.Γ1+瓊月旨4?58.171，卩!1值5.8?6.0; 步驟(2)所述快繁增殖的方法是:將步驟(I)獲得的無菌苗剪成I?2cm長帶芽莖段，轉接于快繁增殖培養(yǎng)基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，25?30d后誘導形成叢生芽，增殖倍數(shù)8?10倍； 其中:所述快繁增殖培養(yǎng)基是以WPM培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，于基本培養(yǎng)基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)、玉米素(ZT)、6_芐氨基腺嘌呤出-BA)、萘乙酸(NAA)四種植物生長調節(jié)劑制成，該快繁增殖培養(yǎng)基配方是:WPM+TDZ0.5?2.0mg.Γ'+ΖΤΙ.0?2.0mg *L ^Θ-ΒΑΟ.5 ?1.5mg.L ^NAA0.5 ?1.0mg *L 1+25 ?35mg.L 1 鹿糖 +4 ?5mg *L 1瓊脂，pH值5.8?6.0 ; 步驟(3)所述組培苗生根的方法是:待步驟(2)培養(yǎng)的試管苗長到3?5cm時，將其切成單株，接種到生根培養(yǎng)基中，以步驟(I)所述條件進行晝夜光照周期培養(yǎng)，15?20d后獲得生根植株，其生根數(shù)4?6條,根長I?3cm ； 其中:所述生根培養(yǎng)基配方是:l/2WPM+0.7?2.1mg.L_1IBA+0.01?0.03mg.L ^AA+0.1 ?0.2mg/L ZT+18 ?25g.L1 鹿糖+4 ?5g.L1 瓊月旨，pH 值 5.7 ?5.9 ； 上述1/2WPM是指培養(yǎng)基的組分中WPM大量元素減半及其余為WPM全量元素，其具體組分為:NH4NO3 400mg.?Λ Ca (Ν03) 2.4H20 556mg.?Λ K2SO4 990mg.?Λ CaCl2.2Η2096mg.I/1，ΚΗ2Ρ04 170mg.I/1，Na2MoO4.2Η20 0.25mg.I/1，MgSO4.7H20370mg.I/1，MnS04.4H20 22.4mg.L—1，ZnS04.7H20 8.6mg.L—1，CuS04.5H200.25mg.L—1，F(xiàn)eS04.7H2027.8mg.I71, Na2-EDTA 37.3mg.I/1,鹽酸硫胺素 1.0mg.L—1,煙酸 0.5mg.L—1,鹽酸比P多酉享0.5mg.L—1,肌酉享 10mg.I71，甘氨酸 2.0mg.L-1 ； 步驟(4)所述煉苗移栽的方法是:把步驟(3)中已生根的瓶苗轉移到煉苗溫室中適應I?2d，然后用清水逐棵洗去苗根部殘留的培養(yǎng)基，并將其移栽到裝有輕型基質的無紡布營養(yǎng)杯中，放置于遮光度60%?70%遮蔭網(wǎng)塑料大棚內，利用自動間歇噴霧裝置保持棚內空氣相對濕度在80%以上，煉苗8?1d后，棚內逐漸通風，再繼續(xù)培養(yǎng)10?12d，移栽于大田； 其中:所述無紡布營養(yǎng)杯中的輕型基質的成分以體積比計為:蛭石:珍珠巖:草炭土= 2:3: 5，且在無紡布營養(yǎng)杯中輕型基質上面還撒放一層厚度為1.5?2cm的細沙。
2.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特征在于，步驟(I)、(2)或(3)所述晝夜光照周期培養(yǎng)條件為:白天光照強度2500LUX，光照時間溫度25 0C ;夜溫度 18 °C。
3.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特征在于，所述種子萌發(fā)培養(yǎng)基或快繁增殖培養(yǎng)基中，瓊脂為4.5g.L_\蔗糖為30g.L-1, pH值為5.8。
4.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特征在于，步驟(2)所述的快繁增殖培養(yǎng)基配方是:WPM+TDZ 1.5mg.L_1+ZT 1.5mg.L_1+6-BA 1.0mg.L'NAA0.7mg.L ^SOmg.L 1 鹿糖 +4.5mg.L 1 瓊脂，pH 值 5.8 ?6.0。
5.如權利要求1所述提高絨毛白蠟組培快繁增殖率的方法，其特征在于，步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基配方是:1/2WPM+1.0mg.L_1IBA+0.02mg.L_1NAA+0.15mg.L_1ZT+20g.Γ1 蔗糖+‘g.!/1 瓊脂，pH 值 5.7。
【文檔編號】A01C1/00GK104381128SQ201410546879
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月15日 優(yōu)先權日:2014年10月15日
【發(fā)明者】劉翠蘭, 燕麗萍, 李麗, 王開芳, 夏陽, 王振猛 申請人:山東省林業(yè)科學研究院