本發(fā)明涉及1h-吲唑-4-胺類化合物，還涉及其制備方法和作為ido抑制劑的用途。
背景技術(shù)：
吲哚胺2,3-雙加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase，ido)是催化色氨酸等吲哚胺類分子中吲哚環(huán)氧化裂解，使其按犬尿酸途徑分解代謝的限速酶。
ido在腫瘤免疫豁免及腫瘤發(fā)生過程中起著重要作用。正常情況下，ido在體內(nèi)呈低水平表達(dá)，而大多數(shù)腫瘤細(xì)胞則會組成的高表達(dá)ido，將l-色氨酸轉(zhuǎn)化為n-甲酰犬尿氨酸，降低了細(xì)胞微環(huán)境中的色氨酸濃度，使得色氨酸依賴的t細(xì)胞合成停滯于g1期，t細(xì)胞增殖受到抑制，從而抑制了機(jī)體免疫系統(tǒng)對腫瘤組織的殺傷作用。同時，ido作用下色氨酸的代謝產(chǎn)物存在細(xì)胞毒性，可對t細(xì)胞產(chǎn)生直接溶解作用。
因此，抑制ido的活性可以有效地阻止腫瘤細(xì)胞周圍色氨酸的降解，促進(jìn)t細(xì)胞的增殖，從而增強機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的攻擊能力。并且，ido抑制劑還可以與化療藥物合用，降低腫瘤細(xì)胞的耐藥性，從而增強常規(guī)細(xì)胞毒療法的抗腫瘤活性。同時服用ido抑制劑也可提高癌癥病人的治療性疫苗的療效。
除了在腫瘤細(xì)胞耐藥性方面發(fā)揮著重要作用，ido還與多種與細(xì)胞免疫激活相關(guān)的疾病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。ido已被證實是與細(xì)胞免疫激活相關(guān)的感染、惡性腫瘤、自身免疫性疾病、艾滋病等重大疾病的靶標(biāo)。同時，抑制ido還是對于患有神經(jīng)系統(tǒng)疾病如抑郁癥，阿爾茨海默病的病人的重要治療策略。因此，ido抑制劑具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
為解決上述問題，本發(fā)明主要提供了一類新型的ido抑制劑類藥物，它們均1h-吲唑-4-胺類化合物。
本發(fā)明提供了一種化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結(jié)構(gòu)如式(ⅰ)所示：
其中，
y表示-nh-、
r1選自h、x、-cx3、-chx2、-ch2x、-(ch2)ach3；
r2選自-(ch2)b-r3、-ch2nhr3、-ch2conh-r3、-ch(ch2oh)r3或-ch2ch(oh)r3，
r3選自取代的或非取代的芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基，所述取代的芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基分別獨立地被一個或多個選自-(ch2)ccooh、-(ch2)dcoor4、x、-(ch2)coh、-(ch2)cnh2、硝基、c1～c6烷基的取代基所取代；
r4選自甲基或乙基；
x表示f、cl、br或i，a＝0或1，b＝0或1，c＝0或1，d＝0或1。
所述c1～c6的烷基是指具有1～6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、己基等等。
進(jìn)一步地，所述r1選自h、br、-cf3、-ch3或-ch2ch3。
更進(jìn)一步地，所述r1選自br。
進(jìn)一步地，所述化合物的結(jié)構(gòu)如式(ii)、式(iii)、式(iv)、式(v)、式(ⅵ)或式(ⅶ)所示：
進(jìn)一步地，所述環(huán)烷基為環(huán)己基；所述取代的環(huán)烷基為被一個羥基所取代的環(huán)烷基。
進(jìn)一步地，所述雜環(huán)基為四氫吡喃基。
進(jìn)一步地，所述取代的芳基選自被一個-(ch2)ccooh、氯、氨基、羥基、硝基或甲基所取代的苯基。
進(jìn)一步地，所述r3選自下述基團(tuán)之一：
進(jìn)一步地，所述化合物選自如下化合物之一：
本發(fā)明還提供了一種制備所述式(ⅱ)化合物或其制備中間體的方法，包括下述步驟：
以sm和s2所示化合物為原料，在還原劑的作用下反應(yīng)制備得到式(ⅱ)化合物或其制備中間體。
在具體的實施方式中，該反應(yīng)可在酸性催化劑的存在下進(jìn)行。
還原劑可選自dhp、nabh4或nabh3(cn)，最優(yōu)選dhp；酸性催化劑可用tfa、甲酸、乙酸或聯(lián)萘磷酸，最優(yōu)選tfa；溶劑為ch2cl2、meoh或dmf，最優(yōu)選ch2cl2。
在本發(fā)明提供的制備方法中，所述制備中間體指的是目標(biāo)化合物前一步的合成中間體。
例如，當(dāng)某個化合物r3選自-(ch2)dcoor4時，其可以本身既作為藥物使用，也可以作為另一個r3選自-(ch2)dcoor4化合物的制備中間體。在本發(fā)明具體的實施方式中，化合物1m可以作為化合物1l的制備中間體，化合物1o可以作為化合物1n的制備中間體。化合物1l和1n可以分別以化合物1m和1o的制備中間體，再進(jìn)一步通過本領(lǐng)域常規(guī)的酯水解技術(shù)手段，酯水解反應(yīng)制備得到。
又例如，當(dāng)r3選自硝基時，其可以本身既作為藥物使用，也可以作為另一個r3選自-nh2化合物的制備中間體。在本發(fā)明具體的實施例中，化合物1p可以作為化合物1q的制備中間體，1q通過對1p上的硝基還原反應(yīng)制備得到。
本發(fā)明還提供了一種制備所述式(ⅲ)化合物或其制備中間體的方法，包括下述步驟：
以sm和s2所示化合物為原料，縮合反應(yīng)制備得到式(ⅲ)化合物或其制備中間體。合成的縮合劑可用edci或dcc，最優(yōu)為edci；堿可用hobt或hatu，最優(yōu)為hobt。
本發(fā)明還提供了一種制備所述式(ⅳ)化合物或其制備中間體的方法，包括下述步驟：
(1)
以s4a所示化合物和二(三氯甲基)碳酸酯為原料，反應(yīng)制備得到s4b所示化合物；
(2)
以s4b和sm所示化合物為原料，反應(yīng)制備得到式(ⅳ)化合物或其制備中間體。
本發(fā)明還提供了一種制備所述式(ⅴ)、式(ⅵ)化合物，或其制備中間體的方法，包括下述步驟：
以s5和sm所示化合物為原料，反應(yīng)制備得到式(ⅴ)或式(ⅵ)化合物，或其制備中間體。
在具體的實施方式中，合成反應(yīng)的ph值可在7-10之間，最優(yōu)選的ph值為7。反應(yīng)溫度可在20-80℃，最優(yōu)選80℃。溶劑可選自etoh、h2o、dmf、meoh、thf、ch2cl2、etoac或二氧六環(huán)中的任一種或多種，最優(yōu)選etoh和h2o的混合溶液。
本發(fā)明還提供了一種制備所述式(ⅶ)化合物或其制備中間體的方法，包括下述步驟：
(1)
以sm所示化合物和溴乙酸乙酯為原料，反應(yīng)制備得到s7a所示化合物；
該反應(yīng)具體的實施方式中，可在堿的存在下進(jìn)行。
堿可選自k2co3、nah、naoh或koh,最優(yōu)選k2co3；溶劑可選自ch2cl2、meoh,etoh、thf、ch3coch3、etoac或dmf，最優(yōu)選dmf。
(2)
將s7a所示化合物水解，反應(yīng)制備得到s7b所示化合物；
(3)
以s7b和s7c所示化合物為原料，縮合反應(yīng)制備得到(ⅶ)所示化合物或其制備中間體。
本發(fā)明還提供了所述化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽、或其前藥、或其溶劑合物在制備ido抑制劑類藥物上的用途。
進(jìn)一步地，所述藥物是預(yù)防和/或治療阿爾茨海默病、白內(nèi)障、細(xì)胞免疫激活相關(guān)的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌癥、抑郁癥或色氨酸代謝異常的藥物。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它是以所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。
其中，所述組合物是治療或預(yù)防和/或治療阿爾茨海默病、白內(nèi)障、細(xì)胞免疫激活相關(guān)的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌癥、抑郁癥或色氨酸代謝異常的藥物
所述前藥是前述化合物的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性或甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理條件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的生物活性形式。
所述的制劑可以包括注射劑或口服制劑。
本發(fā)明中的關(guān)鍵中間體和化合物進(jìn)行分離和純化，所使用的方式是有機(jī)化學(xué)中常用的分離和純化方法。
本發(fā)明的一種或多種化合物可以彼此聯(lián)合使用，也可選擇將本發(fā)明的化合物與任何其它的活性試劑結(jié)合使用，用于制備ido抑制劑。如果使用的是一組化合物，則可將這些化合物同時、分別或有序地對受試對象進(jìn)行給藥。
本發(fā)明所述藥學(xué)上可接受的輔料，是指除活性成分以外包含在劑型中的物質(zhì)。
經(jīng)試驗證明，本發(fā)明提供的1h-吲唑-4-胺類化合物對ido具有優(yōu)異的抑制作用，可以用于預(yù)防和/或治療多種疾病，如阿爾茨海默病、白內(nèi)障、細(xì)胞免疫激活相關(guān)的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌癥、抑郁癥或色氨酸代謝異常等。
本發(fā)明中，英文縮寫的涵義如下所示：
dhp：1,4-dihydropyridine，二氫吡啶。
dmf：dimethylformamide，二甲基甲酰胺。
dcc：dicyclohexylcarbodiimide，二環(huán)己基碳二亞胺。
diea：n,n-diisopropylethylamine，n,n-二異丙基乙胺。
ea：ethylacetate，乙酸乙酯。
edci：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽。
et3n：triethylamine，三乙胺。
hobt：1-hydroxybenzotriazole，1-羥基苯并三氮唑。
hatu：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯。
pe：petroleumether，石油醚。
tfa：tallowfattyacid，三氟乙酸。
thf：tetrahydrofuran，四氫呋喃。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施方式
所述試劑和原料均來自市售的商品，除專門標(biāo)注了來源的起始原料外，其余試劑購于成都科龍化學(xué)試劑公司。
實施例1中間體原料的合成
(1)6a和6b的合成
將原料4-硝基-1h-吲唑5a(cas:2942-40-7,1.4g,8.26mmol，購于安耐吉化學(xué)試劑有限公司)或6-溴-4-硝基-1h-吲唑5b(cas:885518-46-7,2.0g,8.26mmol，購于江蘇南通生物科技有限公司)溶于乙醇(20ml)和水(10ml)的混合溶劑中，加入氯化銨(221.5mg,4.13mmol)，先將一部分鐵粉(1.3g,23.46mmol)加入其中，升溫至80℃攪拌反應(yīng)5分鐘，再將另剩余鐵粉(1.0g,17.86mmol)加入，繼續(xù)攪拌反應(yīng)20分鐘。tlc檢測原料反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液趁熱過濾，濾渣用乙醇(10ml)洗。減壓旋去乙醇，用乙酸乙酯(20ml)萃取水層三次。合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，旋干，過柱(pe:ea＝8:1)，得淡黃色固體，收率92-94％。6a的收率為94％，6b的收率為92％。
(2)6c的合成
2,5-二甲基-1,3-二硝基苯(8)的合成
將對二甲苯(7)(360.0mg,3.40mmol)裝于圓底燒瓶中，冰浴冷卻至0℃，緩慢滴加，90％硝酸溶液和濃硫酸(2:1)的混酸溶液(1ml)，有固體析出，室溫攪拌反應(yīng)3h，tlc檢測原料(7)反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液倒入冰水中，過濾，濾餅真空干燥箱干燥12h，得淡黃色固體545.8mg，收率82％。
2,5-二甲基-3-硝基苯胺(9)的合成
將2,5-二甲基-1,3-二硝基苯(8)(196.0mg,1.00mmol)溶于meoh(6ml)和二氧六環(huán)(3ml)中，加入濃鹽酸(0.60ml)和fe(168.90mg,3.00mmol)，升至80℃攪拌反應(yīng)12h。tlc檢測原料(8)反應(yīng)完全后，先過濾，再將反應(yīng)液旋干，加少量水，飽和nahco3溶液將ph調(diào)至7～8，乙酸乙酯提取三次，乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，旋干得淡黃色固體142.8mg，收率86％。
6-甲基-4-硝基-1h-吲唑(10)的合成
將2,5-二甲基-3-硝基苯胺(9)(83.0mg,0.50mmol)溶于冰醋酸(3ml)中，再將nano2(69.0mg,1.00mmol)溶于水(0.5ml)中，室溫攪拌下將nano2的水溶液緩慢滴加到2,5-二甲基-3-硝基苯胺(9)的冰醋酸溶液中，有固體析出，室溫攪拌反應(yīng)13h。tlc檢測原料(9)反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液倒入冰水中，過濾，濾餅真空干燥箱干燥12h，得黃色固體79.6mg，收率90％。
6-甲基-1h-吲哚-4-胺(6c)的合成
將原料6-甲基-4-硝基-1h-吲唑(10)(50mg,0.28mmol)溶于乙醇(2ml)和水(1ml)的混合溶劑中，加入氯化銨(1.6mg,0.03mmol)，再加入鐵粉(79.1mg,1.41mmol)加入其中，升溫至80℃攪拌反應(yīng)0.5h，tlc檢測原料(10)反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液趁熱過濾，濾渣用乙醇洗。減壓旋去乙醇，用乙酸乙酯萃取水層三次。合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，旋干，過柱(pe:ea＝10:1)，得34.9mg淡黃色固體，收率84％。
實施例2本發(fā)明化合物3a、3b和3c的合成
2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)乙酸乙酯(11)的合成
將6-溴-1h-吲唑-4-氨基6b(212.0mg,1.00mmol)溶于dmf(5ml)中，加入碳酸鉀(345.0mg,2.50mmol)和碘化鉀(14.9mg,0.09mmol)。氬氣保護(hù)下，加入溴乙酸乙酯(167.0μl,1.50mmol)，65℃反應(yīng)過夜。tlc檢測原料(6b)反應(yīng)完全后，用油泵抽走大量的dmf，加入乙酸乙酯(25ml)，用水(20ml)洗三次。乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，旋干過柱(pe:ea＝15:1)。得淡黃色固體206.9mg，收率70％。
2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)乙酸(12)的合成
將2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)乙酸乙酯(11)(80.0mg,0.27mmol)溶于乙醇(1.5ml)和水(1.5ml)中，加入氫氧化鈉(32.2mg,0.81mmol)，室溫攪拌反應(yīng)過夜。tlc檢測原料反應(yīng)完畢后，用1mol/l的稀鹽酸調(diào)ph為5，減壓旋干反應(yīng)液，直接用于下一步反應(yīng)，收率100％
2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-n-四氫-2h-吡喃-4-乙酰胺(3a)的合成
將酸12(50.0mg,0.19mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，置于冰浴下，滴入四氫-2h-吡喃-4-胺13(57ul,0.56mmol)，分別將edci(42.6mg,0.22mmol)、hobt(32.4mg,0.22mmol)、diea(61ul,0.37mmol)加入，0℃反應(yīng)5分鐘后，升至室溫(25℃)攪拌過夜。tlc檢測待原料(12)反應(yīng)完全后，反應(yīng)液用飽和碳酸氫鈉(1.5ml)洗滌，有機(jī)相旋干、過柱(pe:ea＝10:1)，得白色粉末42.1mg，收率65％。
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ8.22(d,1h,j＝7.5hz,amide),8.07(s,1h,indazole-h3),6.87(s,1h,indazole-h7),6.29(d,1h,j＝1.1hz,indazole-nh),6.14(s,1h,indazole-h5),4.90(s,1h,ch2),3.85-3.76(m,4h,pyran-h2andpyran-h6),3.52-3.48(m,1h,pyran-h4),3.42-3.34(m,4h,pyran-h3andpyran-h5).esi-ms:375.0452[m+na].
2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-n-(4-乙氧羰基苯基)乙酰胺(3c)的合成
以酸12(50.0mg,0.19mmol)和4-氨基苯甲酸乙酯14(91.5mg,0.56mmol)為原料，按照3a的制備方法得到，得到3c46.4mg，收率60％。1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ10.67(s,1h,amide),8.13(s,1h,indazole-h3),7.82(d,2h,j＝8.7hz,ar-h2andar-h6),7.74(d,2h,j＝8.7hz,ar-h3andar-h5),6.98(s,1h,indazole-h7),6.32(d,1h,j＝1.2hz,indazole-nh),6.18(s,1h,indazole-h5),5.21(s,2h,benzyl-ch2),4.48(q,2h,j＝6.8hz,ch2ch3),1.30(t,3h,j＝6.8hz,ch2ch3).esi-ms:417.03[m+h].
2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-n-(4-羧基苯基)乙酰胺(3b)的合成
將酰胺3c(40.0mg,0.10mmol)溶于乙醇(1.0ml)和水(1.0ml)中，加入氫氧化鈉(11.5mg,0.29mmol)，室溫攪拌過夜。tlc檢測待原料反應(yīng)完全后，用1mol/l的稀鹽酸調(diào)ph為5，有白色固體析出，過濾，減壓干燥，得15.6mg白色固體，收率42％。
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.80(br,1h,cooh),10.67(s,1h,amide),8.13(s,1h,indazole-h3),7.91(d,2h,j＝8.7hz,ar-h2andar-h6),7.79(d,2h,j＝8.7hz,ar-h3andar-h5),6.98(s,1h,indazole-h7),6.32(d,1h,j＝1.2hz,indazole-nh),6.18(s,1h,indazole-h5),5.21(s,2h,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ207.0,167.3,166.7,143.9,143.1,132.9,131.0,126.0,121.9,118.9,113.2,104.7,99.6,52.2.esi-ms:389.03[m+h].
實施例3本發(fā)明化合物1a、1c-j和1p的合成
將胺6b(0.28mmol)和苯甲醛16(0.24mmol)溶于二氯甲烷(dcm，3ml)中，加入二氫吡啶(dhp，83.5mg,0.33mmol)和適量4a分子篩(840.2mg)，滴入三氟醋酸(tfa，17.6μl,0.24mmol)，40℃回流12小時，將反應(yīng)液過濾，旋干，過柱得化合物1a。
4-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯甲酸(1a).收率64％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.80(br,2h,coohandindazole-nh),8.22(s,1h,indazole-h3),7.91(d,2h,j＝8.3hz,ar-h2andar-h6),7.49(d,2h,j＝8.3hz,ar-h3andar-h5),6.64(s,1h,indazole-h7),6.01(s,1h,indazole-h5),4.53(s,2h,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.7,145.3,143.0,142.2,132.5,130.0,129.9,127.5,121.7,112.6,101.2,100.6,46.2.esi-ms:344.0035[m-h].
選擇相應(yīng)的醛原料，按照類似的方法制備得到化合物1c-j和1p，結(jié)果和表征如下：
n-芐基-6-溴-1h-吲唑-4-胺(1c).收率43％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.83(s,1h,indazole-nh),8.23(s,1h,indazole-h3),7.40-7.23(m,5h,ar-h),6.83(s,1h,indazole-h7),6.06(s,1h,indazole-h5),4.44(d,2h,j＝6.0hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ143.2,142.1,139.9,132.7,128.9,127.5,127.3,121.7,112.6,101.2,100.3,46.4.esi-ms:302.02[m+h].
3-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯甲酸(1d).收率60％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.90(br,2h,coohandindazole-nh),8.22(s,1h,indazole-h3),7.98(s,1h,ar-h2),7.83(d,1h,j＝7.6hz,ar-h4),7.64(d,1h,j＝7.6hz,ar-h6),7.48(t,1h,j＝7.6hz,ar-h5),7.37(t,1h,j＝6.0hz,nh),6.84(s,1h,indazole-h7),6.05(s,1h,indazole-h5),4.51(d,2h,j＝6.0hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.8,143.0,142.2,140.6,132.5,132.1,131.4,129.1,128.3,128.3,121.7,112.6,101.2,100.5,46.0.esi-ms:344.00[m-h].
6-溴-n-(4-甲基芐基)-1h-吲唑-4-胺(1e).收率65％；黃色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.82(s,1h,indazole-nh),8.22(s,1h,indazole-h3),7.26(d,2h,j＝7.9hz,ar-h2andar-h6),7.14(d,2h,j＝7.9hz,ar-h3andar-h5),6.82(s,1h,indazole-h7),6.04(s,1h,indazole-h5),4.38(d,2h,j＝6.0hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ143.2,141.2,136.8,136.3,132.7,129.4,127.5,121.7,112.6,101.2,100.2,46.2,21.1.esi-ms:316.03[m+h].
6-溴-n-(4-氯芐基)-1h-吲唑-4-胺(1f).收率71％；黃色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.85(s,1h,indazole-nh),8.21(s,1h,indazole-h3),7.40(s,4h,ar-h),7.32(t,1h,j＝6.0hz,nh),6.84(s,1h,indazole-h7),6.03(s,1h,indazole-h5),4.43(d,2h,j＝6.0hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ142.9,142.1,139.0,132.6,131.8,129.3,127.5,121.7,112.6,101.3,100.5,45.7.esi-ms:335.97[m+h].
4-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯酚(1g).收率59％；黃色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.80(s,1h,indazole-nh),9.29(s,1h,indazole-h3),8.21(s,1h,oh),7.17(d,2h,j＝8.4hz,ar-h3andar-h5),6.81(s,1h,indazole-h7),6.72(d,2h,j＝8.4hz,ar-h2andar-h6),6.06(s,1h,indazole-h5),4.29(d,2h,j＝6.0hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ156.7,143.2,142.8,132.7,129.7,128.8,121.8,115.6,112.6,101.2,100.0,46.1.esi-ms:318.03[m+h].
5-(((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)-2-羥基苯甲酸hydroxybenzoicacid(1h).收率82％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.80(br,2h,coohandindazole-nh),8.21(s,1h,indazole-h3),7.82(s,1h,ar-h6),7.46(d,1h,j＝8.4hz,ar-h4),7.24(t,1h,j＝6.0hz,nh),6.87(d,2h,j＝8.4hz,ar-h3),6.83(s,1h,indazole-h7),6.06(s,1h,indazole-h5),4.35(d,2h,j＝6.0hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.8,143.0,142.2,140.6,132.5,132.1,131.4,129.2,128.3,121.7,117.3,112.6,101.1,100.4,49.1.esi-ms:360.02[m-h].
2-(4-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯基)乙酸(1i).收率81％；黃色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.80(br,2h,coohandindazole-nh),8.23(s,1h,indazole-h3),7.33(d,2h,j＝8.0hz,ar-h2andar-h6),7.23(d,2h,j＝8.0hz,ar-h3andar-h5),6.83(s,1h,indazole-h7),6.05(s,1h,indazole-h5),4.40(s,2h,ch2nh),3.18(s,2h,ch2cooh).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ173.2,143.2,142.2,138.1,134.0,132.6,129.9,127.5,121.8,112.6,101.2,100.3,49.1,46.2.esi-ms:358.03[m-h].
2-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯酚(1j).收率63％；黃色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.81(s,1h,indazole-nh),9.63(s,1h,indazole-h3),8.22(s,1h,indazole-h7),7.19-7.05(m,2h,ar-h4andar-h6),6.87-6.72(m,2h,ar-h3andar-h5),6.05(s,1h,indazole-h5),4.34(d,2h,j＝5.8hz,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ155.4,143.4,142.1,132.7,128.5,128.2,125.3,121.8,119.4,115.4,112.5,100.9,100.0,49.1.esi-ms:318.02[m+h].
6-溴-n-(2-硝基芐基)-1h-吲唑-4-胺(1p).收率70％，黃色固體。1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.20(s,1h,indazole-nh),8.31(s,1h,indazole-h3),7.98-7.55(m,4h,ar-h),6.69(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),6.01(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5),4.56(s,2h,benzyl-ch2).esi-ms:346.11[m+h]。
實施例4本發(fā)明化合物1b的合成
按照實施例3中類似的方法合成化合物1b，區(qū)別在于以化合物6a替代化合物6b，得化合物1b。
4-((1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯甲酸(1b).收率62％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.79(br,2h,coohandindazole-nh),8.22(s,1h,indazole-h3),7.90(d,2h,j＝7.4hz,ar-h2andar-h6),7.50(d,2h,j＝7.4hz,ar-h3andar-h5),6.99-6.96(m,1h,indazole-h6),6.66(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),5.90(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5),4.52(s,2h,benzyl-ch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.7,146.1,142.0,141.7,132.1,129.9,129.7,128.0,127.5,113.8,98.2,98.1,46.5.esi-ms:266.11[m-h].
實施例5本發(fā)明化合物1k的合成
(1s,2s)-2-羥基環(huán)己烷甲醛(17)的合成
將庚二醛(40.0mg,0.31mmol)溶于dcm(2ml)中，加入l-脯氨酸(3.6mg,0.031mmol)，室溫攪拌反應(yīng)兩小時。tlc檢測待原料庚二醛反應(yīng)完全后。旋干，過柱(pe:ea＝6:1)，得白色液體34.5mg，收率86％。
(1s,2r)-2-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)甲基)環(huán)己醇(1k)的合成
制備化合物1k(56.3mg,0.17mmol，收率62％)：以胺6b(60.0mg,0.28mmol)和醛17(30.7mg,0.24mmol)為原料，按照1a的制備方法得到。
黃色固體。1h-nmr(400mhz,cdcl3,ppm):δ7.94(s,1h,indazole-h3),6.96(s,1h,indazole-h7),6.33(s,1h,indazole-h5),3.56-3.50(m,1h,cyclohexanol-h1),3.35-3.25(m,2h,ch2nh),2.03-2.00(m,1h,cyclohexanol-h3),1.88-1.71(m,4h,cyclohexanol-h3andh6),1.39-1.25(m,4h,cyclohexanol-h4andh5).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ142.8,141.8,131.9,123.0,112.7,102.8,101.1,49.3,44.1,36.1,30.9,29.7,25.2,24.6.esi-ms:346.0498[m+na].
實施例6本發(fā)明化合物1l、1m、1n和1o的合成
合成路線如下所示：
(1)4-(1-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-2-羥乙基)苯甲酸甲酯(1m)和4-(2-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-1-羥乙基)苯甲酸甲酯(1o)的合成
將環(huán)氧18(229.2mg,1.42mmol)和苯胺6b(300.0mg,1.42mmol)溶于乙醇和水1:1的混合溶液(20ml)中，升溫至100℃回流反應(yīng)過夜。tlc檢測待原料(18)反應(yīng)完全后，減壓旋走乙醇，用乙酸乙酯(15ml)萃取反應(yīng)液3次，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，旋干，過柱。先用pe:ea＝15:1沖去小極性雜質(zhì)，再用pe:ea＝6:1洗脫化合物1m，最后用pe:ea＝3:1洗脫化合物1o(總收率43％)。
化合物1m:收率20％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.87(s,1h,indazole-nh),8.33(s,1h,indazole-h3),7.92(d,2h,j＝8.3hz,ar-h2andar-h6),7.57(d,2h,j＝8.3hz,ar-h3andar-h5),6.94(d,1h,j＝6.8hz,nh),6.82(s,1h,indazole-h7),5.88(s,1h,indazole-h5),5.11(t,1h,j＝5.3hz,oh),4.69-4.64(m,1h,nhch),3.83(s,3h,och3),3.76-3.71(m,2h,ohch2).
化合物1o:收率23％；棕色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.81(s,1h,indazole-nh),8.18(s,1h,indazole-h3),7.94(d,2h,j＝8.3hz,ar-h2andar-h6),7.56(d,2h,j＝8.3hz,ar-h3andar-h5),6.83(s,1h,indazole-h7),6.67(t,1h,j＝5.7hz,nh),6.19(s,1h,indazole-h5),5.77(d,1h,j＝4.4hz,oh),4.93-4.89(m,1h,ohch),3.86(s,3h,och3),3.34(m,2h,nhch2).
(2)4-(1-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-2-羥乙基)苯甲酸(1l)和4-(2-(6-溴-1h-吲唑-4-氨基)-1-羥乙基)苯甲酸(1n)的合成
以酯1m(45.0mg,0.11mmol)為原料，按照實施例2中3b的制備方法得到化合物1l(38mg,0.10mmol)，棕色固體。
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.87(br,2h,coohandindazole-nh),8.35(s,1h,indazole-h3),7.91(d,2h,j＝8.2hz,ar-h2andar-h6),7.54(d,2h,j＝8.2hz,ar-h3andar-h5),6.97(d,1h,j＝6.7hz,nh),6.81(s,1h,indazole-h7),5.89(s,1h,indazole-h5),5.13(br,1h,oh),4.68-4.63(m,1h,nhch),3.75-3.71(m,2h,ohch2).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.7,147.0,142.5,142.2,132.7,131.0,129.9,127.5,121.5,112.7,101.9,100.6,65.8,59.8,49.1.esi-ms:376.0299[m+h].
以酯1o(45.0mg,0.11mmol)為原料，按照實施例2中3b的制備方法得到化合物1n(38mg，收率87％)，棕色固體。
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.85(br,2h,coohandindazole-nh),8.20(s,1h,indazole-h3),7.92(d,2h,j＝8.3hz,ar-h2andar-h6),7.53(d,2h,j＝8.3hz,ar-h3andar-h5),6.84(s,1h,indazole-h7),6.71(t,1h,j＝5.7hz,nh),6.19(s,1h,indazole-h5),5.78(br,1h,oh),4.91(m,1h,ohch),4.13(m,1h,nhch).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.8,149.4,143.2,142.2,132.6,129.6,126.7,121.9,112.6,100.8,100.2,70.6,51.2.esi-ms:376.0293[m+h].
實施例7本發(fā)明化合物1q的合成
將硝基化合物1p(2.9g,8.26mmol)溶于乙醇(20ml)和水(10ml)的混合溶劑中，加入氯化銨(221mg,4.13mmol)，先將一部分鐵粉(1.314g,23.46mmol)加入其中，升溫至80℃攪拌反應(yīng)5分鐘，再將另剩余鐵粉(1g,17.86mmol)加入，繼續(xù)攪拌反應(yīng)20分鐘。tlc檢測原料1p反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液趁熱過濾，濾渣用乙醇(10ml)洗。減壓旋去乙醇，用乙酸乙酯(20ml)萃取水層三次。合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，旋干，過柱((pe:ea＝3:1))，得2.4g淡黃色固體，收率92.1％。
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.21(s,1h,indazole-nh),8.30(s,1h,indazole-h3),6.69(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),6.91-6.01(m,5h,ar-h,indazole-h5),4.35(s,2h,benzyl-ch2).esi-ms:316.13[m+h].
實施例8本發(fā)明化合物1r的合成
按照實施例3中類似的方法合成化合物1r，區(qū)別在于以化合物6c替代化合物6b，得化合物1r。
4-((6-甲基-1h-吲唑-4-氨基)甲基)苯甲酸(1r).收率70％；黃色固體；1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.79(br,2h,coohandindazole-nh),8.23(s,1h,indazole-h3),7.91(d,2h,j＝7.4hz,ar-h2andar-h6),7.43(d,2h,j＝7.4hz,ar-h3andar-h5),6.62(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),5.84(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5),4.48(s,2h,benzyl-ch2),2.38(s,3h,ch3).13c-nmr(100mhz,d6-dmso,ppm):δ167.7,146.1,142.0,141.7,132.1,129.9,129.7,128.0,127.5,113.8,98.2,98.1,46.5,21.5.esi-ms:281.12[m+h].
實施例9本發(fā)明化合物2a-d的合成
將原料(6b)(50mg,0.185mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，置于冰浴下，滴入化合物21(97.6mg,0.708mmol)，分別將edci(62.4mg,0.329mmol)、hobt(48mg,0.329mmol)、diea(77.5ul,0.470mmol)加入，0℃反應(yīng)5分鐘后，升至室溫(30℃)攪拌過夜。tlc檢測待原料(6a)反應(yīng)完全后，反應(yīng)液用水(1ml)洗滌，再用飽和碳酸氫鈉(1.5ml)洗滌，有機(jī)相旋干、過柱，得2a。黃色固體27.1mg，結(jié)構(gòu)表征如下：
3-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基甲酰))苯酚(2a)
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.83(br,2h,indazole-nhandar-oh),8.52(s,1h,indazole-h3),7.62(s,1h,indazole-h7),6.76-8.09(m,4h,ar-h),7.15(m,1h,ar-h5),6.76(s,1h,indazole-h5),6.26(s,1h,nhco).esi-ms:332.01[m+h].
按照類似的方法，選擇相應(yīng)取代基的苯甲酸，制備得到2b黃色固體35.3mg，收率45.3％。棕黃色固體2c，36.3mg，收率41.5％。結(jié)構(gòu)表征如下：
3-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基甲酰))苯胺(2b)
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.75(s,1h,indazole-nh),8.50(s,1h,indazole-h3),7.64(s,1h,indazole-h7),7.18(d,1h,j＝7.9hz,ar-h6),7.15(m,1h,ar-h5),7.13(s,1h,indazole-h5),7.12(s,1h,ar-h2),7.05(d,1h,j＝7.6,ar-h4),6.54(s,1h,nhco).esi-ms:331.01[m+h].
4-((6-溴-1h-吲唑-4-氨基甲酰))苯甲酸(2c)
1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ13.12(br,2h,coohandindazole-nh),8.56(s,1h,indazole-h3),8.07(d,2h,j＝8.3hz,ar-h2andar-h6),8.03(d,2h,j＝8.5hz,ar-h3andar-h5),7.67(s,1h,indazole-h7),6.70(s,1h,indazole-h5),6.62(s,1h,nhco).esi-ms:359.98[m+h].
實施例10本發(fā)明化合物4a和4b的合成
用5mlthf將化合物(22)(0.63mmol)和三乙胺(0.27ml，1.95mmol)溶解，在0℃攪拌下加入化合物(23)(0.06g，0.20mmol)，同溫攪拌反應(yīng)3h后加入化合物(6b)(0.09g，0.42mmol)，加畢，升至室溫攪拌反應(yīng)12h后tcl顯示完全反應(yīng)。直接將反應(yīng)液旋干得粗品，粗品經(jīng)柱層析(pe:ea＝2：1)純化得白色固體粉末0.07g，收率41％。
化合物4a：1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.40(s,1h,indazole-nh),10.12(br,1h,oh),8.90(s,1h,nhconh),8.35(s,1h,nhconh),8.20(s,1h,indazole-h3),7.31-7.68(m,4h,ar-h),6.87(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),5.99(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5).esi-ms:347.11[m+h].
按照類似的方法合成化合物4b，區(qū)別在于以化合物3-氨基苯酚替代化合物22，得化合物4b，白色固體粉末，收率45％。
4b:1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.40(s,1h,indazole-nh),10.12(br,1h,oh),8.90(s,1h,nhconh),8.65(s,1h,nhconh),8.20(s,1h,indazole-h3),7.38(d,2h,j＝7.4hz,ar-h2andar-h6),6.87(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),6.73(d,2h,j＝7.4hz,ar-h3andar-h5),5.99(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5).esi-ms:347.11[m+h].
實施例11本發(fā)明化合物4c和4d的合成
用4mlch2cl2和4ml飽和nahco3將化合物(25)(0.34mmol)溶于圓底燒瓶中，在0℃攪拌下加入化合物(23)(0.03g，0.10mmol)，同溫攪拌反應(yīng)15min后tcl顯示完全反應(yīng)。將反應(yīng)液倒入分液漏斗中，收集有機(jī)層，干燥，濃縮，未經(jīng)純化直接投下一步。
用5mlch2cl2將化合物(26)(0.34mmol)和化合物(6b)(0.06g，0.28mmol)溶解，置于0℃攪拌反應(yīng)10h后tcl顯示完全反應(yīng)。直接將反應(yīng)液旋干得粗品，粗品經(jīng)柱層析(pe:ea＝3：1)純化得白色固體粉末0.05g，收率51％。
4c:1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.40(s,1h,indazole-nh),10.12(br,1h,oh),8.90(s,1h,nhconh),7.62(s,1h,nhconh),8.20(s,1h,indazole-h3),6.95(d,2h,j＝7.4hz,ar-h2andar-h6),6.71(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),6.73(d,2h,j＝7.4hz,ar-h3andar-h5),5.99(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5),4.25(s,2h,benzyl-ch2).esi-ms:361.01[m+h].
按照類似的方法合成化合物4d，區(qū)別在于以化合物3-羥基芐胺替代化合物25，得化合物4d，白色固體粉末，收率55％
4d:1h-nmr(400mhz,d6-dmso,ppm):δ12.40(s,1h,indazole-nh),10.12(br,1h,oh),8.90(s,1h,nhconh),7.62(s,1h,nhconh),8.20(s,1h,indazole-h3),6.71(d,1h,j＝7.9hz,indazole-h7),5.99(d,1h,j＝7.1hz,indazole-h5),7.10-6.72(m,4h,ar-h),4.43(s,2h,benzyl-ch2).esi-ms:361.01[m+h].
實施例12本發(fā)明化合物對ido蛋白的抑制活性
重組人ido蛋白經(jīng)大腸桿菌表達(dá)，鎳親合層析純化而得?；衔飳do抑制活性實驗采用l-色氨酸作為底物。待測化合物溶解在10％dmso溶液中配制成稀釋液。取5ul稀釋液加入到100μl反應(yīng)體系中。100μl反應(yīng)體系中含有0.5％dmso，40nmol/lido，900μmol/ll-色氨酸，以及其他反應(yīng)共存物(磷酸鉀緩沖液、抗壞血酸、過氧化氫酶，亞甲基藍(lán))。反應(yīng)混合物于37度下培育180分鐘，再加入三氯乙酸終止反應(yīng)。使用tecaninfinitem1000酶標(biāo)儀在321nm處測定產(chǎn)生的n-甲?；虬彼岬臐舛龋瑥亩u價化合物對ido的抑制活性。陰性對照物是以5μl的緩沖液代替ido。臨床iii期的ido抑制劑incb024360作為陽性對照，驗證本實驗建立的ido活性檢測體系是否有效。
每個濃度設(shè)立三復(fù)孔。使用軟件graphpadprism進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。在不含待測化合物的反應(yīng)液中，吸光度(at)定義為100％活性。在不含ido的反應(yīng)液中，吸光度(ab)定義為0％活性。對于待測化合物，活性的計算公式為：％activity＝[(a-ab)/(at-ab)]×100，其中a為含待測化合物的反應(yīng)液的吸光度。抑制率的計算公式為：％inhibition＝100-％activity.
通過以上實驗方法，測試了本發(fā)明中的部分化合物針對ido的抑制活性。具體部化合物在1μm、10μm、100μm濃度下的抑制活性見表1。
其中a表示抑制率大于90％、b表示抑制率為70-90％，c表示抑制率為50-69％；d表示抑制率為10-49％，e表示抑制率小于10％；陽性對照物在濃度為0.05μm時的抑制率為46％。
表1本發(fā)明化合物對ido的抑制活性
構(gòu)效關(guān)系顯示：當(dāng)r1為含鹵素的取代基時，化合物的ido酶抑制活性顯著增加；而r1為h或甲基時，活性顯著降低。當(dāng)y為氨基連接時，化合物的活性顯著增加。當(dāng)r2結(jié)構(gòu)中含有能形成氫鍵的官能團(tuán)時，化合物的活性顯著增加。
經(jīng)試驗證明，本發(fā)明提供的1h-吲唑-4-胺類化合物對ido具有優(yōu)異的抑制作用，可以用于預(yù)防和/或治療多種疾病，如阿爾茨海默病、白內(nèi)障、細(xì)胞免疫激活相關(guān)的感染、自身免疫性疾病、艾滋病、癌癥、抑郁癥或色氨酸代謝異常等。