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仿刺參的雌核發(fā)育誘導(dǎo)方法與流程

文檔序號:12778892閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種仿刺參的雌核發(fā)育誘導(dǎo)方法,其特征在于,采用電刺激法,電刺激前先將卵子移入電刺激緩沖液中平衡 2min,調(diào)好電脈沖儀參數(shù),用吸管吸取 1ml 卵子放入電擊杯中,即可進行電刺激處理;

所述電刺激緩沖液為Zimmerman氏緩沖液,具體成分為:0.1 mmol/L Ca(C2H3O2)2H2O,1 mmol/L K2HPO4,0.5 mmol/L Mg(C2H3O2)2·4H2O,0.1 mmol/L 還原型谷胱甘肽,1% BSA,0.28 mmol/L蔗糖;

所述電脈沖儀參數(shù)為場強0.8 kv/cm,電容3 μF,2次電脈沖。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的仿刺參的雌核發(fā)育誘導(dǎo)方法,其特征在于,所述電刺激時的卵子密度為11×104個/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的仿刺參的雌核發(fā)育誘導(dǎo)方法,其特征在于,電刺激后卵子及胚胎的培養(yǎng)方法為:經(jīng)電刺激后的卵子被放入直徑 15 cm 培養(yǎng)皿中,用高溫蒸煮的過濾海水培養(yǎng),水溫保持 20℃,培養(yǎng)密度為每個培養(yǎng)皿中每升約 2×105個卵子;培養(yǎng)初期每半小時輕輕攪動海水一次,以后每 3~4h 攪動一次,以促進其孵化。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的仿刺參的雌核發(fā)育誘導(dǎo)方法,其特征在于,電刺激處理后 2 小時統(tǒng)計各組的卵裂率,24 小時統(tǒng)計胚胎存活率;

卵裂率或雌核發(fā)育誘導(dǎo)率=發(fā)生卵裂和排放極體的卵數(shù)/觀察總卵數(shù)×100%;

胚胎存活率=上浮的原腸胚數(shù)量/發(fā)生卵裂的總卵數(shù)×100%。

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