本發(fā)明涉及抗體制備技術(shù)領域，具體涉及一種高效價卵黃抗體制備方法。

背景技術(shù)：

巴氏桿菌屬為無芽孢，不運動，兼性厭氧，菌體兩端常染色濃重的革蘭氏染色陰性小桿菌。因1880年巴斯德氏首先自病雞分離到本屬中的多殺巴氏桿菌而得名。鼠疫桿菌、假結(jié)核桿菌、腸道結(jié)腸炎桿菌和土拉桿菌原歸本屬，現(xiàn)前三者改歸耶爾森氏菌屬，最后一種改歸弗朗西斯氏菌屬。本屬已確定的種有多殺巴氏桿菌、嗜肺巴氏桿菌、溶血巴氏桿菌、尿巴氏桿菌和鴨疫巴氏桿菌等。

豬巴氏桿菌并目前主要用疫苗免疫來預防該疾病的發(fā)生，通過免疫孕期母豬，小豬通過初乳獲得母源抗體。然而對于未接種疫苗的個體，當其感染上述病癥后臨床上主要采取對癥治療和抗生素類藥物預防并發(fā)癥的發(fā)生，但是由于該病發(fā)病急、致死率高，上述治療方法的效果不理想。因此，急需一種針對仔豬巴氏桿菌病特異性強、抗菌譜廣、治療效果好且療效迅速的治療制劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種高效價卵黃抗體制備方法。以實現(xiàn)注射一種針劑即可較全面的治療因各型巴氏桿菌抗原菌株所導致的疾病，同時具有較明顯的療效。

為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種高效價卵黃抗體制備方法，包括以下步驟：

1)分離高免雞蛋蛋黃：將仔豬巴氏桿菌滅活苗免疫過的高免雞蛋進行消毒后送入蛋清蛋黃分離機進行蛋黃分離；

2)制備精制蛋黃抗體：將步驟(1)所分離的蛋黃中加入醋酸緩沖液進行稀釋，其中，蛋黃與醋酸緩沖液的體積比為1：5，用酸調(diào)PH至4.5，4℃沉淀；按每毫升稀釋蛋黃液加16μL辛酸的比例在室溫攪拌下逐滴加入辛酸，于30min內(nèi)加完，低溫下靜置2h，然后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min，棄沉淀；上清液過濾后，加入1/10體積的0.01mol/L的PBS，用堿調(diào)PH至7.2；將40％甲醛溶液與該上清液混合，使甲醛的終濃度達到0.1％(V/V)，充分攪拌均勻。

作為優(yōu)選，步驟1)中免疫次數(shù)為2次。

作為優(yōu)選，步驟1)中消毒方法為：用水將高免雞蛋外表洗凈，再用0.01～0.1％的百毒殺浸泡3-5min，擦干，再用乙醇溶液擦洗，晾干。

在以上技術(shù)方案中，抗巴氏桿菌蛋黃抗體制備完畢后還應對產(chǎn)物進行抗體效價測定，其具體方法可以是用ELISA法。

利用本發(fā)明方法制備的抗豬仔豬巴氏桿菌精制蛋黃抗體，是一種針對仔豬巴氏桿菌疾病具有特異性、治療效果好且療效迅速的治療制劑，能針對仔豬巴氏桿菌病進行有效的防治；其制備方法采用辛酸沉淀法提取抗仔豬巴氏桿菌精制蛋黃抗體，該法安全、價格低廉，適于大規(guī)模生產(chǎn)，且制備的蛋黃抗體純度高、效價高、性質(zhì)穩(wěn)定、易于保存。

具體實施方式

以下將對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在以下實施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術(shù)和科學術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。以下實施例中所用到的儀器、試劑，如無特殊說明，均為市售常規(guī)產(chǎn)品。

實施例1

一種高效價卵黃抗體制備方法，包括以下步驟：

1)分離高免雞蛋蛋黃：將仔豬巴氏桿菌滅活苗免疫過的高免雞蛋進行消毒后送入蛋清蛋黃分離機進行蛋黃分離；

2)制備精制蛋黃抗體：將步驟1)所分離的蛋黃中加入醋酸緩沖液進行稀釋，其中，蛋黃與醋酸緩沖液的體積比為1：5，用酸調(diào)PH至4.5，4℃沉淀；按每毫升稀釋蛋黃液加16μL辛酸的比例在室溫攪拌下逐滴加入辛酸，于30min內(nèi)加完，低溫下靜置2h，然后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min，棄沉淀；上清液過濾后，加入1/10體積的0.01mol/L的PBS，用堿調(diào)PH至7.2；將40％甲醛溶液與該上清液混合，使甲醛的終濃度達到0.1％(V/V)，充分攪拌均勻。

在以上技術(shù)方案的基礎上，滿足以下條件

步驟1)中免疫次數(shù)為2次。

步驟1)中消毒方法為：用水將高免雞蛋外表洗凈，再用0.01％的百毒殺浸泡4min，擦干，再用乙醇溶液擦洗，晾干。

實施例2

一種高效價卵黃抗體制備方法，包括以下步驟：

1)分離高免雞蛋蛋黃：將仔豬巴氏桿菌滅活苗免疫過的高免雞蛋進行消毒后送入蛋清蛋黃分離機進行蛋黃分離；

2)制備精制蛋黃抗體：將步驟1)所分離的蛋黃中加入醋酸緩沖液進行稀釋，其中，蛋黃與醋酸緩沖液的體積比為1：5，用酸調(diào)PH至4.5，4℃沉淀；按每毫升稀釋蛋黃液加16μL辛酸的比例在室溫攪拌下逐滴加入辛酸，于30min內(nèi)加完，低溫下靜置2h，然后以10000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min，棄沉淀；上清液過濾后，加入1/10體積的0.01mol/L的PBS，用堿調(diào)PH至7.2；將40％甲醛溶液與該上清液混合，使甲醛的終濃度達到0.1％(V/V)，充分攪拌均勻。

以上對本發(fā)明的實施例進行了詳細說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。