本發(fā)明涉及藥物化學領(lǐng)域，具體涉及多靶點型他米巴羅汀衍生物及其制備方法，以及這些化合物的醫(yī)藥用途，特別是在制備抗腫瘤藥物中的用途。

背景技術(shù)：
維甲酸受體是核受體(nuclearreceptors，NR)超家族的一個子家族，它由2類受體組成，分別為維甲酸受體(retinoicacidreceptors,RARs)和維甲酸X受體(retinoidXreceptors,RXRs)，RARs和RXRs又分別包括α、β和γ三個亞型。維甲酸類化合物(retinoids)是4000余個天然及合成化合物的總稱，它們在結(jié)構(gòu)與功能上均與維生素A(retinol)的代謝產(chǎn)物：全反式維甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)有關(guān)。維甲酸類化合物具有廣泛的生物學作用，在維持機體正常功能、抗腫瘤、治療皮膚病和代謝疾病等方面具有重要的作用，其主要作用機制是通過結(jié)合和激活核受體RAR或RXR而調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，進而調(diào)節(jié)功能性蛋白的表達來實現(xiàn)其生理作用。目前已上市的維甲酸受體亞型選擇性藥物包括他米巴羅汀(tamibarotene，AM80)和Bexarotene。維甲酸類化合物臨床應(yīng)用中常見副作用有皮膚粘膜干燥，頭痛，骨與關(guān)節(jié)疼痛，潰瘍，惡心，嘔吐等。ATRA、13-cisRA等經(jīng)常出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，這是限制維甲類化合物的主要原因，因為耐藥的發(fā)生，導致疾病復發(fā)、療效不佳甚至治療失??；另外，一些維甲類藥物長期用藥的毒副作用較大，一方面影響了這類藥物的療效，另一面也使得病人的依從性降低，影響了藥物的臨床應(yīng)用。他米巴羅汀(Tamibarotene，AM80)化學名為4-[(5,5,8,8-四甲基-6,7-二氫萘-2-基)氨基甲酰]苯甲酸。由日本東光制藥株式會社開發(fā)，是第一個上市的RARα亞型選擇性激動劑，它針對ATRA的耐藥性而開發(fā)，是對急性早幼粒細胞白血病復發(fā)患者具有顯著分化誘導能力的藥品。該藥物顯示對ATRA緩解后復發(fā)的APL具有顯著有效性，對ATRA應(yīng)答困難患者的有效性也可期待。與全反式維甲酸(ATRA)相比，其具有更高的療效、更低的耐藥性等優(yōu)點，但是，其毒副作用包括高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥、皮疹、骨痛、維甲酸綜合征和致畸胎作用等限制了它的臨床使用。羥基脲(Hydroxycarbamide，HU)是一種核苷二磷酸還原酶抑制劑，可阻止核苷酸還原為脫氧核苷酸，干擾嘌呤及嘧啶堿基生物合成，選擇性地阻礙DNA合成，對RNA及蛋白質(zhì)合成無阻斷作用。它是一種周期性的特異性藥，對S期細胞敏感。臨床上用于惡性黑色素瘤、胃癌、腸癌、乳癌、膀胱癌等實體瘤的治療。目前研究還發(fā)現(xiàn)它與丙戊酸協(xié)同作用，可以更好地調(diào)節(jié)骨髓性白血病細胞中的NKG2DLs配體從而加強NK細胞的介入，起到更好的抗白血病的作用。5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)化學名為2,4-二羥基-5-氟嘧啶，為嘧啶類的氟化物，屬于抗代謝抗腫瘤藥，能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻斷脫氧嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶核苷核，干擾DNA合成。對RNA的合成也有一定的抑制作用，臨床用于結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、絨毛膜上皮癌、惡性葡萄胎、頭頸部鱗癌、皮膚癌、肝癌、膀胱癌等。目前臨床上有許多藥物可與5-FU聯(lián)合應(yīng)用以增強細胞毒性，此外，已有一些與5-FU聯(lián)合用藥用于治療白血病的研究。來那度胺(Lenalidomide/Revlimid)化學名為3-(7-氨基-3-氧代-1H-異吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮。由美國Celgene公司開發(fā)，是沙利度胺的衍生物，臨床上用于治療骨髓增生異常綜合征及與地塞米松聯(lián)合用藥治療多發(fā)性骨髓瘤。來那度胺對細胞內(nèi)多種生物途徑都有影響。在臨床Ⅰ、Ⅱ期研究中發(fā)現(xiàn)其對多種腫瘤有抑制作用，包括多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌、甲狀腺癌、腎癌、黑色素瘤、肝癌、慢性淋巴細胞白血病。他米巴羅汀(AM80)、羥基脲(Hydroxycarbamide)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、來那度胺(Revlimid)的化學結(jié)構(gòu)式如下：多靶點藥物(multitargetdrugs)是當今新藥研究的一個重要趨勢，它指可以同時作用于同一疾病的多個不同病理靶點而發(fā)揮協(xié)同治療作用的藥物，其通過全面調(diào)節(jié)疾病相關(guān)的多個靶標而起到更佳的治療效果、更少的副作用和更低的耐藥性，尤其適用于治療多病理機制和多基因相關(guān)的各種重大疾病，包括白血病及其他惡性腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病和代謝性疾病等。針對惡性腫瘤的多重發(fā)病機制、多個病理環(huán)節(jié)設(shè)計多靶點藥物或協(xié)同前藥已成為當前藥物設(shè)計領(lǐng)域的重要策略。藥物在體內(nèi)代謝降解，釋放出多個藥效結(jié)構(gòu)后再分別結(jié)合不同靶點而實現(xiàn)協(xié)同調(diào)節(jié)作用，可以產(chǎn)生更好的治療效果和更少的副作用等。此外，協(xié)同前藥或多靶點藥物相比聯(lián)合用藥具有單一的理化特性和均一的藥代動力學特性，可以避免藥物混合物的組分間相互作用以及各組分吸收分布代謝不同步等問題，從而可以更好的發(fā)揮協(xié)同作用，尤其在低濃度情況下，多靶點藥物的療效明顯好于對應(yīng)的單靶點藥物聯(lián)合用藥的療效。因而采用拼合原理設(shè)計合成具有協(xié)同治療作用的新型抗癌藥物，對于尋找療效更佳、耐藥性和副作用更低的抗癌藥物具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種多靶點型他米巴羅汀衍生物，本發(fā)明還提供該衍生物的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：1.多靶點型他米巴羅汀衍生物一種多靶點型他米巴羅汀衍生物，是具有下列結(jié)構(gòu)的化合物之一：N-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)-4-((脲氧基)羰基)苯甲酰胺(1)；(5-氟-2,4-二氧基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)氨基甲酰基)苯甲酸酯(3)；N1-(2-(2,6-哌啶二酮-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)-N4(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)對苯二甲酰胺(5)。2.多靶點型他米巴羅汀衍生物的制備方法本發(fā)明化合物N-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)-4-((脲氧基)羰基)苯甲酰胺(1)的制備方法，步驟如下：將他米巴羅汀(AM80)溶于無水四氫呋喃中，于1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽作用下與五氟苯酚縮合，將所得反應(yīng)液加入羥基脲縮合得到目標化合物1；合成路線如下：反應(yīng)條件：(a).五氟苯酚，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，羥基脲；具體制備步驟如下：將1mmol他米巴羅汀(AM80)溶于無水四氫呋喃中，冰浴下加入1.1mmol1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，加入1.1mmol事先用N,N-二甲基甲酰胺溶好的五氟苯酚；室溫反應(yīng)12h，TLC監(jiān)測反應(yīng)，反應(yīng)完成后，蒸除溶劑待用；先將1mmol羥基脲溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入12mLN-甲基嗎啉，將上部的五氟苯酚酯溶于無水二氧六環(huán)中，滴入N,N-二甲基甲酰胺反應(yīng)液中；室溫反應(yīng)12h，直接過柱，用乙酸乙酯/石油醚＝5/1體積比洗脫得白色固體即為化合物1。本發(fā)明化合物(5-氟-2,4-二氧基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)氨基甲酰基)苯甲酸酯(3)的制備方法，步驟如下：5-氟尿嘧啶(5-FU)于體積百分比37％的甲醛溶液中反應(yīng)得到中間體2，中間體2在四氫呋喃中于二環(huán)己基碳二亞胺和4-二甲氨基吡啶催化下與他米巴羅汀(AM80)反應(yīng)得目標化合物3；合成路線如下：具體制備步驟如下：將10mmol5-氟尿嘧啶(5-FU)和3mL體積百分比37％的甲醛水溶液混合，60℃下攪拌2h，減壓蒸除水分，得到無色粘稠油狀物；所得油狀物用無水乙腈溶解，加入他米巴羅汀(AM80)10mmol，二環(huán)己基碳二亞胺11mmol和4-二甲氨基吡啶1mmol；24h后，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全，蒸除溶劑，加入乙酸乙酯溶解，有機相分別用水、1M鹽酸、飽和碳酸氫鈉、飽和氯化鈉洗滌；用無水硫酸鎂干燥，過濾蒸除溶劑，殘留物用硅膠柱分離，二氯甲烷/甲醇＝60:1體積比，得到白色固體即為化合物3。本發(fā)明化合物N1-(2-(2,6-哌啶二酮-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)-N4(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)對苯二甲酰胺(5)的制備方法，步驟如下：他米巴羅汀(AM80)在N,N-二甲基甲酰胺催化下與氯化亞砜回流反應(yīng)得對應(yīng)的酰氯4，酰氯4與來那度胺縮合得到目標化合物5；合成路線如下：具體制備步驟如下：將他米巴羅汀(AM80)1mmol溶于20mL的氯化亞砜中，滴加兩滴N,N-二甲基甲酰胺，75℃下攪拌回流2h；蒸除溶劑得到化合物黃色油狀化合物4；將來那度胺1mmol溶于吡啶溶液中，冰浴下滴加化合物4的四氫呋喃溶液；撤去冰浴室溫反應(yīng)；24h后，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全，蒸除溶劑，加入乙酸乙酯溶解，有機相分別用水，1M鹽酸，飽和氯化鈉洗滌；用無水硫酸鎂干燥，過濾蒸除溶劑，殘留物用硅膠柱分離，石油醚/乙酸乙酯5:1體積比，得到白色固體即為化合物5。3.多靶點型他米巴羅汀衍生物的應(yīng)用本發(fā)明化合物具有顯著的抗腫瘤活性，因此，本發(fā)明也提供了上述化合物1,3,5的應(yīng)用，尤其是在制備抗惡性腫瘤藥物方面的應(yīng)用。優(yōu)選的，本發(fā)明提供了上述化合物1,3,5在制備抗白血病藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明還提供含有上述化合物的藥物組合物，即：一種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物，包含本發(fā)明化合物和一種或多種藥學上可以接受載體或賦形劑。一種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物，包含本發(fā)明化合物和一種或多種藥學上可以接受載體或賦形劑。本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明將RARα受體選擇性激動劑他米巴羅汀(AM80)通過酯鍵或酰胺鍵融合到分子結(jié)構(gòu)中，合成了一系列新的多靶點前藥。化合物1和化合物3進入到體內(nèi)后，在體內(nèi)酯酶或酰胺酶催化下都可代謝釋放出他米巴羅汀(AM80)，他米巴羅汀(AM80)作用于RARα受體而誘導白血病細胞的分化和抑制其增殖而發(fā)揮白血病治療作用，另一細胞毒藥物作用其各自的靶點，實現(xiàn)兩個藥物協(xié)同作用?？乖鲋硨嶒灲Y(jié)果表明，化合物1和化合物3對幾種白血病細胞的抑制效果明顯的優(yōu)于其各自母體藥物。體內(nèi)動物實驗結(jié)果同樣表明了化合物1對U937移植瘤有明顯的抑制效果。附圖說明圖1是化合物1在人工胃液中的穩(wěn)定性圖；圖2是化合物1在人工腸液中的穩(wěn)定性圖；圖3是化合物1在人血漿中的穩(wěn)定性圖；圖4是化合物3在人工胃液中的穩(wěn)定性圖；圖5是化合物3在人工腸液中的穩(wěn)定性圖；圖6是化合物3在人血漿中的穩(wěn)定性圖；圖7是化合物3在新鮮鼠血漿中的穩(wěn)定性圖；圖8是化合物3在鼠肝勻漿中的穩(wěn)定性圖；以上圖1-8中橫坐標為時間t，單位：小時；縱坐標：峰面積；圖9是U937移植瘤抗腫瘤實驗中各給藥組瘤重圖，縱坐標：瘤重，單位：g；其中SAHA為伏立諾他；圖10是U937移植瘤抗腫瘤實驗中各給藥組腫瘤圖片，其中SAHA為伏立諾他，Ctrl為無菌PBS。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明，但不限于此。實施例1:N-(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)-4-((脲氧基)羰基)苯甲酰胺(1)的制備他米巴羅汀(AM80)(0.35g，1mmol)溶于無水四氫呋喃中，冰浴下加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(0.21g,1.1mmol),加入事先用N,N-二甲基甲酰胺溶好的五氟苯酚(0.20g,1.1mmol)。室溫反應(yīng)12h,TLC監(jiān)測反應(yīng)。反應(yīng)完成后，蒸除溶劑待用。先將羥基脲(0.08g,1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-甲基嗎啉(12mL)將上部的五氟苯酚酯溶于無水二氧六環(huán)中，滴入N,N-二甲基甲酰胺反應(yīng)液中。室溫反應(yīng)12h。直接過柱(EA/PE＝5/1)得白色固體1(0.11g，27％)。ESI-MSm/z:410.5(M+H)+，1H-NMR(600MHzDMSO-d6):δ1.24-1.25(m,12H)，1.64-1.66(m,4H)，6.67(s,2H)，7.31(d,J＝8.4Hz,1H)，7.60(dd,J＝8.4Hz,1H)，7.68(s,1H)，8.11(d,J＝8.4Hz,2H)，8.16(d,J＝8.4Hz,2H),9.87(s,1H)，10.31(s,1H)。mp:124-125℃。實施例2:(5-氟-2,4-二氧基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基-4-((5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)氨基甲酰基)苯甲酸酯(3)的制備5-氟尿嘧啶(5-FU)(1.3g,10mmol)和3mL體積百分比37％的甲醛水溶液混合，60℃下攪拌2h，減壓蒸除水分，得到無色粘稠油狀物。所得油狀物用無水乙腈溶解，加入AM80(3.51g,10mmol)，二環(huán)己基碳二亞胺(2.3g,11mmol)，4-二甲氨基吡啶適量。24h后，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全，蒸除溶劑，加入乙酸乙酯溶解，有機相分別用水，1M鹽酸，飽和碳酸氫鈉，飽和氯化鈉洗滌。用無水硫酸鎂干燥，過濾蒸除溶劑，殘留物用硅膠柱分離(二氯甲烷/甲醇60:1)得到白色固體3(2.93g,60％)。ESI-MSm/z:494.5(M+H)+，1H-NMR(600MHzDMSO-d6):δ1.24-1.25(m,12H),1.65(s,4H),5.87(s,2H),7.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(dd,J1＝2.4Hz,J2＝8.4Hz,1H),7.67(d,J＝2.4Hz,1H),8.07-8.11(m,4H),8.30(d,J＝6.6Hz,1H),10.31(s,1H),12.04(s,1H).mp:124-125℃。實施例3:N1-(2-(2,6-哌啶二酮-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)-N4(5,5,8,8-四甲基-5,6,7,8-四氫-2-萘基)對苯二甲酰胺(5)的制備他米巴羅汀(AM80)(0.35g，1mmol)溶于20mL的氯化亞砜中，滴加兩滴DMF，75℃下攪拌回流2h。蒸除溶劑得到化合物黃色油狀化合物4。將來那度胺(0.26g,1mmol)溶于吡啶溶液中，冰浴下滴加化合物4的四氫呋喃溶液。撤去冰浴室溫反應(yīng)。24h后，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全，蒸除溶劑，加入乙酸乙酯溶解，有機相分別用水，1M鹽酸，飽和氯化鈉洗滌。用無水硫酸鎂干燥，過濾蒸除溶劑，殘留物用硅膠柱分離(石油醚/乙酸乙酯5:1)得到白色固體5(0.33g，55％)。ESI-MSm/z:593.6(M+H)+，1H-NMR(600MHzDMSO-d6):δ1.25-1.30(m,12H)，1.64-1.65(m,4H)，2.00-2.02(m,1H)，2.39-2.42(m,1H)，2.60(d,J＝16.8Hz,1H)，2.89-2.92(m,1H)，4.43-4.51(m,2H)，5.15-5.18(m,1H)，7.31(d,J＝8.4Hz,1H)，7.57-7.61(m,2H)，7.65(d,J＝7.2Hz,1H)，7.71(d,J＝1.2Hz,1H)，7.77(d,J＝7.8Hz,1H)，8.12-8.14(m,4H)，10.27(s,1H)，10.52(s,1H)，11.02(s,1H).mp:207-209℃。實施例4：體外藥效學實驗(MTT法)取人白血病HL60、U937和K562細胞株轉(zhuǎn)接到細胞培養(yǎng)瓶中，加入培養(yǎng)基于37℃、5％CO2和飽和濕度條件下培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細胞1瓶，用移液管吹打均勻，然后取細胞懸液制備血球計數(shù)板涂片，于倒置顯微鏡下計數(shù)細胞數(shù)目，加入培養(yǎng)基調(diào)整細胞數(shù)目至1×105/mL。取96孔細胞培養(yǎng)板進行細胞接種和藥物實驗，周邊孔不用(充填無菌PBS)，設(shè)立空白對照組、陰性對照組、陽性對照組和藥物實驗組，其中空白對照組只加入細胞培養(yǎng)液150μL/孔，陰性對照組接種細胞懸液100μL/孔并且加入細胞培養(yǎng)液50μL/孔，陽性對照組接種細胞懸液100μL/孔并且加入陽性對照藥溶液50μL/孔，藥物實驗組接種細胞懸液100μL/孔并且加入待測化合物溶液50μL/孔，陽性對照組和藥物實驗組分別設(shè)立5個不同的藥物終濃度:0.01、0.1、1、10、100μmol·L-1，每個藥物濃度設(shè)3個平行復孔。藥物加入完畢后，將96孔細胞培養(yǎng)板置于CO2培養(yǎng)箱中于37℃、5％CO2和飽和濕度條件下培養(yǎng)48h。取上述96孔細胞培養(yǎng)板，每孔加入20μL的噻唑藍(MTT)溶液(濃度5mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，取出培養(yǎng)板于2000rpm離心30min，小心吸棄各孔內(nèi)的培養(yǎng)液，每孔加入100μL的DMSO，在平板振蕩器上振蕩15min，使formazan結(jié)晶溶解完全，然后用酶標儀于波長570nm處測定各孔的OD值，計算各藥物在不同濃度下的細胞增殖抑制率，采用統(tǒng)計學軟件SPSS16.0計算半數(shù)抑制濃度(IC50)，其中細胞增殖抑制率按下面公式計算：本發(fā)明所述的目標化合物1,3和陽性對照藥他米巴羅汀(AM80)對人白血病HL60、U937和K562細胞株的增殖抑制活性結(jié)果(IC50/μMa)見下面表1：表1：對人白血病U937、K562、HL60細胞株的增殖抑制活性結(jié)(IC50/μMa)化合物U937K562HL60115.66±3.49NDb21.31±2.6638.21±1.5610.64±4.819.87±1.41他米巴羅汀72.45±12.2831.93±7.4725.47±1.78羥基脲262.83±10.34NDb415.59±37.19五氟尿嘧啶102.11±26.24155.56±35.13129.96±20.97a表中數(shù)值為三次實驗的平均結(jié)果，“±”后的數(shù)值表示標準偏差，b未測。以上生物活性實驗結(jié)果顯示，本發(fā)明所示的目標化合物1和3對上述腫瘤細胞都有一定的增殖抑制作用，與陽性對照藥他米巴羅汀相比，1和3都表現(xiàn)出了更好的增殖抑制活性。此外，化合物1和3的活性均分別優(yōu)于它們相應(yīng)的母體陽性藥羥基脲和五氟尿嘧啶。實施例5：體外穩(wěn)定性實驗(HPLC分析法)我們研究了化合物1和3在人工胃液，人工腸液，人血漿，新鮮鼠血漿以及鼠肝勻漿中的穩(wěn)定性，為進一步動物實驗提供科學依據(jù)。本實驗中人工胃液，腸液的配制的配制參考2010版藥典二部。鼠血漿及鼠肝勻漿取自Wistar大鼠((山東大學實驗動物中心，♀，200±20g)，動物合格證號：SCXK(魯)20090001)。檢測方法為HPLC，液相條件：色譜柱：ODSHYPERSIL(5μm,4.6mm×250mm)；流動相：甲醇：乙腈：水(0.2％甲酸)＝68％：7％：25％(％均為體積百分比)；最大吸收波長為239nm；流速：1mL/min；進樣量：20μM?；衔?的保留時間t＝5.462min,AM80為t＝8.284min，化合物3保留時間t＝7.130min?；衔?的穩(wěn)定性結(jié)果如圖1、2、3所示：從圖中我們可以看出化合物1在人工胃液中穩(wěn)定，在人工腸液及人血漿中能釋放出AM80.化合物3的穩(wěn)定性如圖4-8所示，結(jié)果顯示在人工胃液中穩(wěn)定，在人工腸液和人血漿中不穩(wěn)定且有緩慢降解出AM80，在新鮮鼠血漿及鼠肝勻漿中不穩(wěn)定，有大量的AM80降解。結(jié)果說明化合物1及3都如我們預(yù)期設(shè)計那樣進入體內(nèi)后能緩慢釋放出他米巴羅汀(AM80)和另一細胞毒藥物。實施例6：體內(nèi)藥效實驗(U937移植瘤實驗)1、實驗材料：BALB/c-nu小鼠，雌性，4-5周齡；人白血病細胞株U937。2、實驗步驟：人白血病細胞株U937用含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液在37℃，5％CO2的細胞培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。動物購買后，實驗室平衡飼養(yǎng)1周。取處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞，收集于離心管，1000rpm離心5min，棄去上清，PBS洗滌1次。用PBS重懸細胞，細胞計數(shù)板計數(shù)，使得細胞密度為5×107/mL。裸鼠皮膚消毒后用1mL注射器分別在右側(cè)頸背部皮下接種細胞懸液100μL。接種時盡量使裸鼠皮下瘤呈圓形，形態(tài)規(guī)則，易于觀察測量。接種一周后，瘤子長到接近100mm3時對裸鼠進行隨機分組(每組5只)：(1)、空白組；(2)、(SAHA)(100mg/kg/d,po)；(3)、化合物1(50mg/kg/d,po)；所有組連續(xù)給藥14天。給藥方式為灌胃給藥，陰性對照組給予等體積的配制藥物所用溶劑。給藥期間記下小鼠體重變化。3、實驗結(jié)果：實驗結(jié)果如下圖9、10所示，從圖中我們可以看出化合物1對U937具有一定的抑制活性，相比較于另一上市抗腫瘤藥物伏立諾他(SAHA)，表現(xiàn)出了相當甚至更好的活性(腫瘤抑制率：伏立諾他為32.1％，化合物1為36.8％)。