本發(fā)明屬于微生物學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及丁酸桿菌(Butyribacterintestini)在治療和預(yù)防肥胖及其相關(guān)疾病中的應(yīng)用，也涉及包含丁酸桿菌的組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：人體內(nèi)存在大量共生微生物，它們大部分寄居在人的腸道中，數(shù)量超過(guò)1000萬(wàn)億(1014數(shù)量級(jí)),是人體細(xì)胞總數(shù)的10倍以上。在漫長(zhǎng)的進(jìn)化過(guò)程中，腸道微生物與人類(lèi)達(dá)成了良好的合作，對(duì)人體的營(yíng)養(yǎng)、代謝和免疫都起著至關(guān)重要的作用，許多研究者更多地是將人體腸道微生物群落看作是人體的一個(gè)“器官”，或者是人體第二基因組，其中蘊(yùn)含的海量遺傳信息與人類(lèi)健康密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)糖尿病、冠心病、肥胖、結(jié)腸癌、等數(shù)百種疾病近萬(wàn)種樣品的研究發(fā)現(xiàn)，某些特定的物種與疾病呈現(xiàn)出顯著的關(guān)聯(lián)，這些結(jié)果在疾病的臨床評(píng)定和診斷以及后期的干預(yù)治療提供了一個(gè)全新的方向。肥胖癥是一種慢性疾病，許多因素都會(huì)導(dǎo)致肥胖，其發(fā)病起源至今未研究清楚。肥胖同時(shí)也是一系列疾病的誘導(dǎo)因子，如高血壓、糖尿病、冠心病、膽囊病、骨關(guān)節(jié)炎、睡眠中呼吸窒息、呼吸失調(diào)、子宮瘤、前列腺癌、乳腺癌和結(jié)腸癌等。根據(jù)NIH的報(bào)告，目前約有9700萬(wàn)美國(guó)人超重和過(guò)度肥胖，其中與過(guò)度肥胖相關(guān)的II型糖尿病人數(shù)達(dá)到約1510萬(wàn)人，每年約有20萬(wàn)人死于與肥胖癥相關(guān)的疾病。肥胖通常是由于生理或生物化學(xué)功能改變而導(dǎo)致的體脂肪過(guò)剩。脂肪通常包括中性脂、磷脂和膽固醇。脂肪的增加是由于能量攝入大于能量的消耗。從發(fā)病原理上講，肥胖有兩種類(lèi)型：(a)單純性肥胖(simpleobesity)和(b)繼發(fā)性肥胖(secondobesity)。單純性肥胖可劃分為先天性肥胖(idiopamicobesity)和后天性肥胖(acquiredobesity)，單純性肥胖患者數(shù)量可占95％以上的總肥胖?jǐn)?shù)目。先天 性肥胖是由大量的脂肪細(xì)胞所致，且常見(jiàn)于兒童期肥胖。后天性肥胖是由更大尺寸的脂肪細(xì)胞所致，且常見(jiàn)于成年期肥胖。繼發(fā)性肥胖又被稱(chēng)為癥狀性肥胖，其通常是由內(nèi)分泌或新陳代謝疾病所致。目前有五種治療肥胖的策略：節(jié)食、鍛煉、行為治療、藥物治療和康復(fù)手術(shù)(therapetlticoperation)。采取哪種策略主要視病人的健康危險(xiǎn)因子和體重減輕的速度和效果而定，可選擇或組合這些策略對(duì)肥胖病人進(jìn)行治療。其體重減輕的速度和效果受諸如年齡、身高、家族史和危險(xiǎn)因子等多個(gè)因素的影響。飲食—鍛煉療法，即吃低熱量、低脂肪食物和進(jìn)行有氧鍛煉，但這種方法一般認(rèn)為對(duì)普通大眾不成功，且需要長(zhǎng)期經(jīng)常性地堅(jiān)持；去除體內(nèi)脂肪手術(shù)能達(dá)到立竿見(jiàn)影的效果，但存在諸多限制，如手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)、除脂效果難以持久和花費(fèi)過(guò)于昂貴等。藥物治療是目前主要的臨床治療肥胖及其肥胖相關(guān)疾病(如糖尿病)的方法。藥物治療的機(jī)制包括抑制食欲、增加能量消耗、刺激脂肪移動(dòng)、降低甘油三酯合成和抑制脂肪吸收。目前主要的藥物為：苯丙醇胺(phenylpropanolamine，PPA)、羅氏鮮(orlistat，XenicalⅢ)和諾美婷(sibutramine，ReductilTM)。某些糖尿病人的高血糖通過(guò)飲食和/或鍛煉療法或使用上述治療化合物仍然不能得到適當(dāng)控制。對(duì)于這些病人，應(yīng)使用外源胰島素。對(duì)病人來(lái)說(shuō)，使用外源胰島素是很昂貴和痛苦的方法，還會(huì)給病人帶來(lái)多種并發(fā)癥。例如，由于沒(méi)有吃飯或不正常鍛煉，胰島素劑量的計(jì)算錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致胰島素響應(yīng)(低血糖)。此外，使用藥物還可能發(fā)生對(duì)藥物的局部或全身過(guò)敏或免疫抗性。目前本領(lǐng)域還沒(méi)有一種有效的、副作用小的治療和預(yù)防肥胖及其相關(guān)疾病的方法和藥物。因此本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)一種的新的，無(wú)毒副作用的，用于治療和預(yù)防肥胖及其相關(guān)疾病的藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的另一目的是提供丁酸桿菌在治療和預(yù)防肥胖及其相關(guān)疾病方面的用途。本發(fā)明的另一目的是提供一種有效的無(wú)毒副作用的，用于治療和預(yù)防肥胖 及其相關(guān)疾病的藥品、飲料、食品組合物，或動(dòng)物飼料組合物。本發(fā)明的另一目的是提供一種降低體重和/或血糖的方法及其應(yīng)用。本發(fā)明第一方面提供了一種丁酸桿菌，所述丁酸桿菌為丁酸桿菌(Butyribacterintestini)。在另一優(yōu)選例中，所述的丁酸桿菌的16srDNA的序列如SEQIDNO.:1所示。在另一優(yōu)選例中，所述丁酸桿菌為ButyribacterintestiniTF01-11，保藏號(hào)為CGMCC10984。本發(fā)明第二方面提供了一種組合物，所述組合物包括：(a)安全有效量本發(fā)明第一方面所述的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物；以及(b)食品上可接受的載體或藥學(xué)上可接受的載體。在另一優(yōu)選例中，所述組合物選自下組：食品組合物、保健組合物、藥物組合物、飲料組合物、飼料組合物、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為口服制劑。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為液態(tài)制劑、固態(tài)制劑、半固態(tài)制劑。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物的劑型選自下組：粉末劑、散劑、片劑、糖衣劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、滴劑、和舌下含片。在另一優(yōu)選例中，所述的食品組合物包括乳液制品、溶液制品、粉末制品、或懸浮液制品。在另一優(yōu)選例中，所述的食品組合物包括乳品、乳粉、或乳液。在另一優(yōu)選例中，所述的液態(tài)制劑選自下組：溶液制品或懸浮液制品。在另一優(yōu)選例中，所述組合物含有1×10-1×1020cfu/mL或cfu/gButyribacterintestiniTF01-11，較佳地1×104-1×1015cfu/mL或cfu/gButyribacterintestiniTF01-11，按所述組合物的總體積或總重量計(jì)。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物中，含有0.0001－99wt％，較佳地0.1-90wt％所述的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物，以所述組合物的總重量計(jì)。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為單元?jiǎng)┬?一片、一粒膠囊或一小瓶)，每個(gè)單元?jiǎng)┬椭兴鼋M合物的質(zhì)量為0.05-5g，較佳地為0.1-1g。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物還含有其它益生菌和/或益生元。在另一優(yōu)選例中，所述的益生菌選自下組：乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿 菌、或其組合。在另一優(yōu)選例中，所述的益生元選自下組：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、或其組合。本發(fā)明第三方面提供了一種本發(fā)明第一方面所述丁酸桿菌、或本發(fā)明第二方面所述組合物的用途，用于制備藥物，所述藥物用于選自下組的一種或多種用途：(a)預(yù)防和/或治療肥胖；(b)降低血脂；(c)預(yù)防或治療心血管疾病；和/或(d)預(yù)防和/或治療糖尿病。本發(fā)明第四方面提供了一種本發(fā)明第一方面所述丁酸桿菌、或本發(fā)明第二方面所述組合物的用途，用于制備藥物或制劑，所述藥物或制劑用于(i)降低哺乳動(dòng)物中單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP-1)的水平；和/或(ii)改善瘦素抵抗，提高體內(nèi)對(duì)Leptin的敏感性。在另一優(yōu)選例中，所述的藥物或制劑還獨(dú)立地或額外地用于選自下組的一種或多種用途：(iii)抑制哺乳動(dòng)物的體重增長(zhǎng)；(iv)降低哺乳動(dòng)物的體脂比(脂肪重量/體重之比)；(v)降低哺乳動(dòng)物的血脂水平；(vi)提高哺乳動(dòng)物中的高密度脂蛋白(HDLC)的水平；(vii)降低哺乳動(dòng)物中的低密度脂蛋白(LDLC)水平。在另一優(yōu)選例中，所述哺乳動(dòng)物包括人、嚙齒動(dòng)物(如大鼠、小鼠)。在另一優(yōu)選例中，所述降低哺乳動(dòng)物的血脂水平包括降低總膽固醇(TC)水平和/或甘油三酯水平。本發(fā)明第五方面提供了一種本發(fā)明第二方面所述組合物的制法，包括步驟：將本發(fā)明第一方面所述的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物、與食品上可接受的載體或藥學(xué)上可接受的載體混合，從而形成本發(fā)明第二方面所述的組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為口服制劑。本發(fā)明第六方面提供了一種生產(chǎn)方法，包括步驟：(a)在適合培養(yǎng)的條件下，對(duì)本發(fā)明第一方面所述的丁酸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得培養(yǎng)產(chǎn)物；(b)任選地，從所述培養(yǎng)產(chǎn)物分離丁酸桿菌菌體和/或其代謝產(chǎn)物；和(c)任選地，將上一步驟分離獲得的丁酸桿菌菌體和/或其代謝產(chǎn)物與食品上可接受的載體或藥學(xué)上可接受的載體混合，從而制得組合物。本發(fā)明第七方面提供了一種降低體重和/或血脂的方法，給所述對(duì)象施用本發(fā)明第一方面所述的丁酸桿菌或本發(fā)明第二方面所述的組合物。在另一優(yōu)選例中，所述的施用包括口服。在另一優(yōu)選例中，所述的施用劑量為0.01-5g/50kg體重/天，較佳地，0.1-2g/50kg體重/天。在另一優(yōu)選例中，所述的對(duì)象包括哺乳動(dòng)物，如人。應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附圖說(shuō)明圖1顯示了本發(fā)明丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)的菌落圖片和在顯微鏡下的革蘭氏染色圖片(1000倍)。圖2顯示了灌胃B.intestiniTF01-11(丁酸桿菌)菌液9周后各組小鼠與灌胃前相比的體重增長(zhǎng)量。圖3顯示了各組小鼠的體脂比。圖4顯示了B.intestiniTF01-11(丁酸桿菌)對(duì)血脂的影響。圖5顯示了B.intestiniTF01-11(丁酸桿菌)對(duì)瘦素(Leptin，LEP)的影響。圖6顯示了B.intestiniTF01-11(丁酸桿菌)對(duì)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的影響。具體實(shí)施方式本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究和實(shí)驗(yàn)，意外地發(fā)現(xiàn)，丁酸桿菌(Butyribacterintestini)具有預(yù)防和治療肥胖及其相關(guān)疾病(如心血管疾病)的作用，將含有丁酸桿菌的活性組合物飼喂食實(shí)驗(yàn)對(duì)象，發(fā)現(xiàn)該組合物能夠抑制體 重增加，提高體脂比，降低血脂，有效減輕心血管及肥胖等病癥。在此基礎(chǔ)上完成本發(fā)明。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“含有”表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的混合物或組合物中。因此，術(shù)語(yǔ)“主要由...組成”和“由...組成”包含在術(shù)語(yǔ)“含有”中。如本文所用，所述“體脂比”是指脂肪重量/體重的比值。丁酸桿菌及其應(yīng)用如本文所用，術(shù)語(yǔ)“丁酸桿菌”，“Butyribacterintestini”可互換使用。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述菌株為ButyribacterintestiniTF01-11，保藏號(hào)為CGMCC10984，分離自人的糞便中。丁酸桿菌的生理特性如下：丁酸桿菌在PYG平板上厭氧條件37℃培養(yǎng)48h之后，菌落呈現(xiàn)灰白色，不透明，平滑，邊緣不規(guī)則似假根狀，菌落直徑約2mm；通過(guò)革蘭氏染色、顯微觀察，TF01-11為革蘭氏陽(yáng)性菌，長(zhǎng)桿狀，無(wú)芽孢，具有鞭毛，可運(yùn)動(dòng)，菌體直徑約0.5–1.0mm，長(zhǎng)度約2.0–8.0mm；并且本發(fā)明所述的丁酸桿菌為過(guò)氧化氫酶陰性菌，溫度生長(zhǎng)范圍是30–42℃，最適生長(zhǎng)溫度是37℃，pH值耐受范圍是6.0–8.5，能耐受2％的NaCl。能夠發(fā)酵幾種碳水化合物，包括木糖、半乳糖、棉子糖、葡萄糖、麥芽糖、纖維二糖、蔗糖、淀粉和糖原，主要產(chǎn)生乙酸和丁酸。本發(fā)明提供了丁酸桿菌在治療和預(yù)防肥胖及其相關(guān)疾病(如心血管疾病)方面的應(yīng)用。受驗(yàn)者攝入高脂肪的食物，菌株ButyribacterintestiniTF01-11具有(i)抑制該受驗(yàn)者體重增加；(ii)降低血脂；和(iii)提高體脂比的能力。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，經(jīng)菌株ButyribacterintestiniTF01-11來(lái)治療的被喂以可導(dǎo)致肥胖的高脂肪的食物的C57BL/6J雄性小鼠，與未接受治療的對(duì)照組相比，其體重增加幅度減緩且血脂下降，并且各種與肥胖或心血管疾病相關(guān)的指標(biāo)也下降，如瘦素(LEP)以及單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP-1)。因此，所述菌株能夠用以預(yù)防和治療肥胖及由肥胖引起的疾病，如心血管疾病等。組合物及其應(yīng)用本發(fā)明還提供了一種組合物，優(yōu)選地，為藥物組合物。所述組合物包括有效量的丁酸桿菌，在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物還包括選自下組的益生菌：乳酸菌、雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、或其組合；和/或選自下組的益生元：低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚木糖(XOS)、低聚乳果糖(LACT)、大豆低聚糖(SOS)、菊粉(Inulin)、或其組合。在一優(yōu)選例中，所述的組合物為液態(tài)制劑、固態(tài)制劑、半固態(tài)制劑。在一優(yōu)選例中，所述的液態(tài)制劑選自下組：溶液制品或懸浮液制品。在一優(yōu)選例中，所述的組合物的劑型選自下組：粉末劑、散劑、片劑、糖衣劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、滴劑、和舌下含片。本發(fā)明藥物組合物可以以藥物片劑，針劑或膠囊的任一種形式給藥，所述藥物制劑包括賦形劑、藥物允許的媒介和載體，這些物質(zhì)可根據(jù)給藥途徑進(jìn)行選擇。本發(fā)明中藥物制劑可進(jìn)一步包含輔助的活性組份。乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、硅酸鈣、細(xì)結(jié)晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂或礦物油等都可用作本發(fā)明中藥物組合物的載體、賦形劑或稀釋劑等。此外，本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包括潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、懸浮液穩(wěn)定劑、防腐劑、甜味劑和香料等。本發(fā)明的藥物組合物可通過(guò)多種公知的方法以腸衣制劑生產(chǎn)，以便于藥物組合物的活性成分即微生物能順利通過(guò)胃而不被胃酸所破壞。另外，本發(fā)明的微生物可以常規(guī)方法制備的膠囊形式使用。例如，標(biāo)準(zhǔn)賦形劑和本發(fā)明的冷干微生物混合制成小球藥丸，然后將藥丸裝填入明膠膠囊中。此外，本發(fā)明的微生物和藥物允許使用的賦形劑如液體膠、纖維素、硅酸鹽或礦物油等混合制作懸浮液或分散液，這種懸浮液或分散液可裝入軟的明膠膠囊中。本發(fā)明的藥物組合物可制成腸衣片供口服使用。本申請(qǐng)中的術(shù)語(yǔ)—“腸衣”，包括所有常規(guī)藥物允許使用的包衣，這些包衣不被胃酸降解，但在小腸中能充分分解并快速釋放出本發(fā)明的微生物。木發(fā)明的腸衣能在合成胃酸如pH＝1的 HCl溶液中在36-38℃維持2小時(shí)以上，并優(yōu)選在合成腸液如pH＝7.0的緩沖液中在1.0小時(shí)內(nèi)分解。本發(fā)明的腸衣為以每片約16-30mg進(jìn)行包衣，較佳地16-25mg，更佳地16-20mg進(jìn)行包衣。本發(fā)明中腸衣厚度為5-100μm，理想的厚度為20-80μm。腸衣成分選自己公開(kāi)知曉的常規(guī)聚合物。本發(fā)明優(yōu)選的腸衣由纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯聚合物或偏苯三酸酯聚合物以及異丁烯酸的共聚物(例如，含有40％以上異丁烯酸和含有甲基纖維素鄰苯二甲酸羥丙酯或其酯類(lèi)衍生物的異丁烯酸的共聚物)制備。本發(fā)明中腸衣所使用的纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯的粘度為約45-90cp，乙酰含量17-26％，鄰苯二甲酸含量30-40％。用于腸衣中的纖維素乙酸偏苯二酸酯粘度為約5-21cs，乙酞含量17-26％。纖維素乙酸偏苯三酸酯由Eastman科達(dá)公司生產(chǎn)，可用于本發(fā)明中的腸衣材料。用于本發(fā)明腸衣中的羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酷，分子量一般為20,000-130,000道爾頓，理想分子量為80,000-100,000道爾頓，羥丙基含量為5-10％，甲氧基含量為18-24％，鄰苯二甲?；繛?1-35％。用于本發(fā)明腸衣中的羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酷為HP50，由日本Shin-EtsuChemidnlCo.Ltd.生產(chǎn)。HP50含有6-10％羥丙基，20-24％甲氧基，21-27％的丙基，其分子量為84,000道爾頓。另一種腸衣物質(zhì)為HP55，HP55含有5-9％的羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯，18-22％甲氧基，27-35％的鄰苯二甲酸，其分子量為78,000道爾頓。本發(fā)明腸衣如下制備：使用常規(guī)方法將腸衣溶液噴霧到核心上。該腸包衣方法中所有溶劑為醇類(lèi)(如乙醇)、酮類(lèi)(如丙酮)、鹵代烴化合物(如二氯甲烷)、或其組合物。將軟化劑如二-正丁基鄰苯二甲酸酯和三乙酸甘油酯加入到腸衣溶液中，其比例為1份包衣物對(duì)約0.05份或約0.3份軟化劑。噴霧方法優(yōu)選連續(xù)執(zhí)行，所噴霧的料量可根據(jù)包衣所采用的條件進(jìn)行控制。噴霧壓力可隨意調(diào)節(jié)，一般而言，能在平均1-1.5巴壓力下獲得理想的結(jié)果。說(shuō)明書(shū)中“藥物有效量”是指可對(duì)人和/或動(dòng)物產(chǎn)生功能或活性的且可被人和/或動(dòng)物所接受的量。比如，在本發(fā)明中，可制備含有1×10-1×1020cfu/ml或cfu/g(特別的，可含有1×104-1×1015cfu/ml或cfu/g；更特別地，可含有1×106-1× 1011cfu/ml或cfu/g)的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物的制劑。當(dāng)用于制備藥物組合物時(shí)，所用的丁酸桿菌或其代謝產(chǎn)物的有效劑量可隨施用的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體密切混合的約1×10-1×1020cfu/ml或cfu/g(特別的，可含有1×104-1×1015cfu/ml或cfu/g；更特別地，可含有1×106-1×1011cfu/ml或cfu/g)的活性丁酸桿菌或發(fā)酵產(chǎn)生的活性成分。可調(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開(kāi)的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。所述的丁酸桿菌或其代謝產(chǎn)物可通過(guò)口服等途徑給予。固態(tài)載體包括：淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括：培養(yǎng)基、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合丁酸桿菌或其代謝產(chǎn)物特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。從易于制備和給藥的立場(chǎng)看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊?？诜o藥是優(yōu)選的。將本發(fā)明組合物施用給所述個(gè)體，每天給藥1次或多次。給藥劑量單位表示其形式上能分開(kāi)且適用于人類(lèi)或其他所有哺乳動(dòng)物個(gè)體的劑量。每一單位含有藥物允許的載體和有效治療量的木發(fā)明微生物。給藥量隨病人的體重和肥胖嚴(yán)重程度、所包括的補(bǔ)充活性組份和所使用的微生物而變化。此外如可能，可分開(kāi)給藥，并且如需要可連續(xù)給藥。因此，所述給藥量不會(huì)對(duì)本發(fā)明造成限制。此外，本發(fā)明中的“組合物”不僅意味著藥品而且表示可作為功能性食品和健康補(bǔ)充食品。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組合物包括：飲料、食品、藥品、動(dòng)物飼料等。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，還提供了一種食品組合物，它含有有效量的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物，以及余量的食品上可接受的載體，所述的食物組合物的劑型選自固體、乳品、溶液制品、粉末制品、或懸浮液制品。在一優(yōu)選例中，所述組合物的配方如下：1×10-1×1020cfu/mL的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物；以及食品上或藥學(xué)上可接受 的載體，和/或賦形劑。在另一優(yōu)選例中，所述組合物的配方如下：1×106-1×1011cfu/mL的丁酸桿菌和/或其代謝產(chǎn)物；以及食品上或藥學(xué)上可接受的載體，和/或賦形劑。丁酸桿菌的生產(chǎn)方法通常，丁酸桿菌可以用常規(guī)方法制得。在本發(fā)明中，提供了一種能夠大規(guī)模生產(chǎn)丁酸桿菌的方法，具體地，包括如下步驟：(a)在適合培養(yǎng)的條件下，對(duì)所述的丁酸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得培養(yǎng)產(chǎn)物；(b)任選地，從所述培養(yǎng)產(chǎn)物分離丁酸桿菌菌體和/或其代謝產(chǎn)物；和(c)任選地，將上一步驟分離獲得的丁酸桿菌菌體和/或其代謝產(chǎn)物與食品上可接受的載體或藥學(xué)上可接受的載體混合，從而制得組合物。降低體重和/或血脂的方法在另一優(yōu)選例中，所述方法包括：攝取本發(fā)明的藥物組合物、食品組合物、飲料組合物、或其組合。所述實(shí)驗(yàn)對(duì)象為人。在另一優(yōu)選例中，所述方法包括：攝取本發(fā)明的藥物組合物、食品組合物、或動(dòng)物飼料，或其組合。所述實(shí)驗(yàn)對(duì)象為動(dòng)物，較佳地為鼠類(lèi)，兔類(lèi)。菌種保藏本發(fā)明的菌種丁酸桿菌(Butyribacterintestini)TF01-11(與保藏名稱(chēng)相同)已于2015年06月16日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)：CGMCC10984。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)包括：(a)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠顯著降低體重、降低血脂、降低體脂比。(b)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠顯著降低與肥胖及其相關(guān)疾病(如心血管疾病)相關(guān)的指標(biāo)(如膽固醇和甘油三酯)(c)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠顯著降低總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的水平。(d)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠顯著提高高密度脂蛋白的水平。(e)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠改善胰島素抵抗，還可降低動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。(f)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠顯著降低單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平。(g)本發(fā)明的丁酸桿菌能夠有效地改善肥胖癥伴隨的瘦素抵抗，提高體內(nèi)對(duì)Leptin的敏感性。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(NewYork：ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989)中所述的條件，或按照《微生物：實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》(JamesCappuccino和NatalieSherman編，PearsonEducation出版社)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1：丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)的篩選鑒定1.1丁酸桿菌TF01-11的分離本發(fā)明的丁酸桿菌TF01-11分離自深圳市鹽田區(qū)一位17歲男性的糞便樣品，在厭氧條件下取約0.2g糞便樣品，加入無(wú)菌的PBS中，然后進(jìn)行梯度稀釋涂布，采用PYG培養(yǎng)基，其主要成分是蛋白胨5g，胰化酪蛋白5g，酵母粉10g，牛肉膏5g，葡萄糖5g，K2HPO42g,Tween801ml,Cysteine-HCl·H2O0.5g，血紅素5mg，維生素K11ul，無(wú)機(jī)鹽溶液(每L無(wú)機(jī)鹽溶液含有CaCl2·2H2O0.25g，MgSO4·7H2O0.5g，K2HPO41g，KH2PO41g，NaHCO310g，NaCl2g)40ml，刃天青1mg，蒸餾水950ml，pH6.8～7.0，115℃滅菌25min。平板培養(yǎng)48h后，挑取單菌落進(jìn)行劃線分離。1.216SrDNA鑒定取1mlTF01-11培養(yǎng)的菌液，提取基因組DNA，用引物對(duì)8f/1492rPCR擴(kuò)增16SrDNA。將產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化、測(cè)序，獲得1400bp的16SrDNA序列(如SEQIDNO.:1所示)，將這段序列進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，獲得同TF01-11的16SrDNA同源性最高的菌為Roseburiaintestinalis，有92.18％的相似度。SEQIDNo.:11.3丁酸桿菌TF01-11的進(jìn)化分析將TF01-11和毛螺菌科的模式物種的16SrDNA序列進(jìn)行多序列比對(duì)，然后用MEGA5進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)的制作，使用Neighbour-joining的方法構(gòu)建出系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。1.4丁酸桿菌TF01-11的微生物學(xué)特征(1)形態(tài)學(xué)特征丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)在PYG平板上厭氧條件37℃培養(yǎng)48h之后菌落呈現(xiàn)灰白色，不透明，平滑，邊緣不規(guī)則似假根狀，菌落直徑約2mm(圖1)。(2)顯微特征通過(guò)革蘭氏染色、顯微觀察，TF01-11為革蘭氏陽(yáng)性菌，長(zhǎng)桿狀，無(wú)芽孢，具有鞭毛，可運(yùn)動(dòng)，菌體直徑約0.5–1.0mm，長(zhǎng)度約2.0–8.0mm(圖1)。(3)生理生化特征TF01-11為過(guò)氧化氫酶陰性，溫度生長(zhǎng)范圍是30–42℃，最適生長(zhǎng)溫度是37℃，pH值耐受范圍是6.0–8.5，能耐受2％的NaCl。將TF01-11與近緣3株模式菌(RoseburiaintestinalisDSM14610T；AcetivibrioethanolgignensATCC33324T；LachnospiramultiparaDSM3073T)的酶反應(yīng)(APIZYM)和底物利用情況(API20A、API50CH)進(jìn)行比較后，表1顯示，TF01-11同近緣的3株模式菌的API反應(yīng)存在很大的差異。表1(4)TF01-11與近緣的3株模式菌的細(xì)胞脂肪酸成分，分析結(jié)果如下表(菌株:1,TF01-11T；2,RoseburiaintestinalisDSM14610T；3,AcetivibrioethanolgignensATCC33324T；4,LachnospiramultiparaDSM3073T；–,未檢出)結(jié)果表明，該菌株是一株新菌種的菌株，命名為丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)。實(shí)施例2丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)生物活性的測(cè)定取培養(yǎng)48h的TF01-11的發(fā)酵液1ml，12000r/min離心5min，吸取上清液，用一定濃度甲酸水溶液稀釋10倍后(甲酸終濃度為9％)，備用。采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)量，選用乙酸、丙酸、丁酸、戊酸進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，其中乙酸、丁酸、戊酸的濃度分別為517μL/L、497μL/L、401μL/L、467μL/L。采用島津GC-2014C氣象色譜儀，HP-INNOWax(Cross-LinkedPEG)，30m×0.25mm×0.25um的毛細(xì)柱進(jìn)行分析，檢測(cè)器為氫火焰離子檢測(cè)器，GC參數(shù)設(shè)置為柱溫：180～200℃；氣化室溫度：240℃；檢測(cè)溫度：210℃；進(jìn)樣量：2μL；載氣流量：N2，50mL/min；氫氣流量：50mL/min；空氣流量：600～700mL/min。結(jié)果表明，通過(guò)上述方法測(cè)定TF01-11的SCFA產(chǎn)量為：乙酸2.79mmol/L，丁酸15.09mmol/L。實(shí)施例3丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)對(duì)于肥胖模型小鼠的治療作用實(shí)驗(yàn)材料:小鼠：購(gòu)買(mǎi)C57BL/6J雄性小鼠(購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，為正常飼養(yǎng)小鼠，6周齡，一共30只。小鼠生長(zhǎng)過(guò)程處于同一環(huán)境，且喂養(yǎng)同樣的食物。菌株：實(shí)施例1所述的分離得到的ButyribacterintestiniTF01-11菌株高脂飼料(HF)：含78.8％基礎(chǔ)飼料、1％膽固醇、10％蛋黃粉、10％豬油 和0.2％膽鹽，購(gòu)自南通特洛菲飼料科技有限公司。普通維持飼料：購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。實(shí)驗(yàn)方法：選取正常喂養(yǎng)的C57BL/6J成年雄性小鼠，隨機(jī)分成三個(gè)實(shí)驗(yàn)組(分別為Control組，肥胖模型組和TF01組)，每組10只，在SPF(SpecificpathogenFree)環(huán)境下自由進(jìn)食和飲水。肥胖模型(Model)組和TF01組喂食高脂飼料，Control組喂食普通維持飼料。喂養(yǎng)4周后，TF01組開(kāi)始灌胃丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)菌液，肥胖模型組和Control組灌胃等量培養(yǎng)基，灌胃9周。灌喂菌量定為0.15mL/10g體重，菌濃為1×107cfu/mL，濃縮后濃度為1×108cfu/mL，頻率為隔天一次。菌液需提前培養(yǎng)，每周活化保證新鮮，并分別測(cè)定濃度。實(shí)驗(yàn)期中，每周記錄小鼠體重、狀態(tài)、進(jìn)食量等數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)最后一周各組小鼠進(jìn)行葡萄糖耐量(OGTT)試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠，記錄脂肪重量，并取血清，用Elisa試劑盒檢測(cè)血脂和蛋白因子含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)對(duì)鼠體重的影響。表1-1表1-2結(jié)果如表1-1、表1-2和圖2所示。結(jié)果表明，丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)可有效減緩肥胖模型小鼠的體重的增長(zhǎng)(*P<0.05)。(2)丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)對(duì)體脂比的影響。表2各組小鼠的體脂比分組脂肪重量/體重×100％P值-Model組P值-Control組TF01組3.9310.000*0.056Model組7.3661.0000.000*Control組2.8220.000*1.000結(jié)果如表2和圖3所示。結(jié)果表明，丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)能顯著降低肥胖模型小鼠的體脂比(*P<0.05)。(3)丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)對(duì)血脂的影響。表3分組TC(mmol/L)TG(mmol/L)LDLC(mmol/L)HDLC(mmol/L)TF01組4.8661.0231.4003.486Model組6.3081.2812.3722.148Control組3.8150.9381.2473.300表4結(jié)果如圖4、表3和表4所示。血脂中的主要成份是膽固醇和甘油三酯，血漿中膽固醇和甘油三脂水平的升高與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生有關(guān)。結(jié)果表明，丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)可降低血脂，降低動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)疾病(如心血管疾病)的相關(guān)指標(biāo)。并且，降低總膽固醇和低密度脂蛋白的作用尤為明顯(*P<0.05)。(4)丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)對(duì)瘦素(Leptin，LEP)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的影響。表5分組MCP-1(pg/ml)LEP(pg/ml)TF01組337.61186.4Model組378.81398.8Control組340.41255.3表6P值MCP-1LEPTF01-Model0.014*0.014*TF01-Control0.8620.891Model-Control0.0730.110結(jié)果如圖5、圖6及表5、表6所示。結(jié)果顯示，丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)能明顯降低肥胖模型小鼠血清中的瘦素(LEP)和MCP-1含量(*P<0.05)。結(jié)果表明，丁酸桿菌(ButyribacterintestiniTF01-11)能夠改善瘦素抵抗，提高體內(nèi)對(duì)瘦素(LEP)的敏感性；并且，經(jīng)過(guò)益生菌ButyribacterintestiniTF01-11治療后血清MCP-1水平降低，有利于改善胰島素抵抗，可降低動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)施例4含丁酸桿菌ButyribacterintestiniTF01-11的食品組合物原料配比如表7。表7原料質(zhì)量百分比(％)ButyribacterintestiniTF01-110.5牛奶90.0白糖9.5混合上述配方比例，攪拌至完全混合，預(yù)熱，20Mpa壓力均質(zhì)，90℃左右殺菌5-10分鐘，冷卻至40-43℃，接種1-100×106cfu/g的ButyribacterintestiniTF01-11菌，即制成含ButyribacterintestiniTF01-11菌的食品組合物。實(shí)施例5含丁酸桿菌的藥物組合物原料配比見(jiàn)表8。表8原料質(zhì)量百分比(％)ButyribacterintestiniTF01-111.0％乳糖2.0％酵母粉2.0％蛋白胨1.0％純凈水94.0％按照比例將乳糖、酵母粉、蛋白胨以純凈水混合均勻，預(yù)熱到60-65℃，20Mpa壓力均質(zhì)，90℃左右殺菌20-30分鐘，冷卻至36-38℃，接入ButyribacterintestiniTF01-11活菌(1-50×106cfu/mL)，36-38℃發(fā)酵至pH值為6.0，離心，冷凍干燥至水份含量小于3％，即制備ButyribacterintestiniTF01-11菌冷凍干燥物。稱(chēng)取0.5克ButyribacterintestiniTF01-11冷凍干燥物與麥芽糊精等量混合后裝入膠囊中，即制成含ButyribacterintestiniTF01-11菌的藥物組合物。菌種保藏本發(fā)明的菌種丁酸桿菌(Butyribacterintestini)TF01-11(與保藏名稱(chēng)相同)已于2015年06月16日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，地址中國(guó)北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)：CGMCC10984。本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3