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一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶及其制備方法與流程

文檔序號:12152867閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于,它的化學(xué)名稱為:四氧化三鐵(甲基丙烯酸縮水甘油酯-甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-2-羥乙酯)共聚物固定化氫過氧化物裂解酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于由以下步驟制得:

a.將納米磁性微球置于錐形瓶中,按HPL/NMP質(zhì)量比為20mg/g~60mg/g加入HPL并將兩者混合在一起,然后加入配置好的固定化介質(zhì),得到混合物;

b.將步驟a中得到的混合物于30~40℃恒溫震蕩6~12h,得到固定化HPL;

c.外加磁場回收固定化HPL,然后去除上清液;

d.用PBS以及去離子水分別清洗固定化HPL后得到納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于,步驟a中所述納米磁性微球的制備包括如下步驟:

(一)水相組成為:將0.5~1.7g/L的Fe3O4超聲至完全分散于含有0.1wt.%~0.3wt.%PVA的水溶液中;

(二)油相組成為:GMA、HEMA以及MMA按摩爾比2~10:0~15:15~0 混合,并加入0.1wt.%~0.5wt.%的EDGMA作為交聯(lián)劑;

(三)水相與油相混合、通氮?dú)怛?qū)氧并攪拌10~30min,然后逐滴加入0.5%~1.0%v/v過硫酸鉀作為引發(fā)劑,并于60~80℃下回流反應(yīng)30min~12h,然后磁分離得到固體產(chǎn)物;

(四)使用40%~75%乙醇洗去固體產(chǎn)物中殘余未聚合的單體,得到納米磁性微球。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于,步驟(三)所述過硫酸鉀的質(zhì)量濃度為0.5%~5.0%。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于,步驟c為:外加磁場回收固定化HPL,然后去除上清液,之后向固定化HPL中加入半胱氨酸猝滅多余的環(huán)氧基團(tuán),半胱氨酸的添加量為摩爾比GMA:-NH2=1:0.01~0.1。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于,步驟b所述固定化介質(zhì)為:含1~5mM DTT及質(zhì)量濃度0.1%~0.5%Triton X-100的PBS,PBS的濃度為0.1~1.0M,pH為6.0~7.5。

7.一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

A.將納米磁性微球置于錐形瓶中,按HPL/NMP質(zhì)量比為20mg/g~60 mg/g加入HPL并將兩者混合在一起,然后加入配置好的固定化介質(zhì),得到混合物;

B.將步驟A中得到的混合物于30~40℃恒溫震蕩6~12h,得到固定化HPL;

C.外加磁場回收固定化HPL,然后去除上清液;

D.用PBS以及去離子水分別清洗固定化HPL后得到納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶的制備方法,其特征在于,步驟A中所述納米磁性微球的制備包括如下步驟:

①水相組成為:將0.5~1.7g/L的Fe3O4超聲至完全分散于含有0.1wt.%~0.3wt.%PVA的水溶液中;

②油相組成為:GMA、HEMA以及MMA按摩爾比2~10:0~15:15~0混合,并加入0.1wt.%~0.5wt.%的EDGMA作為交聯(lián)劑;

③水相與油相混合、通氮?dú)怛?qū)氧并攪拌10~30min,然后逐滴加入0.5%~1.0%v/v濃度為0.5wt.%~5.0wt.%的過硫酸鉀作為引發(fā)劑,并于60~80℃下回流反應(yīng)30min~12h,然后磁分離得到固體產(chǎn)物;

④使用40%~75%乙醇洗去固體產(chǎn)物中殘余未聚合的單體,得到納米磁性微球。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶的制備方法,其特征在于,步驟C為:外加磁場回收固定化HPL,然后去除上清液,之后向固定化HPL中加入半胱氨酸猝滅多余的環(huán)氧基團(tuán),半胱氨酸的添加量為摩爾比GMA:-NH2=1:0.01~0.1。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種納米磁性微球固定化氫過氧化物裂解酶,其特征在于,步驟B所述固定化介質(zhì)為:含1~5mM DTT及質(zhì)量濃度0.1%~0.5%Triton X-100的PBS,PBS的濃度為0.1~1.0M,pH為6.0~7.5。

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