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編碼殺蟲蛋白的核苷酸序列及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12056438閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.分離的核酸分子,其特征在于,所述核酸分子包含SEQ ID NO:1所示核苷酸序列或與SEQ ID NO:1具有至少70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%或99.9%序列同一性的核苷酸序列,或以上的互補序列;任選地,所述核酸分子包含SEQ ID NO:1所示核苷酸序列,或者所述核酸分子由SEQ ID NO:1所示核苷酸序列組成。

2.表達(dá)盒,其特征在于,包含權(quán)利要求1所述的核酸分子;任選地,所述核酸分子與35S啟動子和nos終止子可操作地連接。

3.表達(dá)載體,其特征在于,包含權(quán)利要求2所述的表達(dá)盒;任選地,所述表達(dá)載體還包含PolyA序列和omega增強子。

4.宿主細(xì)胞,其特征在于,包含權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體;任選地,所述宿主細(xì)胞為植物細(xì)胞或原核生物細(xì)胞;任選地,所述宿主細(xì)胞為大腸桿菌或農(nóng)桿菌細(xì)胞。

5.產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物的方法,其特征在于,用權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體或權(quán)利要求4所述的宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)化植物,得到轉(zhuǎn)基因植物;任選地,所述植物為單子葉植物;任選地,所述植物選自:玉米、水稻、小麥、燕麥、大麥、青稞、粟、高粱和甘蔗。

6.產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因種子的方法,其特征在于,從權(quán)利要求5所述方法產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因種子。

7.控制鱗翅目害蟲群體的方法,包括使所述鱗翅目害蟲群體進食通過權(quán)利要求5所述方法獲得的轉(zhuǎn)基因植物;任選地所述植物為單子葉植物;任選地,所述植物選自:玉米、水稻、小麥、燕麥、大麥、 粟、高粱和甘蔗;任選地所述鱗翅目害蟲為歐洲玉米螟(Pyrausta nubilalis)或亞洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)。

8.殺死鱗翅目害蟲的方法,包括向所述鱗翅目害蟲喂食殺蟲有效量的通過權(quán)利要求5所述方法獲得的轉(zhuǎn)基因植物;任選地所述植物為單子葉植物;任選地,所述植物選自:玉米、水稻、小麥、燕麥、大麥、粟、高粱和甘蔗;任選地所述鱗翅目害蟲為歐洲玉米螟(Pyrausta nubilalis)或亞洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)。

9.減輕鱗翅目害蟲對植物的傷害的方法,包括將表達(dá)載體穩(wěn)定整合進植物的基因組,其特征在于,所述表達(dá)載體包含編碼抗鱗翅目害蟲基因的核酸分子,所述核酸分子包含SEQ ID NO:1所示核苷酸序列或與SEQ ID NO:1具有至少90%序列同一性的核苷酸序列,或以上的互補序列;任選地,所述核酸分子包含SEQ ID NO:1所示核苷酸序列;任選地,所述核酸分子由SEQ ID NO:1所示核苷酸序列組成;任選地所述植物為單子葉植物;任選地,所述植物選自:玉米、水稻、小麥、燕麥、大麥、粟、高粱和甘蔗;任選地所述鱗翅目害蟲為歐洲玉米螟(Pyrausta nubilalis)或亞洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)。

10.篩選抗鱗翅目害蟲基因的方法,其特征在于,包括以下步驟:

以殺蟲蛋白氨基酸序列為模板,根據(jù)單子葉植物密碼子偏好性改造獲得G+C含量高、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的基因序列;任選地所述殺蟲蛋白為由cry1Ca5編碼;

設(shè)計高效穩(wěn)定表達(dá)基因的載體表達(dá)盒,構(gòu)建表達(dá)載體;

用所述表達(dá)載體轉(zhuǎn)化單子葉植物,獲得轉(zhuǎn)基因植物并鑒定轉(zhuǎn)基因事件;以及

挑選低拷貝轉(zhuǎn)基因植物事件,利用鱗翅目害蟲進行殺蟲活性生物測定。

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