本發(fā)明涉及一類雜環(huán)類法尼酯衍生物X受體調(diào)節(jié)劑、其異構(gòu)體、前藥或藥學(xué)上可接受的鹽、穩(wěn)定的同位素衍生物、其藥物組合物、制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：：核受體(NuclearReceptor，NRs)是一類配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子超家族，通過內(nèi)源性或外源性配體物質(zhì)激活調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄，在機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、新陳代謝以及病理生理過程中發(fā)揮著重要的作用。法尼酯衍生物X受體(FarnesoidXReceptor，F(xiàn)XR)是孤兒核受體家族成員，最早由Forman等于1995年在大鼠肝臟cDNA中克隆發(fā)現(xiàn)，因其轉(zhuǎn)錄活性可被超生理濃度的法尼酯增強(qiáng)而命名。FXR在糖代謝、脂類代謝和膽汁平衡中起到重要的調(diào)控作用。FXR參與機(jī)體糖代謝過程，但對(duì)其機(jī)制目前并不十分清楚。FXR在調(diào)節(jié)PEPCK基因表達(dá)方面存在爭(zhēng)議，但在糖尿病小鼠體內(nèi)，活化的FXR能顯著降低血糖，提高胰島素敏感性(FutureMedChem，2010，2(4)：575-586；BiochimBiophysActa，2010，1802(3)：363-372)。FXR是脂代謝中相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的重要核受體。FXR調(diào)節(jié)膽汁酸的生物合成和轉(zhuǎn)運(yùn)，因而在調(diào)節(jié)膽固醇肝臟外排及其內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)起到關(guān)鍵作用?；罨腇XR可抑制SREBP的基因表達(dá)，從而降低血漿中甘油三酯的水平。ZhangY等(MolEndocrinol，2012，26(2)：272-280)研究發(fā)現(xiàn)FXR-/-小鼠血漿甘油三酯和膽固醇明顯增高?；罨腇XR顯著增加磷脂轉(zhuǎn)移蛋白表達(dá)，加速磷脂和膽固醇從富含甘油三酯的脂蛋白向高密度脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，從而起到抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。FXR在調(diào)節(jié)膽汁平衡中也發(fā)揮重要作用，膽汁酸是膽汁的主要成分，在脂肪代謝、脂溶性維生素的吸收和抑制膽固醇在膽汁中的析出沉淀起到重要作用。膽汁酸通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)抑制自身合成來實(shí)現(xiàn)膽汁酸的動(dòng)態(tài)平衡，但對(duì)負(fù)反饋調(diào)節(jié) 機(jī)制并不十分清楚，直到FXR及其一系列靶基因的發(fā)現(xiàn)后才對(duì)這一負(fù)反饋機(jī)制做出了進(jìn)一步闡述。CYP7A1的基本表達(dá)和誘導(dǎo)依賴于肝受體同源體(liverreceptorhomolog1，LRH1)和LXRα。相反，人類CYP7A1基因缺乏LXR應(yīng)答元件，細(xì)胞內(nèi)上升的膽汁酸與FXR結(jié)合并活化小異二聚體伴侶(smallheterodimerpartner，SHP)下調(diào)CYP7A1的表達(dá)(MolCell，2000，6(3)：517-526.)。SHP為非典型孤兒核受體，缺乏DNA結(jié)合域，能與LRH1形成二聚體并將其活化，從而降低CYP7A1基因表達(dá)。FXR在膽汁酸的激活下與RXR形成異二聚體BSEP的DNA啟動(dòng)子區(qū)的反向重復(fù)序1(invertedrepeat，IR-1)元件結(jié)合并調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，增加膽酸鹽向膽汁中分泌。FXR也能通過IR-1結(jié)合元件上調(diào)小腸膽汁酸結(jié)合蛋白表達(dá)，從而促進(jìn)膽汁酸鹽的有效重吸收并進(jìn)入肝腸循環(huán)。近年研究表明，F(xiàn)XR在糖脂代謝和膽汁調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮重要作用，這使其成為代謝綜合癥、異常血脂癥、動(dòng)脈粥樣硬化和膽汁淤積肝病等疾病的潛在靶標(biāo)。雖然在新的FXR激動(dòng)劑的開發(fā)方面以取代一些進(jìn)展，但目前還沒有非甾族類的FXR激動(dòng)劑上市，因此還有很大的開發(fā)空間。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于，提供了一種對(duì)于法尼酯衍生物X受體(FXR)具有調(diào)節(jié)作用的雜環(huán)化合物、其立體異構(gòu)體、前藥或藥學(xué)上可接受的鹽、其穩(wěn)定的同位素衍生物、其藥物組合物、制備方法及應(yīng)用。一方面，本發(fā)明提供一種如式I所示的化合物、其異構(gòu)體、前藥、穩(wěn)定的同位素衍生物及藥學(xué)上可接受的鹽，其中，A環(huán)為5元雜芳環(huán)，X選自C、O或N，Z選自C或N，并且， 并且，X為C時(shí)，Z為N；或者X為O，Z為C。所述的A環(huán)優(yōu)選以下A1～A5：M為6-15元橋雜環(huán)基或6-15元螺雜環(huán)基；M優(yōu)選6-10元橋雜環(huán)基或6-10元螺雜環(huán)基。L為結(jié)合鍵或但是，當(dāng)X為O，Z為C并且M為時(shí)，L只為V為O、S或NH；W為結(jié)合鍵、-O-、-S-、或-N(R3)-。Ar選自取代或未取代地芳基、雜芳基、芳基烷基或雜芳基烷基；當(dāng)Ar被取代時(shí)，可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代在任意位置，所述Ar的取代基選自：R5、鹵素、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、取代或未取代地環(huán)烷基、取代或未取代地雜環(huán)烷基、取代或未取代地芳基、取代或未取代地雜芳基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、氨基、雜環(huán)烷基烷氧基、環(huán)烷基烷氧基、芳基烷氧基、雜芳基烷氧基、C2-4烯基、C2-4炔基、氨基烷基、-SR4、-NO2、-CN、-OC(O)R4、-OC(O)NR4R4a、-NR4R4a、-N(R4)C(O)R4a、-N(R4)S(O)2R4a、-N(R4)C(O)NR4R4a、-S(O)2NR4R4a、-(CH2)rS(O)0-2R4、-C(O)-(CH2)r-C(O)OR4、-C(O)R4、-C(O)NR4R4a、-(CH2)rC(O)NR4R4a、或-(CH2)rNR4R4a；當(dāng)所述的Ar的取代基被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自鹵素、C(O)OH、或C1-3烷基取代。R5選自-C(O)OH、-C(O)OR5a、-C(O)NHS(O)2R5a、-(CH2)rC(O)OH、CHF2C(O)OH、CH2FC(O)OH、-環(huán)丙基-C(O)OH、或-(CH2)rC(O)NHS(O)2R5a。R1選自取代或未取代地芳基、雜芳基、或環(huán)烷基；R2選自取代或未取代的烷基、鹵代烷基、或環(huán)烷基；當(dāng)所述的R1被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R1a取代在任意位置；當(dāng)所述的R2被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R2a取代在任意位置；R1a選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、單環(huán)環(huán)烷基或苯基。R2a選自烷基或鹵代烷基。R3選自氫或烷基。R4和R4a分別獨(dú)立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、芳基、雜芳基、芳基烷基、雜芳基烷基；或者，所述的R4和R4a與它們所連接的N原子一起形成3-7元的單雜環(huán)烷基。R5a選自取代或未取代地烷基、苯基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基烷基、苯基烷基、雜芳基烷基；所述的R5a被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自鹵素、C(O)OH、或C1-3烷基取代。r為1-6的整數(shù)。本發(fā)明中所示的如式I所示的化合物較佳地為式IA：本發(fā)明中所述的如式I或IA所示的化合物可以為式IA-1；其中，X為N或C，Z為N。L為結(jié)合鍵或V為O；W為結(jié)合鍵、-N(R3)-、或-O-。R1選自取代或未取代地苯基、5-6元雜芳基、或C3-10環(huán)烷基；R2選自取代或未取代的烷基、鹵代烷基、或C3-6環(huán)烷基；當(dāng)所述的R1被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R1a取代在任意位置；當(dāng)所述的R2被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R2a取代在任意位置。R1a選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、環(huán)丙基或苯基；R2a選自C1-3烷基或C1-3鹵代烷基。Ar選自取代或未取代的苯基、5-6元單環(huán)雜芳基、8-10元雙環(huán)雜芳基；當(dāng)Ar被取代時(shí)，可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代在任意位置，所述Ar的取代基 選自：R5、氟、氯、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、取代或未取代地C3-8環(huán)烷基、取代或未取代地3-8元雜環(huán)烷基、取代或未取代地苯基、取代或未取代地5-6元雜芳基、C3-8環(huán)烷基烷基、3-8元雜環(huán)烷基烷基、苯基烷基、5-6元雜芳基烷基、氨基、3-8元雜環(huán)烷基烷氧基、C3-8環(huán)烷基烷氧基、苯基烷氧基、5-6元雜芳基烷氧基、氨基C1-6烷基、-SR4、-NO2、-CN、-OC(O)R4、-OC(O)NR4R4a、-NR4R4a、-N(R4)C(O)R4a、-N(R4)S(O)2R4a、-N(R4)C(O)NR4R4a、-S(O)2NR4R4a、-(CH2)rS(O)0-2R4、-C(O)-(CH2)r-C(O)OR4、-C(O)R4、-C(O)NR4R4a、-(CH2)rC(O)NR4R4a、或-(CH2)rNR4R4a；當(dāng)所述的Ar的取代基被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自鹵素、C(O)OH、或C1-3烷基取代；R5選自-C(O)OH、-C(O)OR5a、-C(O)NHS(O)2R5a、-(CH2)rC(O)OH、CHF2C(O)OH、CH2FC(O)OH、-環(huán)丙基-C(O)OH、或-(CH2)rC(O)NHS(O)2R5a。R4和R4a分別獨(dú)立地選自氫或C1-3烷基。R5a選自取代或未取代地C1-3烷基、C3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)烷基、苯基、5-6元雜芳基；所述的R5a被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自氟、氯、C(O)OH、或甲基取代。R3選自氫或C1-3烷基。r為1、2或3。本發(fā)明中所述的如式I或IA所示的化合物可以為式IA-2：其中，X為O，Z為C。L為V為O；W為結(jié)合鍵、-N(R3)-、或-O-。R1選自取代或未取代地苯基、5-6元雜芳基、或C3-10環(huán)烷基；R2選自取代或未取代的烷基、鹵代烷基、或C3-6環(huán)烷基；當(dāng)所述的R1被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R1a取代在任意位置；當(dāng)所述的R2被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R2a取代 在任意位置。R1a選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、環(huán)丙基或苯基。R2a選自C1-3烷基或C1-3鹵代烷基。Ar選自取代或未取代的苯基、5-6元單環(huán)雜芳基、8-10元雙環(huán)雜芳基；當(dāng)Ar被取代時(shí)，可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代在任意位置，所述Ar的取代基選自：R5、氟、氯、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、取代或未取代地C3-8環(huán)烷基、取代或未取代地3-8元雜環(huán)烷基、取代或未取代地苯基、取代或未取代地5-6元雜芳基、C3-8環(huán)烷基烷基、3-8元雜環(huán)烷基烷基、苯基烷基、5-6元雜芳基烷基、氨基、3-8元雜環(huán)烷基烷氧基、C3-8環(huán)烷基烷氧基、苯基烷氧基、5-6元雜芳基烷氧基、氨基C1-6烷基、-SR4、-NO2、-CN、-OC(O)R4、-OC(O)NR4R4a、-NR4R4a、-N(R4)C(O)R4a、-N(R4)S(O)2R4a、-N(R4)C(O)NR4R4a、-S(O)2NR4R4a、-(CH2)rS(O)0-2R4、-C(O)-(CH2)r-C(O)OR4、-C(O)R4、-C(O)NR4R4a、-(CH2)rC(O)NR4R4a、或-(CH2)rNR4R4a；當(dāng)所述的Ar的取代基被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自鹵素、C(O)OH、或C1-3烷基取代；R5選自-C(O)OH、-C(O)OR5a、-C(O)NHS(O)2R5a、-(CH2)rC(O)OH、CHF2C(O)OH、CH2FC(O)OH、-環(huán)丙基-C(O)OH、或-(CH2)rC(O)NHS(O)2R5a。R4和R4a分別獨(dú)立地選自氫或C1-3烷基。R5a選自取代或未取代地C1-3烷基、C3-8環(huán)烷基、3-8元雜環(huán)烷基、苯基、5-6元雜芳基；所述的R5a被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自氟、氯、C(O)OH、或甲基取代。R3選自氫或C1-3烷基。r為1、2或3。本發(fā)明中所述的如式IA所示的化合物較佳地為式I-1～I(xiàn)-10；本發(fā)明中所述的如式I-1～I(xiàn)-10所示的化合物較佳地為：R1選自取代或未取代地苯基、嘧啶基、吡啶基、環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、雙環(huán)[3.1.0]己基、螺[2.3]己基、雙環(huán)[3.1.1]庚基、螺[2.5]辛基、螺[2.4]庚基、或雙環(huán)[4.1.0]庚基；當(dāng)所述的R1被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R1a取代在任意位置；R1a選自氟、氯、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、環(huán)丙基或苯基；Ar選自取代或未取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、苯并噁唑基；當(dāng)Ar被取代時(shí)，可被1-3個(gè)取代基取代在任意位置，所述Ar的取代基選自：氟、氯、羧基、C1-3烷基、C3-8環(huán)烷基、5-6元雜芳基、3-8元雜環(huán)烷基。本發(fā)明中所示的如式I所示的化合物較佳地為式IB：其中，m為0、1、2或3；n為0、1、2或3；p為1、2或3。本發(fā)明中所示的如式I或IB所示的化合物較佳地選自：X為N或C，Z為N；或X為O，Z為C；L為結(jié)合鍵或V為O；W為結(jié)合鍵、-N(R3)-、或-O-；R1選自取代或未取代地苯基、5-6元雜芳基、或C3-10環(huán)烷基；R2選自取代或未取代的烷基、鹵代烷基、或C3-6環(huán)烷基；當(dāng)所述的R1被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R1a取代在任意位置；當(dāng)所述的R2被取代時(shí)，可被1-3個(gè)R2a取代在任意位置；R1a選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、環(huán)丙基或苯基；R2a選自C1-3烷基或C1-3鹵代烷基；Ar選自取代或未取代的苯基、5-6元單環(huán)雜芳基、8-10元雙環(huán)雜芳基；當(dāng)Ar被取代時(shí)，可被一個(gè)或多個(gè)取代基取代在任意位置，所述Ar的取代基選自：R5、氟、氯、C1-6烷基、鹵代C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵代C1-6烷氧基、取代或未取代地C3-8環(huán)烷基、取代或未取代地3-8元雜環(huán)烷基、取代或未取代地苯基、取代或未取代地5-6元雜芳基、C3-8環(huán)烷基烷基、3-8元雜環(huán)烷基烷基、苯基烷基、5-6元雜芳基烷基、氨基、3-8元雜環(huán)烷基烷氧基、C3-8環(huán)烷基烷氧基、苯基烷氧基、5-6元雜芳基烷氧基、氨基C1-6烷基、-SR4、-NO2、-CN、-OC(O)R4、-OC(O)NR4R4a、-NR4R4a、-N(R4)C(O)R4a、-N(R4)S(O)2R4a、-N(R4)C(O)NR4R4a、-S(O)2NR4R4a、-(CH2)rS(O)0-2R4、-C(O)-(CH2)r-C(O)OR4、-C(O)R4、-C(O)NR4R4a、-(CH2)rC(O)NR4R4a、或-(CH2)rNR4R4a；當(dāng)所述的Ar的取代基被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自鹵素、C(O)OH、或C1-3烷基取代；R5選自-C(O)OH、-C(O)OR5a、-C(O)NHS(O)2R5a、-(CH2)rC(O)OH、CHF2C(O)OH、CH2FC(O)OH、-環(huán)丙基-C(O)OH、或-(CH2)rC(O)NHS(O)2R5a；R4和R4a分別獨(dú)立地選自氫或C1-3烷基；R5a選自取代或未取代地C1-3烷基、環(huán)丙基、苯基、5-6元雜芳基；所述的R5a被取代時(shí)，可被1或2個(gè)選自氟、氯、C(O)OH、或甲基取代；R3選自氫或C1-3烷基；r為1、2或3。本發(fā)明中所述的如式IB所示的化合物較佳地為式I-11～I(xiàn)-20；所述的如式I所示的化合物為以下化合物：第二方面，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包括所述的如式I、IA、IB、I-1～I(xiàn)-20所示的化合物、同位索取代衍生物、其藥學(xué)上可接受的鹽和/或前藥，以及藥學(xué)上可接受的輔料。本發(fā)明還提供了藥物組合物，該組合物包括如式I、IA、IB、I-1～I(xiàn)-20所示的化合物，用于治療由FXR介導(dǎo)的疾病。所述的藥物組合物可進(jìn)一步含有其它種類的治療膽汁淤積、肝內(nèi)膽汁淤積、雌激素誘導(dǎo)的膽汁淤積、藥物誘導(dǎo)的膽汁淤積、妊娠性膽汁淤積、與腸胃營養(yǎng)相關(guān)的膽汁淤積、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PBS)、進(jìn)行性家族性膽汁淤積(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、化療相關(guān)的脂肪性肝炎(CASH)、藥物誘導(dǎo)的膽管損傷、肝硬化、酒精誘導(dǎo)的肝硬化、囊性纖維化、膽管梗阻、膽石病、肝纖維化、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、糖尿病腎病、結(jié)腸炎、新生兒黃疸、核黃疸的預(yù)防、靜脈阻塞病、門靜脈高壓、代謝綜合征、高膽固醇血病、炎性腸道疾病的藥物或其它種類的治療劑。所述的輔料可為藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和/或賦形劑等。體外測(cè)試表明，如式I所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或組合物具有有價(jià)值的藥理學(xué)特性，因此可用作藥物，具體而言，本發(fā)明化合物為法尼酯衍生物X受體(FXR)的激動(dòng)劑，可以調(diào)節(jié)FXR的活性，用作治療FXR介導(dǎo)的疾病，也可用于制備用于治療FXR介導(dǎo)的疾病的藥物，所述疾病是由于糖類代謝紊亂、脂類代謝紊亂及膽汁酸代謝紊亂引起的，具體而言，所述疾病包括但不限于：膽汁淤積、肝內(nèi)膽汁淤積、雌激素誘導(dǎo)的膽汁淤積、藥物誘導(dǎo)的膽汁淤積、妊娠性膽汁淤積、與腸胃營養(yǎng)相關(guān)的膽汁淤積、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PBS)、進(jìn)行性家族性膽汁淤積(PFIC)、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、 化療相關(guān)的脂肪性肝炎(CASH)、藥物誘導(dǎo)的膽管損傷、肝硬化、酒精誘導(dǎo)的肝硬化、囊性纖維化、膽管梗阻、膽石病、肝纖維化、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、糖尿病腎病、結(jié)腸炎、新生兒黃疸、核黃疸的預(yù)防、靜脈阻塞病、門靜脈高壓、代謝綜合征、高膽固醇血病、和/或炎性腸道疾病。第三方面，本發(fā)明提供了如式I所示化合物的制備方法，其為如下任一方法：方法一：所述的制備方法包括如下步驟：溶劑中，如式II-1所示化合物在縮合劑及堿存在的情況下和相應(yīng)的酸縮合生成酰胺鍵得到如式I-a所示化合物；所述的成酰胺反應(yīng)的條件和步驟可為本領(lǐng)域常規(guī)的縮合反應(yīng)的條件和步驟，本發(fā)明特別優(yōu)選以下反應(yīng)條件：所述的溶劑優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺；所述的縮合劑優(yōu)選2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)；所述的堿優(yōu)選N，N-二異丙基乙胺或三乙胺，所述的反應(yīng)的溫度優(yōu)選0～30℃；所述的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0～24小時(shí)。方法一中，所述的ArC(O)OH還可以和草酰氯或二氯亞砜反應(yīng)得到相應(yīng)的酰氯ArC(O)Cl，再和II-1在堿(例如：三乙胺或N，N-二異丙基乙胺)性條件下，在非質(zhì)子溶劑(例如：二氯甲烷)中反應(yīng)得到I-a。方法二：所述的制備方法包括如下步驟：溶劑中，如式II-1所示化合物在堿存在及加熱的條件下，與相應(yīng)的氨基甲酸苯酯或相應(yīng)的異氰酸酯反應(yīng)生成脲鍵得到如式I-2所示化合物；所述的成脲反應(yīng)的條件和步驟可為本領(lǐng)域常規(guī)的成脲反應(yīng)的條件和步 驟，本發(fā)明特別優(yōu)選以下反應(yīng)條件：條件1：所述的溶劑優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺；所述的堿優(yōu)選三乙胺；所述的加熱反應(yīng)的溫度優(yōu)選40～120℃；所述的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0～24小時(shí)。條件2：所述的溶劑優(yōu)選二氯甲烷；所述的堿優(yōu)選三乙胺；所述的加熱反應(yīng)的溫度優(yōu)選0～40℃；所述的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0～24小時(shí)。方法三：所述的制備方法包括如下步驟：其中，Y為氯或溴，條件1：在鈀催化劑和相應(yīng)的Ar的鹵代物存在下，通過Buchwald-Hartwig偶聯(lián)反應(yīng)得到如式I-3所示化合物；條件2：堿性條件下，通過取代反應(yīng)得到如式I-3所示化合物。其中，條件1適用于所用的Ar的氯代物或溴代物，只有當(dāng)Ar的溴代物或氯中的氯或溴較易被取代時(shí)，才適用方法2所述條件。例如，當(dāng)Ar-Y為2-氯吡啶或2-氯嘧啶類化合物。所述的Buchwald-Hartwig偶聯(lián)反應(yīng)為本領(lǐng)域常規(guī)的反應(yīng)的條件和步驟。本發(fā)明特別優(yōu)選以下反應(yīng)條件：所述的溶劑優(yōu)選叔丁醇；所述的堿優(yōu)選碳酸銫；所述的偶聯(lián)試劑為：2-二環(huán)己基磷-2，4，6-三異丙基聯(lián)苯(x-phos)和三(二亞芐基丙酮)二鈀(dba3Pd2)體系；所述的加熱反應(yīng)的溫度優(yōu)選0～85℃；所述的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0～24小時(shí)。所述的取代反應(yīng)為本領(lǐng)域常規(guī)的反應(yīng)的條件和步驟。本發(fā)明特別優(yōu)選以下反應(yīng)條件：所述的溶劑優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺；所述的堿優(yōu)選碳酸銫；所述的加熱反應(yīng)的溫度優(yōu)選0～90℃；所述的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0～24小時(shí)。中間體II可通過如下制備方法制備：溶劑中，如式III所示化合物在18-冠醚-6及堿存在條件下，與相應(yīng)的醇反應(yīng)生成醚鍵得到如式II所示中間體；所述的成醚鍵反應(yīng)的條件和步驟可為本領(lǐng)域常規(guī)的成醚鍵反應(yīng)的條件和步驟，本發(fā)明特別優(yōu)選以下反應(yīng)條件：所述的溶劑優(yōu)選四氫呋喃；所述的堿優(yōu)選叔丁醇鉀；所述的加熱反應(yīng)的溫度優(yōu)選0～40℃；所述的反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選0～48小時(shí)。除非另有說明，在本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中出現(xiàn)的以下術(shù)語具有下述含義：術(shù)語“烷基”是指包含1-20個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基，優(yōu)選1～8個(gè)碳原子，更優(yōu)選1～6個(gè)碳原子，烷基的代表性例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、異丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、4，4-二甲基戊基、2，2，4-三甲基戊基、十一烷基、十二烷基，及它們的各種異構(gòu)體等。當(dāng)“烷基”作為其它基團(tuán)的鏈接基團(tuán)時(shí)，如-(CH2)r-，它可以是支鏈或直鏈；r為1-6的整數(shù)，r優(yōu)選為1、2或3，例子包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-或-CH2CH(CH3)-。術(shù)語“環(huán)烷基”是指包含3-20個(gè)碳原子的飽和或部分不飽和(包含1或2個(gè)雙鍵)的單環(huán)或多環(huán)基團(tuán)。“單環(huán)環(huán)烷基”優(yōu)選3-10元單環(huán)烷基，更優(yōu)選3-8元單環(huán)烷基，例如：環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)癸基、環(huán)十二烷基、環(huán)己烯基?！岸喹h(huán)環(huán)烷基”包括“橋環(huán)基”、“并環(huán)環(huán)烷基”和“螺環(huán)烷基”，“橋環(huán)基”是指單環(huán)環(huán)烷基任意兩個(gè)不相鏈接的碳原子被1-3個(gè)額外的碳原子之間的亞烷基橋連接(即，-(CH2)t-形式的橋接基團(tuán)，其中t是1、2或3)。雙環(huán)橋環(huán)基的代表性例子包括但不限于：冰片基、雙環(huán)[2.2.1]庚烯基、雙環(huán)[3.1.1]庚烷基、雙環(huán)[2.2.1]庚烷基、雙環(huán)[2.2.2]辛烷基、雙環(huán)[3.2.2]壬烷基、雙環(huán)[3.3.1]壬烷基、雙環(huán)[4.2.1]壬烷基等?！安h(huán)環(huán)烷基”包含稠合到苯基、單環(huán)環(huán)烷基、單環(huán)雜環(huán)烷基或單環(huán)雜芳基上的 環(huán)烷基環(huán)，并環(huán)環(huán)烷基包括但不限于：苯并環(huán)丁烯、苯并環(huán)丁烷、苯并環(huán)己烷、苯并環(huán)庚烷、吡啶并環(huán)丁烷、吡啶并環(huán)戊烷、吡啶并環(huán)己烷、2，3-二氫-1-H-茚()、2，3-環(huán)戊烯并吡啶、5，6-二氫-4H-環(huán)戊基[B]噻吩、十氫萘等?！奥莪h(huán)烷基”是指兩個(gè)環(huán)烷基共用一個(gè)碳原子形成的雙環(huán)基團(tuán)，螺環(huán)烷基包括但不限于：等。多環(huán)環(huán)烷基為5-18元，優(yōu)選6-15元，更優(yōu)選6-12元。所述的多環(huán)環(huán)烷基優(yōu)選雙環(huán)環(huán)烷基。單環(huán)環(huán)烷基或多環(huán)環(huán)烷基可以通過環(huán)上任意的碳原子鏈接到母體分子上。術(shù)語“C3-8環(huán)烷基”是指包含3-8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，包括單環(huán)環(huán)烷基、螺環(huán)基和并環(huán)環(huán)烷基。術(shù)語“取代或未取代的環(huán)烷基”是指所述的環(huán)烷基可以為未取代，或者被1-2個(gè)選自鹵素、羧基、或C1-3烷基取代在任意位置。術(shù)語“雜環(huán)烷基”指由碳原子以及選自氮、氧或硫等雜原子組成的飽和或部分不飽和(包含1或2個(gè)雙鍵)的非芳香環(huán)狀基團(tuán)，此環(huán)狀基團(tuán)可為單環(huán)或多環(huán)基團(tuán)，在本發(fā)明中，雜環(huán)烷基中雜原子個(gè)數(shù)優(yōu)選1、2、3或4，雜環(huán)烷基中的氨、碳或硫原子可任選地被氧化。氮原子可任選進(jìn)一步被其他基團(tuán)取代而形成叔胺或季銨鹽?！皢苇h(huán)雜環(huán)烷基”優(yōu)選3-10元單環(huán)雜環(huán)烷基，更優(yōu)選5-8元單環(huán)雜環(huán)烷基。例如：氮丙啶基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃-3-基、嗎啉-4-基、硫代嗎啉-4-基、硫代嗎啉-S-氧化物-4-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌啶-4-基、N-烷基哌啶-4-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、N-烷基吡咯烷-2-基、哌嗪-1-基、4-烷基哌嗪-1-、等?！岸喹h(huán)雜環(huán)烷基”包括“橋雜環(huán)基”、“并環(huán)雜環(huán)烷基”和“螺雜環(huán)基”，“橋雜環(huán)基”是指單環(huán)雜環(huán)烷基任意兩個(gè)不相鏈接的環(huán)原子被1-3個(gè)額外的碳原子和雜原子/1-3個(gè)額外的碳原子/1個(gè)額外的雜原子形成的直鏈基團(tuán)橋連結(jié)(所述的直鏈基團(tuán)選自但不限于：-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-CH2CH2-、-CH2O-、-CH2S-、 -CH2NH-、-CH2CH2CH2-、-CH2OCH2-、-CH2CH2O-、-CH2CH2NH-、-CH2NHCH2-)，橋雜環(huán)基的代表性例子包括但不限于：等?！安h(huán)雜環(huán)烷基”包含稠合到苯基、單環(huán)環(huán)烷基、單環(huán)雜環(huán)烷基或單環(huán)雜芳基的單環(huán)雜環(huán)烷基環(huán)，雙環(huán)并環(huán)雜環(huán)烷基包括但不限于：2，3-二氫苯并呋喃基、1，3-二氫異苯并呋喃基、二氫吲哚基、2，3-二氫苯并[b]噻吩基、二氫苯并哌喃基、1，2，3，4-四氫喹啉基、等?！奥蓦s環(huán)基”是指兩個(gè)雜環(huán)烷基或一個(gè)環(huán)烷基和一個(gè)雜環(huán)烷基共用一個(gè)碳原子形成的雙環(huán)基團(tuán)，螺雜環(huán)基包括但不限于：等。多環(huán)環(huán)烷基為6-18元，優(yōu)選6-15元，更有選7-12元。單環(huán)雜環(huán)烷基和多環(huán)雜環(huán)烷基可以通過環(huán)上任意的環(huán)原子鏈接到母體分子上。上述環(huán)原子特指組成環(huán)骨架的碳原子和/或氮原子。術(shù)語“3-8元雜環(huán)烷基”是指包含3-8個(gè)碳原子和雜原子的單環(huán)雜環(huán)基、橋雜環(huán)基、并環(huán)雜環(huán)烷基或螺雜環(huán)基。術(shù)語“取代或未取代的雜環(huán)烷基”是指所述的雜環(huán)烷基可以為未取代，或者被1-2個(gè)選自鹵素、羧基、或C1-3烷基取代在任意位置。術(shù)語“環(huán)烷基烷基”是指環(huán)烷基與母核結(jié)構(gòu)之間通過烷基連接。由此，“環(huán)烷基烷基”包含上述烷基和環(huán)烷基的定義。術(shù)語“雜環(huán)烷基烷基”是指雜環(huán)烷基與母核結(jié)構(gòu)之間通過烷基連接。由此，“雜環(huán)烷基烷基”包含上述烷基和雜環(huán)烷基的定義。術(shù)語“烷氧基”指通過氧橋連接的具有所述碳原子數(shù)目的環(huán)狀或者非環(huán)狀烷基，包含烷基氧基、環(huán)烷基氧基和雜環(huán)烷基氧基。由此，“烷氧基”包含 上述烷基、雜環(huán)烷基和環(huán)烷基的定義。術(shù)語“環(huán)烷基烷氧基”是指環(huán)烷基取代烷氧基中烷基上的氫形成的基團(tuán)。由此，“環(huán)烷基烷氧基”包含上述環(huán)烷基和烷氧基的定義。術(shù)語“雜環(huán)烷基烷氧基”是指雜環(huán)烷基取代烷氧基中烷基上的氫形成的基團(tuán)。由此，“雜環(huán)烷基烷氧基”包含上述雜環(huán)烷基和烷氧基的定義。術(shù)語“烯基”指含有至少1個(gè)碳碳雙鍵的直鏈、支鏈或者環(huán)狀非芳香烴基。其中可以存在1-3個(gè)碳碳雙鍵，優(yōu)選存在1個(gè)碳碳雙鍵。包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和環(huán)己烯基。所述的烯基可以被取代。術(shù)語“C2-4烯基”是指具有2-4個(gè)碳原子的烯基。術(shù)語“炔基”是指含有至少1個(gè)碳碳三鍵的直鏈、支鏈或者環(huán)狀烴基。其中可以存在1-3個(gè)碳碳三鍵，優(yōu)選存在1個(gè)碳碳三鍵。包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和3-甲基丁炔基。術(shù)語“C2-4炔基”是指具有2-4個(gè)碳原子的炔基。術(shù)語“芳基”是指任何穩(wěn)定的6-10元單環(huán)或雙環(huán)芳香族基團(tuán)，例如：苯基、萘基、四氫萘基、2，3-二氫化茚基或聯(lián)苯基等。術(shù)語“C6芳基”是指苯基術(shù)語“雜芳基”是指至少1個(gè)環(huán)上的碳原子被選自氮、氧或硫的雜原子置換所形成的芳香環(huán)基團(tuán)，其可為5-7元單環(huán)雜芳基或7-12元雙環(huán)雜芳基，優(yōu)選5-6元單環(huán)雜芳基和8-10元雙環(huán)雜芳基。在本發(fā)明中，雜原子個(gè)數(shù)優(yōu)選1、2或3，包括：吡咯基、咪唑基、1，2，4-三氮唑基、1，2，3-三氮唑基、四氮唑基、吲唑基、異吲唑基、吲哚基、異吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并[d][1，3]二氧戊環(huán)基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基等。術(shù)語“芳基烷基”是指芳基與母核結(jié)構(gòu)之間通過烷基連接。由此，“芳基烷基”包含上述烷基和芳基的定義。術(shù)語“雜芳基烷基”是指雜環(huán)烷基與母核結(jié)構(gòu)之間通過烷基連接。由此，“雜芳基烷基”包含上述烷基和雜芳基的定義。術(shù)語“芳基烷氧基”是指芳基取代烷氧基中烷基上的氫形成的基團(tuán)。由此，“芳基烷氧基”包含上述芳基和烷氧基的定義。術(shù)語“雜芳基烷氧基”是指雜芳基取代烷氧基中烷基上的氫形成的基團(tuán)。由此，“雜芳基烷氧基”包含上述雜芳基和烷氧基的定義。術(shù)語“鹵素”表示氟、氯、溴或碘。術(shù)語“鹵代烷基”是指被鹵素任意取代的烷基，包括但不限于：-CF3、-CHF2。由此，“鹵代烷基”包含以上鹵素和烷基的定義。術(shù)語“鹵代烷氧基”是指被鹵素任意取代的烷氧基。由此，“鹵代烷氧基”包含以上鹵素和烷氧基的定義。術(shù)語“氨基”是指-NH2，術(shù)語“烷基氨基”是指氨基上至少一個(gè)氫原子被烷基所取代。術(shù)語“氨烷基”是指烷基上一個(gè)氫原子被氨基所取代。由此，“烷基氨基”和“氨烷基”包含上述烷基和氨基的定義。術(shù)語“羧基”是指-C(O)OH。符號(hào)“＝”表示雙鍵；本發(fā)明所述“室溫”是指15-30℃。所述的同位索取代衍生物包括：式I中任意的氫原子被1-5個(gè)氘原子取代得到的同位索取代衍生物、式I中任意的碳原子被1-3個(gè)碳14原子取代得到的同位素取代衍生物或式I中任意的氧原子被1-3個(gè)氧18原子取代得到的同位索取代衍生物。本發(fā)明所述的“藥學(xué)上可接受的鹽”在Berge，etal.，“Pharmaceuticallyacceptablesalts”，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)中有討論，并對(duì)藥物化學(xué)家來說是顯而易見，所述的鹽是基本上無毒性的，并能提供所需的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、適口性、吸收、分布、代謝或排泄等。本發(fā)明藥學(xué)上可接受的鹽可通過一般的化學(xué)方法合成。一般情況下，鹽的制備可以通過游離堿或酸與等化學(xué)當(dāng)量或者過量酸(無機(jī)酸或有機(jī)酸)或堿在合適的溶劑或溶劑組合物中反應(yīng)制得。本發(fā)明所述的“前藥”是指化合物在體內(nèi)代謝后轉(zhuǎn)換成原始活性化合物。代表性地講，前藥為非活性物質(zhì)，或者比活性母體化合物活性小，但可以提供方便的操作、給藥或者改善代謝特性。本發(fā)明所述“異構(gòu)體”是指本發(fā)明的式(I)化合物可以有不對(duì)稱中心和外消旋體、外消旋混合物和單個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體，所有這些異構(gòu)體，包括立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體均包含在本發(fā)明中。所述幾何異構(gòu)體包括順反異構(gòu)體。具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。本發(fā)明所有化合物的結(jié)構(gòu)可通過核磁共振(1HNMR)和/或質(zhì)譜檢測(cè)(MS)鑒定。1HNMR化學(xué)位移(δ)以PPM記錄(10-6)。NMR通過BrukerAVANCE-400光譜儀進(jìn)行。合適的溶劑是氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，氘代二甲亞砜(DMSO-d6)，四甲基硅烷作為內(nèi)標(biāo)(TMS)。低分辨率質(zhì)譜(MS)由Agilent1200HPLC/6120質(zhì)譜儀測(cè)定，使用XBridgeC18，4.6×50mm，3.5μm，梯度洗脫條件一：80-5％溶劑A1和20-95％溶劑B1(1.8分鐘)，然后95％溶劑B1和5％溶劑A1(3分鐘以上)，百分?jǐn)?shù)為某一溶劑占總?cè)軇w積的體積百分?jǐn)?shù)。溶劑A1：0.01％三氟乙酸(TFA)的水溶液；溶劑B1：0.01％三氟乙酸的乙腈溶液；百分?jǐn)?shù)為溶質(zhì)占溶液的體積百分?jǐn)?shù)。梯度洗脫條件二：80-5％溶劑A2和20-95％溶劑B2(1.5分鐘)，然后95％溶劑B2和5％溶劑A2(2分鐘以上)，百分?jǐn)?shù)為某一溶劑占總?cè)軇w積的體積百分?jǐn)?shù)。溶劑A2：10mM的碳酸氫銨的水溶液；溶劑B2：乙腈。薄層硅膠板是煙臺(tái)黃海HSGF254或青島GF254硅膠板。柱層析一般使用煙臺(tái)黃海200-300目硅膠作為載體?；衔锏闹苽洌褐虚g體1：步驟1：冰浴條件下，向鹽酸羥胺(22.5g，362mmol)的水(16.5mL)溶液中滴加氫氧化鈉水溶液(25g，629mmol，溶于105mL水中)，冰浴下攪拌30分鐘，將上述溶液加入到2，6-二氯苯甲醛的乙醇(250mL)溶液中，反應(yīng)體系加熱至90℃，攪拌過夜。冷卻至室溫，減壓濃縮得粗品，將粗品用乙醇/水(1∶10)重結(jié)晶，過濾、干燥得(E)-2，6-二氯苯甲醛肟(1-2)(50g，產(chǎn)率92％)為白色固體。步驟2：向(E)-2，6-二氯苯甲醛肟(50g，263mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(160mL)溶液中緩慢加入N-氯代丁二酰亞胺(36g，268mmol，溶液140mL的N，N-二甲基甲酰胺中)，滴加完畢，反應(yīng)體系在40℃下攪拌1小時(shí)后加入乙酸乙酯稀釋，用水和飽和食鹽水洗滌有機(jī)相，干燥，減壓濃縮得粗品，粗品用正己烷重結(jié)晶得(Z)-2，6-二氯苯甲酰氯肟(1-3)(45g，產(chǎn)率：76％)為白色固體。步驟3：室溫下，向3-環(huán)丙基-3-氧代丙酸甲酯(15.8g，111mmol)中滴加三乙胺(32mL)。10℃條件下，向上述體系中加入(Z)-2，6-二氯苯甲酰氯肟(25g，111mmol，溶于60mL乙醇中)，加畢，室溫?cái)嚢柽^夜。加入水(20mL)淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取反應(yīng)體系，合并有機(jī)相，干燥，濃縮得粗品，將粗品用乙酸乙酯/石油醚(1∶10)重結(jié)晶得5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異噁唑-4-甲酸甲酯(1-4)(20g，58％)為白色固體。步驟4：冰浴條件下，向5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異噁唑-4-甲酸甲酯(11.5g，36.7mmol)的四氫呋喃溶液(73mL)中滴加二異丁基氫化鋁的甲苯溶液(77mL，1mol/L)，滴加完畢，反應(yīng)體系升至室溫反應(yīng)2小時(shí)。加入乙醇(5mL)淬滅反應(yīng)，用水(37mL)和乙酸乙酯(72mL)稀釋， 攪拌10分鐘，減壓過濾除去固體，濾液濃縮得粗品，粗品用正己烷重結(jié)晶得(5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(1-5)(10g，產(chǎn)率：96％)為白色固體。步驟5：冰浴條件下，向5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(6g，21.1mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中加入三苯基膦(8.4g，32mmol)，然后再室溫下分批向反應(yīng)體系中加入四溴化碳(10.6g，32.4mmol)，加畢，室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)體系濃縮，粗品用硅膠柱層析過濾(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶20)后再采用乙酸乙酯/石油醚(1∶20)重結(jié)晶得4-溴甲基-5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)-1，2-異噁唑(1-6)(5.1g，產(chǎn)率：69％)為白色固體。m/z：[M+H]+419；1HNMR(CDCl3，400Hz)：δ7.48-7.36(m，3H)，4.24(s，2H)，2.19-2.10(m，1H)，1.35-1.29(m，2H)，1.26-1.20(m，2H)。中間體2：步驟1：將3-羥基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(196mg，0.86mmol)，叔丁醇鉀(116mg，1.04mmol)和18-冠醚-6(274mg，1.04mmol)溶于四氫呋喃(20mL)溶液中，室溫?cái)嚢?5分鐘后，加入4-(溴甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2，6-二氯苯基)-1，2-噁唑(300mg，0.86mmol)，反應(yīng)室溫?cái)嚢柽^夜，加水(20mL)淬滅反應(yīng)，水相用乙酸乙酯萃取3次每次用(10mL)，將有機(jī)相合并，并用水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮并用硅膠柱層(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)析純化所得化合物2-1(260mg，產(chǎn)率：61％)為油狀產(chǎn)物。步驟2：將化合物2-1(260mg，0.57mmol)，溶于二氯甲烷(4mL)中，在冰浴作用下加入三氟乙酸(2mL)，在此溫度攪拌1小時(shí)，濃縮所得粗品2-2，不用純化直接用于下一步反應(yīng)。m/z：[M+H]+393.2。中間體3：用中間體2-2的合成方法合成中間體3-2m/z：[M+H]+379.1。實(shí)施例1：步驟1：化合物I-1-1將對(duì)甲酸苯甲酸甲酯(11.7mg，0.065mmol)、HATU(25mg，0.065mmol)和化合物2-2(32mg，0.065mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中，在冰浴冷卻的情況下加入N，N-二異丙基乙胺(21mg，0.16mmol)，室溫反應(yīng)攪拌過夜，加水(2mL)淬滅反應(yīng)，水相用乙酸乙酯萃取(3mL×3)，將有機(jī)相合并，并依次用飽和氯化銨、水、飽和碳酸氫鈉和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮并用薄層硅膠板(2％的甲醇二氯甲烷溶液)純化所得化合物I-1-1(16mg，產(chǎn)率：44％)為油狀產(chǎn)物。m/z：[M+H]+555.1；步驟二：化合物I-1A化合物I-1-1(16mg，0.029mmol)溶于甲醇(2mL)中，將氫氧化鋰(3mg，0.059mmol)溶于1mL水中滴加至上述溶液中，室溫?cái)嚢柽^夜，減壓蒸掉甲醇，水相用2N的鹽酸稀釋液調(diào)PH值約為3，用乙酸乙酯萃取(3mL×3)，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮得到化合物 I-1A(12mg，產(chǎn)率：76％)為白色固體。m/z：[M+H]+541.2；1HNMR(CDCl3，400Hz)：δ9.80(S，1H)，8.13(d，J＝8.4，2H)，7.52(d，J＝8.4，2H)，7.41-7.43(t，J＝4.4，2H)，7.28-7.36(m，1H)，4.71(s，1H)，4.20-4.32(m，2H)，3.87(s，1H)，3.61-3.63(m，1H)，2.10-2.19(m，3H)，1.69-1.91(m，7H)，1.13-1.16(m，2H)，0.87-0.92(m，1H)。按照實(shí)施例1化合物的合成方法合成化合物I-1B～I(xiàn)-1C：m/z：[M+H]+541.2；m/z：[M+H]+542.2。實(shí)施例2：步驟1：化合物I-2-1將中間體2-2(32mg，0.065mmol)、三乙胺(16mg，016mmol)、3-乙氧羰基苯基異氰酸酯(12.4mg，0.065mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，室溫?cái)嚢?小時(shí)，將有機(jī)溶劑旋干，所得粗品用薄層硅膠板(2％的甲醇二氯甲烷溶液)純化得到化合物I-2-1(30mg，產(chǎn)率：79％)為淡黃色油狀物。m/z：[M+H]+583.2；步驟2：化合物I-2A化合物I-2-1(30mg，0.05mmol)溶于甲醇(2mL)中，將氫氧化鋰(11mg，0.25mmol)溶于1mL水中滴加至上述溶液中，室溫?cái)嚢柽^夜，減壓蒸掉甲醇，水相用2N的鹽酸稀釋液調(diào)PH值約等于3，用乙酸乙酯萃取(3mL×3)，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮得到化合物I-2A(16mg，產(chǎn)率：58％)為白色固體。m/z：[M+H]+556.2；1HNMR(DMSO-d6，400Hz)：δ13.0(br，1H)，8.55(s，1H)，8.10(s，1H)，7.48-7.66(m，4H)，7.32(m，1H)，4.23-4.26(m，3H)，3.53(s，1H)，2.34-2.35(m，1H)，1.91-1.99(m，3H)，1.59-1.67(m，4H)，1.09-1.30(m，6H)，0.85(s，1H)。實(shí)施例3：4-(苯氧基碳酰氨基)苯甲酸甲酯的合成將對(duì)氨基苯甲酸甲酯(151mg，1mmol)溶于二氯甲烷中(10mL)，在冰浴的作用下依次加入吡啶(1mL)和氯甲酸苯酯(156.6mg，1mmol)，室溫?cái)嚢?小時(shí)，反應(yīng)液依次用2M鹽酸、水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并旋干得到白色固體化合物(100mg，產(chǎn)率：37％)。m/z：[M+H]+272.4；步驟1：化合物I-2-2將中間體2-2(32mg，0.065mmol)、4-(苯氧基碳酰氨基)苯甲酸甲酯(18mg，0.065mmol)和三乙胺(20mg，0.195mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺中(1mL)。升溫至60℃，攪拌2小時(shí)后冷卻至室溫，用飽和食鹽水淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)，有機(jī)相合并，并依次用飽和氯化銨、 水、和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮并用用薄層硅膠板(2％的甲醇二氯甲烷溶液)純化得化合物I-2-2(25mg，產(chǎn)率：67％)為無色油狀物。m/z：[M+H]+570.2；步驟3：化合物I-2B化合物I-2-2(25mg，0.044mmol)溶于甲醇(2mL)中，將一水合氫氧化鋰(18mg，0.44mmol)溶于1mL水中滴加至上述溶液中，室溫?cái)嚢柽^夜，減壓蒸掉甲醇，水相用2N的鹽酸稀釋液調(diào)PH值約為3，用乙酸乙酯萃取(3mL×3)，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮得到白色固體化合物I-2B(14mg，產(chǎn)率：57％)為白色固體。m/z：[M+H]+556.2；1HNMR(DMSO-d6，400Hz)：δ13.0(br，1H)，8.68(s，1H)，7.78-7.81(m，2H)，7.57-7.66(m，4H)，4.24-4.26(m，3H)，3.52(s，1H)，2.35(s，1H)，1.79-1.91(m，3H)，1.58-1.67(m，5H)，1.09-1.24(m，6H)。按照實(shí)施例3化合物的合成方法合成化合物I-2C～I(xiàn)-2E：m/z：[M+H]+557.2；m/z：[M+H]+574.2；m/z：[M+H]+557.2。實(shí)施例4：步驟1：化合物I-3-1將化合3-2(50mg，0.1mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入碳酸銫(99mg，0.3mmol)和6-氯煙酸甲酯(35mg，0.20mmol)，反應(yīng)加熱至60℃攪拌3小時(shí)，冷卻至室溫，加入乙酸乙酯稀釋，用水、飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮，粗品用硅膠制備板(5％的甲醇二氯甲烷溶液)得化合物I-3-1(40mg，59％)為類白色泡沫狀固體。m/z：[M+H]+514.2；步驟2：化合物I-3A化合物I-3-1(40mg，0.08mmol)溶于甲醇(0.5mL)、四氫呋喃(0.2mL)和水(0.1mL)中，加入一水合氫氧化鋰(16mg，0.40mmol)，室溫?cái)嚢?6小時(shí)，加入水(2mL)，水相用乙酸乙酯萃取，棄去有機(jī)相，水相用飽和檸檬酸溶液調(diào)PH值約為2-3，用乙酸乙酯萃取(×2)，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮得到化合物I-3A(28mg，產(chǎn)率：77％)為白色固體。m/z：[M+H]+500.2；1HNMR(CDCl3，400Hz)：δ8.8(d，J＝1.6Hz，1H)，8.03(dd，J＝1.6Hz，J＝8.8Hz，1H)，7.34-7.45(m，3H)，6.19(d，J＝8.8Hz，1H)，4.17(s，2H)，4.01(s，2H)，4.02(s，2H)，3.82-3.89(m，1H)，2.36-2.41(m，2H)，1.98-199(m，2H)，1.25-1.29(m，3H)，1.12-1.16(m，2H)。按照實(shí)施例4化合物的合成方法合成化合物I-3B～I(xiàn)-3D：m/z：[M+H]+500.3；m/z：[M+H]+500.2；m/z：[M+H]+501.2。實(shí)施例5：步驟1：化合物I-3-2將化合物3-2(30mg，0.06mmol)，5％mmol的2-二環(huán)己基磷-2，4，6-三異丙基聯(lián)苯(x-phos)(2mg)、5％mmol的三(二亞芐基丙酮)二鈀(dba3Pd2)和碳酸銫(58mg，0.18mmol)混合于叔丁醇中，氮?dú)庵脫Q3次，反應(yīng)回流3小時(shí)，冷卻至室溫，通過硅藻土過濾，濾液濃縮用硅膠制備板純化(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得化合物I-3-2(23mg，產(chǎn)率：60.8％)為淡黃色固體。m/z：[M+H]+600.4步驟2：化合物I-3E化合物I-3-2(23mg，0.04mmol)溶于甲醇(0.5mL)、四氫呋喃(0.2mL)和水(0.1mL)中，加入一水合氫氧化鋰(8mg，0.2mmol)，室溫?cái)嚢?6小時(shí)，加入水(2mL)，水相用乙酸乙酯萃取，棄去有機(jī)相，水相用飽和檸檬酸溶液調(diào)PH值約為3，用乙酸乙酯萃取(×2)，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾濃縮得到化合物I-3E(19mg，產(chǎn)率：84％)為淡黃色固體。m/z：[M+H]+586.21HNMR(CDCl3，400Hz)：δ8.04(d，J＝1.2Hz，1H)，7.55(d，J＝1.2Hz，1H)，7.37-7.48(m，3H)，4.19-4.20(m，4H)，4.12(s，2H)，4.05(s，2H)，3.39-2.44(m，2H)，2.11-2.18(m，1H)，1.97-2.02(m，2H)，1.27-1.35(m，4H)，1.13-1.18(m，2H)。按照實(shí)施例5化合物的合成方法合成化合物I-3F～I(xiàn)-3I：m/z：[M+H]+574.2；m/z：[M+H]+556.3；m/z：[M+H]+499.3；m/z：[M+H]+499.2。生物測(cè)試實(shí)施例：實(shí)施例1：FXRTR-FRET試驗(yàn)化合物FXR輔酶多肽募集TR-FRET生物活性測(cè)定FXR激動(dòng)劑的篩選是利用TR-FRET(Time-resolvedfluorescenceresonance energytransfer時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移)方法進(jìn)行生物活性測(cè)定。該方法測(cè)量化合物調(diào)節(jié)FXR配體結(jié)合域蛋白(ligandbindingdomain，LBD)與生物素標(biāo)記的多肽(SRC-1)之間的相互作用的能力。當(dāng)配體結(jié)合到FXR配體結(jié)合域時(shí)會(huì)促使此區(qū)域的構(gòu)象發(fā)生變化，從而產(chǎn)生高親和性募集其輔酶多肽(SRC-1)。當(dāng)兩者靠得很近時(shí)，光子能從一個(gè)受激發(fā)的熒光團(tuán)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)熒光團(tuán)，并誘導(dǎo)后者產(chǎn)生熒光從而可以進(jìn)行檢測(cè)。與FXR親和力越高的化合物，誘導(dǎo)的熒光信號(hào)越強(qiáng)。測(cè)試是在384孔測(cè)試板中進(jìn)行，將N-末端GST-標(biāo)記的FXR配體結(jié)合域蛋白FXR-LBD(3nM，LifeTechnology)和銪標(biāo)記的抗-GST抗體(50nl，Cisbio)在pH7.5的Tris-HCl緩沖液中混合，再將生物素標(biāo)記的SRC1肽(500nM，GL)和APC標(biāo)記的鏈霉(50nl，Cisbio)在緩沖液中混合，然后將上述兩種混合液按照1∶1混合后每孔加20ul到384孔測(cè)試板中，所述實(shí)施例化合物100％DMSO溶液，使得DMSO在最終體積為20mL的混合液里面的濃度為1％。并在室溫下孵育3小時(shí)。信號(hào)的檢測(cè)是用EnVisionMuti-Label讀數(shù)器(PerkinElmer公司)讀取，測(cè)量波長(zhǎng)為615nm處和665nm的相對(duì)熒光單位(RFU)。信號(hào)用RFU665nm/RFU615mm來計(jì)算?；衔锏幕钚员硎緸椋セ罨絒化合物信號(hào)-基底信號(hào)]/[最大信號(hào)-基底信號(hào)]×100％。化合物如果能夠促進(jìn)FXR和其配體結(jié)合域蛋白復(fù)合物的形成，將會(huì)誘導(dǎo)熒光信號(hào)隨著化合物濃度的增加而增強(qiáng)?；衔锏腅C50從劑量反應(yīng)曲線中得到。實(shí)施例2：FXRReporter試驗(yàn)化合物在肝細(xì)胞HepG2中GAL4熒光素酶報(bào)告基因生物活性測(cè)定將每孔60,000的肝細(xì)胞HepG2接種在96孔板中，并用FuGENE轉(zhuǎn)染試劑(Promega)將pBIND-FXR_LBD(50ng)和pGL5Luc(50ng)共轉(zhuǎn)染近HepG2細(xì)胞。在37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)箱中孵溫育24小時(shí)后，將化合物加入到細(xì)胞中，DMSO的終濃度為0.6％，在37℃，5％二氧化碳培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育18小時(shí)。使用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(Promega)，按照供應(yīng)商的試劑盒的規(guī)程進(jìn)行熒光素酶活性測(cè)定。相對(duì)光單位(RLU)由EnVision Muti-Label讀數(shù)器(PerkinElmer公司)進(jìn)行測(cè)定?；衔锏幕钚员硎緸椋セ罨?化合物的RLU-基底R(shí)LU)/(最大RLU-基底R(shí)LU)×100％?；衔锶绻軌蚣せ頕XR的活性，發(fā)光信號(hào)隨著化合物濃度的增加而增強(qiáng)。本發(fā)明所述化合物活性測(cè)試結(jié)果，F(xiàn)XR-FRET試驗(yàn)EC50值報(bào)告的范圍為：+表示0.5-1μM，++表示0.05-0.5μM，+++表示≤0.05μM。FXRReporter試驗(yàn)EC50值報(bào)告的范圍為：+表示0.5-1μM，++表示0.1-0.5μM，+++表示≤0.1μM?；衔锞幪?hào)FXRTR-FRET(EC50)FXR-Reporter(EC50)I-1A++/I-1B++/I-1C++/I-2A+++++I-2B++++++I-3B+/I-3E++/I-3H++/GW4064++++當(dāng)前第1頁1 2 3 當(dāng)前第1頁1 2 3