1.一種誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,包括如下步驟:
S1,快速分離和純化均質(zhì)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞;
S2,選擇多種可用于干細(xì)胞表觀遺傳調(diào)控的小RNA分子;
S3,組裝和轉(zhuǎn)染核酸多肽納米粒;
S4,制備誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的培養(yǎng)基;
S5,激活多種指導(dǎo)皮膚干細(xì)胞自我更新和轉(zhuǎn)分化的相關(guān)基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,所述的步驟S1包括如下步驟:
S11,用PBS液漂洗脂肪顆粒祛除殘余的血液和組織碎片;
S12,將碎小的脂肪組織以1∶1比例與0.25%I型膠原酶溶液混合,置于ClinicMACS Prot égé組織分離細(xì)胞純化機(jī)的工作管中,將工作溫度調(diào)到37℃,分離細(xì)胞純化機(jī)的旋轉(zhuǎn)速度設(shè)置為60轉(zhuǎn)/分,正反轉(zhuǎn)各轉(zhuǎn)15分鐘;
S13,分離完畢,加入10%FBS低糖DMEM終止消化,接著進(jìn)行1500轉(zhuǎn)/分的離心處理,處理時(shí)間為10分鐘,取沉淀的細(xì)胞顆粒,用PBS清洗;
S14,用含5-10%FBS,5ng/ml FGF-b,5ng/ml PDGF-BB,5ng/ml IGF-1,3ng/ml HGF,3ng/ml EGF,3ng/ml VEGF,5ng/ml IL-8,0.5ng/ml TGF-beta,1ng/ml LIF,100uM Vc,100U青霉素和100mg/L鏈霉素的低糖DMEM/F12重懸;
S15,以差速帖壁方法除去殘留的成纖維細(xì)胞,用地塞米松去除殘留的單核血細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,所述的步驟S2中多種可用于干細(xì)胞表觀遺傳調(diào)控的小RNA分子是指miR-24和miR-29的反義核酸Anti-24和Anti-29,并以干粉重量的0.6∶0.4比例要求進(jìn)行混合配制。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,所述的步驟S3組裝和轉(zhuǎn)染核酸多肽納米粒是指不同的小RNA分子與多肽轉(zhuǎn)染試劑按一定配比、程序和時(shí)間的配制過(guò)程,通過(guò)每天一次共二次的轉(zhuǎn)染和至少4天的培養(yǎng)以達(dá)到最佳的誘導(dǎo)效率。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,所述的步驟S4包括如下步驟:在無(wú)血清的高糖DMEM/F12培養(yǎng)基中添加20ng/ml bFGF,20ng/ml EGF,10ng/ml IGF-1,5ng/ml KGF,50ng/ml WNT3a,10ug/ml Insulin、0.5uM Retinoic Acid、20ng/ml Delta1,0.5mM VPA,和100uM Vc,以及IV型膠原纖維并形成預(yù)結(jié)合處理的培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,將所述的步驟S4制備的誘導(dǎo)培養(yǎng)基制造成不同的培養(yǎng)試劑盒,所述的不同的培養(yǎng)試劑盒包括皮膚干細(xì)胞增殖所需要的細(xì)胞增殖因子和細(xì)胞分化抑制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為皮膚干細(xì)胞的方法,其特征在于,所述的步驟S5中的相關(guān)基因包括Keratin 5/14/15/19,Notch-1,p63,α6β4-和α3β1-integrins,ABC transporters,c-kit/CD117,CD34,stat3,CD49f,sox9,EGFR,IGF-1/IGF-R1,WNT,Myc,TGF-β,Tcf/Lef,BMI-1,Lhx2,IKK-α,IRF6,和NFATc1。