抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物、其制法及包含其的抗癌藥物組合物技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物、用于制備該抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的方法以及包含該抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物作為活性成分的抗癌藥物組合物。更具體地，本發(fā)明涉及抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物、制備該抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的方法以及包含抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物作為活性成分的抗癌藥物組合物，其中，抗體和細胞毒性藥物經(jīng)由酶可剪切的肽連接子相連接，該酶可剪切的肽連接子能夠與抗體的賴氨酸殘基直接結(jié)合。

背景技術(shù)：
抗體是與抗原特異性結(jié)合的免疫性蛋白。目前，已經(jīng)開發(fā)了用作抗癌劑或用于癌癥治療的多種單克隆抗體。然而，盡管能夠抑制癌細胞的生長并且因此抑制癌癥擴散，但是幾乎所有抗體在癌癥治療中都具有非常有限的應用(Sharkey等人.,Adv.DrugDel.Rev.,2008,1407-1420)。作為克服該限制的抗體治療劑的替代物，已出現(xiàn)了抗體與藥物相連接的抗體-藥物偶聯(lián)物(antibody-drug-conjugate:ADC)(Chari,Acc.Chem.Res.,41(2008),98-107)。本文中使用的術(shù)語“ADC”是指包含與單克隆抗體(monoclonalantibody:mAb)偶聯(lián)的細胞毒性藥物或毒素的高效生物藥物，該單克隆抗體(mAb)能夠允許細胞毒性藥物或毒素被選擇性地遞送至靶向腫瘤細胞(內(nèi)化)。給藥至患者后，ADC通過抗體部分結(jié)合至靶向細胞并被內(nèi)化至細胞，其中，細胞毒性藥物或毒素部分與偶聯(lián)物相分離，并且發(fā)揮出其療效(Hamblett等人.,Clin.CancerRes.,10:7063-7070,October15,1999)。對于ADC的制備，通常使用合適形式的連接子來連接抗體和細胞毒性藥物。其中，代表性的連接子是腙、二硫化物和肽。從根本上來講，ADC的有效性至少需要所有三種組分(mAb、連接子和細胞毒性藥物)的特定功能水平(Chari,Acc.Chem.Res.,41(2008),98-107)。US專利6,214,345公開了一種ADC，其中，細胞毒性藥物(諸如阿霉素、紫杉酚等)經(jīng)由酶可剪切的肽連接子與抗體相連接，其中，該酶可剪切的肽連接子能夠被溶酶體蛋白酶組織蛋白酶剪切。此外，US專利7,964,566公開了一種ADC，其中，細胞毒性藥物(諸如MeVal-Val-Dil-Dap-去甲麻黃堿(MMAE)和MeVal-Val-Dil-Dap-Phe(MMAF))通過酶可剪切的肽與抗體相附接。根據(jù)使用酶可剪切的肽連接子制備ADC的常規(guī)方法，通過在還原劑(諸如二硫蘇糖醇(dithiolthreitol:DTT))的存在下，將抗體中的二硫鍵還原成巰基，并且使連接子與該抗體的巰基相結(jié)合來實現(xiàn)連接子和抗體之間的附接。但是，利用還原劑來斷開抗體的分子內(nèi)二硫鍵必定會引起抗體本身的結(jié)構(gòu)改變，這會不利地影響抗體對抗原的親和力。此外，該還原可能會導致抗體發(fā)生部分降解，使得最終的ADC難以純化。進一步地，當分子內(nèi)二硫鍵被還原成巰基時，抗體容易聚集在一起，從而降低ADC的最終產(chǎn)率?？赏ㄟ^用于巰基加成的試劑(諸如2-亞氨基噻吩鹽酸鹽(Traut's試劑))與抗體的賴氨酸殘基反應代替將抗體的分子內(nèi)二硫鍵還原成巰基來實現(xiàn)硫醇化。在該情況下，附接至抗體的硫醇化試劑的數(shù)目顯示出從零至小于10的較寬分布。因此，連接子不能覆蓋所有產(chǎn)生的巰基，導致在同一抗體中連接的巰基和未連接的巰基同時存在。由于存在未與連接子相連接的巰基且這種巰基是不需要的，并且由于存在剩余的硫醇化試劑，所以該常規(guī)方法制備的ADC在尤其是體內(nèi)藥代動力學特性的性能上較差。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
技術(shù)問題在不改變抗體結(jié)構(gòu)的情況下，通過廣泛深入地研究ADC的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)采用能夠與抗體的賴氨酸殘基直接結(jié)合的酶可剪切的肽連接子的ADC能夠克服在常規(guī)ADC中所遇到的問題，從而得到了本發(fā)明。因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物，其中，抗體與細胞毒性藥物經(jīng)由酶可剪切的肽連接子相偶聯(lián)，所述酶可剪切的肽連接子能夠與所述抗體的賴氨酸殘基直接結(jié)合。另一目的是提供一種以高產(chǎn)率制備抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的方法。又一目的是提供一種抗癌劑組合物，該抗癌劑組合物包含所述抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物作為活性成分。技術(shù)方案根據(jù)本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了由化學式I、化學式I-1、化學式I-2、化學式I-3或化學式I-4所表示的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽：[化學式I]其中，Ab代表抗體；L代表連接子；D代表藥物；以及n為1至5的整數(shù)；[化學式I-1]其中，Ab代表抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1為氫原子、羥基、C1-C4烷氧基或氧代基(＝O)；R2為氫原子或C1-C4烷基；R3為氫原子、羥基、C1-C4烷氧基、氨基、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；R4為芳基；以及n為1至5的整數(shù)；[化學式I-2]其中，Ab代表抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1、R2、R3和R4各自獨立地為氫原子或C1-C4烷基；Ar代表芳基；Z為氮原子或氧原子；當Z為氮原子時，R5為氫原子或C1-C4烷基；當Z為氧原子時，不存在R5；R6為氫原子、羥基、C1-C4烷氧基或氧代基(＝O)；以及n為1至5的整數(shù)；[化學式I-3]其中，Ab代表抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1、R2、R3和R4各自獨立地為氫原子或C1-C4烷基；R5為氫原子、羥基、C1-C4烷氧基、氨基、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；Ar代表芳基；Y為氮原子或氧原子；當Y為氮原子時，R6為氫原子或C1-C4烷基；當Y為氧原子時，不存在R6；以及n為1至5的整數(shù)；[化學式I-4]其中，Ab代表抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1、R2、R3、R4、R7和R8各自獨立地為氫原子或C1-C4烷基；R5為氫原子、羥基、C1-C4烷氧基、氨基、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；Ar代表芳基；Y為氮原子或氧原子；當Y為氮原子時，R6為氫原子或C1-C4烷基；當Y為氧原子時，不存在R6；以及n為1至5的整數(shù)。本文中使用的術(shù)語“C1-C8烷基”是指包含1至8個碳原子的直鏈的或支鏈的烴基，包括但不限于，例如甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基和正辛基。本文中使用的術(shù)語“C3-C6環(huán)烷基”是指包含3至6個碳原子的環(huán)烴基，包括但不限于，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。本文中使用的術(shù)語“C1-C4烷氧基”是指包含1至4個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基，包括但不限于，例如甲氧基、乙氧基和正丙氧基。本文中使用的術(shù)語“C1-C4烷基”是指包含1至4個碳原子的直鏈的或支鏈的烴基，包括但不限于，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基。本文中使用的術(shù)語“芳基”用于涵蓋所有的芳香基、雜芳香基及其部分還原的衍生物?！胺枷慊笔侵?至15元的單環(huán)或稠環(huán)，而“雜芳香基”是指含有至少一個雜原子，諸如氧原子、硫原子或氮原子的芳香基。芳基的代實例包括但并不限于：苯基、萘基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、喹啉基、咪唑啉基、噁唑基、噻唑基和四氫化萘基。C1-C8烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基以及芳基上的一個或多個氫原子可被C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、C3-C10環(huán)烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4硫代烷氧基、芳基、酰基、羥基、硫代基、鹵素、氨基、烷氧羰基、羧基、氨基甲?；⑶杌蛳趸热〈?。本文中使用的術(shù)語“抗體”用于涵蓋盡可能廣泛的抗體，包括：完整的單克隆抗體或多克隆抗體；由兩種或更多種不同的完整抗體構(gòu)成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)以及顯示出預期生物活性的抗體片段?？贵w為免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，能夠識別并結(jié)合至特異性抗原。就結(jié)構(gòu)而言，抗體為由四條多肽鏈(兩條重鏈和兩條輕鏈)組成的Y-型分子，每條鏈都具有可變區(qū)和穩(wěn)定區(qū)。在抗體的“Y”的每個頂端處的可變區(qū)與靶向抗原相結(jié)合并相互作用。可變區(qū)含有識別并結(jié)合在其特異性抗原上的抗原表位的互補決定區(qū)(CDR)，而在“Y”的尾部的穩(wěn)定區(qū)被免疫系統(tǒng)識別并與免疫系統(tǒng)發(fā)生相互作用。通常來講，靶向抗原具有被抗原上的CDR識別的多個抗原決定簇(被稱為抗原表位)。與不同抗原表位特異性結(jié)合的各個抗體具有不同的結(jié)構(gòu)。因此，一種抗原可被對應其抗原表位的一種或多種抗體識別。在本發(fā)明的一個示例性實施方式中，抗體可為能夠與癌細胞抗原免疫特異性結(jié)合的抗體。對癌細胞抗原免疫特異性的抗體是可商購的，或者是通過本領(lǐng)域已知的方法，諸如重組表達技術(shù)來制備。通過GenBank數(shù)據(jù)庫或文件可得到用于編碼對癌細胞抗原免疫特異性的抗體的核苷酸序列?？捎糜诎┌Y治療的抗體的實例包括：赫塞汀(Herceptin)(Genentech銷售的曲妥珠單抗)，其為用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌的人源抗-HER2抗體；Rituxan(Genentech銷售的利妥昔單抗)，其為用于治療非霍奇金淋巴瘤的嵌合的抗-CD20；Erbitux(ImCloneSystems銷售的西妥昔單抗)，其用于治療表皮生長因子陽性癌癥(例如頭部和頸部癌癥)的嵌合抗-EGFR抗體；以及Vitaxin(MedImmuneInc.)，其為用于治療惡性腫瘤的人源抗-整合素αvβ3抗體，但并不限于此。在本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物中，連接子-藥物部分與抗體部分的賴氨酸殘基直接結(jié)合。因此，本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物并不經(jīng)歷由于分子內(nèi)二硫鍵的還原以及硫醇化試劑的殘余而帶來的不需要的抗體蛋白修飾，而允許抗體部分的最小異常破碎或聚集。本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物具有90％或更高比例，優(yōu)選92％或更高比例，更優(yōu)選97％或更高，并且進一步更優(yōu)選98％或更高比例的正?？贵w結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物可由下式來表示：i)化學式I-1，其中，Ab為與癌細胞抗原免疫特異性結(jié)合的抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1為氫原子、羥基或C1-C4烷氧基；R2為氫原子或C1-C4烷基；R3為氫原子、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；以及R4為未取代的苯基，或者為被選自C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和鹵素原子中的至少一種取代基所取代的苯基；ii)化學式I-2，其中，Ab為與癌細胞抗原免疫特異性結(jié)合的抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1、R2和R4各自獨立地為氫原子或C1-C4烷基；R3為C1-C4烷基；Ar為未取代的苯基，或者為被選自由C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基；Z為氮原子；R5為氫原子或C1-C4烷基；以及R6為氫原子、羥基或C1-C4烷氧基；iii)化學式I-3，其中，Ab為與癌細胞抗原免疫特異性結(jié)合的抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1、R2和R4各自獨立地為氫原子或C1-C4烷基；R3為C1-C4烷基；R5為氫原子、氨基、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；Ar為未取代的苯基或萘基，或者為被選自由C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基或萘基；Y為氮原子或氧原子；以及當Y為氮原子時，R6為氫原子或C1-C4烷基；當Y為氧原子時，不存在R6，或iv)化學式I-4其中，Ab為與癌細胞抗原免疫特異性結(jié)合的抗體；X為C1-C8烷基或C3-C6環(huán)烷基；R1、R2、R4、R7和R8各自獨立地為氫原子或C1-C4烷基；R3為C1-C4烷基；R5為氫原子、氨基、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；Ar為未取代的苯基或萘基，或者為被選自由C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基或萘基；Y為氮原子或氧原子；以及當Y為氮原子時，R6為氫原子或C1-C4烷基；當Y為氧原子時，不存在R6。在本發(fā)明更優(yōu)選的示例性實施方式中，所述抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物由下式來表示：i)化學式I-1，其中，Ab為曲妥珠單抗；X為甲基、正丙基、正戊基、正辛基或環(huán)丙基；R1為氫原子、羥基或甲氧基；R2為氫原子或甲基；R3為氫原子、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；以及R4為未取代的苯基，或者為被選自由甲基、甲氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基；ii)化學式I-2，其中，Ab為曲妥珠單抗；X為甲基、正丙基、正戊基、正辛基或環(huán)丙基；R1、R2和R3各自為甲基；R4為氫原子或甲基；Ar為未取代的苯基，或者為被選自由甲基、甲氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基；Z為氮原子；R5為氫原子或甲基；以及R6為氫原子、羥基或甲氧基；iii)化學式I-3，其中，Ab為曲妥珠單抗；X為甲基、正丙基、正戊基、正辛基或環(huán)丙基；R1、R2和R3各自為甲基；R4為氫原子或甲基；R5為氫原子、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；Ar為未取代的苯基或萘基，或者為被選自由甲基、甲氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基或萘基；Y為氮原子或氧原子；以及當Y為氮原子時，R6為氫原子或甲基；當Y為氧原子時，不存在R6；iv)化學式I-4其中，Ab為曲妥珠單抗,X為甲基、正丙基、正戊基、正辛基或環(huán)丙基；R1、R2和R3各自為甲基；R4、R7和R8各自為氫原子或甲基；R5為氫原子、氧代基(＝O)或肟基(＝N-OH)；Ar為未取代的苯基或萘基，或者為被選自由甲基、甲氧基和鹵素原子所組成的組中的至少一種取代基所取代的苯基或萘基；Y為氮原子或氧原子；以及當Y為氮原子時，R6為氫原子或甲基；當Y為氧原子時，不存在R6。本文中使用的術(shù)語“藥學上可接受的鹽”用于涵蓋所有的非毒性有機鹽和無機鹽。實例包括但并不限于，例如，鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、苯磺酸鹽和檸檬酸鹽。本發(fā)明的代表性抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物如下所示：以及其中，n為1至5的整數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了一種用于制備由化學式I-1、化學式I-1、化學式I-2、化學式I-3或化學式I-4所表示的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的方法，所述方法包括以下步驟：(i)使下列化學式II-1的化合物分別與下列化學式III-1、化學式III-2和化學式III-3的海兔毒素10衍生物發(fā)生縮合反應以相應地產(chǎn)生下列化學式IV-1、化學式IV-2和化學式IV-3的化合物，或使下列化學式II-2的化合物與下列化學式III-4的海兔毒素10衍生物發(fā)生縮合反應以產(chǎn)生下列化學式IV-4的化合物；(ii)使下列化學式IV-1、化學式IV-2、化學式IV-3和化學式IV-4的化合物分別與下列化學式V的化合物發(fā)生加成反應以相應地產(chǎn)生下列化學式VI-1、化學式VI-2、化學式VI-3和化學式VI-4的化合物；(iii)使下列化學式VI-1、化學式IV-2、化學式IV-3和化學式IV-4的化合物分別與N-羥基琥珀酰亞胺發(fā)生縮合反應以相應地產(chǎn)生下列化學式VII-1、化學式VII-2、化學式VII-3和化學式VII-4的化合物；以及(iv)使下列化學式VII-1、化學式VII-2、化學式VII-3和化學式VII-4的化合物與抗體發(fā)生反應：[化學式II-1][化學式II-2]其中，R7和R8分別與化學式I-4中的限定相同。[化學式III-1]其中，R1、R2、R3和R4分別與化學式I-1中的限定相同。[化學式III-2]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar和Z分別與化學式I-2中的限定相同。[化學式III-3]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar和Y分別與化學式I-3中的限定相同。[化學式III-4]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar和Y分別與化學式I-4中的限定相同。[化學式IV-1]其中，R1、R2、R3和R4分別與化學式I-1中的限定相同。[化學式IV-2]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar和Z分別與化學式I-2中的限定相同。[化學式IV-3]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar和Y分別與化學式I-3中的限定相同。[化學式IV-4]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、Ar和Y分別與化學式I-4中的限定相同。[化學式V]其中，X與化學式I-1、化學式I-2、化學式I-3或化學式I-4中的限定相同。[化學式VI-1]其中，R1、R2、R3、R4和X分別與化學式I-1中的限定相同[化學式VI-2]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar、X和Z分別與化學式I-2中的限定相同。[化學式VI-3]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar、X和Y分別與化學式I-3中的限定相同。[化學式VI-4]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、Ar、X和Y分別與化學式I-4中的限定相同。[化學式VII-1]其中，R1、R2、R3、R4和X分別與化學式I-1中的限定相同。[化學式VII-2]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar、X和Z分別與化學式I-2中的限定相同。[化學式VII-3]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Ar、X和Y分別與化學式I-3中的限定相同。[化學式VII-4]其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、Ar、X和Y分別與化學式I-4中的限定相同。以下，將參照反應歷程I-1至反應歷程I-4來詳細描述制備化學式I-1至化學式I-4的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的方法。在反應歷程I-1至反應歷程I-4中示出的方法是示例性說明，并且可根據(jù)需要來改變單元操作順序、反應試劑和反應條件。[反應歷程I-1][反應歷程I-2][反應歷程I-3][反應歷程I-4]在步驟(i)中，化學式II-1的化合物分別與化學式III-1、化學式III-2和化學式III-3的海兔毒素10衍生物發(fā)生縮合反應以相應地產(chǎn)生化學式IV-1、化學式IV-2和化學式IV-3的化合物，或者化學式II-2的化合物與下列化學式III-4的海兔毒素10衍生物發(fā)生縮合反應以產(chǎn)生化學式IV-4的化合物。縮合反應可在縮合劑的存在下進行。在該反應中，可使用的縮合劑的實例包括羥基苯并三唑(HOBt)、羥基氮雜苯并三唑(HOAt)和羥基琥珀酰亞胺(HOSu)，但并不限于此。對于縮合反應，需要時，可將縮合劑與諸如吡啶或二異丙基乙胺的有機堿一起使用。對于反應溶劑，可選自二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)、二甲基亞砜(DMSO)或N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)。優(yōu)選地，將縮合反應的溫度設(shè)定在20℃至25℃的范圍內(nèi)。在步驟(ii)中，化學式IV-1、化學式IV-2、化學式IV-3或化學式IV-4的化合物與化學式V的化合物進行加成反應以產(chǎn)生化學式VI-1、化學式VI-2、化學式VI-3或化學式VI-4的化合物。對于該加成反應，可使用二甲基亞砜(DMSO)、乙腈(MeCN)或二甲基甲酰胺(DMF)作為溶劑，同時將反應溫度設(shè)定在20℃和25℃之間。在步驟(iii)中，化學式VI-1、化學式IV-2、化學式IV-3或化學式IV-4的化合物與N-羥基琥珀酰亞胺發(fā)生縮合反應以活化化學式VI-1、化學式IV-2、化學式IV-3或化學式IV-4的化合物中的羧酸。該縮合反應可在縮合劑的存在下進行?？s合劑的非限制說明性的實例包括二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)和(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺(EDC)。對于該縮合反應的溶劑，可使用二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)或二氯甲烷(DCM)，同時優(yōu)選地將反應溫度設(shè)定在20℃和25℃之間。在步驟(iv)中，化學式VII-1、化學式VII-2、化學式VII-3或化學式VII-4的化合物與抗體發(fā)生反應以得到最終產(chǎn)物化學式I-1、化學式I-2、化學式I-3或化學式VI-4的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物。對于該反應，可使用pH為6.0至8.0的磷酸鹽緩沖液作為溶劑。由于化學式VII-1、化學式VII-2、化學式VII-3和化學式VII-4所表示的連接子-細胞毒性藥物在磷酸鹽緩沖液中的溶解度依據(jù)細胞毒性藥物的種類而變化，所以如果需要，可使用諸如二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)和/或乙腈(MeCN)與磷酸鹽緩沖液的混合物。就該點而言，有機溶劑優(yōu)選地占該混合溶劑的50％或更低?；诳贵w，化學式VII-1、化學式VII-2、化學式VII-3和化學式VII-4的化合物優(yōu)選以3至25當量的量使用。在本文中，所得的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物具有約1至5的DAR(藥物-抗體比)，即連接至一個抗體分子的藥物的數(shù)目?；瘜W式II-1或化學式II-2的化合物為本領(lǐng)域已知的酶可剪切的肽連接子，并且可利用US專利6,214,345中所述的方法來容易地制備。此外，化學式III-1、化學式III-2、化學式III-3或化學式III-4的海兔毒素10衍生物為細胞毒性藥物，并且可利用本申請人在2012年9月20日提交的同時待審的韓國專利申請10-2012-0104710或美國專利5,599,902中所述的方法來合成，在此，上述兩個專利通過引用而整體并入本申請。例如，化學式III-1、化學式III-2、化學式III-3和化學式III-4的海兔毒素10衍生物可分別根據(jù)以下示出的反應歷程II-1至反應歷程II-4來合成。[反應歷程II-1][反應歷程II-2][反應歷程II-3][反應歷程II-4]本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物呈現(xiàn)出優(yōu)異的抗腫瘤活性(測試例4和測試例6)。因此，根據(jù)本發(fā)明的進一步方面，涉及一種尤其用于治療乳腺癌的抗癌組合物，該抗癌組合物包含化學式I-1至化學式I-4之一的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體。根據(jù)本發(fā)明的抗癌組合物可通過口服(例如，咽下或吸入)或腸道外給藥(例如，注射、沉積、植入、栓劑)。對于注射，可通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)來進行給藥。根據(jù)給藥途徑，本發(fā)明的抗癌組合物可被配制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、細粒劑、粉劑、舌下片劑、栓劑、糊劑、注射劑、乳劑、懸浮液、糖漿、噴霧等。當本發(fā)明的抗癌組合物被制成多種制劑時，可使用每種制劑常規(guī)的藥學可接受的載體。藥學上可接受的載體的實例包括：賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、防腐劑、抗氧化劑、等滲劑、緩沖劑、包衣劑、甜味劑、增溶劑、基質(zhì)、分散劑、濕潤劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、著色劑等。在根據(jù)本發(fā)明的抗癌組合物中，盡管本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽的含量根據(jù)制劑而發(fā)生變動，但是其范圍為約0.01wt％至95wt％。本發(fā)明的抗癌組合物的有效劑量取決于多種因素，這些因素包括哺乳動物(包括人)受試者的種類、體重、性別和疾病嚴重性。通常來講，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以0.01至50mg/kg體重的日常劑量經(jīng)由口服途徑給藥，并且以0.01至10mg/kg體重的日常劑量經(jīng)由腸道外途徑給藥。根據(jù)醫(yī)師或藥劑師的醫(yī)囑，該化合物每天可以以單劑量或多劑量給藥。有益效果如上所述，本發(fā)明的連接子-藥物部分與抗體部分的賴氨酸殘基直接結(jié)合的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物并不需要進行不必要的修飾，并且能夠在確保體內(nèi)穩(wěn)定性的同時，選擇性地有效遞送細胞毒性藥物。甚至單劑量的本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物也能夠有效地治療癌癥，尤其是乳腺癌。此外，利用本發(fā)明的方法能夠以高產(chǎn)率制備所述抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物。附圖說明圖1為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-8)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖2為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-10)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖3為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-11)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖4為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-16)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖5為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-18)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖6為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-19)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-21)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖7為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-20)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-22)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖8為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-23)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖9為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-24)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖10為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-25)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖11示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-26)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖12示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-32)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖13示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-33)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖14示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-34)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖15為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-35)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-36)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖16為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-37)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-38)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖17為示出了根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-39)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-40)針對BT-474細胞的體外抗增殖活性的劑量反應曲線；圖18為在根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)、抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-10)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-11)注射至癌癥誘導的動物模型之后，各自的腫瘤體積相對于時間繪制的曲線；圖19為示出了在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-10)和抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-11)注射至癌癥誘導的動物模型后第56天的相應腫瘤重量曲線；圖20為在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-16)注射至癌癥誘導的動物模型之后，腫瘤體積相對于時間繪制的曲線；圖21為示出了在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-16)注射至癌癥誘導的動物模型后第28天的腫瘤重量曲線；圖22為在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-23)注射至癌癥誘導的動物模型之后，腫瘤體積相對于時間繪制的曲線；圖23為示出了在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-23)注射至癌癥誘導的動物模型后第28天的腫瘤重量曲線；圖24為在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-25)注射至癌癥誘導的動物模型之后，腫瘤體積相對于時間繪制的曲線；圖25為示出了在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-25)注射至癌癥誘導的動物模型后第28天的腫瘤重量曲線；圖26為在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-26)注射至癌癥誘導的動物模型之后，腫瘤體積相對于時間繪制的曲線；圖27為示出了在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-26)注射至癌癥誘導的動物模型后第28天的腫瘤重量曲線；圖28為在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-34)注射至癌癥誘導的動物模型之后，腫瘤體積相對于時間繪制的曲線；圖29為示出了在將根據(jù)本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-34)注射至癌癥誘導的動物模型后第28天的腫瘤重量曲線。具體實施方式通過下列示出的用于說明但并不用于限制本發(fā)明的實施例，能夠更好地理解本發(fā)明。制備例1：化學式II-1和化學式II-2的化合物制備制備例1-1：化合物(II-1)的制備在氬氣氣流下，將6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(5.0g，8.7mmol，Dubowchik等人.,BioconjugateChem.,2002,13(4),pp855-869)溶解在60mL無水二甲基甲酰胺中，加入N,N-二異丙基乙胺(3.0mL，17.4mmol)，并冷卻至0℃。立即將二(4-硝基苯基)碳酸酯(7.94g，26.1mmol)加入至該混合物，隨后在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，在真空下對反應混合物進行濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得淺黃色固體形式的標題化合物(3.65g，57％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.83(d,J＝6.8Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(t,J＝7.2Hz,1H),1.19(m,2H),1.34-1.76(m,7H),1.96(m,1H),2.15(m,2H),2.99(m,2H),3.37(m,2H),4.19(t,J＝7.8Hz,1H),4.39(m,1H),5.24(s,2H),5.41(s,2H),5.97(brt,J＝5.6Hz,1H),7.00(s,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.57(d,J＝7.2Hz,2H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.80(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(d,J＝7.2Hz,1H),8.31(d,J＝7.2Hz,2H),10.05(brs,1H)制備例1-2：化合物(II-3)的制備在氬氣氣流下，將6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-N-((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(5.0g，8.7mmol，Dubowchik等人.,BioconjugateChem.,2002,13(4),pp855-869)溶解在60mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入N,N-二異丙基乙胺(3.0mL，17.4mmol)，并隨后冷卻至0℃。立即將二(4-硝基苯基)碳酸酯(7.94g，26.1mmol)加入至該混合物，隨后在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得淺黃色固體形式的4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己氨基)-3-甲基丁氨基)-5-脲基戊氨基)芐基(4-硝基苯基)碳酸酯(3.65g，57％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.83(d,J＝6.8Hz,3H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),1.09(t,J＝7.2Hz,1H),1.19(m,2H),1.34-1.76(m,7H),1.96(m,1H),2.15(m,2H),2.99(m,2H),3.37(m,2H),4.19(t,J＝7.8Hz,1H),4.39(m,1H),5.24(s,2H),5.41(s,2H),5.97(brt,J＝5.6Hz,1H),7.00(s,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.57(d,J＝7.2Hz,2H),7.65(d,J＝8.4Hz,2H),7.80(d,J＝8.4Hz,1H),8.09(d,J＝7.2Hz,1H),8.31(d,J＝7.2Hz,2H),10.05(brs,1H)在氬氣氣流下，將4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己氨基)-3-甲基丁氨基)-5-脲基戊氨基)芐基(4-硝基苯基)碳酸酯(3.65g，4.95mmol)和叔丁基(2-氨乙基)(甲基)氨基甲酸酯(0.86g，4.95mmol)一起溶解在90mL無水二甲基甲酰胺中，并在20℃至25℃下攪拌2小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行充分濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得化合物(II-3)的氨基被保護的衍生物(3.8g，99％)。LC-MSm/z:773.5[M+H]+將2mL三氟乙酸逐滴加入至化合物(II-3)的氨基被保護的衍生物(146mg，0.186mmol)在5mL二氯甲烷的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌2小時。在反應完全后，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且隨后通過加入5mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸以得到標題化合物的濃縮的TFA鹽。制備例1-3：化合物(II-4)的制備在氬氣氣流下，將4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己氨基)-3-甲基丁氨基)-5-脲基戊氨基)芐基(4-硝基苯基)碳酸酯(6.8g，9.22mmol)和叔丁基甲基(2-(甲氨基)乙基)氨基甲酸酯(1.82g，9.68mmol)一起溶解在150mL無水二甲基甲酰胺中，并且在20℃至25℃下攪拌19小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行充分濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得化合物(II-4)的氨基被保護的衍生物(5.14g，71％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.78-0.8(d,3H),0.8-0.83(d,3H),1.09-1.99(m,10H),1.33(s,9H),1.92(m,1H),2.07-2.19(m,2H),2.66-2.73(d,3H),2.8-2.81(m,3H),2.9-3.0(m,2H),3.37(m,2H),4.15(t,1H),4.34(m,1H),4.94(s,2H),5.38(s,2H),5.94(brt,1H),6.96(s,2H),7.23(d,2H),7.55(d,2H),7.77(d,1H),8.04(d,1H),9.95(brs,1H)LC-MSm/z:787.5[M+H]+除了使用化合物(II-4)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例1-2中相同的過程來得到標題化合物的濃縮的TFA鹽。制備例1-4：化合物(II-5)的制備在氬氣氣流下，將4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己氨基)-3-甲基丁氨基)-5-脲基戊氨基)芐基(4-硝基苯基)碳酸酯(6.8g，9.22mmol)和叔丁基(2-氨乙基)氨基甲酸酯(1.63g，10.14mmol)一起溶解在80mL無水二甲基甲酰胺中，并在20℃至25℃下攪拌15小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行充分濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得化合物(II-5)的氨基被保護的衍生物(4.13g，59％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.78-0.8(d,3H),0.8-0.83(d,3H),1.09-1.99(m,10H),1.33(s,9H),1.92(m,1H),2.07-2.19(m,2H),2.9-3.0(m,2H),3.37(m,2H),4.15(t,1H),4.34(m,1H),4.94(s,2H),5.38(s,2H),5.94(brt,1H),6.76(m,1H),6.96(s,2H),7.15(m,1H),7.23(d,2H),7.55(d,2H),7.77(d,1H),8.04(d,1H),9.95(brs,1H)LC-MSm/z:759.5[M+H]+除了使用化合物(II-5)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例1-2中相同的過程來得到標題化合物的濃縮的TFA鹽。制備例1-5：化合物(II-6)的制備在氬氣氣流下，將4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己氨基)-3-甲基丁氨基)-5-脲基戊氨基)芐基(4-硝基苯基)碳酸酯(0.74g，1mmol)和叔丁基(2-(甲氨基)乙基)氨基甲酸酯(0.25g，1.4mmol)一起溶解在30mL無水二甲基甲酰胺中，并且在20℃至25℃下攪拌15小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行充分濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得化合物(II-6)的氨基被保護的衍生物(0.36g，48％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.79(d,3H),0.82(d,3H),1.13-1.7(m,10H),1.32-1.39(d,9H),1.89-1.93(m,1H),2.07-2.17(m,2H),2.79-2.82(d,2H),2.89-3.02(m,5H),3.14(d,1H),3.2(m,1H),4.15(t,1H),4.34(m,1H),4.9-4.94(d,2H),5.37(s,2H),5.941(brt,1H),6.81-6.85(m,1H),7.24(d,2H),7.54(d,2H),7.76(d,1H),8.04(d,1H),9.95(brs,1H)LC-MSm/z:773.5[M+H]+除了使用化合物(II-6)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例1-2中相同的過程來得到標題化合物的濃縮的TFA鹽。制備例2：化學式III-1、化學式III-2、化學式III-3和化學式III-4的化合物的制備制備例2-1：化合物(III-5)的制備在氬氣氣流下，將(2R,3R)-3-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(0.63g，2.2mmol)溶解在10mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入2-(2,6-二氟代苯基)乙胺(0.38g，2.4mmol)。將溫度冷卻至0℃之后，將苯并三氮唑-1-基-氧基-三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸鹽(0.97g，2.2mmol)和二異丙基乙胺(1.0mL，6.6mmol)依次加入至反應混合物中。在室溫下持續(xù)攪拌15小時。在反應完全后，在高真空下對所得到的反應混合物進行濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到(R)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.60g，64％)。將1mL三氟乙酸加入至該化合物(0.6g，1.4mmol)在10mL二氯甲烷的溶液中，隨后在室溫下攪拌3小時。在反應完全后，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且通過加入10mL二氯甲烷兩次來完全移除剩余的三氟乙酸以得到(2R,3R)-N-(2,6-二氟代苯乙基)-3-甲氧基-2-甲基-3-((R)-吡咯烷-2-基)丙酰胺的三氟乙酸鹽。將該濃縮物(TFA鹽)和(5S,8S,11S,12R)-11-((S)-仲丁基)-5,8-二異丙基-12-甲氧基-4,10-二甲基-3,6,9-三氧代-1-甲基-2-氧雜-4,7,10-三氮雜十四烷-14-酸(0.77g，1.4mmol)一起溶解在10mL二甲基甲酰胺，并且在0℃下依次加入氰基磷酸二乙酯(DEPC)(0.23mL，1.54mmol)和三乙胺(1.17mL，8.4mmol)之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，移除溶劑，并且將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并且用30mL去離子水進行洗滌。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以獲得化合物(III-5)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.96g，80％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.75-1.06(m,17H),1.18-1.38(m,5H),1.71-2.15(m,7H),2.21-2.52(m,4H),2.87-2.91(m,4H),2.99(s,3H),3.10(s,3H),3.38(s,3H),3.43-3.51(m,3H),3.82(m,1H),4.09-4.15(m,4H),4.69(m,1H),5.12-5.23(m,2H),6.50-6.60(m,2H),6.82-6.87(m,2H),7.13-7.17(m,1H),7.30-7.34(m,5H)將化合物(III-5)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.96g，1.1mmol)溶解在18mL叔丁醇和2mL水的混合物中，并且在氫氣氣氛中，在10％的鈀碳(0.1g)存在下攪拌3小時。在反應完全后，將反應混合物通過硅藻土進行過濾，并用甲醇洗滌數(shù)次。隨后，在真空下移除溶劑以得到標題化合物(0.79g，99％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.78-0.98(m,16H),1.06(m,1H),1.16-1.27(m,4H),1.38(m,1H),1.65-1.76(m,6H),1.89-2.02(m,4H),2.31-2.38(m,5H),2.71-2.75(m,1H),2.88-2.89(m,2H),3.00(s,3H),3.29(s,3H),3.41-3.48(m,3H),3.79-3.82(m,1H),4.08-4.15(m,2H),4.72-4.86(m,2H),6.56(m,1H),6.79-6.85(m,2H),7.10-7.15(m,1H),7.16-7.22(m,1H),7.55(d,1H)制備例2-2：化合物(III-6)的制備除了使用2-氨基苯乙酮來替代2-(2,6-二氟代苯基)乙胺之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到化合物(III-6)的N-末端氨基被保護的衍生物：2.36g(81％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.71-1.04(m,17H),1.31-1.32(m,4H),1.77-1.81(m,2H),1.92-2.04(m,4H),2.17-2.61(m,4H),2.89-2.95(m,3H),2.99(s,3H),3.30(s,3H),3.46(m,3H),3.43-3.52(m,1H),3.99-4.01(m,1H),4.09-4.15(m,1H),4.24(m,1H),4.69-4.76(m,6H),5.09-5.23(m,2H),6.46-6.49(m,1H),7.12(m,1H),7.26-7.34(m,5H),7.50(t,J＝7.6Hz,2H),7.62(t,J＝7.2Hz,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,2H)除了使用化合物(III-6)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到標題化合物：1.89g(96％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.81-0.85(m,3H),0.92-1.14(m,13H),1.25-1.43(m,5H),1.46-1.89(m,6H),1.92-2.22(m,5H),2.33(s,3H),2.45-2.54(m,2H),2.74(d,J＝4.8Hz,1H),3.02(s,3H),3.32(s,3H),3.43(d,J＝9.2Hz,3H),3.52-3.84(m,2H),3.92-4.06(m,2H),4.75-4.80(m,2H),4.94-5.23(m,1H),6.76-6.94(m,1H),7.34-7.43(m,4H),7.60(m,1H)制備例2-3：化合物(III-7)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和2-氨基-1-(2-氟代-4-甲氧基苯基)乙酮來分別替代(2R,3R)-3-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和2-(2,6-二氟代苯基)乙胺之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到標題化合物：0.18g(89％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.80-0.84(m,3H),0.88-1.03(m,17H),1.32(d,J＝7.2Hz,3H),1.35-1.39(m,2H),1.98-2.10(m,4H),2.35(s,3H),2.36-2.51(m,3H),2.74(m,1H),3.02(m,3H),3.29(s,3H),3.34(s,3H),3.45(s,3H),3.46-3.56(m,1H),3.87(s,3H),3.99(dd,J＝7.6Hz,2.8Hz,1H),4.10-4.15(m,1H),4.25-4.28(m,1H),4.58-4.64(m,2H),4.73-4.78(m,1H),6.67(m,1H),6.78(qd,J＝10.4Hz,2.8Hz,1H),7.95(m,1H)制備例2-4：化合物(III-8)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和(S)-2-氨基-1-(4-氟代苯基)丙-1-酮來分別替代(2R,3R)-3-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和2-(2,6-二氟代苯基)乙胺之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到標題化合物：0.45g(100％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.71-1.03(m,20H),1.22(d,3H),1.33-1.37(m,4H),1.40-1.44(m,3H),1.60-1.81(m,4H),1.98(m,2H),2.26(m,2H),2.90(s,3H),3.21(s,3H),3.32(s,3H),3.43(s,3H),4.06-4.15(m,2H),4.22-4.27(m,2H),4.64-4.69(m,2H),5.09-5.13(m,2H),5.23-5.30(m,2H),5.50(m,1H),7.18(t,2H),8.01-8.05(m,2H)制備例2-5：化合物(III-9)的制備除了使用(R,E)-2-氨基-1-(3-甲氧基苯基)丙-1-酮肟來替代2-(2,6-二氟代苯基)乙胺之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到標題化合物：0.17g(94％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-0.98(m,20H),1.01(m,4H),1.19-1.27(m,4H),1.79-1.83(m,2H),2.21-2.43(m,4H),2.77(m,2H),3.00(m,2H),3.29(s,6H),3.42(s,3H),3.99-4.14(m,3H),4.15-4.37(m,3H),4.70(m,1H),5.21-5.23(m,2H),5.36(m,1H),7.03(m,1H),7.15(m,2H),7.49(m,1H)制備例2-6：化合物(III-10)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸來替代(2R,3R)-3-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到得到化合物(III-10)的N-末端氨基和羥基被保護的粗衍生物：1.0g(100％)。將1.0M四丁基氟化銨(3.1mL，3.1mmol)加入至該化合物(1.0g，1.02mmol)在10mL二甲基甲酰胺中的溶液中，隨后攪拌5小時。在反應完全后，移除溶劑，并且將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水進行洗滌。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到化合物(III-10)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.75g，84％)。ES-MSm/z:874[M+H]+除了使用化合物(III-10)的N-末端氨基被保護的衍生物之外，重復制備例2-1中相同的過程來得到標題化合物：0.64g(100％)。ES-MSm/z:740[M+H]+制備例2-7：化合物(III-11)的制備在氬氣氣流下，將(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(0.70g,2.2mmol)溶解在10mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl(0.47g，2.4mmol)。將溫度冷卻至0℃之后，將苯并三氮唑-1-基-氧基-三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸鹽(0.97g，2.2mmol)和二異丙基乙胺(1.0mL，6.6mmol)依次加入至反應混合物中。在室溫下持續(xù)攪拌15小時。在反應完全后，在高真空下對所得到的反應混合物進行濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到(2S,4R)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-(((2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(0.61g，56％)。LC-MSm/z:494.2[M+]+,516.3[M+Na]+將7mL三氟乙酸加入至該化合物(0.61g，1.23mmol)在10mL二氯甲烷的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入5mL甲苯兩次來完全移除剩余的三氟乙酸之后，再進行進一步的反應。將該濃縮物(TFA鹽)和(3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸(0.53g，1.23mmol)一起溶解在5mL二甲基甲酰胺，并且在0℃下依次加入氰基磷酸二乙酯(DEPC)(0.20mL，1.35mmol)和三乙胺(1.56mL，11.09mmol)之后，在室溫下攪拌16小時。當反應完全時，移除溶劑，并且將剩余物溶解在20mL乙酸乙酯中，并用1M亞硫酸氫鉀、水、飽和碳酸氫鈉溶液以及鹽水進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并在真空下濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到化合物(III-11)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.25g，25％)。LC-MSm/z:779.6[M+H]+將化合物(III-11)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.25g，0.31mmol)溶解在10mL甲醇的混合物中，并且在氫氣氣氛中，在10％的鈀碳(0.1g)存在下攪拌16小時。在反應完全后，將反應混合物通過硅藻土進行過濾，并用甲醇洗滌數(shù)次。隨后，在真空下移除溶劑以得到白色固體形式的標題化合物(97mg，41％)。LC-MSm/z:753[M+]+,775[M+Na]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.72(t,3H),0.77-1.02(m,17H),1.01(d,3H),1.15(d,3H),1.32(m,1H),1.78(brd2H),1.85-2.12(m,4H),2.18(S,6H),2.32-2.50(m,4H),3.30(s,3H),3.38(s,6H),3.48(m,1H),4.00-4.15(m,4H),4.32(m,2H),4.85(m,2H),6.60(s,1H),6.88(s,1H),6.99-7.06(m,2H),7.22-7.32(m,2H)制備例2-8：化合物(III-12)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(92mg，0.32mmol)和(2R)-1-疊氮基-1-苯基丙-2-胺HCl(68mg，0.32mmol)來分別替代(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl之外，重復制備例2-7中相同的過程來得到標題化合物(44mg，50％)。MALDI-TOFMSm/z:731.6[M+H]+，753.5[M+Na]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.81(t,3H),0.88-1.07(m,17H),1.18(d,3H),1.21(d,3H),1.47(m,1H),1.74(brd,2H),1.87-2.17(m,3H),2.24(S,6H),2.25-2.47(m,4H),3.04(s,3H),3.28-3.34(m,1H),3.31(s,3H),3.38(s,3H),3.45(m,1H),3.79(d,1H),3.82(m,1H),4.05-4.12(m,4H),4.24(m,2H),4.75(m,2H),6.73(s,1H),6.95(d,1H),7.24-7.35(m,5H)制備例2-9：化合物(III-13)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(0.80g，2.8mmol)替代(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸并且使用(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl(0.64g，2.8mmol)之外，重復制備例2-7中相同的過程來得到標題化合物(0.5g，79％)。LC-MSm/z:749.47[M+H]+,771.44[M+Na]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.82(t,3H),0.91-1.1(m,17H),1.16(d,3H),1.20(d,3H),1.35(m,1H),1.78(brd,2H),1.87-2.10(m,4H),2.24(S,6H),2.28-2.48(m,4H),3.03(s,3H),3.28-3.34(m,1H),3.31(s,3H),3.38(s,3H),3.48(m,1H),3.82(d,1H),4.03-4.10(m,4H),4.22(m,2H),4.77(m,2H),6.56(d,1H),6.86(s,1H),6.99-7.07(m,2H),7.23-7.35(m,2H)制備例2-10：化合物(III-14)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羥基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(340mg，1.12mmol)替代(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸并且使用(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl(258mg，1.12mmol)之外，重復制備例2-7中相同的過程來得到標題化合物(350mg，71％)。LC-MSm/z:765.46[M+]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.80(t,3H),0.90-1.09(m,17H),1.11(d,3H),1.25(d,3H),1.32(m,1H),1.78(brd,2H),2.04-2.09(m,3H),2.23(S,6H),2.35-2.50(m,4H),3.03(s,3H),3.32(s,3H),3.38(m,1H),3.47(s,3H),3.54-3.56(m,2H),3.90(m,1H),4.0-4.32(m,6H),4.75(m,2H),6.53(s,1H),6.76(d,1H),6.99-7.04(m,2H),7.32-7.35(m,2H)制備例2-11：化合物(III-15)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(0.17g，0.58mmol)和(2R)-1-苯二酰亞氨基-1-(4-甲氧基苯基)丙-2-胺HCl(0.2g，0.58mmol)來分別替代(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl之外，重復制備例2-7中相同的過程來得到化合物(III-15)的氨基被保護的衍生物(0.34g，94％)。LC-MSm/z:891.62[M]+將1mL水合肼加入至化合物(III-15)的氨基被保護的衍生物(0.34g，0.38mmol)在10mL乙醇的溶液中，隨后在室溫下攪拌16小時。在反應完全后，在真空下移除溶劑。通過硅膠柱色譜法對剩余物進行純化以得到白色固體形式的標題化合物(0.11g，38％)。LC-MSm/z:761.56[M+]+,783.60[M+Na]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.80(m,3H),0.88-1.07(m,18H),1.19(d,3H),1.15(m,1H),1.22(m,1H),1.25(d,3H),1.70-1.90(m,4H),2.07(S,6H),2.26(s,3H),2.28-2.48(m,4H),3.06(s,3H),3.32(s,3H),3.38(m,1H),3.43(s,3H),3.50(m,1H),3.76(m,1H),3.80(s,3H),3.78(d,1H),3.90-4.25(m,4H),4.54(m,2H),6.89(d,2H),7.35(d,2H)制備例2-12：化合物(III-16)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羥基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(0.36g，1.17mmol)和(2R)-1-苯二酰亞氨基-1-(4-甲氧基苯基)丙-2-胺HCl(0.41g,1.17mmol)來分別替代(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl之外，重復制備例2-7中相同的過程來得到化合物(III-16)的氨基被保護的衍生物(0.59g，74％)。LC-MSm/z:907.54[M]+除了使用化合物(III-16)的氨基被保護的衍生物(0.59g，0.65mmol)之外，重復制備例2-11中相同的過程來得到白色固體形式的標題化合物(0.19g，38％)。LC-MSm/z:777.42[M+]+,799.39[M+Na]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-0.859(m,3H),0.86-1.06(m,17H),1.13(d,3H),1.24-1.40(m,6H),1.62-1.84(m,2H),1.97-2.41(m,3H),2.20-2.32(m,7H),2.36-2.54(m,4H),3.06(s,3H),3.31(s,3H),3.46(t,1H)3.50(s,3H),3.56(brs,1H),3.62(m,1H),3.67(m,1H),3.72-3.77(m,1H),3.80(s,3H),3.97-4.28(m,4H),4.30(m,1H),4.68(m,1H),4.72-4.83(m,1H),6.89(d,2H),7.33(d,2H)制備例2-13：化合物(III-17)的制備除了使用(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-羥基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(1.43g，4.7mmol)和2-苯二酰亞氨基-2-(對甲苯基)乙胺HCl(1.65g，5.2mmol)來分別替代(2R,3R)-3-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲氧基吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸和(2R)-1-疊氮基-1-(4-氟代苯基)丙-2-胺HCl之外，重復制備例2-7中相同的過程來得到化合物(III-17)的氨基被保護的衍生物(2.35g，78％)。LC-MSm/z:878[M+1]+除了使用化合物(III-17)的氨基被保護的衍生物(2.08g，2.37mmol)之外，重復制備例2-11中相同的過程來得到白色固體形式的標題化合物(1.7g，94％)。LC-MSm/z:748[M+1]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-0.84(m,3H),0.91-1.03(m,19H),1.24-1.29(m,4H),1.29-1.40(m,1H),1.90-2.14(m,4H),2.25(s,6H),2.32(s,3H),2.38-2.48(m,3H),3.03(s,3H),3.14(brd,1H),3.24-3.30(m,1H),3.32(s,3H),3.38-3.43(m,1H),3.48(s,3H),3.54-3.62(m,3H),4.04-4.18(m,3H),4.24-4.34(m,2H),4.77-4.90(m,2H),6.37(m,1H),7.14-7.28(m,4H)制備例2-14：化合物(III-18)的制備在氬氣氣流下，將(2R,3R)-3-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)吡咯烷-2-基)-3-甲氧基-2-甲基丙酸(0.92g，2.2mmol)溶解在10mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入2-(2,6-二氟代苯基)乙胺(0.38g，2.4mmol)。將溫度冷卻至0℃之后，將苯并三氮唑-1-基-氧基-三(二甲氨基)磷鎓六氟磷酸鹽(0.97g，2.2mmol)和二異丙基乙胺(1.0mL，6.6mmol)依次加入至反應混合物中。在室溫下持續(xù)攪拌15小時。在反應完全后，在高真空下對所得到的反應混合物進行濃縮，并通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到(2S,4S)-叔丁基-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.87g，70.9％)。將7mL三氟乙酸加入至該化合物(0.87g，1.56mmol)在10mL二氯甲烷的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入5mL甲苯兩次來完全移除剩余的三氟乙酸之后，再進行進一步的反應。將該濃縮物(TFA鹽)和(3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸(0.67g，1.56mmol)一起溶解在5mL二甲基甲酰胺，隨后在室溫下依次加入氰基磷酸二乙酯(DEPC)(0.26mL，1.56mmol)和三乙胺(1.09mL，7.82mmol)之后，在室溫下攪拌16小時。在反應完全后，移除溶劑，并且將剩余物溶解在20mL乙酸乙酯中，并用1M亞硫酸氫鉀、水、飽和碳酸氫鈉溶液以及鹽水進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯:己烷＝2:1→乙酸乙酯)對濃縮物進行純化以得到化合物(III-18)的羥基被保護的衍生物(1.14g，84％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.04(s,6H),0.81-1.06(m,19H),1.19(m,3H),1.46(m,2H),1.65(m,2H),1.97-2.17(m,3H),2.44-2.46(m,3H),2.71-2.80(m,3H),2.81-2.89(m,1H),2.91-2.94(m,2H),2.71-2.80(m,3H),3.04(s,3H),3.26-3.33(m,2H),3.37(s,3H),3.74(m,2H),4.28-4.31(m,2H),4.75-4.82(m,2H),6.18(m,1H),6.84-6.89(m,2H),7.15-7.19(m,1H),7.58(d,1H)攪拌化合物(III-18)的羥基被保護的衍生物(1.14g，1.31mmol)和1.0M四丁基氟化銨(4.9mL，4.09mmol)在95m四氫呋喃中的溶液5小時，隨后用飽和水性氯化銨溶液來終止反應。用450mL乙酸乙酯和300mL水進行萃取之后，進行真空濃縮。通過硅膠柱色譜法(二氯甲烷:甲醇＝9:1)來對濃縮物進行純化以得到標題化合物(0.45g，45％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-1.05(m,19H),1.26(m,3H),1.45(m,2H),1.66(m,2H),1.97-2.17(m,3H),2.44-2.46(m,3H),2.71-2.80(m,3H),2.81-2.89(m,1H),2.91-2.94(m,2H),2.71-2.80(m,3H),3.04(s,3H),3.26-3.33(m,2H),3.37(s,3H),3.74(m,2H),4.28-4.31(m,2H),4.75-4.82(m,2H),6.18(m,1H),6.84-6.89(m,2H),7.15-7.19(m,1H),7.58(d,1H)LC-MSm/z:754[M+]+制備例2-15：化合物(III-19)的制備除了使用通過(S)-2-氨基-1-(4-氟代苯基)丙-1-酮替代2-(2,6-二氟代苯基)乙胺而得到的(2S,4S)-叔丁基-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(4-氟代苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.44g，0.78mmol)之外，重復制備例2-14中相同的過程來得到標題化合物：0.34g(58％)。LC-MSm/z:764[M+]+制備例2-16：化合物(III-20)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-疊氮基-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.33g，0.71mmol)替代(2S,4S)-叔丁基-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-14中相同的過程來得到化合物(III-20)的氨基被保護的衍生物(0.42g，76％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-1.07(m,15H),1.20(d,2H),1.99-2.11(m,4H),2.18-2.28(m,5H),2.33-2.45(m,4H),2.90-3.27(m,6H),3.32-3.42(m,6H),3.47-3.54(m,2H),3.75-3.78(m,1H),3.85-3.98(m,2H),4.19-4.21(m,1H),4.39-4.44(m,1H),4.46-4.80(m,1H),4.87-4.90(m,1H),6.17(m,1H),6.84-6.95(m,2H),7.14-7.26(m,1H)將化合物(III-20)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.24g，0.31mmol)溶解在10mL甲醇中，并且在氫氣氣氛中，在10％的鈀碳(15mg)存在下攪拌14小時。在反應完全后，通過硅藻土對反應混合物進行過濾，并用甲醇洗滌數(shù)次。隨后，在真空下移除溶劑以得到標題化合物(0.23g，99％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-1.03(m,14H),1.21-1.22(m,5H),2.06-2.45(m,6H),2.89-3.02(m,4H),3.30-3.44(m,5H),3.47-3.52(m,2H),3.67-3.69(m,1H),3.71-4.39(m,3H),4.78-4.80(m,1H),6.17(m,1H),6.84-6.95(m,2H),7.14-7.26(m,1H)LC-MSm/z:753[M+]+,775[M+Na]+制備例2-17：化合物(III-21)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-(芐基(甲基)氨基)-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.13g，0.24mmol)來替代(2S,4S)-叔丁基-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-14中相同的過程以得到化合物(III-21)的氨基被保護的衍生物(0.13g，64％)。LC-MSm/z:857.5[M+]+將化合物(III-21)的N-末端氨基被保護的衍生物(0.13g，0.15mmol)溶解在10mL甲醇中，并且在氫氣氣壓(55psi)中，在10％的氫氧化鈀(66mg)存在下攪拌12小時。在反應完全后，通過硅藻土對反應混合物進行過濾，并用甲醇洗滌數(shù)次。隨后，在真空下移除溶劑以得到標題化合物(115mg，100％)。LC-MSm/z:767.6[M+]+,789.4[M+Na]+制備例2-18：化合物(III-22)的制備將10mL三氟乙酸滴加至(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯(1.28g，2.73mmol)在30mL二氯甲烷的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入5mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸之后，再進行進一步的反應。將10mL三氟乙酸逐滴加入至(3R,4S,5S)-叔丁基-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁氨基)-3-甲氧基-5-庚酸甲酯(1.33g，2.73mmol)在30mL二氯甲烷的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入5mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸之后，再進行進一步的反應。將上述兩種濃縮物(TFA鹽)溶解在60mL二氯甲烷中，并且隨后在0℃下依次加入氰基磷酸二乙酯(DEPC)(0.52mL，3.28mmol)和三乙胺(3.8mL，27.32mmol)之后，在室溫下攪拌16小時。在反應完全后，移除溶劑，并且將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并用1M亞硫酸氫鉀、水、飽和碳酸氫鈉溶液以及鹽水進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯:己烷＝2:1→乙酸乙酯)對濃縮物進行純化以得到標題化合物(1.3g，60％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.780.88(m,3H),0.91-1.07(m,17H),1.31-1.37(m,5H),1.99-2.11(m,3H),2.28(s,6H),2.43-2.62(m,6H),3.06(s,3H),3.11-3.16(m,2H),3.34(s,3H),3.56(s,3H),3.57-3.65(m,2H),3.97(s,3H),4.08-4.09(brs,1H),4.18-4.2(d,1H),4.3(brs,1H),4.39-4.42(d,2H),4.7-4.72(t,2H),4.76-4.8(m,2H),4.85-4.91(brs,1H),7.03-7.1(m,1H),7.69-7.78(m,2H)LC-MSm/z:780.8[M+H]+,802.8[M+Na]+制備例2-19：化合物(III-23)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(2,4-二甲基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-18中相同的過程來得到標題化合物(3.2g，89％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-0.85(m,3H),0.91-1.13(m,14H),1.15-1.19(m,3H),1.35-1.38(m,5H),2.00-2.10(m,3H),2.18-2.24(m,3H),2.37(s,3H),2.39-2.48(m,1H),2.53(s,3H),2.55-2.62(m,1H),2.87(s,6H),2.89(s,1H),3.02(s,3H),3.07-3.17(m,2H),3.32(s,3H),3.52(s,3H),3.51-3.61(m,2H),4.11-4.12(brs,1H),4.16-4.18(d,1H),4.30(m,1H),4.37-4.4(d,1H),4.64-4.66(t,2H),4.69-4.74(m,2H),6.90(t,1H),7.09-7.11(m,2H),7.66-7.68(d,2H)LC-MSm/z:760.6[M+H]+,782.6[M+Na]+制備例2-20：化合物(III-24)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-羥基-2-((1R,2R)-1-甲氧基-3-((2-(6-甲氧基萘-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-18中相同的過程來得到標題化合物(0.17g，67.5％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.75-0.82(m,3H),0.85-1.07(m,17H),1.26-1.40(m,5H),1.98-2.10(m,6H),2.39-2.48(m,3H),2.58-2.64(m,1H),3.01(s,3H),3.34(s,3H),3.52-3.73(m,2H),3.57(s,3H),4.12(brs,1H),4.19-4.21(d,1H),4.25-4.31(brs,1H),4.41-4.44(d,1H),4.75-4.83(m,2H),4.87-4.94(m,3H),6.91-6.94(t,2H),7.17(s,1H),7.22-7.24(d,1H),7.78-7.92(m,2H),7.96-7.98(d,1H),8.42(s,1H)LC-MSm/z:812.7[M+H]+,834.7[M+Na]+制備例2-21：化合物(III-25)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-疊氮基-2((1R,2R)-3-((2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.39g，0.77mmol)來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-18中相同的過程來得到化合物(III-25)的氨基被保護的衍生物(0.56g，89％)。LC-MSm/z:817.5[M+H]+,839.5[M+Na]+除了使用化合物(III-25)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例2-16中相同的過程來得到標題化合物(0.38g，69％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-0.82(t,3H),0.88-1.02(m,17H),1.23-1.28(m,1H),1.31-1.34(m,3H),1.96-2.12(m,2H),2.25-2.28(m,6H),2.36-2.52(m,2H),2.56-2.65(m,1H),2.98-3.03(m,3H),3.25-3.33(m,5H),3.47-3.49(m,1H),3.51-3.57(m,3H),3.72-3.73(m,1H),3.83-3.96(d,6H),4.09-4.16(m,2H),4.18-4.24(m,2H),4.25-4.36(m,1H),4.68-4.69(m,1H),4.74-4.88m,2H),4.82-4.88(m,1H),6.91-6.93(d,1H),7.50(s,1H),7.60-7.63(d,1H)制備例2-22：化合物(III-26)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-疊氮基-2-((1R,2R)-1-甲氧基-2-甲基-3-((2-(萘-2-基)-2-氧代乙基)氨基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.40g，0.81mmol)來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-18中相同的過程來得到化合物(III-26)的氨基被保護的衍生物(0.60g，92％)。LC-MSm/z:807.5[M+H]+,829.5[M+Na]+除了使用化合物(III-26)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例2-16中相同的過程來得到標題化合物(0.28g，48％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.78-0.82(t,3H),0.87-1.01(m,17H),1.22-1.28(m,1H),1.33-1.34(m,3H),1.80-2.12(m,2H),2.24-2.28(m,6H),2.38-2.50(m,2H),2.58-2.68(m,1H),2.95-3.05(m,3H),3.06-3.13(m,1H),3.20-3.23(m,1H),3.28-3.40(m,3H),3.43-3.45(m,1H),3.48-3.59(m,3H),3.60-3.67(m,1H),3.72-3.75(m,1H),4.04-4.17(m,2H),2.20-2.30(m,1H),4.32-4.36(m,1H),4.73-4.81(m,2H),4.85-4.86(m,1H),4.96-5.02(m,1H),7.57-7.65(m,2H),7.88-8.01(m,4H),8.51(s,1H)制備例2-23：化合物(III-27)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-疊氮基-2-((1R,2R)-1-甲氧基-3-((2-(3-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.30g，0.63mmol)來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-18中相同的過程來得到化合物(III-27)的氨基被保護的衍生物(0.50g，100％)。LC-MSm/z:787.4[M+H]+,809.5[M+Na]+除了使用化合物(III-27)的氨基被保護的衍生物之外，重復制備例2-16中相同的過程來得到標題化合物(0.23g，48％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.78-0.82(t,3H),0.88-1.02(m,17H),1.25-1.29(m,3H),2.07-2.09(m,2H),2.18-2.31(m,6H),2.33-2.40(m,2H),2.52-2.64(m,1H),2.92-3.08(m,3H),3.20-3.25(m,1H),3.28-3.33(m,3H),3.38-3.40(m,1H),3.48-3.76(m,1H),3.78-3.88(m,3H),4.06-4.16(m,2H),4.19-4.28(m,1H),4.29-4.39(m,1H),4.70-4.71(m,1H),4.74-4.81(m,2H),4.88-4.95(m,1H),6.96-6.99(d,1H),7.38-7.42(t,1H),7.47(s,1H),7.53-7.55(d,1H)制備例2-24：化合物(III-28)的制備將7mL三氟乙酸滴加至(2S,4S)-叔丁基-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(4-氟代苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.87g，1.56mmol)在10mL二氯甲烷的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入5mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸之后，再進行后續(xù)反應。將該濃縮物(TFA鹽)和(3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚酸(0.67g，1.56mmol)一起溶解在5mL二甲基甲酰胺，并且在0℃下依次加入氰基磷酸二乙酯(DEPC)(0.26mL，1.56mmol)和三乙胺(1.09mL，7.82mmol)之后，在室溫下攪拌16小時。在反應完全后，移除溶劑，并且將剩余物溶解在20mL乙酸乙酯中，并用1M亞硫酸氫鉀、水、飽和碳酸氫鈉溶液以及鹽水進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯:己烷＝2:1→乙酸乙酯)對濃縮物進行純化以得到化合物的羥基被保護的衍生物(1.14g，84％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.04(s,6H),0.81-1.06(m,19H),1.19(m,3H),1.46(m,2H),1.65(m,2H),1.97-2.17(m,3H),2.44-2.46(m,3H),2.71-2.80(m,3H),2.81-2.89(m,1H),2.91-2.94(m,2H),2.71-2.80(m,3H)3.04(s,3H),3.26-3.33(m,2H),3.37(s,3H),3.74(m,2H),4.28-4.31(m,2H),4.75-4.82(m,2H),6.18(m,1H),6.84-6.89(m,2H),7.15-7.19(m,1H),7.58(d,1H)攪拌化合物的羥基被保護的衍生物(1.14g，1.31mmol)和1.0M四丁基氟化銨(4.9mL，4.09mmol)在95m四氫呋喃中的溶液5小時，隨后用飽和水性氯化銨溶液來終止反應。在用450mL乙酸乙酯和300mL水來進行萃取之后，進行真空濃縮。通過硅膠柱色譜法(二氯甲烷:甲醇＝9:1)來對濃縮物進行純化以得到(S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N-((3R,4S,5S)-1-((2S,4S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(4-氟代苯基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N,3-二甲基丁酰胺(0.45g，45％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-1.05(m,19H),1.26(m,3H),1.45(m,2H),1.66(m,2H),1.97-2.17(m,3H),2.44-2.46(m,3H),2.71-2.80(m,3H),2.81-2.89(m,1H),2.91-2.94(m,2H),2.71-2.80(m,3H),3.04(s,3H),3.26-3.33(m,2H),3.37(s,3H),3.74(m,2H),4.28-4.31(m,2H),4.75-4.82(m,2H),6.18(m,1H),6.84-6.89(m,2H),7.15-7.19(m,1H),7.58(d,1H)LC-MSm/z:754[M+H]+將該化合物(0.45g，0.59mmol)在20mL二氯甲烷中的溶液冷卻至-50℃至-60℃，并且加入吡啶(0.29ml，3.54mmol)。將對硝基苯基氯甲酸酯(0.71g，3.54mmol)在10mL二氯甲烷中的溶液在20min內(nèi)緩慢地滴加至反應混合物，隨后在-50℃至-60℃下，攪拌3小時。當反應完全時，將20mL二氯甲烷進一步加入至反應混合物中，隨后用0.5M亞硫酸氫鉀溶液對該反應混合物進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到標題化合物(0.4g，74％)。LC-MSm/z:929.6[M+H]+制備例2-25：化合物(III-29)的制備將10mL三氟乙酸滴加至(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯(1.28g，2.73mmol)在30mL二氯甲烷中的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入10mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸之后，再進行進一步的反應。將10mL三氟乙酸滴加至(3R,4S,5S)-叔丁基-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁氨基)-3-甲氧基-5-庚酸甲酯(1.33g，2.73mmol)在30mL二氯甲烷中的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過真空濃縮移除反應溶劑，并且在通過加入10mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸之后，再進行后續(xù)反應。將這兩種濃縮物(TFA鹽)溶解在60mL二氯甲烷中，并且在0℃下依次加入氰基磷酸二乙酯(DEPC)(0.52mL，3.28mmol)和三乙胺(3.8mL，27.32mmol)之后，在室溫下攪拌16小時。在反應完全后，移除溶劑，并且將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并用1M亞硫酸氫鉀、水、飽和碳酸氫鈉溶液以及鹽水進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法(乙酸乙酯:己烷＝2:1→乙酸乙酯)對濃縮物進行純化以得到(S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N-((3R,4S,5S)-1-((2S,4S)-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N,3-二甲基丁酰胺(1.3g，60％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.78-0.88(m,3H),0.91-1.07(m,17H),1.31-1.37(m,5H),1.99-2.11(m,3H),2.28(s,6H),2.43-2.62(m,6H),3.06(s,3H),3.11-3.16(m,2H),3.34(s,3H),3.56(s,3H),3.57-3.65(m,2H),3.97(s,3H),4.08-4.09(brs,1H),4.18-4.2(d,1H),4.3(brs,1H),4.39-4.42(d,2H),4.7-4.72(t,2H),4.76-4.8(m,2H),4.85-4.91(brs,1H),7.03-7.1(m,1H),7.69-7.78(m,2H)LC-MSm/z:780.8[M+H]+,802.8[M+Na]+將該化合物(1.27g，1.63mmol)在20mL二氯甲烷中的溶液冷卻至-50℃至-60℃，并且加入吡啶(1.3ml，16.28mmol)。將對硝基苯基氯甲酸酯(16.28g，3.3mmol)在10mL二氯甲烷中的溶液在20min內(nèi)緩慢地滴加至反應混合物，隨后在-50℃至-60℃下，攪拌3小時。當反應完全時，將20mL二氯甲烷進一步加入至反應混合物中，隨后用0.5M亞硫酸氫鉀溶液對該反應混合物進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到標題化合物(0.8g，54％)。LC-MSm/z:945.7[M+H]+,967.7[M+Na]+制備例2-26：化合物(III-30)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(2,4-二甲基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-25中相同的過程以得到(S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N-((3R,4S,5S)-1-((2S,4S)-2-((1R,2R)-3-((2-(2,4-二甲基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N,3-二甲基丁酰胺(3.2g，89％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.790.85(m,3H),0.91-1.13(m,14H),1.15-1.19(m,3H),1.35-1.38(m,5H),2.00-2.10(m,3H),2.18-2.24(m,3H),2.37(s,3H),2.39-2.48(m,1H),2.53(s,3H),2.55-2.62(m,1H),2.87(s,6H),2.89(s,1H),3.02(s,3H),3.07-3.17(m,2H),3.32(s,3H),3.52(s,3H),3.51-3.61(m,2H),4.11-4.12(brs,1H),4.16-4.18(d,1H),4.30(m,1H),4.37-4.4(d,1H),4.64-4.66(t,2H),4.69-4.74(m,2H),6.90(t,1H),7.09-7.11(m,2H),7.66-7.68(d,2H)LC-MSm/z:760.6[M+H]+,782.6[M+Na]+除了使用該化合物之外，重復制備例2-25中相同的過程來得到標題化合物(1.6g，43％)。LC-MSm/z:925.6[M+H]+,947.6[M+Na]+制備例2-27：化合物(III-31)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-羥基-2-((1R,2R)-1-甲氧基-3-((2-(6-甲氧基萘-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-25中相同的過程以得到(S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N-((3R,4S,5S)-1-((2S,4S)-4-羥基-2-((1R,2R)-1-甲氧基-3-((2-(6-甲氧基萘-2-基)-2-氧代乙基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-N,3-二甲基丁酰胺(0.17g，67.5％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.75-0.82(m,3H),0.85-1.07(m,17H),1.26-1.40(m,5H),1.98-2.10(m,6H),2.39-2.48(m,3H),2.58-2.64(m,1H),3.01(s,3H),3.34(s,3H),3.52-3.73(m,2H),3.57(s,3H),4.12(brs,1H),4.19-4.21(d,1H),4.25-4.31(brs,1H),4.41-4.44(d,1H),4.75-4.83(m,2H),4.87-4.94(m,3H),6.91-6.94(t,2H),7.17(s,1H),7.22-7.24(d,1H),7.78-7.92(m,2H),7.96-7.98(d,1H),8.42(s,1H)LC-MSm/z:812.7[M+H]+,834.7[M+Na]+除了使用該化合物之外，重復制備例2-25中相同的過程來得到標題化合物(0.15g，87％)。LC-MSm/z:977.9[M+H]+,999.9[M+Na]+制備例2-28：化合物(III-32)的制備除了使用(2S,4S)-叔丁基-4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-1-羧酸酯(0.87g，70.9％)來替代(2S,4S)-叔丁基-2-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-羧酸酯之外，重復制備例2-24中相同的過程來得到(2S)-N-((3R,4S)-1-((2S,4S)-2-((1R,2R)-3-((2,6-二氟代苯乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-羥基吡咯烷-1-基)-3-甲氧基-5-甲基-1-氧代庚-4-基)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁酰胺(0.45g，45％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.79-1.05(m,19H),1.26(m,3H),1.45(m,2H),1.66(m,2H),1.97-2.17(m,3H),2.44-2.46(m,3H),2.71-2.80(m,3H),2.81-2.89(m,1H),2.91-2.94(m,2H),2.71-2.80(m,3H),3.04(s,3H),3.26-3.33(m,2H),3.37(s,3H),3.74(m,2H),4.28-4.31(m,2H),4.75-4.82(m,2H),6.18(m,1H),6.84-6.89(m,2H),7.15-7.19(m,1H),7.58(d,1H)LC-MSm/z:754[M+]+除了使用該化合物之外，重復制備例2-24中相同的過程來得到標題化合物(0.46g，83％)。LC-MSm/z:920.1[M+H]+制備例3：化學式IV-1、化學式IV-2、化學式IV-3和化學式IV-4的化合物的制備制備例3-1：化合物(IV-5)的制備在氬氣氣流下，將在制備例1-1中制備的化合物(II-1)(0.37g，0.50mmol)加入至在制備例2-1中制備的化合物(III-5)(0.36g，0.50mmol)在14mL無水二甲基甲酰胺的溶液中。將反應混合物冷卻至0℃，并且在依次加入HOBt(81mg，0.60mmol)和3.5mL無水吡啶之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，進行真空濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對剩余物進行純化以得到乳白色固體形式的標題化合物(0.49g，74％)。MALDI-TOFMSm/z:1345.6[M+Na]+,1361.6[M+K]+制備例3-2：化合物(IV-6)的制備除了使用在制備例2-2中制備的化合物(III-6)(0.35g，0.50mmol)來替代在制備例2-1中制備的化合物(III-5)之外，重復制備例3-1中相同的過程來得到標題化合物(0.42g，72％)。MALDI-TOFMSm/z:1322.8[M+Na]+,1339.0[M+K]+制備例3-3：化合物(IV-7)的制備除了使用在制備例2-3中制備的化合物(III-7)(79mg，0.10mmol)來替代在制備例2-1中制備的化合物(III-5)之外，重復制備例3-1中相同的過程來得到標題化合物(97mg，78％)。MALDI-TOFMSm/z:1400.3[M+Na]+制備例3-4：化合物(IV-8)的制備除了使用在制備例2-4中得到的化合物(III-8)(104mg，0.14mmol)來替代在制備例2-1中得到的化合物(III-5)之外，重復制備例3-1中相同的過程來得到標題化合物(86mg，48％)。MALDI-TOFMSm/z:1386.9[M+Na]+,1402.9[M+K]+制備例3-5：化合物(IV-9)的制備除了使用在制備例2-5中得到的化合物(III-9)(65mg，0.085mmol)來替代在制備例2-1中得到的化合物(III-5)之外，重復制備例3-1中相同的過程來得到標題化合物(43mg，41％)。MALDI-TOFMSm/z:1381.6[M+Na]+制備例3-6：化合物(IV-10)的制備除了使用在制備例2-6中得到的化合物(III-10)(82mg，0.11mmol)來替代在制備例2-1中得到的化合物(III-5)之外，重復制備例3-1中相同的過程來得到標題化合物(89mg，66％)。MALDI-TOFMSm/z:1360.0[M+Na]+,1377.2[M+K]+制備例3-7：化合物(IV-11)的制備在氬氣氣流下，將在制備例2-7中得到的化合物(III-11)(89mg，0.116mmol)溶解在8mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入在制備例1-1中所得到的化合物(II-1)(78mg，0.106mmol)。將反應混合物冷卻至0℃，并且在依次加入HOBt(17mg，0.128mmol)和2.0mL無水吡啶之后，在室溫下攪拌17小時。在反應完全后，進行真空濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對剩余物進行純化以得到標題化合物(106mg，73％)。LC-MSm/z:1377.8[M+]+,1400.8[M+Na]+制備例3-8：化合物(IV-12)的制備除了使用在制備例2-8中得到的化合物(III-12)(17mg，0.023mmol)來替代在制備例2-7中得到的化合物(III-11)之外，重復制備例3-7中相同的過程來得到標題化合物(26mg，93％)。MALDI-TOFMSm/z:1351.3[M+Na]+,1367.7[M+K]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.81-0.91(m,6H),0.91-1.03(m,21H),1.63(d,2H),1.22(d,1H),1.28(m,2H),1.32(m,1H),1.50-1.63(m,6H),1.68(m,2H),1.82-1.90(m,2H),1.95(s,3H),1.98(m,4H),2.23-2.28(m,3H),2.34(brd,1H),2.40(s,6H),2.58-2.70(m,1H),2.80-2.85(m,1H),2.91-2.98(m,1H),3.12(s,3H),3.15-3.27(m,2H),3.26-3.33(m,8H,OCH3),3.34(d,2H),3.42-3.48(m,5H,OCH3),3.52(m,1H),3.7-3.96(m,2H),3.96-4.08(m,2H),4.15(d,1H),4.18(m,1H),4.44-4.54(m,2H),4.66(d,1H),4.54-5.10(m,5H),6.76(m,1H),7.02-7.12(m,2H),7.23-7.28(m,2H),7.30-7.38(m,2H),7.51-7.58(m,2H)制備例3-9：化合物(IV-13)的制備除了使用在制備例2-9中得到的化合物(III-13)(478mg，0.638mmol)來替代在制備例2-7中得到的化合物(III-11)之外，重復制備例3-7中相同的過程來得到標題化合物(347mg，40％)。LC-MSm/z:1347[M+]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.76-0.90(m,6H),0.90-1.12(m,18H),1.16(m,4H),1.19(m,3H),1.28(m,3H),1.28(m,3H),1.40(m,2H),1.50-1.66(m,9H),1.66-1.80(m,2H),1.93(s,3H),2.0-2.14(m,4H),2.26(m,3H),2.38(d,6H),2.44(m,1H),2.50-2.65(m,1H),2.77(m,2H),3.10-3.24(m,6H),3.25-3.36(m,7H,OCH3),3.45(t,3H),3.58(m,1H),3.66(m,1H),3.82(m,1H),4.06(m,1H),4.14(m,2H),4.26(m,1H),4.36(m,1H),4.48(m,2H),4.63(m,1H),4.69(m,3H),6.78(s,2H),6.97(m,1H),7.08(m,1H),7.25(m,2H),7.34(m,2H),7.54(m,2H)制備例3-10：化合物(IV-14)的制備除了使用在制備例2-10中得到的化合物(III-14)(0.39g，0.51mmol)來替代在制備例2-7中得到的化合物(III-11)之外，重復制備例3-7中相同的過程來得到標題化合物(453mg，65％)。LC-MSm/z:1364[M+1]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.81-0.91(m,6H),0.91-1.03(m,21H),1.13(d,2H),1.22(d,1H),1.28(m,2H),1.32(m,1H),1.50-1.63(m,6H),1.68(m,2H),1.82-1.90(m,2H),1.95(s,3H),1.98(m,4H),2.23-2.28(m,3H),2.34(brd,1H),2.40(s,6H),2.58-2.70(m,1H),2.80-2.85(m,1H),2.91-2.98(m,1H),3.12(s,3H),3.15-3.27(m,2H),3.27-3.33(m,8H,OCH3),3.34(d,2H),3.42-3.48(m,5H,OCH3),3.52(m,1H),3.7-3.96(m,2H),3.96-4.08(m,2H),4.15(d,1H),4.18(m,1H),4.44-4.54(m,2H),4.66(d,1H),4.74-5.10(m,5H),6.76(m,1H),7.02-7.12(m,2H),7.23-7.28(m,2H),7.30-7.38(m,2H),7.51-7.58(m,2H)制備例3-11：化合物(IV-15)的制備除了使用在制備例2-11中得到的化合物(III-15)(110mg，0.144mmol)來替代在制備例2-7中得到的化合物(III-11)之外，重復制備例3-7中相同的過程來得到標題化合物(82mg，42％)。LC-MSm/z:1360[M+1]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.81-0.91(m,6H),0.92-1.05(m,19H),1.3-1.2(m,3H),1.22(d,1H),1.28(m,2H),1.32(m,1H),1.50-1.63(m,6H),1.68(m,2H),1.82-1.90(m,2H),1.95(s,3H),1.98(m,3H),2.23-2.28(m,3H),2.37(d,6H),2.61(m,1H),2.78(m,1H),3.12(s,3H),3.16-3.24(m,2H),3.26-3.32(m,15H,OCH3),3.32-3.28(m,5H,OCH3),3.42-3.50(m,1H),3.74(d,3H),3.86(m,1H),3.96-4.08(m,2H),4.14(d,1H),4.18-4.10(m,1H),4.42-4.52(m,2H),4.64-5.10(m,5H),6.76(d,2H),6.87(m,2H),7.24(m,4H),7.55(m,2H)制備例3-12：化合物(IV-16)的制備除了使用在制備例2-12中得到的化合物(III-16)(179mg，0.23mmol)來替代在制備例2-7中得到的化合物(III-11)之外，重復制備例3-7中相同的過程來得到標題化合物(268mg，85％)。LC-MSm/z:1375[M+1]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.71-0.80(m,5H),0.80-0.98(m,18H),0.98-1.10(m,4H),1.18(m,2H),1.50(m,6H),1.55-1.75(m,4H),1.81-2.00(m,8H),2.05-2.30(m,5H),2.26(d,6H),2.40-2.61(m,1H),2.65-2.80(m,2H),2.90-3.08(m,6H),3.15(d,3H),3.30(d,3H),3.42(s,2H),3.67(s,3H),3.70(s,3H),3.15-3.43(m,3H),3.85-4.05(m,4H),4.18(brt,2H),4.38(m,2H),4.52(t,1H),4.56-4.80(m,3H),4.88(d,1H),5.01(m,2H),5.10(d,1H),6.00(m,1H),6.84-8.20(m,10H),10.0(d,1H)制備例3-13：化合物(IV-17)的制備除了使用在制備例2-13中得到的化合物(III-17)(327mg，0.431mmol)來替代在制備例2-7中得到的化合物(III-11)之外，重復制備例3-7中相同的過程來得到標題化合物(440mg，75％)。LC-MSm/z:1346[M+1]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.81-1.02(m,23H),1.13-1.20(m,3H),1.25-1.32(m,2H),1.40(m,1H),1.50-1.63(m,6H),1.72-1.78(m,2H),1.82-1.98(m,3H),1.96(s,3H),2.00-2.09(m,4H),2.15-2.30(m,5H),2.34-2.42(d,6H),2.40-2.60(m,3H),2.75(m,1H),2.98(m,1H),3.05(m,3H),3.16-3.24(m,2H),3.26-3.35(m,8H,OCH3),3.38-3.48(m,6H,OCH3),3.52-3.60(m,1H),3.65-3.80(m,1H),3.90-4.16(m,5H),4.48(m,1H),4.63-5.10(m,8H),6.76(s,2H),7.09-7.28(m,6H),7.53(m,2H)制備例3-14：化合物(IV-18)的制備在氬氣氣流下，將在制備例2-14中得到的化合物(III-18)(0.36g，0.48mmol)溶解在10mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入在制備例1-1中所得到的化合物(II-1)(0.32g，0.43mmol)。將反應混合物冷卻至0℃，并且在依次加入HOBt(70mg，0.52mmol)和2.5mL無水吡啶之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，進行真空濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對剩余物進行純化以得到乳白色固體形式的標題化合物(0.29g，51％)。LC-MSm/z:1353[M+]+,1375[M+Na]+制備例3-15：化合物(IV-19)的制備除了使用在制備例2-15中得到的化合物(III-19)(0.34g，0.45mmol)來替代在制備例2-14中得到的化合物(III-18)之外，重復制備例3-14中相同的過程來得到標題化合物(0.28g，45％)。LC-MSm/z:1362.8[M+]+,1384.8[M+Na]+制備例3-16：化合物(IV-20)的制備除了使用在制備例2-16中得到的化合物(III-20)(91mg，0.12mmol)來替代在制備例2-14中得到的化合物(III-18)之外，重復制備例3-14中相同的過程來得到標題化合物(122mg，82％)。LC-MSm/z:1352[M+]+制備例3-17：化合物(IV-21)的制備除了使用在制備例2-17中得到的化合物(III-21)(110mg，0.14mmol)來替代在制備例2-14中得到的化合物(III-18)之外，重復制備例3-14中相同的過程來得到標題化合物(153mg，86％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.70-0.77(m,5H),0.81-0.97(m,17H),1.02-1.07(m,3H),1.16-1.29(m,8H),1.34-1.40(m,1H),1.48-1.51(m,6H),1.54-1.63(m,1H),1.63-1.79(m,2H),1.91-1.97(m,5H),2.03-2.30(m,7H),2.35-2.44(m,1H),2.59-2.61(m,1H),2.61-2.69(m,1H),2.70-2.84(m,4H),3.07-3.12(m,1H),3.12-3.24(m,3H),3.26-3.40(m,3H),3.40-3.48(m,1H),3.62-4.03(m,4H),4.03-4.25(m,3H),4.25-4.68(m,4H),4.88-5.09(s,2H),5.35-5.47(s,2H),5.85-6.03(t,1H),6.85-7.10(s,2H),7.14-7.40(m,2H),7.56-7.66(m,1H),7.74-7.83(d,1H),7.90-8.22(m,3H),10.00(brs,1H)LC-MSm/z:1366[M+]+制備例3-18：化合物(IV-22)的制備將在制備例2-18中得到的化合物(III-22)(1.27g，1.63mmol)在20mL二氯甲烷中的溶液冷卻至-50℃至-60℃，并且加入吡啶(1.3mL，16.28mmol)。將對硝基苯基氯甲酸酯(16.28g，3.3mmol)在10mL二氯甲烷中的溶液在20min內(nèi)緩慢地滴加至反應混合物，隨后在-50℃至-60℃下，攪拌3小時。當反應完全時，將20mL二氯甲烷進一步加入至反應混合物中，隨后用0.5M亞硫酸氫鉀溶液對該反應混合物進行萃取。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到(3S,5S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(二甲氨基)-3-甲基丁氨基)-N,3-二甲基丁氨基)-3-甲氧基-5-甲基庚?；?-5-((1R,2R)-3-((2-(3-氟代-4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)氨基)-1-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙基)吡咯烷-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯(0.8g，54％)。LC-MSm/z:945.7[M+H]+,967.7[M+Na]+在氬氣氣流下，將該化合物(0.3g，0.32mmol)與叔丁基-((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)氨基)-1-氧代-5-脲基戊-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸酯(0.3g，0.64mmol)一起溶解在10mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入4-甲氨基吡啶(0.039g，0.32mmol)。將反應混合物在20℃至25℃下攪拌19小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行濃縮以使?jié)饪s完全，并且通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到氨基被保護的衍生物(0.1g，25％)。LC-MSm/z:1285.5[M+H]+將2mL三氟乙酸加入至該氨基被保護的化合物(0.18g，0.14mmol)在8mL二氯甲烷中的溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌3小時。當反應完全時，通過加入5mL甲苯兩次來完全移除三氟乙酸之后，再進行進一步的反應。將該濃縮物(TFA鹽)和2,5-二氧代吡咯烷-1-基-6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1-吡咯-1-基)己酸酯一起溶解在10mL二甲基甲酰胺中，并且在室溫下加入三乙胺(0.1mL，0.7mmol)之后，在室溫下攪拌18小時。在反應完全后，在高真空下對反應混合物進行濃縮以使?jié)饪s完全，并且通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到標題化合物(0.14g，71％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.70-0.78(m,6H),0.81-0.92(m,13H),1.16-1.24(23H),1.46-1.51(m,4H),1.84-1.97(m,3H),3.06-3.17(m,12H),3.30-3.38(m,15H),3.84-3.93(m,3H),4.08-4.85(m,8H),4.86-5.04(m,1H),5.10(s,2H),5.40(s,2H),6.03(t,1H),7.00(s,1H),7.15-7.35(m,2H),7.53-7.55(d,1H),7.77-7.98(m,2H),8.10-8.12(d,1H),8.19-8.48(m,1H),9.44-9.49(brs,1H),10.03(s,1H)LC-MSm/z:1378.7[M+H]+制備例3-19：化合物(IV-23)的制備除了使用在制備例2-19中得到的化合物(III-23)(0.8g，0.865mmol)來替代在制備例2-18中得到的化合物(III-22)之外，重復制備例3-18中相同的過程來得到標題化合物(0.22g，69％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.73-0.75(m,4H),0.81-0.92(m,11H),1.16-1.19(23H),1.46-1.50(m,4H),1.54-1.73(m,2H),1.90-1.97(m,2H),2.08-2.25(m,4H),2.28-2.38(m,4H),2.94-2.99(m,4H),3.07-3.17(m,11H),3.33-3.38(m,12H),3.95-4.05(m,1H),4.12-4.27(m,3H),4.51-4.67(m,1H),4.87-4.95(m,1H),5.11(s,2H),5.43(s,2H),6.00(t,1H),7.00(s,1H),7.07-7.15(m,1H),7.22-7.24(d,1H),7.32-7.35(m,H),7.53-7.56(d,1H),7.61-7.62(d,1H),7.81-7.84(d,1H),8.07-8.13(m,1H),8.28-8.50(m,1H),9.26(brs,1H),9.91(s,1H),10.06(s,1H)LC-MSm/z:1380.4[M+H]+制備例3-20：化合物(IV-24)的制備除了使用在制備例2-20中得到的化合物(III-24)(0.44g，0.45mmol)來替代在制備例2-18中得到的化合物(III-22)之外，重復制備例3-18中相同的過程來得到標題化合物(0.16g，64％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.48-0.50(d,1H),0.58-0.59(d,1H),0.68-0.77(m,4H),0.81-0.92(m,14H),1.16-1.23(20H),1.46-1.51(m,4H),1.81-1.88(m,3H),3.06-3.13(m,12H),3.35-3.38(m,15H),3.84-3.92(m,4H),4.08-5.00(m,8H),5.13(s,2H),5.44(s,2H),6.01-6.03(t,1H),7.00(s,1H),7.22-7.28(m,1H),7.33-7.36(m,2H),7.39-7.42(d,1H),7.60-7.65(d,2H),7.82-7.84(d,1H),7.89-7.93(m,2H),8.00-8.03(d,1H),8.11-8.13(d,1H),8.27-8.53(m,1H),8.64(s,1H),9.38(brs,1H),10.06(s,1H)LC-MSm/z:1410.5[M+H]+制備例3-21：化合物(IV-25)的制備除了使用在制備例2-21中得到的化合物(III-25)(0.37g，0.47mmol)來替代在制備例2-18中得到的化合物(III-22)之外，重復制備例3-18中相同的過程來得到標題化合物(0.47g，72％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.57-0.78(m,8H),0.78-0.98(m,15H),1.04-1.28(m,6H),1.28-1.39(m,1H),1.39-1.54(m,5H),1.54-1.63(m,1H),1.63-1.84(m,3H),1.84-2.03(m,3H),2.03-2.25(m,7H),2.25-2.40(m,2H),2.53-2.69(m,3H),2.69-2.83(m,1H),2.85-3.06(m,5H),3.09-3.21(m,3H),3.26-3.42(m,3H),3.44-3.52(m,1H),3.74-3.88(m,6H),3.88-4.05(m,3H),4.07-4.16(m,1H),4.16-4.23(m,1H),4.23-4.34(m,1H),4.34-4.48(m,2H),4.48-4.57(m,1H),4.58-4.73(m,2H),4.97(s,2H),5.42(s,2H),5.93-6.04(t,1H),6.98-7.04(s,1H),7.04-7.12(d,1H),7.25-7.36(m,1H),7.42-7.48(s,1H),7.48-7.57(m,1H),7.57-7.64(d,1H),7.64-7.72(m,1H),7.77-7.86(m,1H),8.01-8.16(m,1H),10.01(brs,1H),10.56(brs,1H)LC-MSm/z:1389.6[M+]+,1412.6[M+Na]+制備例3-22：化合物(IV-26)的制備除了使用在制備例2-22中得到的化合物(III-26)(0.28g，0.36mmol)來替代在制備例2-18中得到的化合物(III-22)之外，重復制備例3-18中相同的過程來得到標題化合物(0.24g，48％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.66-0.78(m,5H),0.78-1.06(m,19H),1.07-1.29(m,6H),1.29-1.38(m,1H),1.38-1.53(m,5H),1.53-1.63(m,1H),1.63-1.85(m,2H),1.85-2.02(m,3H),2.02-2.14(m,3H),2.14-2.27(m,6H),2.27-2.41(m,2H),2.56-2.60(m,3H),2.61-2.83(m,1H),2.86-3.08(m,5H),2.08-3.20(m,3H),3.20-3.27(m,1H),3.27-3.40(m,3H),3.45-3.63(m,1H),3.64-3.88(m,1H),3.88-4.06(m,2H),4.06-4.26(m,2H),4.28-4.46(m,1H),4.46-4.74(m,2H),4.74-4.91(m,1H),4.97(s,2H),5.43(s,2H),5.88-6.10(t,1H),7.01(s,1H),7.12-7.38(m,2H),7.38-7.72(m,4H),7.72-7.92(m,2H),7.92-8.22(m,3H),8.25-8.63(m,2H),8.73(s,1H),10.06(brs,1H),10.59(brs,1H)LC-MSm/z:1379.6[M+]+,1402.5[M+Na]+制備例3-23：化合物(IV-27)的制備除了使用在制備例2-23中得到的化合物(III-27)(0.24g，0.32mmol)來替代在制備例2-18中得到的化合物(III-22)之外，重復制備例3-18中相同的過程來得到標題化合物(0.28g，64％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.59-0.78(m,6H),0.78-0.97(m,15H),0.97-1.06(m,2H),1.06-1.28(m,6H),1.28-1.39(m,1H),1.39-1.54(m,5H),1.54-1.64(m,1H),1.64-1.84(m,3H),1.84-2.02(m,3H),2.05-2.29(m,8H),2.30-2.42(m,2H),2.55-2.60(m,3H),2.60-2.83(m,1H),2.86-3.06(m,5H),3.06-3.21(m,6H),3.21-3.32(m,3H),3.36-3.44(m,1H),3.44-3.52(m,1H),3.65-3.74(m,1H),3.74-3.87(m,2H),3.89-4.05(m,2H),4.15-4.25(m,1H),4.31-4.73(m,4H),4.96(s,2H),5.43(s,2H),5.92-6.06(t,1H),6.71-6.83(m,1H),6.83-6.94(m,1H),6.97-7.04(m,1H),7.16-7.35(m,2H),7.38-7.67(m,3H),7.75-7.88(d,1H),8.00-8.17(m,2H),10.01(brs,1H),10.55(brs,1H)LC-MSm/z:1361.6[M+]+,1384.5[M+Na]+制備例3-24：化合物(IV-28)的制備在氬氣氣流下，將在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽(0.88mg，0.11mmol)溶解在5mL無水二甲基甲酰胺中，并加入二異丙基乙胺(0.18mL，1.03mmol)。在氬氣氣氛中，將在制備例2-24中制備的化合物(III-28)(75mg，0.08mmol)在5mL無水二甲基甲酰胺中的溶液滴加至該溶液中，隨后在20℃至25℃下攪拌17小時。在反應完全后，進行真空濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對剩余物進行純化以得到標題化合物(135mg，100％)。LC-MSm/z:1462.9[M+H]+,1485.9[M+Na]+制備例3-25：化合物(IV-29)的制備除了使用在制備例1-3中得到的化合物(II-4)的TFA鹽(0.17g，0.212mmol)來替代在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(0.14g，44％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.69-0.78(m,6H),0.81-0.90(m,14H),1.11-1.64(m,3H),1.18-1.26(m,10H),1.38-1.51(m,6H),1.58-1.62(m,1H),1.63-1.83(m,3H),1.91-1.99(m,3H),2.11-2.26(m,7H),2.35-2.42(m,2H),2.87(s,6H),2.92-3.05(m,3H),3.13-3.18(m,4H),3.32-3.38(m,17H),3.62(brs,1H),3.92-3.99(m,4H),4.07-4.09(m,1H),4.15-4.84(m,9H),4.98(s,2H),5.4(s,2H),5.96-5.99(t,1H),6.99(s,1H),7.22-7.3(m,2H),7.53-7.65(m,2H),7.77-7.80(m,2H),7.84-7.89(t,1H),8.05-8.07(d,1H),8.37-8.43(m,1H),9.97(s,1H)LC-MSm/z:1492.8[M+H]+,1514.7[M+Na]+制備例3-26：化合物(IV-30)的制備除了使用在制備例1-4中得到的化合物(II-5)的TFA鹽(0.16g，0.212mmol)和在制備例2-25中得到的化合物(III-29)(0.2g,0.212mmol)來分別替代在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽和在制備例2-24中得到的化合物(III-28)之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(0.13g，40％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.69-0.76(m,6H),0.81-0.92(m,14H),1.10-1.20(m,4H),1.25-1.26(m,8H),1.44-1.51(m,5H),1.55-1.65(m,1H),1.66-1.85(3H),1.86-2.05(m,3H),2.06-2.27(m,6H),2.28-2.46m,2H),2.84(s,1H),2.87-2.96(m,1H),2.99-3.04(m,5H),3.14-3.18(m,4H),3.32-3.47(m,11H),3.62(brs,1H),3.92-3.93(d,3H),4.00-4.91(m,8H),4.94(s,2H),5.41(s,2H),5.97-6.00(t,1H),7.00(s,1H),7.24-7.32(m,3H),7.58-7.60(d,2H),7.77-7.80(m,2H),7.85-7.89(t,1H),8.05-8.07(d,1H),8.19(t,1H),8.44(brs,1H),9.97(s,1H)LC-MSm/z:1464.8[M+H]+,1487.9[M+Na]+制備例3-27：化合物(IV-31)的制備除了使用在制備例1-3中得到的化合物(II-4)的TFA鹽(0.26g，0.324mmol)和在制備例2-26中得到的化合物(III-30)(0.2g，0.216mmol)來分別替代在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽和在制備例2-24中得到的化合物(III-28)之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(0.2g，64％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.71-0.75(m,6H),0.80-0.91(m,15H),1.18-1.19(m,3H),1.22-1.27(m,9H),1.43-1.49(m,6H),1.90-1.98(m,3H),2.09-2.23(m,3H),2.25-2.40(m,7H),2.83-2.86(m,4H),2.96-3.01(m,4H),3.15-3.19(m,3H),3.26(s,3H),3.35-3.38(m,16H),3.85-3.96(m,3H),4.11-4.88(m,8H),4.97(s,2H),5.42(s,2H),5.97-5.99(t,1H),6.99-7.01(m,1H),7.06-7.16(m,2H),7.28(brs,2H),7.60-7.69(m,2H),7.81-7.83(d,1H),8.09-8.12(d,1H),8.29(brs,1H),10.09(s,1H)LC-MSm/z:1472.9[M+H]+,1494.9[M+Na]+制備例3-28：化合物(IV-32)的制備除了使用在制備例1-4中得到的化合物(II-5)的TFA鹽(0.24g，0.324mmol)和在制備例2-26中得到的化合物(III-30)(0.2g，0.216mmol)來分別替代在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽和在制備例2-24中得到的化合物(III-28)之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(0.2g，67％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.71-0.75(m,7H),0.81-0.92(m,16H),1.03-1.04(m,2H),1.11-1.12(m,1H),1.18-1.27(m,7H),1.46-1.49(m,5H),1.90-1.98(m,3H),2.09-2.23(m,6H),2.28-2.38(m,7H),2.96-3.03(m,9H),3.15-3.17(m,4H),3.28(s,3H),3.35-3.38(m,14H),3.62-3.65(m,2H),3.85-4.00(m,3H),4.17-4.88(m,8H),4.94(s,2H),5.43(s,2H),5.88-6.00(t,1H),7.00(s,1H),7.06-7.16(m,2H),7.27-7.29(m,3H),7.58-7.69(m,2H),7.82-7.84(d,1H),8.09-8.12(d,1H),8.29(brs,1H),10.00(s,1H)LC-MSm/z:1444.9[M+H]+,1466.9[M+Na]+制備例3-29：化合物(IV-33)的制備除了使用在制備例1-4中得到的化合物(II-5)的TFA鹽(0.23g，0.307mmol)和在制備例2-27中得到的化合物(III-31)(0.2g，0.205mmol)來分別替代在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽和在制備例2-24中得到的化合物(III-28)之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(0.16g，51％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.71-0.75(m,7H),0.81-0.92(m,16H),1.03-1.04(m,2H),1.11-1.12(m,1H),1.18-1.27(m,7H),1.46-1.49(m,5H),1.90-1.98(m,3H),2.09-2.23(m,6H),2.28-2.38(m,7H),2.96-3.03(m,9H),3.15-3.17(m,4H),3.28(s,3H),3.35-3.38(m,14H),3.62-3.65(m,2H),3.85-4.00(m,3H),4.17-4.88(m,8H),4.94(s,2H),5.43(s,2H),5.88-6.00(t,1H),7.00(s,1H),7.06-7.16(m,2H),7.27-7.29(m,3H),7.58-7.69(m,2H),7.82-7.84(d,1H),8.09-8.12(d,1H),8.29(brs,1H),10.00(s,1H)LC-MSm/z:1497.6[M+H]+,1519.6[M+Na]+制備例3-30：化合物(IV-34)的制備除了使用在制備例2-28中得到的化合物(III-32)(1.2g，1.294mmol)來替代在制備例2-24中得到的化合物(III-28)并與在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽(1g，1.294mmol)一起使用之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(1.3g，72％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.48-0.49(m,1H),0.58-0.59(m,2H),0.64-0.65(m,2H),0.70-0.76(m,5H),0.81-0.92(m,16H),1.11-1.13(m,2H),1.16-1.20(m,3H),1.22-1.28(m,9H),1.44-1.49(m,5H),1.90-1.98(m,3H),2.09-2.23(m,7H),2.96-3.04(m,9H),3.13-3.18(m,4H),3.33-3.38(m,14H),3.60-3.64(m,1H),3.90-3.94(m,4H),3.99-4.88(m,8H),4.94(s,2H),5.42(s,2H),5.86-5.99(t,1H),7.22-7.29(m,4H),7.38-7.42(m,1H),7.58-7.60(d,2H),7.80-7.82(d,1H),7.89-7.96(m,2H),8.00-8.10(m,2H),8.29(brs,1H),8.70(s,1H),10.00(s,1H)LC-MSm/z:1452.8[M+H]+,1474.7[M+Na]+制備例3-31：化合物(IV-35)的制備除了使用在制備例1-5中得到的化合物(II-6)的TFA鹽(0.18g，0.233mmol)來替代在制備例1-2中得到的化合物(II-3)的TFA鹽并與在制備例2-25中得到的化合物(III-29)(0.2g，0.212mmol)一起使用之外，重復制備例3-24中相同的過程來得到標題化合物(0.16g，51％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.68-0.76(m,6H),0.81-0.90(m,14H),1.08-1.20(m,4H),1.23-1.27(m,9H),1.44-1.49(m,6H),1.58-1.62(m,1H),1.63-1.83(m,3H),1.91-1.99(m,3H),2.13-2.20(m,6H),2.35-2.42(m,2H),2.85-2.87(m,4H),2.99-3.01(m,4H),3.14-3.17(m,4H),3.28-3.38(m,19H),3.62(brs,1H),3.92-3.94(m,3H),4.07-4.09(m,1H),4.15-4.84(m,8H),4.98(s,2H),5.43(s,2H),5.98-6.00(t,1H),7.01(s,1H),7.22-7.36(m,3H),7.54-7.64(m,2H),7.77-7.97(m,2H),8.08-8.11(d,1H),8.22-8.45(m,2H),10.01(s,1H)LC-MSm/z:1478.5[M+H]+,1500.5[M+Na]+制備例4：化學式VI-1、化學式VI-2、化學式VI-3和化學式VI-4的化合物的制備制備例4-1：化合物(VI-5)的制備將4-巰基丁酸(V-1)(126mg，1.05mmol)和0.5mLDMSO加入至在制備例3-1中制備的化合物(IV-5)(274mg，0.21mmol)在5mL乙腈中的溶液中，隨后在室溫下攪拌4小時。在真空下對反應混合物進行濃縮以得到標題化合物(290mg，98％)。MALDI-TOFMSm/z:1465.3[M+Na]+制備例4-2：化合物(VI-6)的制備將2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(V-2)(44mg，0.3mmol)和0.7mLDMF加入至在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)(70mg，0.053mmol)在2.5mL乙腈中的溶液中，隨后在室溫下攪拌4小時。在真空下對反應混合物進行濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到固體形式的標題化合物(60mg，77％)。MALDI-TOFMSm/z:1492.0[M+Na]+制備例4-3：化合物(VI-7)的制備除了使用6-巰基己酸(V-3)來替代2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(V-2)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(54mg，69％)。MALDI-TOFMSm/z:1493.2[M+Na]+制備例4-4：化合物(VI-8)的制備除了使用8-巰基辛酸(V-4)來替代2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(V-2)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(66mg，84％)。MALDI-TOFMSm/z:1522.0[M+Na]+制備例4-5：化合物(VI-9)的制備除了使用11-巰基十一酸(V-5)來替代2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(V-2)之外，重復在制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(71mg，86％)。MALDI-TOFMSm/z:1563.3[M+Na]+制備例4-6：制備化合物(VI-10)除了使用在制備例3-2中得到的化合物(IV-6)(70mg，0.054mmol)來替代在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(53mg，68％)。MALDI-TOFMSm/z:1469.5[M+Na]+制備例4-7：化合物(VI-11)的制備除了使用在制備例3-2中得到的化合物(IV-6)(70mg，0.054mmol)和6-巰基己酸(V-3)來分別替代在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)和2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(V-2)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(46mg，59％)。MALDI-TOFMSm/z:1471.6[M+Na]+制備例4-8：化合物(VI-12)的制備除了使用在制備例3-3中得到的化合物(IV-7)(88mg，0.064mmol)來替代在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(48mg，49％)。MALDI-TOFMSm/z:1548.1[M+Na]+制備例4-9：化合物(VI-13)的制備除了使用在制備例3-4中得到的化合物(IV-8)(71mg，0.052mmol)來替代在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(46mg，59％)。MALDI-TOFMSm/z:1529.4[M+Na]+制備例4-10：化合物(VI-14)的制備除了使用在制備例3-5中得到的化合物(IV-9)(35mg，0.026mmol)來替代在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(29mg，74％)。MALDI-TOFMSm/z:1528.2[M+Na]+制備例4-11：化合物(VI-15)的制備除了使用在制備例3-6中得到的化合物(IV-10)(78mg，0.058mmol)來替代在制備例3-1中得到的化合物(IV-5)之外，重復制備例4-2中相同的過程來得到標題化合物(77mg，90％)。MALDI-TOFMSm/z:1508.1[M+Na]+,1524.8[M+K]+制備例4-12：化合物(VI-16)的制備將2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(19mg，0.126mmol)加入至在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)(58mg，0.042mmol)在5mL甲醇和1.5mL無水二甲基甲酰胺的溶液中，隨后在室溫下攪拌4小時。在真空下對反應混合物進行濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到固體形式的標題化合物(60mg，93％)。LC-MSm/z:1523.8[M+]+,1545.8[M+Na]+制備例4-13：化合物(VI-17)的制備除了使用在制備例3-8中得到的化合物(IV-12)(41mg，0.031mmol)來替代在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)之外，重復制備例4-12中相同的過程來得到標題化合物(39mg，85％)。MALDI-TOFMSm/z:1496.8[M+Na]+制備例4-14：化合物(VI-18)的制備除了使用在制備例3-9中得到的化合物(IV-13)(347mg，0.257mmol)和11-巰基十一酸(112mg，0.514mmol)來分別替代在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)和2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸之外，重復制備例4-12中相同的過程來得到標題化合物(266mg，66％)。LC-MSm/z:1567[M+1]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.76-0.90(m,10H),0.90-1.14(m,20H),1.17(m,3H),1.26(m,4H),1.29(brs,20H),1.37(m,4H),1.50-1.64(m,14H),1.68-1.78(m,3H),1.88(m,2H),1.94(s,3H),2.21-2.26(m,6H),2.99-2.48(m,10H,N-CH3*2),2.70(m,1H),2.84(m,1H),3.07-3.19(m,6H),3.26-3.45(m,6H),3.45(m,4H),3.82(m,1H),4.15(m,1H),4.47(m,2H),4.64(m,1H),4.81(m,1H),4.98(m,3H),6.96(t,1H),7.08(t,1H),7.25(d,2H),7.28-7.40(m,2H),7.53(d,2H)制備例4-15：化合物(VI-19)的制備除了使用在制備例3-10中得到的化合物(IV-14)(453mg，0.332mmol)來替代在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)之外，重復制備例4-12中相同的過程來得到標題化合物(60mg，93％)。LC-MSm/z:1510[M+1]+,1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.46-0.68(m,5H),0.82-1.10(m,27H),1.17(d,2H),1.22(d,1H),1.30(m,2H),1.40(m,1H),1.50-1.63(m,6H),1.68-1.80(m,2H),1.82-1.90(m,2H),1.94(s,3H),2.00-2.15(m,4H),2.20-2.35(m,5H),2.42(s,6H),2.38-2.50(m,2H),2.81-2.89(m,1H),2.91-2.98(m,2H),3.08-3.40(m,6H),3.26-3.33(m,10H,OCH3),3.43(d,2H),3.45-3.48(m,5H,OCH3),3.52-3.64(m,1H),3.74-3.86(m,1H),3.906-4.10(m,3H),4.15(d,1H),4.24(m,1H),4.44-4.54(m,2H),4.66(d,1H),4.74-5.10(m,5H),7.09-7.12(m,2H),7.23-7.27(m,2H),7.33-7.37(m,2H),7.52-7.59(m,2H)制備例4-16：化合物(VI-20)的制備除了使用在制備例3-11中得到的化合物(IV-15)(82mg，0.063mmol)來替代在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)之外，重復制備例4-12中相同的過程來得到標題化合物(38mg，42％)。LC-MSm/z:1506[M+1]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.42-0.67(m,4H),0.81-1.08(m,27H),1.13-1.20(m,4H),1.29(m,2H),1.40(m,1H),1.50-1.68(m,6H),1.75(m,2H),1.82-1.90(m,2H),1.94(s,3H),2.01-2.18(m,4H),2.23-2.32(m,3H),2.42(s,6H),2.35-2.50(m,1H),2.61(m,1H),2.79-3.00(m,3H),3.10-3.20(m,5H),3.28-3.40(m,19H,2*OCH3),3.43-3.48(m,3H),3.60(m,1H),3.74(d,3H),3.85-4.00(m,3H),4.14(d,1H),4.21-4.30(m,1H),4.48(m,2H),4.64-5.10(m,5H),6.86-7.60(m,8H)制備例4-17：化合物(VI-21)的制備除了使用在制備例3-12中得到的化合物(IV-16)(268mg，0.195mmol)來替代在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)之外，重復制備例4-12中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(132mg，46％)。LC-MSm/z:1521[M]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.48-0.50(m,6H),0.71-1.08(m,27H),1.16-1.22(m,4H),1.42-1.54(m,9H),1.60(m,1H),1.70(m,1H),1.94(s,3H),2.10-2.32(m,8H),2.32-2.46(m,6H),2.50(s,6H),2.78-3.10(m,8H),3.16(m,2H),3.21(m,1H),3.28-3.40(m,6H),3.62(s,1H),3.70(s,2H),3.86-4.00(m,5H),4.19(t,2H),4.38(m,2H),4.52(t,1H),4.60(m,1H),4.76(m,1H),4.88(m,1H),5.00(m,2H),5.08(m,1H),5.42(brs,2H),5.98(m,1H),6.81(d,1H),7.17(d,1H),7.28(dd,1H),7.50-7.70(m,3H),7.82(d,1H),8.10(d,1H),10.0(d,1H)制備例4-18：化合物(VI-22)的制備除了使用在制備例3-13中得到的化合物(IV-17)(440mg，0.33mmol)來替代在制備例3-7中得到的化合物(IV-11)之外，重復制備例4-12中相同的過程來得到標題化合物(296mg，60％)。LC-MSm/z:1492[M+1]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ0.47-0.62(m,5H),0.81-1.02(m,26H),1.13-1.20(m,3H),1.25-1.32(m,2H),1.40(m,1H),1.50-1.68(m,6H),1.72-1.78(m,2H),1.82-1.98(m,3H),1.96(s,3H),2.00-2.09(m,4H),2.25-2.35(m,5H),2.38-2.48(m,6H),2.850-2.90(m,3H),3.05-3.20(m,6H),3.26-3.35(m,9H,OCH3),3.40-3.48(m,6H,OCH3),3.50-3.60(m,2H),3.65-3.80(m,3H),3.90-4.18(m,5H),4.48(m,1H),4.64(m,1H),4.70-5.10(m,8H),7.09-7.58(m,8H)制備例4-19：化合物(VI-23)的制備將2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(12mg，0.083mmol)加入至在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)(37mg，0.027mmol)在5mL甲醇和1.5mL無水二甲基甲酰胺的溶液中，隨后在室溫下攪拌4小時。在真空下對反應混合物進行濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到固體形式的標題化合物(33mg，81％)。LC-MSm/z:1499[M+]+,1451[M+Na]+制備例4-20：化合物(VI-24)的制備除了使用在制備例3-15中得到的化合物(IV-19)(69mg，0.051mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(55mg，72％)。LC-MSm/z:1508.9[M+]+制備例4-21：化合物(VI-25)的制備除了使用在制備例3-16中得到的化合物(IV-20)(94mg，0.07mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到標題化合物(99mg，94％)。LC-MSm/z:1498[M+]+制備例4-22：化合物(VI-26)的制備除了使用在制備例3-17中得到的化合物(IV-21)(144mg，0.105mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(116mg，73％)。LC-MSm/z:1512[M+]+制備例4-23：化合物(VI-27)的制備除了使用在制備例3-18中得到的化合物(IV-22)(0.14g，0.099mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.11g，75％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.50-0.52(m,4H),0.65-0.76(m,6H),0.82-0.92(m,13H),1.08-1.24(18H),1.43-1.49(m,6H),1.54-1.82(m,3H),1.84-1.98(m,3H),2.10-2.19(m,6H),2.79-3.04(m,12H),3.15-3.24(m,3H),3.30-3.44(m,15H),3.87-3.89(m,3H),3.97-4.00(m,1H),4.08-4.86(m,8H),4.86-5.04(m,1H),5.10(s,2H),5.46(s,2H),6.03(t,1H),7.22-7.36(m,2H),7.62-7.65(d,1H),7.77-7.80(d,1H),7.87-7.89(m,2H),8.17-8.23(m,1H),8.48(brs,1H),10.11(s,1H)LC-MSm/z:1524.4[M+]+制備例4-24：化合物(VI-28)的制備除了使用在制備例3-19中得到的化合物(IV-23)(0.2g，0.15mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.06g，27％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.43-0.52(m,6H),0.69-0.76(m,7H),0.82-0.92(m,15H),1.02-1.06(m,7H),1.11-1.13(m,2H),1.18-1.23(m,4H),1.43-1.47(m,6H),1.54-1.65(m,1H),1.66-1.84(m,2H),1.89-1.98(m,3H),2.09-2.20(m,6H),2.91-3.03(m,10H),3.15-3.22(m,5H),3.33-3.46(m,15H),3.87-4.02(m,3H),4.15-4.95(m,8H),5.08(s,2H),5.44(s,2H),6.03(t,1H),7.07-7.16(m,2H),7.33-7.35(m,2H),7.62-7.70(d,2H),7.85-7.91(m,1H),7.98-8.07(m,1H),8.20(brs,1H),8.28-8.49(m,1H),10.10(s,1H)LC-MSm/z:1504.4[M+]+制備例4-25：化合物(VI-29)的制備除了使用在制備例3-20中得到的化合物(IV-24)(0.1g，0.1mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.08g，53％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.43-0.47(m,5H),0.48-0.50(d,1H),0.58-0.59(d,1H)0.69-0.76(m,3H),0.82-0.92(m,16H),1.05-1.09(m,6H),1.11-1.13(m,2H),1.16-1.23(m,4H),1.43-1.47(m,6H),1.54-1.65(m,1H),1.66-1.84(m,2H),1.89-1.98(m,3H),2.10-2.20(m,8H),2.31-2.43(m,2H),2.58-2.68(m,1H),2.70-2.82(m,3H),2.87-2.88(m,2H),2.95-3.00(m,4H),3.13-3.22(m,4H),3.31-3.46(m,16H),3.90-3.92(m,3H),3.97-4.00(m,1H),4.06-5.00(m,8H),5.10(s,2H),5.47(s,2H),6.10(t,1H),7.22-7.28(m,1H),7.33-7.43(m,2H),7.55-7.58(d,1H),7.88-7.99(m,2H),8.01-8.03(d,1H),8.22-8.54(m,2H),8.64(s,1H),10.15(s,1H)LC-MSm/z:1556.4[M+]+制備例4-26：化合物(VI-30)的制備除了使用在制備例3-21中得到的化合物(IV-25)(0.46g，0.33mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.49g，96％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.30-0.58(m,6H),0.59-0.78(m,8H),0.78-1.00(m,16H),1.05-1.32(m,6H),1.32-1.54(m,6H),1.54-1.64(m,1H),1.64-1.84(m,3H),1.84-2.05(m,3H),2.06-2.27(m,10H),2.27-2.43(m,4H),2.55-2.71(m,1H),2.71-2.85(m,2H),2.85-3.07(m,7H),3.09-3.18(m,3H),3.18-3.30(m,3H),3.74-3.88(m,6H),3.88-4.05(m,4H),4.06-4.22(m,2H),4.22-4.43(m,2H),4.43-4.53(m,1H),4.59-4.75(m,2H),4.96(s,2H),5.43(s,2H),5.78(s,1H),5.96-6.10(d,1H),7.01-7.13(d,1H),7.21-7.37(m,2H),7.41-7.48(s,1H),7.49-7.57(m,1H),7.57-7.75(m,3H),8.00-8.11(m,1H),10.00-10.20(brs,1H)LC-MSm/z:1535.5[M+]+制備例4-27：化合物(VI-31)的制備除了使用在制備例3-22中得到的化合物(IV-26)(0.24g，0.17mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.19g，73％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.37-0.58(m,9H),0.60-0.78(m,6H),0.78-0.97(m,16H),1.06-1.37(m,7H),1.37-1.53(m,6H),1.54-1.85(m,5H),1.86-2.03(m,3H),2.05-2.26(m,10H),2.26-2.43(m,3H),2.58-2.67(m,1H),2.68-2.84(m,2H),2.85-3.09(m,8H),3.10-3.24(m,6H),3.24-3.33(m,3H),3.62-3.78(m,1H),3.78-4.05(m,3H),4.05-4.24(m,2H),4.27-4.40(m,1H),4.46-4.61(m,1H),4.61-4.72(m,1H),4.72-4.89(m,1H),5.01(s,2H),5.44(s,2H),5.96-6.14(t,1H),7.21-7.37(m,2H),7.45-7.56(m,1H),7.56-7.74(m,4H),7.93-8.08(m,3H),8.08-8.19(m,1H),8.28-8.39(m,1H),8.49-8.61(m,1H),8.73(s,1H),10.14(brs,1H)LC-MSm/z:1535.5[M+]+制備例4-28：化合物(VI-32)的制備除了使用在制備例3-23中得到的化合物(IV-27)(0.21g，0.15mmol)來替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)之外，重復制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.21g，91％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.34-0.56(m,5H),0.64-0.78(m,6H),0.78-0.96(m,15H),0.96-1.07(m,2H),1.07-1.27(m,5H),1.29-1.39(m,1H),1.39-1.54(m,5H),1.54-1.65(m,1H),1.65-1.84(m,3H),1.84-2.03(m,3H),2.05-2.31(m,10H),2.31-2.44(m,2H),2.44-2.48(m,1H),2.58-2.61(m,2H),2.75-2.85(m,1H),2.86-3.08(m,7H),3.09-3.15(m,1H),3.24-3.55(m,14H),3.64-3.76(m,2H),3.77-3.86(m,2H),3.87-4.04(m,3H),4.04-4.14(m,2H),4.14-4.25(m,2H),4.33-4.40(m,1H),4.40-4.61(m,2H),4.61-4.76(m,1H),4.97(s,2H),5.44(s,2H),5.98-6.11(t,1H),6.82-6.94(m,1H),7.16-7.25(m,1H),7.25-7.37(m,2H),7.40-7.49(m,1H),7.49-7.68(m,3H),7.81-7.99(m,1H),7.99-8.12(m,1H),8.24-8.45(m,1H),10.12(brs,1H)LC-MSm/z:1535.5[M+]+制備例4-29：化合物(VI-33)的制備除了使用在制備例3-17中得到的化合物(IV-21)(0.28g，0.21mmol)和6-巰基己酸(0.07g，0.41mmol)來分別替代在制備例3-14中得到的化合物(IV-18)和2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸之外，重復在制備例4-19中相同的過程來得到固體形式的標題化合物(0.26g，81％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.64-0.79(m,5H),0.79-0.98(m,17H),0.98-1.14(m,4H),1.14-1.28(m,5H),1.28-1.41(m,6H),1.41-1.65(m,14H),1.65-1.79(m,2H),1.83-2.05(m,7H),2.05-2.32(m,13H),2.32-2.56(m,1H),2.57-2.88(m,10H),2.89-3.06(m,6H),3.06-3.24(m,3H),3.69-3.86(m,3H),3.86-4.09(m,3H),4.09-4.28(m,1H),4.29-4.48(m,2H),4.48-4.78(m,2H),5.04(s,2H),5.42(s,2H),6.03(brs,1H),7.01(brs,2H),7.14-7.45(m,2H),7.45-7.70(m,1H),7.83-8.06(m,2H),10.08(brs,1H)LC-MSm/z:1514.4[M+H]+,1536.4[M+Na]+制備例4-30：化合物(VI-34)的制備將2-(1-(巰基甲基)環(huán)丙基)乙酸(41mg，0.28mmol)加入至在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)(137mg，0.093mmol)在5mL甲醇和3mL無水二甲基甲酰胺的溶液中，隨后在室溫下攪拌15小時。在真空下對反應混合物進行濃縮，并且通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到固體形式的標題化合物(25mg，17％)。LC-MSm/z:1609.3[M+H]+制備例4-31：化合物(VI-35)的制備除了使用在制備例3-25中得到的化合物(IV-29)(0.19g，0.128mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(0.085g，41％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.42-0.55(m,6H),0.66-0.75(m,8H),0.81-0.87(m,14H),1.10-1.23(m,6H),1.37-1.49(m,6H),1.54-1.79(m,3H),1.91-1.98(m,7H),2.27(s,1H),2.30-2.37(m,1H),2.38-2.42(m,1H),2.44-2.45(m,1H),2.56-2.64(m,2H),2.75-2.86(m,6H),2.93-2.99(m,4H),3.12-3.24(m,4H),3.31-3.35(m,17H),3.91-4.06(m,6H),4.14-4.86(m,8H),4.98(s,2H),5.43(s,2H),5.97-5.98(t,1H),7.29-7.30(m,2H),7.58-7.60(d,2H),7.77-7.90(m,2H),7.93-8.10(m,2H),8.11-8.13(d,2H),8.46(brs,1H),10.01(s,1H),12.12(brs,1H)LC-MSm/z:1639.0[M+H]+,1661.0[M+Na]+制備例4-32：化合物(VI-36)的制備除了使用在制備例3-26中得到的化合物(IV-30)(0.18g，0.119mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(0.12g，61％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.44-0.52(m,5H),0.66-0.75(m,7H),0.82-0.92(m,12H),1.09-1.23(m,6H),1.43-1.47(m,5H),1.54-1.83(m,3H),1.94-1.97(m,4H),2.10-2.22(m,7H),2.25-2.26(d,1H),2.38-2.46(m,4H),2.56-2.67(m,2H),2.78-2.81(m,2H),2.86-2.91(m,2H),2.96-3.04(m,5H),3.10-3.24(m,4H),3.32-3.35(m,17H),3.91-3.93(m,3H),3.97-4.00(m,2H),4.13-4.65(m,8H),4.80-4.86(m,2H),4.94(s,2H),5.44(s,2H),6.00(t,1H),7.22-7.32(m,4H),7.54-7.56(d,2H),7.78-7.81(d,1H),7.85-8.00(m,2H),8.09-8.23(m,2H),8.47(brs,1H),10.04(s,1H),12.12(brs,1H)LC-MSm/z:1610.8[M+H]+,1632.8[M+Na]+制備例4-33：化合物(VI-37)的制備除了使用在制備例3-27中得到的化合物(IV-31)(0.2g，0.138mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(0.17g，77％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.00-0.57(m,6H),0.69-0.76(m,8H),0.82-0.87(m,14H),0.95-1.08(m,2H),1.09-1.18(m,2H),1.20-1.24(m,2H),1.43-1.49(m,6H),1.54-1.64(m,1H),1.81-2.05(m,4H),2.20-2.23(m,6H),2.27-2.38(m,9H),2.56-2.69(m,1H),2.70-2.81(m,2H),2.82-2.86(m,7H),2.96-3.00(m,5H),3.15-3.20(m,5H),3.27(s,3H),3.32-3.34(m,15H),3.89-4.00(m,3H),4.14-4.25(m,2H),4.26-4.82(m,8H),4.98(s,2H),5.43(s,2H),6.00-6.03(t,1H),7.06-7.16(m,2H),7.28-7.30(m,2H),7.59-7.69(m,3H),7.84-7.86(d,1H),7.97-8.05(m,1H),8.14-8.15(m,1H),8.23-8.28(m,1H),8.49(brs,1H),10.02(s,1H)LC-MSm/z:1619.6[M+H]+,1641.6[M+Na]+制備例4-34：化合物(VI-38)的制備除了使用在制備例3-28中得到的化合物(IV-32)(0.2g，0.137mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(0.17g，76％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.50-0.52(m,4H),0.69-0.76(m,8H),0.82-0.92(m,14H),1.03-1.05(m,2H),1.11-1.12(m,1H),1.18-1.24(m,3H),1.42-1.49(m,6H),1.52-1.64(m,1H),1.66-1.83(m,3H),1.86-2.02(m,4H),2.10-2.20(m,6H),2.28-2.38(m,8H),2.45-2.49(m,1H),2.56-2.68(m,1H),2.78-2.86(m,3H),2.95-3.10(m,8H),3.15-3.17(m,4H),3.28(s,3H),3.34-3.35(m,10H),3.95-4.00(m,3H),4.02-4.88(m,8H),4.94(s,2H),5.43(s,2H),6.03(t,1H),7.06-7.15(m,2H),7.22-7.29(m,4H),7.54-7.69(m,3H),7.89(brs,1H),7.87-7.99(d,1H),8.03-8.05(d,1H),8.19(brs,1H),8.30(m,1H),8.50(m,1H),10.04(s,1H)LC-MSm/z:1591.7[M+H]+,1613.7[M+Na]+制備例4-35：化合物(VI-39)的制備除了使用在制備例3-29中得到的化合物(IV-33)(0.15g，0.099mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(0.11g，70％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.41-0.54(m,6H),0.58-0.65(m,2H),0.68-0.76(m,3H),0.82-0.95(m,14H),1.09-1.23(m,8H),1.32-1.49(m,5H),1.59-1.61(m,1H),1.68-1.71(m,3H),1.87-2.04(m,3H),2.09-2.23(m,10H),2.32-2.39(m,3H),2.62-2.68(m,`H),2.74-3.25(m,15H),3.33-3.50(m,14H),3.90-3.97(m,3H),3.99-4.14(m,2H),4.16-4.89(m,8H),4.90(s,2H),5.45(s,2H),6.10(t,1H),7.22-7.28(m,3H),7.38-7.41(d,2H),7.55-7.85(d,2H),7.86-8.01(m,2H),8.03-8.05(m,1H),8.19-8.20(brs,1H),8.29(brs,1H),8.59(brs,1H),8.84(s,1H),10.08(s,1H)LC-MSm/z:1642.8[M+H]+,1664.8[M+Na]+制備例4-36：化合物(VI-40)的制備除了使用在制備例3-30中得到的化合物(IV-34)(1.3g，0.895mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(1.1g，74％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.40-0.50(m,7H),0.70-0.77(m,8H),0.82-0.89(m,18H),1.02-0.07(m,3H),1.18-1.29(m,3H),1.44-1.47(m,6H),1.54-1.76(m,4H),1.89-1.94(m,5H),2.10-2.23(m,12H),2.32-2.44(m,3H),2.61-2.64(m,2H),2.74-3.00(m,10H),3.13-3.17(m,3H),3.20-3.33(m,10H),3.90-4.00(m,4H),4.16-4.84(m,8H),4.95(s,2H),5.41(s,2H),6.01-6.02(t,1H),7.01-7.05(m,2H),7.28-7.29(m,4H),7.59-7.60(d,2H),7.84-7.99(m,2H),8.13-8.16(m,1H),8.23(brs,1H),10.04(s,1H)LC-MSm/z:1598.9[M+H]+,1621.9[M+Na]+制備例4-37：化合物(VI-41)的制備除了使用在制備例3-31中得到的化合物(IV-35)(0.14g，0.095mmol)來替代在制備例3-24中得到的化合物(IV-28)之外，重復在制備例4-30中相同的過程來得到標題化合物(0.072g，47％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.43-0.50(m,6H),0.66-0.76(m,8H),0.82-0.92(m,16H),1.09-1.23(m,6H),1.44-1.48(m,6H),1.65-1.81(m,3H),1.84-1.97(m,4H),2.01-2.30(m,10H),2.34-2.38(m,3H),2.56-2.64(m,2H),2.80-2.88(m,5H),2.91-3.04(m,5H),3.14-3.17(m,6H),3.27-3.39(m,17H),3.92-3.98(m,3H),4.15-4.86(m,8H),4.98(s,2H),5.42(s,2H),6.02-6.03(t,1H),7.21-7.36(m,4H),7.55-7.63(d,2H),7.77-8.01(m,4H),8.03-8.05(d,1H),8.13(brs,1H),8.45(brs,1H),10.01(s,1H)LC-MSm/z:1624.9[M+H]+,1646.9[M+Na]+制備例5：化學式VII-1、化學式VII-2、化學式VII-3和化學式VII-4的化合物的制備制備例5-1：化合物(VII-5)的制備在氬氣氣流下，將在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)(290mg，0.20mmol)溶解在10mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入N-羥基琥珀酰亞胺(35mg，0.30mmol)。將該反應混合物冷卻至0℃，并且在加入EDC·HCl(58mg，0.30mmol)之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，進行真空濃縮。將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并用5mL的1MHCl進行酸化，并且依次用30mL去離子水和30mL飽和鹽水進行洗滌。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到標題化合物(226mg，73％)。MALDI-TOFMSm/z:1562.9[M+Na]+制備例5-2：化合物(VII-6)的制備除了使用在制備例4-2中得到的化合物(VI-6)(60mg，0.041mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(53mg，83％)。MALDI-TOFMSm/z:1586.7[M+Na]+制備例5-3：化合物(VII-7)的制備除了使用在制備例4-3中得到的化合物(VI-7)(54mg，0.037mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(57mg，98％)。MALDI-TOFMSm/z:1607.4[M+K]+制備例5-4：化合物(VII-8)的制備除了使用在制備例4-4中得到的化合物(VI-8)(66mg，0.044mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(53mg，84％)。MALDI-TOFMSm/z:1617.0[M+Na]+制備例5-5：化合物(VII-9)的制備除了使用在制備例4-5中得到的化合物(VI-9)(71mg，0.046mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(66mg，88％)。MALDI-TOFMSm/z:1660.9[M+Na]+,1677.1[M+K]+制備例5-6：化合物(VII-10)的制備除了使用在制備例4-6中得到的化合物(VI-10)(53mg，0.037mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(38mg，67％)。MALDI-TOFMSm/z:1565.5[M+Na]+制備例5-7：化合物(VII-11)的制備除了使用在制備例4-7中得到的化合物(VI-11)(46mg，0.032mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(30mg，61％)。MALDI-TOFMSm/z:1568.9[M+Na]+,1585.0[M+K]+制備例5-8：化合物(VII-12)的制備除了使用在制備例4-8中得到的化合物(VI-12)(38mg，0.025mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(31mg，78％)。MALDI-TOFMSm/z:1643.7[M+Na]+,1660.2[M+K]+制備例5-9：化合物(VII-13)的制備除了使用在制備例4-9中得到的化合物(VI-13)(34mg，0.023mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(27mg，75％)。MALDI-TOFMSm/z:1627.7[M+Na]+,1644.8[M+K]+制備例5-10：化合物(VII-14)的制備除了使用在制備例4-10中得到的化合物(VI-14)(29mg，0.019mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(8mg，27％)。MALDI-TOFMSm/z:1625.4[M+Na]+,1642.0[M+K]+制備例5-11：化合物(VII-15)的制備除了使用在制備例4-11中得到的化合物(VI-15)(77mg，0.052mmol)來替代在制備例4-1中得到的化合物(VI-5)之外，重復制備例5-1中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(34mg，41％)。MALDI-TOFMSm/z:1603.8[M+Na]+,1621.2[M+K]+制備例5-12：化合物(VII-16)的制備在氬氣氣流下，將在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)(60mg，0.039mmol)溶解在3mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入N-羥基琥珀酰亞胺(18.1mg，0.157mmol)。將該反應混合物冷卻至0℃，并且在加入EDC·HCl(30.2mg，0.157mmol)之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，進行真空濃縮。將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并用5mL的1MHCl進行酸化，并且依次用30mL去離子水和30mL飽和鹽水進行洗滌。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到標題化合物(37mg，57％)。LC-MSm/z:1620.8[M+]+,1643.7[M+Na]+1HNMR(400MHz,CDCl3)δ0.48(m,2H),0.64(m,2H),0.71(m,6H),0.78-0.88(m,17H),0.92-0.97(m,4H),1.02-1.03(d,2H),1.16(m,3H),1.40-1.45(m,5H),1.50-1.78(m,4H),1.82-2.01(m,5H),2.16(S,6H),2.06-2.28(m,3H),2.39(m,1H),2.47(S,3H),2.44-2.50(m,1H),2.60(m,1H),2.70(m,1H),2.77(S,3H),2.82-2.94(m,4H),2.96-3.00(m,3H),3.10-3.17(m,7H),3.18-3.52(m,13H),3.54-3.70(m,2H),3.76(m,1H),3.84-3.99(m,3H),4.00-4.16(m,2H),4.33(m,1H),4.49(t,1H),4.54-4.68(m,2H),4.92(m,2H),5.38(s,2H),5.95(m,1H),7.00-7.06(m,2H),7.22-7.27(m,3H),7.50-7.55(m,2H),7.70-7.78(m,1H),7.98-8.06(m,1H),9.95(S,1H)制備例5-13：化合物(VII-17)的制備除了使用在制備例4-13中得到的化合物(VI-17)(39mg，0.026mmol)來替代在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)之外，重復制備例5-12中相同的過程來得到標題化合物(32mg，78％)。MALDI-TOFMSm/z:1595.8[M+Na]+制備例5-14：化合物(VII-18)的制備除了使用在制備例4-14中得到的化合物(VI-18)(266mg，0.170mmol)來替代在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)之外，重復制備例5-12中相同的過程來得到標題化合物(37mg，57％)。LC-MSm/z:1590[M+]+制備例5-15：化合物(VII-19)的制備除了使用在制備例4-15中得到的化合物(VI-19)(247mg，0.16mmol)來替代在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)之外，重復制備例5-12中相同的過程來得到標題化合物(197mg，77％)。LC-MSm/z:1607[M]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.54(m,1H),0.65(m,3H),0.70-0.78(m,5H),0.80-1.00(m,18H),1.00-1.08(m,6H),1.20(m,3H),1.47(m,5H),1.60(m,2H),1.94(m,5H),2.08-2.20(m,3H),2.25(d,6H),2.40(m,1H),2.60(s,6H),2.73-3.02(m,13H),2.84-3.42(m,17H,2*OCH3),3.60(m,1H),3.70(m,1H),3.80-4.06(m,3H),4.20(t,2H),4.38(m,2H),4.53(t,1H),4.66(m,2H),4.78(m,1H),4.88-5.10(m,3H),5.42(s,2H),6.00(m,1H),7.07(m,1H),7.27-7.37(m,3H),7.50-7.58(m,2H),7.65-7.85(m,1H),8.10(m,1H),9.95(s,1H)制備例5-16：化合物(VII-20)的制備除了使用在制備例4-16中得到的化合物(VI-20)(38mg，0.025mmol)來替代在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)之外，重復制備例5-12中相同的過程來得到標題化合物(25mg，62％)。LC-MSm/z:1603[M]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.48(m,1H),0.62(m,2H),0.65-0.78(m,6H),0.71-1.02(m,25H),1.16(m,2H),1.30-1.52(m,5H),1.53-1.82(m,5H),1.83-2.12(m,5H),2.14(d,6H),2.54(s,3H),2.58-3.02(m,14H),3.10-3.16(m,6H),3.18-3.20(m,7H),3.28-3.70(m,11H),3.72-3.86(m,1H),3.90-4.04(m,1H),4.03-4.29(m,2H),4.32(m,1H),4.42-4.78(m,3H),4.82-4.98(m,2H),5.06(m,1H),5.39(s,2H),5.96(m,1H),6.78(m,1H),7.03-7.26(m,4H),7.58(m,2H),7.79(d,1H),8.00(d,1H),8.07(d,1H),9.95(S,1H)制備例5-17：化合物(VII-21)的制備除了使用在制備例4-17中得到的化合物(VI-21)(132mg，0.09mmol)來替代在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)之外，重復制備例5-12中相同的過程來得到標題化合物(136mg，93％)。LC-MSm/z:1619[M]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.54(m,1H),0.63-0.68(m,3H),0.70-0.80(m,5H),0.81-0.90(m,17H),1.00-1.1.08(m,8H),1.22(m,3H),1.40-1.54(m,6H),1.56-1.74(m,3H),1.80-2.00(m,3H),2.26-2.30(m,7H),2.51(m,6H),2.56(s,1H),2.64-3.04(m,14H),3.13-3.30(m,6H),3.36(m,6H),3.62(s,1H),3.69(s,2H),3.87-4.04(m,4H),4.19(t,2H0,4.37(m,2H),4.52(t,1H),4.62(m,1H),4.68(m,1H),4.76(m,1H),4.89(m,1H),4.979m,2H),5.08(d,1H),5.42(s,2H),5.98(m,1H),6.81(d,1H),7.17(d,1H),7.30(m,1H),7.60(m,3H),7.82(d,1h),8.10(m,1H),10.00(d,1H),制備例5-18：化合物(VII-22)的制備除了使用在制備例4-18中得到的化合物(VI-22)(296mg，0.198mmol)來替代在制備例4-12中得到的化合物(VI-16)之外，重復制備例5-12中相同的過程來得到標題化合物(132mg，83％)。LC-MSm/z:1589[M]+1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.48(m,1H),0.60(m,2H),0.71(m,5H),0.71-0.88(m,17H),0.98(d,3H),0.93-1.08(m,3H),1.16(m,3H),1.37-1.45(m,5H),1.50-1.86(m,4H),1.91(m,3H),2.0-2.42(m,11H),2.68(m,1H),2.77(S,3H),2.82-3.02(m,5H),3.10-3.19(m,6H),3.21-3.30(m,7H),3.36-3.50(m,16H),3.54-3.72(m,3H),3.80-4.00(m,4H),4.15(t,1H),4.33(m,1H),4.49-4.71(m,3H),4.86(m,2H),5.04(m,1H),5.39(s,2H),5.96(m,1H),7.03-7.21(m,5H),7.55(m,2H),7.79(d,1H),8.06(d,1H)9.95(S,1H)制備例5-19：化合物(VII-23)的制備在氬氣氣流下，將在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)(33.4mg，0.022mmol)溶解在3mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入N-羥基琥珀酰亞胺(7.7mg，0.066mmol)。將該反應混合物冷卻至0℃，并且在加入EDC·HCl(12.8mg，0.066mmol)之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，進行真空濃縮。將剩余物溶解在50mL乙酸乙酯中，并用5mL的1MHCl進行酸化，并且依次用30mL去離子水和30mL飽和鹽水進行洗滌。用無水硫酸鈉對有機層進行干燥，并且在真空下進行濃縮。通過硅膠柱色譜法對濃縮物進行純化以得到標題化合物(32mg，91％)。LC-MSm/z:1596[M+]+,1619[M+Na]+制備例5-20：化合物(VII-24)的制備除了使用在制備例4-20中得到的化合物(VI-24)(55mg，0.037mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(49mg，84％)。LC-MSm/z:1606[M+]+制備例5-21：化合物(VII-25)的制備除了使用在制備例4-21中得到的化合物(VI-25)(65mg，0.043mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復在制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(56mg。82％)。LC-MSm/z:1592[M+]+制備例5-22：化合物(VII-26)的制備除了使用在制備例4-22中得到的化合物(VI-26)(114mg，0.075mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(94mg，78％)。LC-MSm/z:1609[M+]+制備例5-23：化合物(VII-27)的制備除了使用在制備例4-23中得到的化合物(VI-27)(91mg，0.0597mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復在制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(25mg，25％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.62-0.71(m,7H),0.78-0.87(m,12H),1.05-1.17(m,4H),1.38-1.43(m,4H),1.84-1.98(m,3H),2.10-2.14(m,5H),2.79-3.04(m,10H),3.09-3.13(m,3H),3.25-3.36(m,10H),3.38-3.49(m,19H),3.87-3.89(m,4H),3.98-4.00(m,2H),4.12-4.99(m,8H),5.05(s,2H),5.39(s,2H),6.00-6.03(t,1H),7.23-7.31(m,3H),7.56-7.58(d,2H),7.72-7.80(m,3H),8.06-8.08(d,2H),8.16-8.41(m,1H),10.01(s,1H)LC-MSm/z:1621.5[M+]+制備例5-24：化合物(VII-28)的制備除了使用在制備例4-24中得到的化合物(VI-28)(60mg，0.0399mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(14mg，23％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.62-0.71(m,7H),0.78-0.87(m,12H),1.05-1.17(m,4H),1.38-1.43(m,4H),1.84-1.98(m,3H),2.14-2.15(m,7H),2.24-2.33(m,6H),2.79-3.04(m,10H),3.09-3.13(m,3H),3.25-3.36(m,10H),3.38-3.49(m,19H),3.87-3.89(m,4H),3.98-4.00(m,2H),4.12-4.99(m,8H),5.05(s,2H),5.39(s,2H),5.97(t,1H),7.02-7.11(m,2H),7.28-7.29(m,1H),7.57-7.65(d,2H),7.88-7.98(m,1H),8.07-8.08(m,1H),8.22-8.44(m,1H),10.00(s,1H)LC-MSm/z:1601.7[M+]+制備例5-25：化合物(VII-29)的制備除了使用在制備例4-25中得到的化合物(VI-29)(83mg，0.053mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(23mg，25％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,2H),0.62-0.71(m,5H),0.78-0.87(m,9H),1.05-1.17(m,4H),1.38-1.43(m,4H),1.84-1.98(m,3H),2.14-2.15(m,4H),2.79-3.04(m,10H),3.09-3.13(m,3H),3.25-3.36(m,10H),3.38-3.49(m,19H),3.87-3.89(m,4H),3.98-4.00(m,2H),4.12-4.99(m,8H),5.05(s,2H),5.39(s,2H),5.97(t,1H),7.18-7.24(m,1H),7.29-7.37(m,2H),7.57-7.58(m,1H),7.78-8.07(m,5H),8.22-8.46(m,1H),8.58(s,1H),10.02(s,1H)LC-MSm/z:1653.4[M+]+制備例5-26：化合物(VII-30)的制備除了使用在制備例4-26中得到的化合物(VI-30)(0.48g，0.31mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(0.44g，86％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.44-0.54(m,1H),0.55-0.75(m,10H),0.75-0.96(m,17H),0.96-1.04(m,1H),1.04-1.25(m,6H),1.271.51(m,6H),1.511.82(m,3H),1.822.02(m,3H),2.02-2.21(m,6H),2.21-2.36(m,3H),2.52-2.64(m,1H),2.65-2.75(m,4H),2.75-2.80(m,5H),2.80-2.84(m,2H),2.84-2.93(m,4H),2.93-3.06(m,4H),3.06-3.22(m,4H),3.25-3.28(m,3H),3.38-3.46(m,2H),3.48-3.64(m,1H),3.71-3.86(m,7H),3.86-4.04(m,4H),4.04-4.21(m,2H),4.21-4.31(m,1H),4.31-4.44(m,2H),4.44-4.56(m,1H),4.56-4.71(m,2H),4.71-4.87(m,1H),4.93(s,2H),5.38(s,2H),5.87-6.01(t,1H),6.95-7.09(d,1H),7.18-7.33(m,2H),7.37-7.54(m,1H),7.54-7.68(m,3H),7.71-7.85(d,1H),8.02-8.12(d,1H),9.96(brs,1H)LC-MSm/z:1633[M+]+制備例5-27：化合物(VII-31)的制備除了使用在制備例4-27中得到的化合物(VI-31)(0.18g，0.12mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(0.13g，68％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.38-0.59(m,8H),0.60-0.79(m,8H),0.79-0.98(m,16H),1.05-1.36(m,7H),1.36-1.52(m,6H),1.54-1.86(m,5H),1.86-2.02(m,3H),2.04-2.28(m,10H),2.28-2.44(m,3H),2.59-2.68(m,1H),2.69-2.86(m,6H),2.86-3.09(m,8H),3.10-3.25(m,6H),3.25-3.43(m,3H),3.71-3.86(m,1H),3.88-4.07(m,2H),4.07-4.26(m,2H),4.31-4.43(m,1H),4.48-4.74(m,2H),4.74-4.90(m,1H),4.97(s,2H),5.41(m,2H),5.86-6.13(t,1H),7.16-7.43(m,2H),7.43-7.55(m,1H),7.56-7.75(m,2H),7.75-7.92(m,1H),7.92-8.21(m,4H),8.21-8.44(m,1H),8.44-8.66(m,1H),8.72(s,1H),9.38-9.82(brs,1H),10.01(brs,1H)LC-MSm/z:1622[M+]+制備例5-28：化合物(VII-32)的制備除了使用在制備例4-28中得到的化合物(VI-32)(0.21g，0.14mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(0.19g，88％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.43-0.59(m,2H),0.59-0.78(m,8H),0.79-1.00(m,16H),1.00-1.08(m,3H),1.08-1.29(m,5H),1.29-1.64(m,9H),1.64-1.73(m,3H),1.74-2.04(m,4H),2.04-2.44(m,10H),2.56-2.64(m,2H),2.65-2.92(m,12H),2.92-3.08(m,6H),3.08-3.23(m,5H),3.23-3.32(m,3H),3.42-3.54(m,1H),3.55-3.64(m,1H),3.68-3.88(m,3H),3.88-4.06(m,2H),4.06-4.26(m,2H),4.26-4.46(m,2H),4.46-4.71(m,2H),4.74-4.88(m,1H),4.96(s,2H),5.41(s,2H),5.90-6.08(t,1H),6.74-7.04(m,1H),7.10-7.38(m,3H),7.38-7.68(m,4H),7.72-7.88(d,1H),8.01-8.18(d,1H),8.18-8.35(m,1H),10.00(brs,1H)LC-MSm/z:1602[M+]+制備例5-29：化合物(VII-33)的制備除了使用在制備例4-29中得到的化合物(VI-33)(0.26g，0.17mmol)來替代在制備例4-19中得到的化合物(VI-23)之外，重復制備例5-19中相同的過程來得到乳白色固體形式的標題化合物(0.14g，52％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.53-0.94(m,28H),0.95-1.28(m,9H),1.28-1.74(m,18H),1.76-2.25(m,13H),2.27-2.43(m,1H),2.54-2.84(m,16H),2.84-3.03(m,5H),3.03-3.21(m,7H),3.60-3.82(m,2H),3.82-4.00(m,3H),4.05-4.24(m,1H),4.29-4.45(m,1H),4.45-4.78(m,2H),5.01(s,2H),5.39(s,2H),5.90-6.09(t,1H),6.97(brs,2H),7.09-7.43(m,2H),7.43-7.70(m,2H),7.70-7.87(m,1H),8.00-7.33(m,2H),10.01(brs,1H)LC-MSm/z:1610[M+]+制備例5-30：化合物(VII-34)的制備在氬氣氣流下，將在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)(25mg，0.016mmol)溶解在3mL無水二甲基甲酰胺中，并且加入N-羥基琥珀酰亞胺(7.2mg，0.062mmol)。將該反應混合物冷卻至0℃，并且在加入EDC·HCl(11.9mg，0.062mmol)之后，在室溫下攪拌15小時。在反應完全后，進行真空濃縮。通過硅膠柱色譜法對剩余物進行純化以得到標題化合物(20mg，76％)。LC-MSm/z:1706.9[M+H]+,1728.9[M+Na]+制備例5-31：化合物(VII-35)的制備除了使用在制備例4-31中得到的化合物(VI-35)(0.074g，0.0452mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.049g，62.4％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.63-0.76(m,12H),0.81-0.86(m,18H),1.02-1.04(d,4H),1.11-1.14(m,4H),1.18-1.22(m,2H),1.42-1.49(m,6H),1.94-1.97(m,3H),2.18-2.19(m,6H),2.732.89(m,13H),2.93-2.99(m,5H),3.14-3.21(m,5H),3.31-3.39(m,17H),3.91-4.03(m,5H),4.14-4.85(m,8H),4.98(s,2H),5.42(s,2H),5.96-5.98(t,1H),7.27-7.30(m,3H),7.58-7.59(d,2H),7.77-7.87(m,2H),7.94-8.03(m,2H),8.08-8.11(d,1H),8.46(brs,1H),10.01(s,1H)LC-MSm/z:1735.4[M+H]+,1758.4[M+Na]+制備例5-32：化合物(VII-36)的制備除了使用在制備例4-32中得到的化合物(VI-36)(0.11g，0.0664mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.079g，69.6％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.63-0.76(m,7H),0.82-0.92(m,12H),1.02-1.04(d,1H),1.09-1.24(m,7H),1.42-1.49(m,8H),1.91-1.99(m,4H),2.11-2.19(m,8H),2.81-2.83(m,10H),2.99-3.14(m,6H),3.17-.21(m,5H),3.32-3.35(m,20H),3.92-3.93(m,4H),3.97-4.04(m,2H),4.13-4.85(m,8H),4.94(s,2H),5.43(s,2H),6.00-6.03(t,1H),7.27-7.32(m,5H),7.58-7.61(d,2H),7.77-7.96(m,3H),8.10-8.12(m,1H),8.47(brs,1H),10.02(s,1H)LC-MSm/z:1708.4[M+H]+,1730.4[M+Na]+制備例5-33：化合物(VII-37)的制備除了使用在制備例4-33中得到的化合物(VI-37)(0.16g，0.096mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.12g，71％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.70-0.75(m,8H),0.82-0.87(m,14H),1.03-1.05(m,4H),1.08-1.14(m,1H),1.18-1.23(m,4H),1.44-1.49(m,7H),2.08-2.20(m,10H),2.28-2.37(m,8H),2.77-2.89(m,13H),2.93-3.00(m,6H),3.14-3.20(m,5H),3.28(s,3H),3.32-3.34(m,18H),3.88-4.04(m,4H),4.08-4.87(m,8H),4.97(s,2H),5.42(s,2H),5.99-6.00(t,1H),7.05-7.15(m,2H),7.28-7.30(m,2H),7.59-7.69(m,2H),7.80-7.83(d,1H),7.97-8.05(m,1H),8.10-8.11(m,1H),8.23-8.28(m,1H),8.49(brs,1H),10.02(s,1H)LC-MSm/z:1716.5[M+H]+,1740.5[M+Na]+制備例5-34：化合物(VII-38)的制備除了使用在制備例4-34中得到的化合物(VI-38)(0.15g，0.093mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.1g，67％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.63-0.66(m,3H),0.69-0.76(m,8H),0.82-0.92(m,14H),1.03-1.05(m,2H),1.11-1.12(m,1H),1.18-1.24(m,3H),1.44-1.49(m,7H),2.13-2.20(m,9H),2.28-2.37(m,7H),2.73-2.89(m,7H),2.93-3.03(m,9H),3.15-3.19(m,5H),3.28(s,3H),3.31-3.35(m,15H),3.85-3.87(m,1H),3.95-4.04(m,3H),4.16-4.88(m,8H),4.94(s,2H),5.42(s,2H),5.99-6.02(t,1H),7.06-7.15(m,2H),7.27-7.29(m,4H),7.58-7.63(m,3H),7.81-7.83(d,1H),7.87-8.04(m,1H),8.10-8.11(d,1H),8.30-8.50(m,1H),10.02(s,1H)LC-MSm/z:1687.6[M+H]+,1709.5[M+Na]+制備例5-35：化合物(VII-39)的制備除了使用在制備例4-35中得到的化合物(VI-39)(0.12g，0.073mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.058g，46％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.48-0.53(m,1H),0.58-0.59(m,1H),0.64-0.76(m,8H),0.82-0.92(m,15H),1.03-1.04(d,2H),1.11-1.22(m,6H),1.42-1.49(m,6H),1.86-1.97(m,3H),2.11-2.20(m,9H),2.73-2.95(m,10H),2.98-3.13(m,6H),3.14-3.21(m,5H),3.33-3.37(m,2H),3.90-3.92(m,4H),3.98-4.04(m,2H),4.14-4.80(m,8H),4.94(s,2H),5.42(s,2H),6.00-6.01(t,1H),7.22-7.29(m,4H),7.38-7.42(d,1H),7.59-7.61(d,2H),7.81-7.83(d,1H),7.89-7.96(m,2H),8.00-8.03(d,1H),8.09-8.12(d,1H),8.28-8.51(m,1H),8.64(s,1H),10.02(s,1H),LC-MSm/z:1740.4[M+H]+,1762.3[M+Na]+制備例5-36：化合物(VII-40)的制備除了使用在制備例4-36中得到的化合物(VI-40)(0.1g，0.063mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.072g，68％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.62-0.69(m,2H),0.70-0.77(m,7H),0.82-0.89(m,18H),1.02-0.07(m,3H),1.18-1.29(m,3H),1.44-1.47(m,6H),2.19-2.21(m,10H),2.61-2.64(m,2H),2.74-3.00(m,10H),3.17-3.18(m,7H),3.25-3.33(m,25H),3.90-4.01(m,5H),4.16-4.84(m,8H),4.95(s,2H),5.40(s,2H),6.01-6.02(t,1H),7.01-7.05(m,2H),7.26-7.29(m,4H),7.58-7.60(d,2H),7.79-7.82(m,1H),7.94-7.99(m,2H),8.08-8.10(m,1H),10.00(s,1H)LC-MSm/z:1697.2[M+H]+,1719.1[M+Na]+制備例5-37：化合物(VII-41)的制備除了使用在制備例4-37中得到的化合物(VI-41)(0.062g，0.038mmol)來替代在制備例4-30中得到的化合物(VI-34)之外，重復制備例5-30中相同的過程來得到標題化合物(0.037g，56％)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.51-0.53(m,1H),0.63-0.77(m,13H),0.81-0.91(m,17H),1.03-1.04(d,2H),1.09-1.22(m,6H),1.42-1.49(m,6H),1.95-1.97(m,3H),2.11-2.19(m,7H),2.77-2.89(m,13H),3.13-3.17(m,7H),3.32-3.36(m,18H),3.92-3.93(m,4H),4.00-4.04(m,2H),4.14-4.85(m,8H),4.99(s,2H),5.42(s,2H),5.88-6.00(t,1H),7.28-7.41(m,4H),7.58-7.65(d,2H),7.77-8.06(m,4H),8.10-8.11(d,1H),8.21-8.45(m,1H),10.00(s,1H)LC-MSm/z:1722.5[M+H]+,1744.3[M+Na]+實施例：化學式I-1、化學式I-2、化學I-3和化學式I-4的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的制備實施例1：偶聯(lián)物(I-5)的制備在與pH7.5的PBS(含有10mM磷酸鹽、137mMNaCl、2.7mMKCl)進行交換處理之后，用2.5ml的pH7.5的PBS和7.5mL的pH8.5的0.05M硼酸鈉進一步處理5mL曲妥珠單抗(Herceptin)溶液(4.0g/mL，27μM)。隨后，將曲妥珠單抗溶液與在制備例5-1中得到的化合物(VII-5)(2mg，0.001mmol，10當量)在3.75mL的20％DMSO中的溶液在25℃下進行混合，并同時攪拌4小時。當反應完全時，通過0.45μm過濾器來過濾該反應混合物。將濾液放置到離心過濾器(centrifugalfilter,AmiconUltra-1530K)中，并且利用pH7.5的PBS進行兩次或三次濃縮，直至移除有機溶劑和未反應的材料。將所得到的濃縮物放置到平衡有pH7.5的PBS的SephadexG-25樹脂填充柱(30×300mm)中，并且通過MPLC(280nm，UV范圍0.08，流速10mL/min)進行純化以得到13.5mg標題化合物(1.28mg/mL，總計10.5mL，68％)。利用UV分光儀，通過測量在三個波長(280nm、320nm//350nm)處的吸光度來確定所得到的化合物的濃度。實施例2：偶聯(lián)物(I-6)的制備除了使用在制備例5-2中得到的化合物(VII-6)(4.2mg，0.003mmol，15當量)來替代在制備例5-1中得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：12.1mg(1.1mg/mL，總計11mL，45％)。實施例3：偶聯(lián)物(I-7)的制備除了使用在制備例5-3中得到的化合物(VII-7)(3.12mg，0.002mmol，15當量)來替代在制備例5-1中得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：13.7mg(1.71mg/mL，總計8mL，68％)。實施例4：偶聯(lián)物(I-8)的制備除了使用在制備例5-4中所得到的化合物(VII-8)(3.20mg，0.002mmol，15當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：13.9mg(1.54mg/mL，總計9mL，68％)。實施例5：偶聯(lián)物(I-9)的制備除了使用在制備例5-5中所得到的化合物(VII-9)(3.27mg，0.002mmol，15當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：15.3mg(1.53mg/mL，總計10mL，77％)。實施例6：偶聯(lián)物(I-10)的制備除了使用在制備例5-6中所得到的化合物(VII-10)(4.17mg，0.003mmol，15當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：14.2mg(1.29mg/mL，總計11mL，53％)。實施例7：偶聯(lián)物(I-11)的制備除了使用在制備例5-7中所得到的化合物(VII-11)(3.08mg，0.002mmol，15當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：9.5mg(1.19mg/mL，總計8mL，48％)。實施例8：偶聯(lián)物(I-12)的制備除了使用在制備例5-8中所得到的化合物(VII-12)(5.4mg，0.003mmol，10當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：50mg(2.5mg/mL，總計20mL，100％)。實施例9：偶聯(lián)物(I-13)的制備除了使用在制備例5-9中所得到的化合物(VII-13)(5.7mg，0.004mmol，20當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：15.2mg(1.01mg/mL，總計15mL，56％)。實施例10：偶聯(lián)物(I-14)的制備除了使用在制備例5-10中所得到的化合物(VII-14)(4.3mg，0.003mmol，15當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：19.4mg(1.55mg/mL，總計12.5mL，72％)。實施例11：偶聯(lián)物(I-15)的制備除了使用在制備例5-11中所得到的化合物(VII-15)(2.3mg，0.0015mmol，10當量)來替代在制備例5-1中所得到的化合物(VII-5)之外，重復實施例1中的相同的過程來得到標題化合物：20.1mg(1.6mg/mL，總計12.5mL，92％)。實施例12：偶聯(lián)物(I-16)的制備在與pH7.5的PBS(含有10mM磷酸鹽、137mMNaCl、2.7mMKCl)進行交換處理之后，用2.5ml的pH7.5的PBS和7.5mL的pH8.5的0.05M硼酸鈉進一步處理5mL曲妥珠單抗(Herceptin)溶液(5.4g/mL，36μM)。隨后，將曲妥珠單抗溶液與在制備例5-12中得到的化合物(VII-16)(4.4mg，0.003mmol，15當量)在3.75mL的20％DMSO中的溶液在25℃下進行混合，并同時攪拌4小時。當反應完全時，通過0.45μm過濾器來過濾該反應混合物。將濾液放置到離心過濾器(centrifugalfilter,AmiconUltra-1530K)中，并且利用pH7.5的PBS進行兩次或三次濃縮，直至移除有機溶劑和未反應的材料。將所得到的濃縮物放置到平衡有pH7.5的PBS的SephadexG-25樹脂填充柱(30×300mm)，并且通過MPLC(280nm，UV范圍0.08，流速10mL/min)進行純化以得到標題化合物22.5mg(1.73mg/mL，總計13mL，83％)。利用UV分光儀，通過測量在三個波長(280nm、320nm、350nm)處的吸光度來確定所得到的化合物的濃度。實施例13：偶聯(lián)物(I-17)的制備除了使用在制備例5-13中得到的化合物(VII-17)(5.6mg，0.004mmol，20當量)來替代在制備例5-13中得到的化合物(VII-16)之外，重復實施例12中的相同的過程來得到標題化合物：25.6mg(2.05mg/mL，總計12.5mL，95％)。實施例14：偶聯(lián)物(I-18)的制備除了使用在制備例5-14中得到的化合物(VII-18)(4.0mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-12中得到的化合物(VII-16)之外，重復實施例12中的相同的過程來得到標題化合物：23.8mg(1.98mg/mL，總計12mL，99％)。實施例15：偶聯(lián)物(I-19)的制備除了使用在制備例5-14中得到的化合物(VII-19)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-12中得到的化合物(VII-16)之外，重復實施例12中的相同的過程來得到標題化合物：20.4mg(1.86mg/mL，總計11mL，82％)。實施例16：偶聯(lián)物(I-20)的制備除了使用在制備例5-16中得到的化合物(VII-20)(3.8mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-12中得到的化合物(VII-16)之外，重復實施例12中的相同的過程來得到標題化合物：18.9mg(1.72mg/mL，總計11mL，79％)。實施例17：偶聯(lián)物(I-21)的制備除了使用在制備例5-17中得到的化合物(VII-21)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-12中得到的化合物(VII-16)之外，重復實施例12中的相同的過程來得到標題化合物：19.8mg(1.8mg/mL，總計11mL，80％)。實施例17：偶聯(lián)物(I-22)的制備除了使用在制備例5-18中得到的化合物(VII-22)(3.8mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-12中得到的化合物(VII-16)之外，重復實施例12中的相同的過程來得到標題化合物：13.0mg(1.18mg/mL，總計11mL，54％)。實施例19：偶聯(lián)物(I-23)的制備在與pH7.5的PBS(含有10mM磷酸鹽、137mMNaCl、2.7mMKCl)進行交換處理之后，用2.5ml的pH7.5的PBS和7.5mL的pH8.5的0.05M硼酸鈉進一步處理5mL曲妥珠單抗(Herceptin)溶液(5.4g/mL，36μM)。隨后，將曲妥珠單抗溶液與在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)(5.7mg，0.0036mmol，20當量)在3.75mL的20％DMSO中的溶液在25℃下進行混合，并同時攪拌4小時。當反應完全時，通過0.45μm過濾器來過濾該反應混合物。將濾液放置到離心過濾器(centrifugalfilter,AmiconUltra-1530K)中，并且利用pH7.5的PBS進行兩次或三次濃縮，直至移除有機溶劑和未反應的材料。將所得到的濃縮物放置到平衡有pH7.5的PBS的SephadexG-25樹脂填充柱(30×300mm)，并且通過MPLC(280nm，UV范圍0.08，流速10mL/min)進行純化以得到標題化合物：16.9mg(1.21mg/mL，總計15mL，67％)。利用UV分光儀，通過測量在三個波長(280nm、320nm、350nm)處的吸光度來確定所得到的化合物的濃度。實施例20：偶聯(lián)物(I-24)的制備除了使用在制備例5-20中得到的化合物(VII-24)(4.3mg，0.0027mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：19.2mg(1.54mg/mL，總計11.5mL，71％)。實施例21：偶聯(lián)物(I-25)的制備除了使用在制備例5-21中得到的化合物(VII-25)(5.74mg，0.0036mmol，20當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：14.7mg(1.23mg/mL，總計12mL，54％)。實施例22：偶聯(lián)物(I-26)的制備除了使用在制備例5-22中得到的化合物(VII-26)(4.38mg，0.0027mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物23.7mg(1.58mg/mL?？傆?4mL，88％)。實施例23：偶聯(lián)物(I-27)的制備除了使用在制備例5-23中得到的化合物(VII-27)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：21.1mg(1.15mg/mL，總計14mL，85％)。實施例24：偶聯(lián)物(I-28)的制備除了使用在制備例5-24中得到的化合物(VII-28)(3.9mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：17.3mg(1.58mg/mL，總計13mL，70％)。實施例25：偶聯(lián)物(I-29)的制備除了使用在制備例5-25中得到的化合物(VII-29)(4.1mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：9.2mg(0.92mg/mL，總計10mL，24.8％)。實施例26：偶聯(lián)物(I-30)的制備除了使用在制備例5-26中得到的化合物(VII-30)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：16.7mg(1.19mg/mL，總計14mL，67％)。實施例27：偶聯(lián)物(I-31)的制備除了使用在制備例5-27中得到的化合物(VII-31)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：21mg(1.61mg/mL，總計13mL，85％)。實施例28：偶聯(lián)物(I-32)的制備除了使用在制備例5-28中得到的化合物(VII-32)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：12.3mg(0.88mg/mL，總計14mL，50％)。實施例29：偶聯(lián)物(I-33)的制備除了使用在制備例5-29中得到的化合物(VII-33)(4.0mg，0.0025mmol，15當量)來替代在制備例5-19中得到的化合物(VII-23)之外，重復實施例19中的相同的過程來得到標題化合物：15.3mg(1.18mg/mL，總計13mL，62％)。實施例30：偶聯(lián)物(I-34)的制備在與pH7.5的PBS(含有10mM磷酸鹽、137mMNaCl、2.7mMKCl)進行交換處理之后，用2.5ml的pH7.5的PBS和7.5mL的pH8.5的0.05M硼酸鈉進一步處理5mL曲妥珠單抗(Herceptin)溶液(5.4g/mL,36μM)。隨后，將曲妥珠單抗溶液與在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)(5.7mg，0.0036mmol，20eqs)在3.75mL的20％DMSO中的溶液在25℃下進行混合，并同時攪拌18小時。當反應完全時，通過0.45μm過濾器來過濾該反應混合物。將濾液放置到離心過濾器(centrifugalfilter,AmiconUltra-1530K)中，并且利用pH7.5的PBS進行兩次或三次濃縮，直至移除有機溶劑和未反應的材料。將所得到的濃縮物放置到平衡有pH7.5的PBS的SephadexG-25樹脂填充柱(30×300mm)，并且通過MPLC(280nm，UV范圍0.08，流速10mL/min)進行純化以得到標題化合物：26.4mg(2.20mg/mL，總計12mL，98％)。利用UV分光儀，通過測量在三個波長(280nm、320nm、350nm)處的吸光度來確定所得到的化合物的濃度。實施例31：偶聯(lián)物(I-35)的制備除了使用在制備例5-31中得到的化合物(VII-35)(4.2mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：14.5mg(1.21mg/mL，總計12mL，61％)。實施例32：偶聯(lián)物(I-36)的制備除了使用在制備例5-32中得到的化合物(VII-36)(4.2mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：17.9mg(1.63mg/mL，總計11mL，75％)。實施例33：偶聯(lián)物(I-37)的制備除了使用在制備例5-33中得到的化合物(VII-37)(4.1mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：11.8mg(1.48mg/mL，總計8mL，50％)。實施例34：偶聯(lián)物(I-38)的制備除了使用在制備例5-34中得到的化合物(VII-38)(4.0mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：15.8mg(1.21mg/mL，總計13mL，66％)。實施例35：偶聯(lián)物(I-39)的制備除了使用在制備例5-35中得到的化合物(VII-39)(4.2mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：18.3mg(1.52mg/mL，總計12mL，77％)。實施例36：偶聯(lián)物(I-40)的制備除了使用在制備例5-36中得到的化合物(VII-40)(4.6mg，0.0027mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：12.7mg(1.15mg/mL，總計11mL，47％)。實施例37：偶聯(lián)物(I-41)的制備除了使用在制備例5-37中得到的化合物(VII-41)(4.1mg，0.0024mmol，15當量)來替代在制備例5-30中得到的化合物(VII-34)之外，重復實施例30中的相同的過程來得到標題化合物：16.1mg(1.24mg/mL，總計13mL，67％)。測試例1：通過蛋白質(zhì)質(zhì)譜測定DAR通過用內(nèi)切糖苷酶PNGaseF在37℃下處理在制備例中所制備的各個抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物15±3小時來移除N-連接的聚糖。用包括安捷倫1200HPLC和安捷倫6530Q-TOF的LC-ESI-MS系統(tǒng)對該去糖基的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物進行分析。在安捷倫Zorbax柱(300SB-C18，2.1mm×75mm，5μm)上，利用在0.1％甲酸的水溶液/0.1％甲酸的乙腈溶液的梯度洗脫來完成抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的色譜分離，并且在900m/z至4000m/z的范圍內(nèi)，在每秒1譜的掃描速率下得到m/z(質(zhì)荷比)數(shù)據(jù)，并進行去卷積，其中，使用分子量和每個峰相對于積分峰(D0、D1、D2...Dn)的豐度％(百分比)來計算DAR。根據(jù)下式來計算各個峰的相對豐度。通過將每個峰的豐度除以峰的總豐度來計算每個峰的相對豐度％。根據(jù)下式，利用相對豐度％來計算抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的DAR，并且在表1至表4中示出結(jié)果。表1表2表3表4測試例2：SEC-HPLC分析利用尺寸排阻色譜法(sizeexclusionchromatography:SEC-HPLC)，進行檢查以查看抗體在連接至藥物期間，抗體是否異常地破碎或聚集。這種異常蛋白結(jié)構(gòu)可用作間接指示所制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物質(zhì)量的指數(shù)，其對抗體的固有性質(zhì)(包括抗原特異性親和力、體內(nèi)藥代動力學等)具有不利的影響。利用SEC-HPLC分析在制備例中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的正?？贵w結(jié)構(gòu)比例。在下表5至表8中示出了該結(jié)果。表5觀察到，在實施例2、實施例6和實施例7中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物中具有98.21％至98.55％的正?？贵w結(jié)構(gòu)，與預連接抗體的正?？贵w結(jié)構(gòu)(99.16％)相當。表6觀察到，在實施例12至實施例18中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物中具有92.43％至99.25％的正常抗體結(jié)構(gòu)，與預連接抗體的正?？贵w結(jié)構(gòu)(99.48％)相當。表7觀察到，在實施例19至實施例29中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物中具有90.68％至99.13％的正?？贵w結(jié)構(gòu)，這與預連接抗體的正?？贵w結(jié)構(gòu)(99.48％)相當。表8觀察到，在實施例30至實施例37中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物中具有97.00％至98.93％的正常抗體結(jié)構(gòu)，這與預連接抗體的正常抗體結(jié)構(gòu)(99.48％)相當。測試例3：IEF分析利用等電點聚集(isoelectricfocusing:IEF)分析來分析在制備例2、制備例4、制備例6和制備例7中分別制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)、(I-8)、(I-10)和(I-11)的等電點(pI)值，并且在下表9中列出了結(jié)果。表9從表9中可以看出，與DAR結(jié)果一致，檢測到在其上偶聯(lián)有更多藥物的偶聯(lián)物(I-10)至偶聯(lián)物(I-11)具有較低的pI條帶。也就是說，連接至抗體的藥物數(shù)目增加。測試例4：體外細胞毒性檢測通過體外評價針對過表達HER-2的乳腺癌細胞系(BT-474)的抗增殖活性，來分析抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的抗癌效力。作為對照，單獨使用用于制備抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的曲妥珠單抗。曲妥珠單抗是針對在乳腺癌細胞中特異性表達的HER-2抗原的單克隆抗體。將BT-474細胞以1x104個細胞/孔的密度接種至96-孔微孔板上，并且與各種濃度的對照曲妥珠單抗或各種濃度的在制備例中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物孵育5天。通過比色劑(CCK-8)測量吸光度來間接評價孵育5天后活細胞的數(shù)目。濃度和效力的相關(guān)性被擬合為4-參數(shù)邏輯曲線，并且在曲線擬合中利用EC50(50％的有效濃度)來評價相對效力。在圖1至圖17和表10至表13中示出了所得到的結(jié)果。如表10所示，與對照曲妥珠單抗相比，實施例2、實施例6和實施例7制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的EC50減小了13.2至17.8倍，表明了本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物甚至在小得多的劑量下也能夠發(fā)揮出與對照物相同的療效，同時相應地降低了副作用。此外，如圖1至圖3的4-參數(shù)邏輯曲線中所描繪的，與對照曲妥珠單抗相比，制備例2、制備例4、制備例6和制備例7中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物獲得了較低的吸光度，表明了本發(fā)明的偶聯(lián)物在抗增殖活性中優(yōu)于對照曲妥珠單抗。這是基于這樣的事實：不僅通過抗體-依賴的抑制活性來抑制腫瘤細胞，而且還通過偶聯(lián)至抗體的藥物的細胞毒性效果來抑制腫瘤細胞。表10從表11中的數(shù)據(jù)中可知，與對照曲妥珠單抗相比，實施例1至實施例7所制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的EC50降低了7.7至34.2倍，表明了本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物甚至在小得多的劑量下也能夠發(fā)揮出與對照物相同的療效，同時相應地降低了副作用此外，如圖4至圖7的4-參數(shù)邏輯曲線中所描繪的，與對照曲妥珠單抗相比，制備例1至制備例7中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物獲得了較低的吸光度，表明了本發(fā)明的偶聯(lián)物在抗增殖活性中優(yōu)于對照曲妥珠單抗。這是基于這樣的事實：不僅通過抗體-依賴的抑制活性來進一步抑制腫瘤細胞，而且還通過偶聯(lián)至抗體的藥物的細胞毒性效果來進一步抑制腫瘤細胞。表11樣品EC50(ng/ml)相對效力(倍數(shù))曲妥珠單抗98.61偶聯(lián)物(I-16)2.8834.2曲妥珠單抗1101偶聯(lián)物(I-18)14.37.7曲妥珠單抗96.61偶聯(lián)物(I-19)5.1818.6曲妥珠單抗92.31偶聯(lián)物(I-20)5.7216.1曲妥珠單抗96.61偶聯(lián)物(I-21)7.0913.6曲妥珠單抗92.31偶聯(lián)物(I-22)6.713.8如表12所示，與對照曲妥珠單抗相比，實施例19至實施例29所制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的EC50降低了0.5至33.6倍。對于抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-23)、(I-25)、(I-26)和(I-33)，檢測到EC50值處于低于對照組的20倍或更高的水平，表明了本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物甚至在低于20倍或更高倍數(shù)的小劑量下也能夠發(fā)揮出與對照物相同的療效，同時相應地降低了副作用。此外，如圖8至圖13的4-參數(shù)邏輯曲線中所描繪的，與對照曲妥珠單抗相比，制備例19至制備例29中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物獲得了較低的吸光度，表明了本發(fā)明的偶聯(lián)物在抗增殖活性中優(yōu)于對照曲妥珠單抗。這是基于這樣的事實：不僅通過抗體-依賴的抑制活性來進一步抑制腫瘤細胞，而且還通過偶聯(lián)至抗體的藥物的細胞毒性效果來進一步抑制腫瘤細胞。表12樣品EC50(ng/mL)相對效力(倍數(shù))曲妥珠單抗1021偶聯(lián)物(I-23)4.7321.6曲妥珠單抗1061偶聯(lián)物(I-24)68.41.5曲妥珠單抗1071偶聯(lián)物(I-25)4.7522.2曲妥珠單抗1011偶聯(lián)物(I-26)4.1724.2曲妥珠單抗97.91偶聯(lián)物(I-32)12.77.7曲妥珠單抗971偶聯(lián)物(I-33)2.8933.6由表10的數(shù)據(jù)明顯可知，與對照曲妥珠單抗相比，實施例30至實施例36所制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物的EC50降低了8.9至22.6倍，表明了本發(fā)明的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物甚至在小得多的劑量下也能夠發(fā)揮出與對照物相同的療效，同時相應地降低了副作用。此外，如圖14至圖17的4-參數(shù)邏輯曲線中所描繪的，與對照曲妥珠單抗相比，制備例30至制備例36中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物獲得了較低的吸光度，表明了本發(fā)明的偶聯(lián)物在抗增殖活性中優(yōu)于對照曲妥珠單抗。這是基于這樣的事實：不僅通過抗體-依賴的抑制活性來進一步抑制腫瘤細胞，而且還通過偶聯(lián)至抗體的藥物的細胞毒性效果來進一步抑制腫瘤細胞。表13樣品EC50(ng/ml)相對效力(倍數(shù))曲妥珠單抗1041偶聯(lián)物(I-34)11.39.2曲妥珠單抗1041偶聯(lián)物(I-35)10.310.1曲妥珠單抗1041偶聯(lián)物(I-36)5.7418.1曲妥珠單抗1161偶聯(lián)物(I-37)138.9曲妥珠單抗1161偶聯(lián)物(I-38)5.1322.6曲妥珠單抗94.71偶聯(lián)物(I-39)713.5曲妥珠單抗94.71偶聯(lián)物(I-40)4.4221.4測試例5：藥代動力學(PK)檢測將在制備例2和制備例4中分別制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)和(I-8)以及對照的曲妥珠單抗各自以20mg/kg的劑量靜脈注射至Balb/cSlc-nu小鼠一次，并且在一個月內(nèi)檢測藥代動力學(Phamacokinetics:PK)。觀察到抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)和(I-8)分別具有8.3天和7.9天的半衰期，與對照的曲妥珠單抗的半衰期(8.6天)并沒有顯著的差異，這意味著細胞毒性藥物在偶聯(lián)期間并沒有直接連接至新生Fc區(qū)域(FcRn)(影響抗體自身PK的位點)。表14測試例6：動物模型中的療效研究對于動物模型療效測試，將在制備例2、6和7中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)、(I-10)和(I-11)分別以3種不同的劑量(1.25mg/kg、5mg/kg和20mg/kg)一次靜脈注射至之前移植了過表達HER-2的乳腺癌細胞(BT-474)的裸鼠。監(jiān)測注射后56天的腫瘤的體積和最終重量。磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)被用作陰性對照，而以20mg/kg的劑量注射曲妥珠單抗作為陽性對照。圖18和圖19中示出了結(jié)果。由圖18和圖19可知，與陰性對照相比，陽性對照曲妥珠單抗顯著地降低了腫瘤大小；而與陽性對照相比，抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-6)、(I-10)和(I-11)更加顯著地縮小了腫瘤大小。具體地，在注射偶聯(lián)物之后28天，移植的腫瘤完全消失，并且在之后并沒有復發(fā)。將制備例12中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-16)以三種不同的劑量分別一次靜脈注射至之前移植了過表達HER-2的乳腺癌細胞(BT-474)的裸鼠。監(jiān)測注射后28天的腫瘤的體積和最終重量。磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)被用作陰性對照，而以5mg/kg的劑量注射曲妥珠單抗作為陽性對照。圖20和圖21中示出了結(jié)果。由圖20和圖21中的數(shù)據(jù)可知，與陰性對照相比，陽性對照曲妥珠單抗顯著地降低了腫瘤大小，而與陽性對照相比，抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-16)進一步降低了腫瘤大小。此外，將制備例19、21和22中制備的抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-23)、(I-25)和(I-26)分別以三種不同的劑量(0.05mg/kg、0.5mg/kg和5mg/kg)一次靜脈注射至之前移植了過表達HER-2的乳腺癌細胞(BT-474)的裸鼠。監(jiān)測注射后28天的腫瘤的體積和最終重量。磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)被用作陰性對照，而以5mg/kg的劑量注射曲妥珠單抗作為陽性對照。圖22和圖27中示出了結(jié)果。由圖20至圖27中的數(shù)據(jù)可知，與陰性對照相比，陽性對照曲妥珠單抗顯著地降低了腫瘤大小，而與陽性對照相比，抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-23)、(I-25)和(I-26)更加顯著性地降低了腫瘤大小。在其它實驗中，將制備例30中制備的(I-34)以三種不同的劑量(0.05mg/kg、0.5mg/kg和5mg/kg)一次靜脈注射至移植了過表達HER-2的乳腺癌細胞系(BT-474)的裸鼠。監(jiān)測注射后28天的腫瘤的體積和最終重量。磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)被用作陰性對照，而以5mg/kg的劑量注射曲妥珠單抗作為陽性對照。圖28和圖29中示出了結(jié)果。由圖28至圖29中的數(shù)據(jù)可知，與陰性對照相比，陽性對照曲妥珠單抗顯著地降低了腫瘤大小，而與陽性對照相比，抗體-連接子-藥物偶聯(lián)物(I-34)進一步降低了腫瘤大小。