本發(fā)明涉及n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺硫酸鹽、其i型結晶及制備方法。

背景技術：

無機磷酸鹽(pi)是骨礦物質(zhì)的必要組分，人體磷酸鹽的大約80％在體外的胞外基質(zhì)(如骨和牙)中，18％在細胞內(nèi)，2％在細胞外液中。正常生理條件下，小腸攝取過量的磷酸鹽，磷酸鹽的體內(nèi)平衡依賴于腎臟的排泄和重吸收功能來調(diào)節(jié)。體內(nèi)磷酸鹽過多或過少均導致機體功能紊亂而致?。喝邕^低則導致低磷酸鹽血癥、軟骨病、佝僂病和心臟功能紊亂；過高則誘發(fā)高磷酸鹽血癥、軟組織和血管鈣化以及腎功能障礙。磷酸鹽過高是心血管疾病和慢性腎病(ckd)患者的死亡率增高的重要因素。

小腸對磷酸鹽的吸收主要通過兩種途徑，被動運輸和主動運輸，其中主動運輸就是通過鈉依賴型的鈉/磷共轉運通道蛋白進行的。最近的研究表明，磷酸鈉協(xié)同轉運蛋白2b(npt2b)是治療慢性腎病(ckd)中高磷酸鹽血癥的重要靶點(jpharmsci.2011sep；100(9):3719-30)。磷酸鈉協(xié)同轉運蛋白包括i型家族(npt1、npt3、npt4)，ii型家族(npt2a，npt2b，npt2c)，iii型家族(pit1，pit2)。其中npt2b在整個上消化道均有表達，介導一半左右的食物中磷酸鹽的吸收，用于維持磷酸鹽的體內(nèi)平衡。npt2b在其他組織中也有表達，npt2b抑制劑有必要保持不可吸收的特性和能在腸腔內(nèi)保持的特點(currentpharmaceuticaldesign,2012,18,1434-1445)。研究發(fā)現(xiàn)，npt2b突變引起的npt2b失活會導致常染色體隱性遺傳病肺泡微結石(pam)的發(fā)生，暗示npt2b在肺泡的主要功能是移除多余的磷酸鹽。

激素如雌性激素、糖皮質(zhì)激素、成纖維細胞生長因子23(fgf23)、1,25(oh)維他命d3(1,25(oh)2d3)和飲食攝入的磷酸鹽均影響小腸刷狀緣膜的磷攝取或npt2b的表達。小腸內(nèi)npt2b的缺失也導致fgf23表達的減少。fgf23的主要功能是通過降低磷酸鹽共轉運蛋白的表達和促進1,25(oh)2d3的合成來調(diào)節(jié)腎臟磷酸鹽的排泄，npt2b作為磷酸鹽傳感器，調(diào)控體內(nèi)激素的平衡，維持全身系統(tǒng)的平衡。

本申請人的wo2016026372提供了一種如下所示的腸2b型磷酸鈉協(xié)同轉運蛋白抑制劑，其化學名為n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該化合物表現(xiàn)出在結腸和空腸部位有優(yōu)異的效果和作用。

本領域技術人員知道，自由堿形式的化合物由于其特定的缺陷往往不能直接藥用，多數(shù)藥物需要提供其它形式的活性化合物來改進這些缺陷，將自由堿形式的化合物轉化為其可藥用鹽即為一種常用的方法。另外，藥用的活性成分的晶型結構往往影響到該藥物的化學穩(wěn)定性，結晶條件及儲存條件的不同有可能導致化合物的晶型結構的變化，有時還會伴隨著產(chǎn)生其他形態(tài)的晶型。一般來說，無定型的藥物產(chǎn)品沒有規(guī)則的晶型結構，往往具有其它缺陷，比如產(chǎn)物穩(wěn)定性較差，析晶較細，過濾較難，易結塊，流動性差等。因此，改善上述產(chǎn)物的各方面性質(zhì)是很有必要的，我們需要深入研究找到晶型純度較高并且具備良好化學穩(wěn)定的新晶型。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲酰基)-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺硫酸鹽(如式(i)所示)，

式(i)所示化合物的可由硫酸和n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺反應得到。

式(i)所示化合物相對于n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺來說，其溶解度和生物利用度大大提高，更加適合藥用。

式(i)所示化合物在不同結晶條件下得到的一系列結晶產(chǎn)物，對所得結晶產(chǎn)物進行了x-衍射及dsc檢測，發(fā)現(xiàn)式(i)所示化合物在常規(guī)的結晶條件下，可以得到一種穩(wěn)定性良好的晶型，我們稱其為i型結晶。本申請中的i型結晶的dsc圖譜顯示在<350℃無吸熱峰，x-射線粉末衍射圖譜如圖1所示，使用cu-ka輻射，以2θ角度和晶面間距(d值)表示的x-射線粉末衍射圖譜，其中在約3.40(25.93)，5.45(16.21)，8.22(10.75)，10.55(8.38)，10.97(8.06)，13.68(6.47)，14.30(6.19)，18.16(4.88)，19.66(4.51)和20.52(4.33)附近有特征峰。

本發(fā)明還提供了制備n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺硫酸鹽的i型結晶的方法。該方法包括如下步驟：

(1)將硫酸和n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺，或者將任意晶型或無定型的式(i)所示化合物加熱溶解于適量的有機溶劑中，冷卻、析晶，所述有機溶劑選自二甲基亞砜/水、n，n-二甲基甲酰胺/水、n，n-二甲基乙酰胺/水；

(2)過濾結晶并洗滌，干燥。

在本發(fā)明的一個實施方案中，優(yōu)選的混合有機溶劑為二甲基亞砜/水的混合溶劑，二者比例沒有特別限制，在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，二者體積比為1：1。

重結晶的方法沒有特別限定，可以用通常的重結晶操作方法進行。例如，可以用原料式(i)所示化合物在有機溶劑加熱溶解后慢慢冷卻析晶，結晶完成后，經(jīng)過濾干燥，即可得到所需要的結晶。需特別說明的是，所濾取的結晶體通常在減壓下，在30～100℃左右，優(yōu)選在40～60℃加熱條件下進行減壓真空干燥，就能達到去除重結晶溶劑的效果。

通過差示掃描熱分析(dsc)、x-衍射圖譜測定，對得到的式(i)所示化合物結晶體進行了晶型研究，同時對所得結晶的溶劑殘留進行了檢測。

按照本發(fā)明的方法制備的式(i)所示化合物i型結晶不含有或僅含有較低含量的殘留溶劑，符合國家藥典規(guī)定的有關醫(yī)藥產(chǎn)品殘留溶劑的限量要求，因而本發(fā)明的結晶可以較好地作為醫(yī)藥活性成分使用。

經(jīng)研究表明，本發(fā)明制備的式(i)所示化合物的i型結晶在高溫、高濕的條件下穩(wěn)定性良好，在光照條件下穩(wěn)定性有所下降，需避光保存，且在研磨、壓力和受熱等條件下，晶型穩(wěn)定性良好，能夠滿足生產(chǎn)運輸儲存的藥用要求，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可重復可控，能夠適應于工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說明

圖1式(i)所示化合物i型結晶的x-射線粉末衍射圖譜。

圖2式(i)所示化合物i型結晶的dsc圖譜。

具體實施方式

以下將結合實施例更詳細地解釋本發(fā)明，本發(fā)明的實施例僅用于說明本發(fā)明的技術方案，并非限定本發(fā)明的實質(zhì)和范圍。

實驗所用的測試儀器

1、dsc譜

儀器型號：mettlertoledodsc1stare^esystem

吹掃氣：氮氣

升溫速率：10.0℃/min

溫度范圍：40-350℃

2、x-射線衍射譜

儀器型號：brukerd8focusx-射線粉末衍射儀

射線：單色cu-kα射線(λ＝1.5406)

掃描方式：θ/2θ，掃描范圍：2-40°

電壓：40kv，電流：40ma

實施例1

n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺的合成

第一步：2-氰基-n-(4-苯乙基苯基)乙酰胺的合成

將4-苯乙基苯胺a(2.15g，10.91mmol，采用公知的方法文獻“journalofmedicinalchemistry，56(5)，2139-2149；2013”制備而得)和2-氰基乙酸(1.39g，16.37mmol)溶解于5mln，n-二甲基甲酰胺中，降溫至0℃，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(3.14g，16.37mmol)，升至室溫，攪拌反應2h。加入10ml水，攪拌30min，固體析出，過濾，濾餅烘干，得到粗品標題產(chǎn)物2-氰基-n-(4-苯乙基苯基)乙酰胺b(2.68g，白色固體)，產(chǎn)物不經(jīng)純化直接進行下一步反應。

msm/z(esi):263.3[m-1]

第二步：2-氰基-2-亞環(huán)己基-n-(4-苯乙基苯基)乙酰胺的合成

將粗品2-氰基-n-(4-苯乙基苯基)乙酰胺b(2.68g，10.13mmol)和環(huán)己酮(2.88g，29.38mmol)溶解于6ml甲苯中，加入嗎啡啉(900mg，10.33mmol)，升溫至120℃，攪拌反應2h。反應液減壓濃縮，用乙醚和石油醚打漿純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物2-氰基-2-亞環(huán)己基-n-(4-苯乙基苯基)乙酰胺c(2.52g，淺褐色固體)，產(chǎn)率：72.2％。

msm/z(esi):345.2[m+1]

第三步：2-氨基-n-(4-苯乙基苯基)-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-3-甲酰胺的合成

將2-氰基-2-亞環(huán)己基-n-(4-苯乙基苯基)乙酰胺c(2.52g，7.32mmol)和硫(246mg，7.68mmol)溶解于10mln，n-二甲基甲酰胺中，加入嗎啡啉(670mg，7.68mmol)，升溫至50℃，攪拌反應2h。加入50ml飽和氯化鈉溶液，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(50ml×1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用異丙醇打漿純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物2-氨基-n-(4-苯乙基苯基)-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-3-甲酰胺d(1.69g，黃色固體)，產(chǎn)率：61.2％。

msm/z(esi):377.2[m+1]

第四步：n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺的合成

將2-氨基-n-(4-苯乙基苯基)-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-3-甲酰胺d(200mg，0.53mmol)和3-(甲基(2-嗎啡啉乙基)氨甲酰基)苯甲酸(292mg，1mmol，采用專利申請“wo2012006477”公開的方法制備而得)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(153mg，0.80mmol)和4-二甲氨基吡啶(97mg，0.80mmol)溶解于5mln，n-二甲基甲酰胺中，升溫至30℃，攪拌反應12h。加入30ml水，用乙酸乙酯萃取(30ml×3)，合并有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌(50ml×1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，用硅膠柱色譜法以洗脫劑(二氯甲烷和甲醇體系)純化所得殘余物，得到標題產(chǎn)物n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺e(174mg，黃色固體)，產(chǎn)率：50.3％。

msm/z(esi):651.5[m+1]

¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.99-8.10(m,2h),7.59-7.77(m,2h),7.50-7.59(m,1h),7.46(d,2h),7.27-7.32(m,1h),7.04-7.23(m,5h),3.91(s,1h),3.76(s,3h),3.58(s,2h),3.39(s,1h),3.04(s,4h),2.88(s,3h),2.74(s,5h),2.50(s,2h),2.24(s,2h),1.90(s,4h).

實施例2

取(500mg，0.77mmol)n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺(按實施例1制備)于25ml單口瓶中，加入5ml二甲基亞砜，40℃加熱溶清，再加入5ml水，然后滴加硫酸水溶液(27.5％，356mg，1.00mmol)，滴畢，40℃反應1h，停止加熱，攪拌析晶。次日，抽濾，干燥得固體492mg，收率為85.6％。該結晶樣品的x-射線衍射見圖1，其中在約3.40(25.93)，5.45(16.21)，8.22(10.75)，10.55(8.38)，10.97(8.06)，13.68(6.47)，14.30(6.19)，18.16(4.88)，19.66(4.51)和20.52(4.33)附近有特征峰。dsc譜圖見圖2，dsc在<350℃無吸熱峰，將此晶型定義為i晶型。

實施例3

取(500mg，0.77mmol)n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺(按實施例1制備)于25ml單口瓶中，加入5mln，n-二甲基甲酰胺，40℃加熱溶清，再加入5ml水，然后滴加硫酸水溶液(27.5％，356mg，1.00mmol)，滴畢，40℃反應1h，停止加熱，攪拌析晶。次日，抽濾，干燥得固體473mg，收率為82.3％。該結晶樣品的x-射線衍射和dsc圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為i晶型。

實施例4

取(500mg，0.77mmol)n¹-甲基-n¹-(2-嗎啡啉乙基)-n³-(3-(4-苯乙基苯基氨基甲?；?-4，5，6，7-四氫苯并[b]噻吩-2-基)間苯二甲酰胺(按實施例1制備)于25ml單口瓶中，加入5mln，n-二甲基乙酰胺，40℃加熱溶清，再加入5ml水，然后滴加硫酸水溶液(27.5％，356mg，1.00mmol)，滴畢，40℃反應1h，停止加熱，攪拌析晶。次日，抽濾，干燥得固體435mg，收率為75.7％。該結晶樣品的x-射線衍射和dsc圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為i晶型。

實施例5

取(500mg，0.67mmol)式(i)所示化合物(按實施例2制備)于25ml單口瓶中，加入5ml二甲基亞砜，40℃加熱溶清，再加入5ml水，40℃攪拌10min，停止加熱，攪拌析晶。次日，抽濾，干燥得固體403mg，收率為80.6％。該結晶樣品的x-射線衍射和dsc圖譜經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為i晶型。

實施例5

取(500mg，0.67mmol)式(i)所示化合物(按實施例2制備)于25ml單口瓶中，加入1.5mln，n-二甲基乙酰胺，40℃加熱溶清，再加入5ml水，40℃攪拌10min，停止加熱，攪拌析晶。次日，抽濾，干燥得固體412mg，收率為82.4％。該結晶樣品的x-射線衍射和dsc譜圖經(jīng)研究比對，確定產(chǎn)物為i晶型。

實施例6

將實施例2所得的i型結晶產(chǎn)物樣品敞口平攤放置，考察在光照(4500lux)，加熱(40℃，60℃)，高濕(rh75％，rh90％)條件下樣品的穩(wěn)定性。考察取樣時間為5天和10天，hplc檢測純度見表1。

表1、式(i)所示化合物i晶型樣品的穩(wěn)定性比較

穩(wěn)定性考察結果表明式(i)所示化合物i型結晶在敞口放置的條件下，經(jīng)光照、高溫和高濕條件下的穩(wěn)定性發(fā)現(xiàn)，高濕、高溫對其影響不大，光照條件下有所下降，需避光保存。

實施例7

將按實施例2方法制得的式(i)所示化合物i型結晶進行研磨、加熱及壓片處理，研究結果表明晶型穩(wěn)定，詳細的實驗數(shù)據(jù)參見下表2。

表2、式(i)所示化合物i晶型特殊穩(wěn)定性研究