專利名稱：樂果分子印跡膜的制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種樂果分子印跡膜的制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
樂果是一種常用的含硫有機膦殺蟲劑，屬膽堿酯酶抑制劑，是具有觸殺和胃毒作用的內(nèi)吸性殺蟲劑和殺螨劑，廣泛應(yīng)用于谷物、棉花、蔬菜，果樹等農(nóng)作物上的螨類、蚜科、粉虱科等多種害蟲的防治。而目前文獻(xiàn)報道的測定方法有分光光度法、化學(xué)發(fā)光法、高效毛細(xì)管電泳法等?；瘜W(xué)發(fā)光法通常需要在酸性或堿性條件下水解使其產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，而毛細(xì)管電泳法及高效液相色譜法需要昂貴的儀器和經(jīng)過專業(yè)訓(xùn)練的操作人員，所用時間也較長。因此，建立一種測試費用低、操作簡便、靈敏度高的測試方法，因此，研究樂果的測定方法對提高農(nóng)藥的利用率及控制用量有著非常重要的意義。 分子印跡技術(shù)(Molecular Imprinting technique, MIT)是指為獲得在空間和結(jié)合位點上與某一分子(模板分子)完全匹配的膜的制備技術(shù)，具有很高的特異性和選擇性?，F(xiàn)有的分子印跡膜都需經(jīng)干燥、研磨、破碎、篩分等過程，這些過程很容易破壞膜的結(jié)合位點，操作費時費力，易造成膜粒子形態(tài)不規(guī)整。將分子印跡技術(shù)與膜分離領(lǐng)域結(jié)合制成的分子印跡膜，兼具分子印跡和膜技術(shù)的特點，不需要研磨等制備過程，且克服了膜技術(shù)中無法實現(xiàn)特定物質(zhì)選擇性分離的缺點，實現(xiàn)了特異地將目標(biāo)分子從混合物中分離純化的目的。目前，樂果子印跡膜的制備并利用其進(jìn)行樂果分析檢測的方法未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種對樂果分子有特異性吸附作用的分子印跡膜的制備方法，并利用該分子印跡膜進(jìn)行樂果的檢測。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種樂果分子印跡膜的制備方法，包括以下步驟I)、采用相轉(zhuǎn)化法制備聚丙烯腈基膜聚丙烯腈干燥處理后與氯化鋰按照4飛1的重量比一同加入N-甲基吡咯烷酮中，于55飛5°C攪拌(例如為磁力攪拌)，待聚丙烯腈與氯化鋰充分溶解后，得溶液；每Ig氯化鋰配用25 28ml的N-甲基吡咯烷酮；溶液經(jīng)過濾脫泡后于55飛5°C靜置I. 5 2. 5h ;然后進(jìn)行刮膜，所得的聚丙烯腈基膜放入去離子水中浸泡3(T40h ；2)、樂果分子印跡膜的制備以樂果作為模板分子，以甲基丙烯酸(MAA)作為功能單體，以乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)作為交聯(lián)劑；以偶氮二異丁腈(AIBN)作為引發(fā)劑；將0. 5 mmol的樂果溶于4. 5^5. 5ml的甲醇中,待樂果完全溶解后,得樂果溶液；在樂果溶液中加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二異丁腈，均勻攪拌后，得膜液；用于制備樂果溶液的樂果甲基丙烯酸乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA) =1:2 6 :38 42的摩爾比；每份由0. 5 mmol樂果制備而得的樂果溶液配用35 45 mg的偶氮
二異丁腈；將步驟I)所得浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；將膜液通氮氣脫氧，得脫氧后膜液；將干燥后基膜先放入脫氧后膜液中浸泡I. 5^2. 5h，然后再真空密封后于55飛5 V聚合45飛Oh ;將經(jīng)上述聚合處理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脫至洗脫液檢測不出模板分子為止(甲醇/乙酸能破壞氫鍵，快速洗脫模板分子)，得樂果分子印跡膜；甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的體積濃度為88、2%。備注說明每4.8 5.2g (最佳為5g)聚丙烯腈制備而得的聚丙烯腈基膜配用由0. 5 mmol樂果制成的膜液。備注說明樂果分子印跡膜可放在甲醇中保存，使用前取出在室溫條件下自然干 燥(室溫下干燥l 2h)。作為本發(fā)明的樂果分子印跡膜的制備方法的改進(jìn)刮膜時，控制膜的厚度為100^200 u m ;從而減少膜的溶脹帶來的影響。本發(fā)明還同時提供了上述樂果分子印跡膜的用途測定液態(tài)待測品中樂果的濃度。本發(fā)明還同時提供了一種測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法，包括以下步驟I)、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，依次進(jìn)行以下步驟①、制備鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液用去離子水配制濃度為I. 0*10_3mol/L的鈣黃綠素溶液；用去離子水配制濃度為I. 0*l(T3mol/L的氯化鈀溶液；取鈣黃綠素溶液和氯化鈀溶液各1ml，然后用去離子水定容至IOOml ;于室溫下反應(yīng)下3飛小時，得鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液；②、在樂果、鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液和pH=7. 98的磷酸鹽緩沖溶液中加去離子水定容配制成一系列濃度的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液，每IOml的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有Iml鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液和ImL的pH=7. 98的磷酸鹽緩沖溶液；③、采用熒光分光光度法(全稱為基于鈣黃綠素-Pd2+熒光探針的熒光分光光度法)，在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處，檢測所述一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光值，以樂果濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，以熒光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；2)、獲得液態(tài)待測品中樂果的濃度，依次進(jìn)行以下步驟①、將液態(tài)待測品濾過樂果分子印跡膜；②、將步驟①所得的樂果分子印跡膜在室溫下放置22 26h，使液態(tài)待測品中的樂果被樂果分子印跡膜充分吸附；③、用甲醇和乙酸的混合液對吸附后分子印跡膜進(jìn)行洗脫，得洗脫液；甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的體積濃度為88、2% ；將洗脫液旋干后加入Iml鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液和ImL的pH=7. 98的磷酸鹽緩沖溶液，并用去離子水定容至10ml，得待測液；④、采用熒光分光光度法，將待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值，代入步驟I)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得待測液的樂果濃度；
⑤、按照液態(tài)待測品與待測液的體積比，換算獲得液態(tài)待測品的樂果濃度。作為本發(fā)明的測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法的改進(jìn)步驟I)中配制成樂果濃度分別為0. 051 mg/L、0.102 mg/L、0.153 mg/L、0.204 mg/L、0. 255 mg/L這一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液；所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)的公式為Y=2173. 3X-39. 685，X代表樂果濃度(mg/L)，Y代表熒光值。在本發(fā)明的樂果分子印跡膜的制備方法中步驟I)中的聚丙烯腈干燥處理為將聚丙烯腈于55飛5°C真空干燥22 26 h ;干燥處理后的聚丙烯腈與氯化鋰加入N-甲基吡咯烷酮后，在55飛5°C磁力攪拌1(T14小時，確 保聚丙烯腈與氯化鋰充分溶解。用刮刀(例如為200 Pm的工字型刮刀)在玻璃板上刮膜，空氣中停留一定時間(約I飛分鐘)后，將玻璃板浸入一定溫度(2(T30°C)的去離子水中；待膜成型后，在室溫下用去離子水浸泡36 h，中間換一次水。其可在甲醇溶液中保存?zhèn)溆?。備注說明在本發(fā)明中，應(yīng)當(dāng)盡量減小膜的厚度，從而減少膜的溶脹帶來的影響。因為超濾膜過厚在水中可能產(chǎn)生一定的溶脹，對水通量和截留率產(chǎn)生影響。超濾膜過薄，會導(dǎo)致實際生產(chǎn)的難度。本發(fā)明所設(shè)定的厚度為lOOlOOym能同時避免上述缺陷。在步驟2)中發(fā)明人通過實驗獲得了模板分子樂果與功能單體MAA的用量比。功能單體與印跡分子之間存在著匹配性，即功能單體與模板分子之間的非共價作用越強，兩者形成的復(fù)合物越穩(wěn)定，其構(gòu)型在聚合過程中越易保持，制得的分子印跡空穴對印跡分子的識別能力越強。樂果與MAA可選比例為1:2飛的摩爾比，最佳比例為1:4摩爾比，分子印跡膜對樂果的吸附效果最佳。在甲醇和乙酸的混合液中，最佳為甲醇/乙酸=9/1 (v/v)0將本發(fā)明所得的樂果分子印跡膜進(jìn)行如下的性能檢測I)、穩(wěn)定性檢測將樂果分子印跡膜放入80°C的蒸餾水中加熱2 h，結(jié)果表明對膜的截留影響并不大，說明本發(fā)明的樂果分子印跡膜的耐熱性能也較好；2)、耐酸堿能力檢測將分子印跡膜分別置于0. IM的HCl、HAc、NaOH溶液浸泡2h后，用蒸餾水清洗干凈，測試分子印跡膜分離性能(截留率)，研究分子印跡膜的耐酸堿能力。分子印跡膜經(jīng)酸溶液浸泡后，截留率有所下降，但在弱酸時能基本保持不變，說明分子印跡膜耐酸性較好，但過強酸度還是會使分子印跡膜對樂果的截留率有明顯下降；而分子印跡膜無法在堿溶液中穩(wěn)定存在，在NaOH溶液中發(fā)生溶脹，耐堿性較差。綜上所述，本發(fā)明制備的樂果分子印跡膜，由于膜材料中存在大量的氰基，遇堿發(fā)生水解，使膜材料無法在堿溶液中穩(wěn)定存在，在NaOH溶液中發(fā)生溶脹，耐堿性較差，這是由膜材料本身的性質(zhì)決定的，因此在實際應(yīng)用及存儲時應(yīng)避免分子印跡膜長時間暴露于堿性環(huán)境中。在中性與弱酸性環(huán)境中，膜性能穩(wěn)定。在本發(fā)明的測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法中，在pH 7.98磷酸鹽緩沖溶液中，Pd2+與鈣黃綠素形成物質(zhì)的量比為1:1的配合物導(dǎo)致熒光試劑鈣黃綠素?zé)晒鈴姸肉?。向上述溶液中加入樂果，樂果與Pd2+作用形成比鈣黃綠素-Pd2+穩(wěn)定性更強的配合物，而使鈣黃綠素游離出來重現(xiàn)熒光，且熒光強度隨樂果質(zhì)量濃度在0. 05、. 25 mg/L范圍內(nèi)增加而增大，據(jù)此建立了以鈣黃綠素-Pd2+作為熒光探針法測定樂果的方法；以實樣為基體用標(biāo)準(zhǔn)加入法按本發(fā)明的方法作回收試驗，測得回收率在829^108%之間。在本發(fā)明的測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法中，將液態(tài)待測品濾過樂果分子印跡膜(以下簡稱分子印跡膜)時，要求分子印跡膜的大小能足夠吸附液態(tài)待測品中的樂果。經(jīng)檢測，本發(fā)明制備所得的直徑11 cm的樂果分子印跡膜(厚度為200 ym)時，對樂果的最高載樣量為50mg。將液態(tài)待測品濾過分子印跡膜，然后靜置22 26h，從而使液態(tài)待測品中的樂果被分子印跡膜充分吸附。本發(fā)明的測定液體待測品中樂果的濃度的方法中采用了熒光分光光度法，非常靈敏，可以檢測低濃度的樂果，檢測范圍為0.05、. 25mg/L (備注說明按照本發(fā)明所給出的
0.051 mg/L、0. 102 mg/L、0. 153 mg/L、0. 204 mg/L、0. 255 mg/L 的一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液；其對應(yīng)的檢測范圍為0. 05、. 25mg/L)。綜上所述，本發(fā)明采用了將分子印跡膜與熒光檢測相結(jié)合的方法，充分利用分子印跡膜對樂果分子的特異性吸附和熒光檢測的簡便與靈敏，從而達(dá)到簡便、快速、靈敏制備樂果定分子印跡膜并利用其檢測樂果的效果。本發(fā)明與常規(guī)的樂果檢測方法相比有如下優(yōu)點突破了常規(guī)分析技術(shù)的靈敏度和選擇性限制，分子印跡膜具有專一選擇性、高度穩(wěn)定性和使用壽命長等。本發(fā)明所得的樂果分子印跡膜的應(yīng)用領(lǐng)域包括I)、裝備到SPE柱中，應(yīng)用于樂果殘留分析的樣品前處理過程中；2)、裝配到傳感器上，制備出適用于樂果檢測分析的傳感器設(shè)備；3)、裝配到液相色譜填充柱中，制備出適用于樂果檢測分析的液相色譜HPLC柱。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的樂果分子印跡膜優(yōu)點在于制備過程簡單，可操作性強，制備成本低廉；所得膜選擇性好、富集程度高，可廣泛用于環(huán)境、生物、食品等樣品中樂果殘留的前處理過程。本發(fā)明結(jié)合分子印跡技術(shù)進(jìn)行樣品前處理，以鈣黃綠素-Pd2+為熒光探針，運用熒光光度法測定樂果的含量。食品中樂果的最大限量為0.05mg/L (此為歐標(biāo)，國標(biāo)的最大限量是0. I mg/L)，在0.05、. 25mg/L范圍內(nèi)，本發(fā)明的制備的樂果分子印跡膜(MM)對樂果有較高的吸附率，從而避免了其他物質(zhì)對樂果檢測的干擾。又在0. 05、. 25mg/L范圍內(nèi)，樂果的濃度與溶液熒光強度的變化值有很高的線性相關(guān)，且相比色譜檢測法，有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，是一種理想的農(nóng)藥檢測方法。綜上所述，本發(fā)明較以往的檢測方法更易于操作且靈敏度高，在樂果富集、分離和檢測方面具有良好的應(yīng)用前景，并對其他抗生素的分析檢測提供了借鑒。


下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖I是樂果濃度與熒光強度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實施例方式實施例I、一種樂果分子印跡膜的制備方法，依次進(jìn)行以下步驟I)、采用相轉(zhuǎn)化法制備聚丙烯腈基膜稱取5g聚丙烯腈于60°C真空干燥24 h，與Ig氯化鋰一同加入26. 5ml的N-甲基吡咯烷酮中，于60°C磁力攪拌過夜(12小時)，從而使聚丙烯腈和氯化鋰充分溶解。所得溶液經(jīng)過濾脫泡，于60°C靜置2 h，用200 U m刮刀，在玻璃板上刮膜，控制膜的厚度為10(T200iim，空氣中停留一定時間(I飛分鐘)后，將玻璃板浸入一定溫度(2(T30°C)的去離子水中。待膜成型后，在室溫下用去離子水浸泡36 h，中間換一次去離子水，得浸泡后的聚丙烯腈基膜，其可在甲醇溶液中保存?zhèn)溆谩?)、樂果分子印跡膜的制備
取樂果0.5mmol溶于5ml甲醇中，邊加邊振蕩。待樂果完全溶解后，然后在所得的溶液中加入甲基丙烯酸(MAA) 2mmol、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA) 20mmol、偶氮二異丁腈(AIBN)40mg，攪拌至完全溶解(S卩，模板分子功能單體交聯(lián)劑=1:4:40的摩爾比);得膜液。將步驟I)所得的浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后(室溫晾干時間一般為1-2 h，從而使去離子水被揮發(fā)；當(dāng)從甲醇溶液中取出時，在上述晾干時間下甲醇也被揮發(fā))；得干燥后基膜；將膜液通氮氣脫氧IOmin (從而確保膜液中不含氧)，得脫氧后膜液；將干燥后基膜浸入上述脫氧后膜液中，浸泡2h后取出；在真空狀態(tài)下密封后，放入60 °C環(huán)境下聚合48h。將經(jīng)上述聚合處理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液(甲醇/乙酸=9/1，v/v)洗脫至洗脫液檢測不出模板分子為止(甲醇/乙酸能破壞氫鍵，快速洗脫模板分子);得樂果分子印跡膜。樂果分子印跡膜放在甲醇中保存，使用前取出在室溫條件下自然干燥(即，室溫晾干1-2 h即可)。實施例2、一種測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法，依次進(jìn)行以下步驟I)、繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，依次進(jìn)行以下步驟I、用17mg/L的樂果溶液配制系列濃度①、0. 102 mg/L，②、0. 204 mg/L，③、0. 306mg/L，④、0.408 mg/L，⑤、0.510 mg/L。備注均以去離子水作為溶劑。2、制備鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液用去離子水配制濃度為I. 0*10_3mol/L的鈣黃綠素溶液；用去離子水配制濃度為I. 0*l(T3mol/L的氯化鈀溶液；取鈣黃綠素溶液和氯化鈀溶液各1ml，然后用去離子水定容至IOOml ;于室溫下反應(yīng)下3飛小時，得鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液；3、在10 mL容量瓶中加入pH 7. 98的磷酸鹽緩沖溶液1.0 mL，鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液I. OmL和5. OmL的樂果溶液(步驟I所得5種濃度中的一種)，用去離子水定容至IOml
后搖勻。從而得樂果濃度分別為0. 051 mg/L、0.102 mg/L、0.153 mg/L、0.204 mg/L、0.255 mg/L這一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液。4、在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處，檢測上述一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光值，以樂果濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，以熒光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖I)；所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)的公式為Y=2173. 3X-39. 685，X代表樂果濃度(mg/L)，Y代表熒光值。2)、獲得液態(tài)待測品中樂果的濃度，依次進(jìn)行以下步驟①、將5ml的液態(tài)待測品濾過樂果分子印跡膜(直徑為Ilcm，厚度為200 ym)，②、將步驟①所得的樂果分子印跡膜室溫下放置22 26h，從而使液態(tài)待測品中的 樂果被樂果分子印跡膜充分吸附；③、用甲醇和乙酸的混合液(甲醇/乙酸=9/1，v/v)對吸附后分子印跡膜進(jìn)行洗脫3次，每次的用量為IOml ;合并3次的洗脫液旋蒸干，加入pH 7. 98的磷酸鹽緩沖溶液
1.OmL，上述鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液I. OmL，去離子水定容至10ml，得待測液；④、將待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值，代入步驟
I)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得待測液的樂果濃度；⑤、按照液態(tài)待測品與待測液的體積比，換算獲得液態(tài)待測品的樂果濃度。實驗I、將準(zhǔn)確標(biāo)有0. 2mg/L的樂果的茶樣品(作為液態(tài)待測品)5ml按照實施例2進(jìn)行操作。待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值為171. 125，代入Y=2173. 3X-39. 685，得待測液的樂果濃度為0. 097mg/L ;由于待測液為10ml，而液態(tài)待測品為5ml，因此得待測品的樂果濃度為0. 194mg/L,回收率為97. 0% ；實驗2、將準(zhǔn)確標(biāo)有0. 4mg/L的樂果的茶葉樣品(作為液態(tài)待測品)5ml按照實施例2進(jìn)行操作。待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值為340. 643，代入Y=2173. 3X-39. 685，得待測液的樂果濃度為0. 175mg/L ;由于待測液為10ml，而液態(tài)待測品為5ml，因此得待測品的樂果濃度為0. 350mg/L,回收率為87. 5%。對比例I、將實施例I中的“模板分子與功能單體”的摩爾比由1:4改成1: 2，其余同實施例
Io對比例2、將實施例I中的“模板分子與功能單體”的摩爾比由1:4改成1:6，其余同實施例
Io空白例I、一種空白膜的制備方法，依次進(jìn)行以下步驟I)、采用相轉(zhuǎn)化法制備聚丙烯腈基膜同實施例I中聚丙烯腈基膜的制備。2)、空白膜的制備在5ml甲醇中加入甲基丙烯酸(MAA) 2mmol、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)20mmol、偶氮二異丁腈(AIBN)40mg,攪拌至完全溶解；得膜液。將步驟I)所得的浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；將膜液通氮氣脫氧lOmin，得脫氧后膜液；將干燥后基膜浸入上述脫氧后膜液中，浸泡2h，取出。在真空狀態(tài)下密封后，放入60 °C環(huán)境下聚合48h，就能得到空白膜。備注說明此空白膜無需(甲醇/乙酸=9/1，v/v)洗脫，因為空白膜上沒有樂果分子?？瞻啄し旁诩状贾斜４?，使用前取出在室溫條件下自然干燥?？瞻桌?、將空白例I中的將甲基丙烯酸(MAA)的量改為lmmol，其余同空白例I。空白例3、將空白例I中的將甲基丙烯酸(MAA)的量改為3mmol。其余同空白例I。確定上述分子印跡膜對樂果的吸附量的實驗結(jié)果如表I所示。 表I、樂果分子印跡聚合物的吸附量
聚合物吸附量(|imol/g)AQ (|imol/g)a
(對比例i)
NIP1031130
(空白例2)168
M1P2
(實施例 I).21o224
NIP2j138224
(空白例I)' ^
MIP3^
(對比例2)125179
NIP3
ISQ
(空白例3)___備注說明利用聚合物吸附前后的濃度差值,可計算出MIPs和NIPs的吸附量Q Q= (CO-Cv) *V/m。進(jìn)一步計算特異吸附量A Q和特異因子a ( I) A Q=QMIP-QNIP ； (2) a =QMIP/QNIP。其中QMIP為MIPs的飽和吸附量，QNIP為NIPs的飽和吸附量。對比實驗1-1、以對比例I所得的樂果分子印跡膜替代實驗I中所用到的樂果分子印跡膜(實施例I所得)，其余同實驗I。將完全同實驗I的茶樣品5ml按照上述方法進(jìn)行檢測待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值為145. 046，代入Y=2173. 3X-39. 685，得待測液的樂果濃度為0. 085mg/L ;由于待測液為10ml，而液態(tài)待測品為5ml，因此得待測品的樂果濃度為0. 170mg/L,回收率為85. 0%。對比實驗1-2、以對比例I所得的樂果分子印跡膜替代實驗2中所用到的樂果分子印跡膜(實施例I所得)，其余同實驗2。將完全同實驗2的茶樣品5ml按照上述方法進(jìn)行檢測待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值為331. 949，代入Y=2173. 3X-39. 685，得待測液的樂果濃度為0. 171mg/L ;由于待測液為10ml，而液態(tài)待測品為5ml，因此得待測品的樂果濃度為0. 342mg/L,回收率為85. 5%。對比實驗2-1、以對比例2所得的樂果分子印跡膜替代實驗I中所用到的樂果分子印跡膜(實施例I所得)，其余同實驗I。將完全同實驗I的茶樣品5ml按照上述方法進(jìn)行檢測待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值為138. 526，代入Y=2173. 3X-39. 685，得待測液的樂果濃度為0. 082mg/L ;由于待測液為10ml，而液態(tài)待測品為5ml，因此得待測品的樂果濃度為0. 164mg/L,回收率為82. 0%。對比實驗2-2、以對比例2所得的樂果分子印跡膜替代實驗2中所用到的樂果分子印跡膜(實施例I所得)，其余同實驗2。將完全同實驗2的茶樣品5ml按照上述方法進(jìn)行檢測待測液在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值為318. 910，代入Y=2173. 3X-39. 685，得待測液的樂果濃度為0. 165mg/L ;由于待測液為10ml，而液態(tài)待測品為5ml，因此得待測品的樂果濃度為0. 330mg/L,回收率為82. 5%。 最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.樂果分子印跡膜的制備方法，其特征是包括以下步驟 1)、采用相轉(zhuǎn)化法制備聚丙烯腈基膜 聚丙烯腈干燥處理后與氯化鋰按照4飛 1的重量比一同加入N-甲基吡咯烷酮中，于55飛5°C攪拌，待聚丙烯腈與氯化鋰充分溶解后，得溶液；每化氯化鋰配用25 281111的N-甲基批略燒麗； 所述溶液經(jīng)過濾脫泡后于55飛5°C靜置I. 5^2. 5h ;然后進(jìn)行刮膜，所得的聚丙烯腈基膜放入去離子水中浸泡3(T40h ； 2)、樂果分子印跡膜的制備 以樂果作為模板分子，以甲基丙烯酸作為功能單體，以乙二醇二甲基丙烯酸酯作為交聯(lián)劑；以偶氮二異丁腈作為引發(fā)劑； 將0. 5 mmol的樂果溶于4. 5^5. 5ml的甲醇中,待樂果完全溶解后,得樂果溶液； 在所述樂果溶液中加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二異丁腈，均勻攪拌后，得膜液；用于制備樂果溶液的樂果甲基丙烯酸乙二醇二甲基丙烯酸酯=1:2飛38 42的摩爾比；每份由0. 5 mmol樂果制備而得的樂果溶液配用35 45 mg的偶氮二異丁腈； 將步驟I)所得浸泡后的聚丙烯腈基膜自然干燥后，得干燥后基膜；將膜液通氮氣脫氧，得脫氧后膜液；將干燥后基膜先放入脫氧后膜液中浸泡I. 5^2. 5h，然后再真空密封后于55飛5 V聚合45飛Oh ;將經(jīng)上述聚合處理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脫至洗脫液檢測不出模板分子為止，得樂果分子印跡膜； 所述甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的體積濃度為88、2%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的樂果分子印跡膜的制備方法，其特征是所述刮膜時，控制膜的厚度為IOOlOOi1 m ;從而減少膜的溶脹帶來的影響。
3.如權(quán)利要求I或2所得的樂果分子印跡膜的用途，其特征是測定液態(tài)待測品中樂果的濃度。
4.測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法，其特征是包括以下步驟 I)、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，依次進(jìn)行以下步驟 ①、制備鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液 用去離子水配制濃度為I. 0*10_3mol/L的鈣黃綠素溶液； 用去離子水配制濃度為I. 0*10_3mol/L的氯化鈀溶液； 取鈣黃綠素溶液和氯化鈀溶液各1ml，然后用去離子水定容至IOOml ;于室溫下反應(yīng)下3飛小時，得鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液； ②、在樂果、鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液和pH=7.98的磷酸鹽緩沖溶液中加去離子水定容配制成一系列濃度的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液，每IOml的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液中含有Iml鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液和ImL的pH=7. 98的磷酸鹽緩沖溶液； ③、采用熒光分光光度法，在激發(fā)波長490nm，發(fā)射波長512nm處，檢測所述一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光值，以樂果濃度為橫坐標(biāo)，以熒光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 2)、獲得液態(tài)待測品中樂果的濃度，依次進(jìn)行以下步驟 ①、將液態(tài)待測品濾過樂果分子印跡膜； ②、將步驟①所得的樂果分子印跡膜在室溫下放置22 26h，使液態(tài)待測品中的樂果被樂果分子印跡膜充分吸附； ③、用甲醇和乙酸的混合液對吸附后分子印跡膜進(jìn)行洗脫，得洗脫液；所述甲醇和乙酸的混合液中，甲醇的體積濃度為88、2% ； 將洗脫液旋干后加入Iml鈣黃綠素-Pd2+反應(yīng)溶液和ImL的pH=7. 98的磷酸鹽緩沖溶液，并用去離子水定容至10ml，得待測液； ④、采用熒光分光光度法，將待測液在激發(fā)波長490 nm，發(fā)射波長512nm處進(jìn)行檢測，得熒光值，代入步驟I)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得待測液的樂果濃度； ⑤、按照液態(tài)待測品與待測液的體積比，換算獲得液態(tài)待測品的樂果濃度。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的測定液態(tài)待測品中樂果的濃度的方法，其特征是 所述步驟I)中 配制成樂果濃度分別為 0. 051 mg/L、0. 102 mg/L、0. 153 mg/L、0. 204 mg/L、0. 255mg/L這一系列的樂果標(biāo)準(zhǔn)溶液； 所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線對應(yīng)的公式為Y=2173. 3X-39. 685，X代表樂果濃度(mg/L)，Y代表熒光值。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種樂果分子印跡膜的制備方法，包括以下步驟1)、采用相轉(zhuǎn)化法制備聚丙烯腈基膜；2)、樂果分子印跡膜的制備以樂果作為模板分子，以甲基丙烯酸作為功能單體，以乙二醇二甲基丙烯酸酯作為交聯(lián)劑，以偶氮二異丁腈作為引發(fā)劑，制備而得膜液；將基膜先放入膜液中浸泡，然后再真空密封后于55~65 ℃聚合45~50h；將經(jīng)上述聚合處理后所得的膜用甲醇和乙酸的混合液洗脫至洗脫液檢測不出模板分子為止，得樂果分子印跡膜。本發(fā)明還同時提供了上述樂果分子印跡膜的用途測定液態(tài)待測品中樂果的濃度。
文檔編號C08J9/26GK102746527SQ20121020583
公開日2012年10月24日 申請日期2012年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月20日
發(fā)明者于海寧, 沈生榮 申請人:浙江大學(xué)