專利名稱：抗病毒蛋白酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的蛋白酶抑制劑，特別是一些逆轉(zhuǎn)錄病毒(以HIV為代表)所具有的天冬氨酸蛋白酶。本發(fā)明更進一步涉及此種蛋白酶抑制劑在治療由逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的疾病中以及用于該目的藥物制備中的用途。本發(fā)明也涉及蛋白酶抑制劑及相似化學(xué)結(jié)構(gòu)的簡單制備的新的合成方法。
本發(fā)明的背景許多生理過程是依賴于特定氨基酸序列上的多肽的準(zhǔn)確酶切除反應(yīng)。此過程的例子是人體免疫缺陷病毒HIV的gag及gag-pol基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)錄后加工，使得組構(gòu)中心蛋白結(jié)構(gòu)并釋放病毒酶。此項任務(wù)是由HIV蛋白酶負(fù)責(zé)，它為病毒編碼的同二聚蛋白酶，屬于酶的天冬氨酸蛋白酶家族。人的腎素及胃蛋白酶也屬于該家族。細(xì)胞培養(yǎng)物中HIV蛋白酶抑制可以阻止病毒的成熟及復(fù)制，因此在人類中該酶代表抗HIV的抗病毒治療中的一個有吸引力的目標(biāo)。
在專利文獻中由數(shù)種文獻描述類HIV蛋白酶抑制劑，一般為具有大量手性中心的肽模擬物。例如，Abbott Laboratories廣泛研究了線性肽模擬物，如在一系列專利公告中描述，以EP 402 654開始至Abbott申請?zhí)朩O 94 14436告終，描述最佳的線性肽模擬物，尤其是化合物Ritonavir

Norvir為現(xiàn)在已知的化合物，它是由FDA注冊，雖然它有好的臨床效能，但其合成很困難。鑒定的現(xiàn)有技術(shù)合成蛋白酶抑制劑的困難可通過參考Roche的蛋白酶抑制劑saquinavir(inverase)來理解

根據(jù)文獻報道，該化合物需要20步的合成路徑，因此總產(chǎn)率約為2％。此困難的合成可行性會對治療成本及生產(chǎn)能力造成壓力。
Merck的US專利號5 413 999描述了茚滿基五胺化合物，包括其現(xiàn)已上市的產(chǎn)品indinavir

Merck的EP 480 714公開了一個對稱的蛋白酶抑制劑，該抑制劑具有由一個7個碳原子骨架隔開的末端茚滿醇胺(indanolamine)基團。

這些化合物以烯二醇為原料用復(fù)雜的方法制備。
Banyu的日本專利申請?zhí)?242613 A也描述了對稱的蛋白酶抑制劑，該抑制劑具有由7-碳原子骨架隔開的茚滿醇胺末端基團

其中R是氫或低級烷基。這些化合物的制備是用2-氯代-2-氯代甲基-丙烯使N，O-亞異丙基-N-[2(R)-羥基-(1S)-茚滿基]-3-苯基丙酰胺經(jīng)BuLi-烷基化亞異丙基，然后是臭氧化、還原及去保護。
Vertex的國際專利申請?zhí)朩O 94/13629開發(fā)了使用甘露糖醇碳水化合物前體來制備下式化合物

很明顯，在這些抑制劑中，酯化在甘露糖醇前體的C-1及C-6羥基的苯甲酰基部分是為填補到HIV蛋白酶活性位置的P1及P1’凹陷部分。氨基酸官能團，例如纈氨?；峭ㄟ^酰胺鍵合C-2及C-5羥基上，并填補酶的P-2及P-2’凹陷部分。這些化合物是由亞異丙基進行3-及4-羥基橋連，環(huán)氧化及用親核試劑如芳香醇使末端羥基開環(huán)，隨后用各個氨基酸將得到的游離羥基酰胺化?；蛘?，首先將亞異丙基-保護的甘露糖醇用氨基酸P-2填加基團在較活潑的C-1及C-6(末端)羥基上酰胺化，然后用苯甲?；糠謱-2及C-5羥基酯化。
一個Abbott Laboratories的蛋白酶領(lǐng)域的早期專利公告EP 402 646描述了許多蛋白酶抑制劑構(gòu)建的潛在方法。這些方法之一也使用了碳水化合物前體，其成為一個對稱蛋白酶抑制劑的中心骨架。EP 402646的實施例305及307描述了甘露葡糖二酸雙內(nèi)酯的開環(huán)及加入末端纈氨酸酯形成一個3，4-O-亞異丙基-橋連的己二酰二胺衍生物。將填加至所述蛋白酶的P1及P1′凹陷部分的芳香基團通過三氟甲磺酸酯活化引入碳?xì)涔羌艿腃-2及C-5位置，隨后在去除亞異丙基橋前將它們轉(zhuǎn)化為苯硫基。

該方法的弊端是C-3及C-4構(gòu)型不可避免的變型，并且可用像苯硫基(thiophenyl)試劑按EP 402 646中描述的方法替換三氟甲磺酸酯離去基團，這樣只可以得到P1及P1′填加基團的硫醚衍生物。從表面上看，可認(rèn)為三氟甲磺酸酯離去基團可用常規(guī)的烷基化試劑例如醇鹽替代得到O-烷基化P1/P1′填加基團。但是我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在先有技術(shù)中使用醇鹽的方法傾向于消除三氟甲磺酸酯得到一個烯烴，而不是所需的O-烷基化取代基。
Magnus Bjrsne等在″Synthesis of Potential Candidates forTherapeutic Intervention against the Human ImmunodeficiencyVirus″(Stockholm大學(xué)，1995)中描述化合物

相應(yīng)的芐酯及苯丙氨酸類似物。這些化合物是從L-mannaric acid前體通過下列步驟制備i).用亞異丙基將已糖醇的C-3及C-4羥基橋連，ii).保護C-1及C-6伯羥基，iii).使C-2及C-5羥基O-烷基化為芳烷基醚，iv).將C-1及C-6伯羥基氧化為羧酸；及v).使得到的化合物與合適的氨基酸(酯)末端基團縮合。此方法可用下圖表示

然后在二氯甲烷-THF中、使用HOBt-EDC偶合條件，使合適的纈氨酸或苯丙氨酸(酯)末端單元縮合到末端羧基上。盡管需要保護、氧化及去保護步驟，但是Bjorsne合成方法對于常規(guī)肽模擬物合成方法的非常多的步驟而言是一個改進(見上述對saquinavir的討論)。Bjrsne方法也避免了三氟甲磺酸酯活化，在“錯誤”的C-3及C-4原子的優(yōu)先反應(yīng)性及Abbott的EP 402 646方法的其它缺點。但是由Bjrsne提出的化合物沒有足夠的抗病毒活性。Bjrsne最好的化合物(其中末端胺是纈氨酸甲基酯(上面描述的))其IC50是5μM，可與當(dāng)前市場上蛋白酶抑制劑相比，這些抑制劑的IC50值低一或多個量級。
現(xiàn)在我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一組新的化合物，其抗病毒活性IC50在毫微摩爾范圍，而且它們也適于新的碳水化合物基的合成技術(shù)，該技術(shù)比上述討論的先有技術(shù)更方便。因此，本發(fā)明的第一個方面提供式I新的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和前體藥物

其中A′及A″獨立為式II

其中R′是H、CH3、C(CH3)2、-ORa、-N(Ra)2、-N(Ra)ORa或-DPR是H、CH3；Ra是H、C1-C3烷基；D是一個鍵、C1-3亞烷基、-C(＝O)-、-S(O)-或-S(O)2；P是一個任選取代的單或雙碳環(huán)或雜環(huán)；R″是H、在天然氨基酸中發(fā)現(xiàn)的任一側(cè)鏈、carboxacetamide或基團(CH2)nDP；M是一個鍵或-C(＝O)N(R)-；Q不存在、一個鍵、-CH(OH)-或-CH2-；或R″與Q、M及R’定義為一個任選取代的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)，其任選與另一個5或6元碳環(huán)或雜環(huán)稠合；前提為如果M是一個鍵及Q不存在時，那么R’是-ORa、-N(CH3)2、-N(Ra)ORa或-DP；X是H、OH、OCH3；Y是H、OH、OCH3，但X及Y不都是H；Z’及Z″獨立為-(CH2)mP，其中P是按上述定義；n及m獨立為0、1或2。
式I化合物是天冬氨酰蛋白酶的活性抑制劑，如那些從HIV中得到的。因此本發(fā)明還提供-包含式I化合物與一個藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的藥用制劑；-式I化合物在生產(chǎn)預(yù)防或治療疾病(例如由逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的AIDS，例如HIV)的藥物中的應(yīng)用；及-治療人類由逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的疾病(尤其是AIDS)的方法，該方法包括給予患有所述疾病的患者式I化合物。
這些化合物有相對低的分子量，所以在哺乳動物中應(yīng)該提供好的口服吸收特性。與先前技術(shù)的天冬氨酰蛋白酶抑制劑相比，本發(fā)明的化合物可用很少的步驟、使用簡單易得且便宜的原料，例如L-甘露糖二內(nèi)酯(mannarodilactone)或其商業(yè)上可得的前體或衍生物例如L-甘露糖-γ-內(nèi)酯很方便地制得。
因此，本發(fā)明的再一方面是提供制備式I化合物的方法

其中X、Y、Z′及Z″是按上述定義，而且A′及A″獨立為式II化合物或常規(guī)蛋白酶P-2/P-2′填加基團，該方法包括i).使L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯O-烷基化生成Z′及Z″基團，ii).用類似或不同的伯或仲胺打開所述內(nèi)酯分別得到A′及A″基團；及iii).任選將C-3或C-4的轉(zhuǎn)化為合適的X及Y″基團。
本發(fā)明此方法的一個例子可用下列說明

本發(fā)明的方法最好用于制備這里要求保護的式I化合物，但是也可用于制備具有常規(guī)的蛋白酶P-2/P-2′填加基團的蛋白酶抑制劑。
在步驟i)中作為C-2及C-5羥基醚的Z及Z′基團的引入是通過在堿例如碳酸鹽、金屬氫化物或氫氧化物及非質(zhì)子傳遞惰性溶劑例如N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃或丙酮存在下，用合適的衍生物O-烷基化方便地進行的，所述衍生物為E(CH2)nP，其中E是鹵素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯等，及P和n按上所述。方便的烷基化劑為芐基三氯乙酰亞氨酸酯與一個質(zhì)子或Lewis酸結(jié)合，如三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯。
在步驟ii)中的開環(huán)引入氨基或氨基酸衍生物A′及A″是使用標(biāo)準(zhǔn)條件在下列溶劑中完成的，所述溶劑如二噁烷、硝基甲烷THF、二甘醇二甲醚、DMF或DMSO，優(yōu)選選擇用于溶解碳水化合物衍生物和涉及的具體胺的溶劑。
為使合成簡單，通常優(yōu)選末端胺A′與A″相同。但是，盡管目標(biāo)酶是對稱的二聚物，由此暗示與對稱化合物緊密相互作用，但是在一些情況下由于抗性或藥代動力學(xué)等方面的原因聚有非對稱末端胺更有優(yōu)勢。當(dāng)需要非對稱化合物，即A′及A″基團不同時，通常分別按順序加入A′及A″基團最為方便。這可以與保護二內(nèi)酯環(huán)中的一個共同完成，但是也可以通過控制試劑濃度、反應(yīng)條件、加料速度等來獲得，得到一個單胺化的內(nèi)酯，在與第二個A′或A″胺反應(yīng)之前，通過常規(guī)技術(shù)或胺中和將其分離。
或者，通過固相合成方法獲得不同末端胺化，其中將未胺化或部分胺化的內(nèi)酯保護到固相底物上，例如珠狀聚合物，其在固相化學(xué)中已被熟知(例如Merrifield樹脂)。以這種方式進行內(nèi)酯的固定使得僅在特定的內(nèi)酯環(huán)上胺化。下文的流程1概括了本發(fā)明的一系列化合物的組合合成方法，但是很明顯單一的純的化合物可用類似的方法、但使用純試劑制得。
流程1

在流程1中，步驟1及步驟2包括在樹脂珠上制備羧基連接基團。各種連接基團(linker)的長度、剛度及可裂解性的差異(幾個在步驟2列出)可按常規(guī)固相化學(xué)技術(shù)中使用。在步驟3中，在帶有連接基團的固相珠上的游離胺在標(biāo)準(zhǔn)肽化學(xué)條件下與一個N-保護氨基酸以酰胺鍵合。所述氨基酸試劑包括一些不同的、被保護的氨基酸，例如N-Boc纈氨酸、N-Boc異亮氨酸、N-Boc丙氨酸、N-Boc亮氨酸等，因此該反應(yīng)步驟得到第一個組合化學(xué)層(tier)。固相珠負(fù)荷著許多隨機配置的氨基酸，每個由珠表面的羧基的各個連接基團隔離開。
在步驟4中，在氨基酸上的游離胺(N-Boc基團去保護后)用于一個雙-O-烷基化γ-雙內(nèi)酯的開環(huán)，其中Rx及Ry為相同或不同的任選取代(雜)芳烷基基團，例如芐基、氟芐基、吡啶基甲基等。該開環(huán)是在常規(guī)條件下完成的，如在下述舉例說明的，在溶劑像二噁烷、硝基甲烷、THF、二甘醇二甲醚、DMF、DMSO等中。如果Rx及Ry是不同的(雜)芳烷基基團，那么此步將根據(jù)Rx-或Ry-所連的環(huán)是否打開產(chǎn)生組合層變化。但是，所述雙內(nèi)酯試劑本身可能包括許多多種Rx、Ry組合及/或內(nèi)酯立體化學(xué)的不同的雙內(nèi)酯，導(dǎo)至更廣的組合多樣性。
在第5步，將剩下的被固定的內(nèi)酯環(huán)用另一個胺試劑以相應(yīng)的方式打開。同樣此胺試劑也包含不同胺的混合物，例如L-氨基酸或(雜)環(huán)胺像上述中的一個。因此此步也可能產(chǎn)生另一個多樣組合層。使用合適的裂解試劑(一般為特定的酰胺酶)或改變pH等，將該組合系列從連接基團上裂解。
盡管式I的化合物優(yōu)選用本發(fā)明的方法制備，但是也可能采用上面描述過的Bjrsne技術(shù)的起始步驟結(jié)合選用合適的A′及A″胺，隨后如果有必要像上面討論和在下面實施例2中舉例說明的那樣進行X及Y的后修飾。
其中X是氫的式I化合物的制備可以方便地用脫氧合完成，如在實施例2及26中闡述的一樣。優(yōu)選的立體化學(xué)是2R，3R，4R，5R形式。
為-DP的R’及/或Z’/Z”及/或其上任選取代基的碳環(huán)基可以是飽和、不飽和或芳香的，并包括單環(huán)例如苯基、環(huán)已烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)已基、環(huán)戊基或雙環(huán)例如茚滿基、萘基等。
為-DP的R’及/或Z’/Z”及/或其上任選取代基的雜環(huán)基可以是飽和、不飽和或芳香的，并有1至4個雜原子，包括單環(huán)例如呋喃基、噻吩基、吡喃基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、哌啶基、吡嗪基、哌嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基等，或雙環(huán)特別是上述與苯環(huán)稠合的雙環(huán)，例如吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基等。碳環(huán)或雜環(huán)可通過一個碳或雜原子(特別是氮原子)連接，例如N-哌啶基、N-嗎啉基等。
本發(fā)明化合物的A’/A”基團的式II的優(yōu)選實施方案包括式IIa或IIe

其中n是1或2，并且R’是烷氧基，最好是甲氧基，或其中n是0而R’是甲基。
其它優(yōu)選的式II基團包括下面的IIb

本發(fā)明化合物的A’/A”基團的另外的優(yōu)選構(gòu)型包括式IIc

其中Q是一個鍵、亞甲基或-C(OH)-，并且R’是-ORa、-N(Ra)2、-NRaORa，其中Ra是H或C1-C3烷基，或一個碳環(huán)或雜環(huán)基團，包括N-哌啶、N-嗎啉、N-哌嗪、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基等。
式IIc化合物的優(yōu)選子集為式IId

其中Rd是氫或甲基(即纈氨?；虍惲涟滨；鶄?cè)鏈)，Re是

其中X是亞甲基、O、S、S＝O、S(＝O)2或NH或Re是-N(CH3)2、-NHOH、-NHOMe、-NHOEt、-NMeOH、-NMeOMe等。
在各個式IIa、IIb及IIc中，R”是氫、甲基、乙基、異丙基、環(huán)烷基(例如環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)已基)、環(huán)烯基、芐基、carboxacetamide或4-咪唑基甲基，任一個都可以像上述定義的被取代。優(yōu)選的R”基團包括在天然氨基酸中發(fā)現(xiàn)的側(cè)鏈，特別是亮氨酸、天冬氨酸、組氨酸或脯氨酸中的那些。式IIa、IIb、IIc及IId的最優(yōu)選R”基團是異亮氨?；⑶姨貏e是纈氨?；鶄?cè)鏈。
R’(如果有的話)將隨Q及/或M的性質(zhì)而變化，因此可以選自例如氫、甲基、乙基、異丙基、按上述定義的Re、valinol，雜環(huán)例如吡啶基、噻唑、噁唑、咪唑、N-哌啶、N-嗎啉、N-哌嗪、吡咯基、咪唑基、吡唑基、嘧啶基、吡嗪基，任一R’基團可被Z’/Z”定義的所取代。
優(yōu)選的A’/A”基團包括式II，其中R”、Q、M及R’共同定義為一個任選取代的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)。在此定義范圍的優(yōu)選基團包括式III的基團

其中R按上述定義，R1是H、NR4R4、C(＝O)R3、CR3R4或一個單環(huán)，任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)；R2是OH或與R1一起是＝O，或者如果R1是NR4R4，那么R2可是H；R3是H、鹵、C1-C3烷基、OR5、NR4R4；R4是H、C1-C3烷基；R5是H或一個藥學(xué)上可接受的酯；R6是OH、NH2、氨基甲?；螋然?；R7是氫、C1-C4直鏈或支鏈烷基或與相鄰的碳原子形成一個稠合苯基或雜芳環(huán)；式III的優(yōu)選基團包括氨基-茚滿醇及1-氨基-氮雜茚滿-2-醇，即下式的部分

A’/A”的常規(guī)蛋白酶P-2/P-2’填加基團包括在Roche的saquinavir及Abbott的ritonavir化合物中發(fā)現(xiàn)的那些。常規(guī)蛋白酶P-2/P-2’填加基團的其它例子包括如上所述在Vertex的VX 478、Agouron的AG1343(現(xiàn)在稱為nelfinavir)及Merck的indinavir中發(fā)現(xiàn)的那些。
Z’/Z”或A’/A”的碳環(huán)或雜環(huán)部分的任選取代基包括一至三個取代基，例如鹵、氨基、巰基、氧代、硝基、NHC1-C6烷基、N(C1-C6烷基)2、C1-C6烷基、C1-C6鏈烯基、C1-C6炔基、C1-C6鏈烷酰基、C1-C6烷氧基、硫代C1-C6烷基、硫代C1-C6烷氧基、羥基、羥基C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、氨基C1-C6烷基、C1-C6烷基、氰基、羧基、烷酯基、甲酰胺、氨基甲?；⒒酋０?、芐氧基、嗎啉基-C1-C6烷氧基、單環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)，如上述定義，由烷基例如C1-3烷基芳基隔開的單環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)等。
Z’及Z”的優(yōu)選定義包括未取代或由1、2或3個特別是1個選自下列的取代基取代的芐基氟、氯、羥基、氨基、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NPh(C1-6烷基)、-NHPh、甲氧基、氰基、羥甲基、氨基甲基、烷基磺?；被柞；?、嗎啉乙氧基、芐氧基、芐酰胺等。此領(lǐng)域中顯示更大自由度的其它可能性在實施例中表明。很明顯Z’及/或Z”取代基可能包含一個環(huán)結(jié)構(gòu)(其取代基環(huán)結(jié)構(gòu)本身如在此定義被取代)例如苯基或包含一或兩個雜原子的5元或6元雜環(huán)，例如噻吩、吡啶等。作為芐基的Z’及Z”的有用的雜環(huán)取代基的制備描述于Tetrahedron Letters 1997 6359-6359-6367及J Org Chem 62(1997)1264及6066，包括N-嗎啉、N-哌啶、N-哌嗪、N’-甲基-N-哌嗪、N-吡咯烷酮、N-吡咯烷等。
這樣的取代基可以在Z’/Z”的間位但特別是在鄰位或?qū)ξ?，鄰位或間位優(yōu)選小的基團例如氟，而在對位對較大的基團有更大的自由度例如(任選取代的)環(huán)狀取代基，包括在上一段落的N-連接環(huán)。整個Z’及Z”基團或其各自的碳環(huán)或雜環(huán)部分可以不同，但為合成的簡易起見，如果相同會更方便。
對作為游離酸的A’/A”或式I化合物的帶電荷基團其它基團而言，合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括有機羧酸的鹽，例如乙酸鹽、乳酸鹽、葡糖酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、泛酸鹽、羥乙磺酸鹽、草酸鹽、乳糖酸鹽及琥珀酸鹽，有機磺酸鹽例如甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-氯苯磺酸鹽及對-甲苯磺酸鹽；及無機酸鹽例如鹽酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽及氨基磺酸鹽。
本發(fā)明的前體藥物是可以在體內(nèi)釋放出式I化合物的衍生物，一般是通常通過在腸、肝或血漿中水解或其它代謝作用進行。典型的前體藥物是在化合物的游離羥基上形成的酯。合適的藥學(xué)上可接受的酯包括C1-C22脂肪酸酯，其中所述脂肪酸是未飽和、單未飽和或多未飽和的。飽和脂肪酸酯包括短鏈例如乙酸酯或丁酸酯或長鏈例如硬脂酸酯。優(yōu)選未飽和脂肪酸酯是ω-9系列，例如棕櫚油酸或亞麻酸酯。其它酯包括C1-C6烷基芳基酯例如芐基或甲基吡啶基酯或磷酸酯，例如單磷酸酯。另外的酯包括相應(yīng)的脂肪酸或烷基芳基碳酸酯、氨基甲酸酯或磺酸酯。
提供的優(yōu)選的式I化合物包括下列化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和前體藥物N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3SR，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丁基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-1-(甲基氨基甲酰基)-2-苯基乙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-1-(甲基氨基甲?；?-2-(4-羥基苯基)乙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(環(huán)丙甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(2-甲基芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(4-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2-(芐氧基)-5-(4-甲基芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-苯基芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(3-噻吩基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-1-苯基-1-(甲基氨基甲?；?甲基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(3-氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(3-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2，4-二氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2，4-二氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-吡啶基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-吡啶基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(3-硝基苯基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-噻吩基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺，N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺，N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(2-氯代-6-氟代芐基)-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺。
O-烷基化雙內(nèi)酯中間體也是新的化合物，因此本發(fā)明的另一方面提供式IV化合物

其中Z’及Z”按上述定義。優(yōu)選式IV的化合物具有下列立體化學(xué)

優(yōu)選的式IV化合物包括其中Z’及Z”是芐基、2-氟代芐基、2-甲基芐基、2，4-二氟代芐基、4-氟代芐基、4-溴代芐基、4-苯基芐基、4-苯硫基芐基、4-(4’-硝基苯基)芐基、4-(吡啶基)芐基或芐基，在間位由伯、仲或叔胺或N-連接的雜環(huán)例如哌啶、嗎啉等所取代。Z’或Z”基團的另外的芐基可以包括其它芳基C1-2烷基或雜芳基C1-2烷基例如在P1蛋白酶領(lǐng)域中熟知的吡啶基亞甲基，喹啉基亞甲基或萘基亞甲基。
如式I，式IV化合物上的Z’及Z”基團可以不同，但是如果相同則較方便而且與目標(biāo)酶的二聚性一致。
因此優(yōu)選的式IV化合物中間體包括下列化合物2，5-二-O-芐基-L-甘露糖(mannaro)-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(2-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(2，4-二氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(2-氯代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-氯代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-噻吩-3’-基-芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-噻吩-2’-基-芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(噻唑-4’-基)-芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-噻唑-2’-基-芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(4’-硝基苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(4’-氰基苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(4’-鹵代苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(4’-氨基苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(4’-羧基苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-(4’-苯基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-吡啶-2-基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-吡啶-3-基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-N-嗎啉基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-N-哌啶基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-N-哌嗪基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯，2，5-二-O-(4-芐基芐基)-L-甘露糖-1，46，3-雙內(nèi)酯。
式III化合物中間體可通過下列反應(yīng)流程制備


1-氨基-偶氮(aza)茚滿-2-醇P-2填加基團可用類似于J Med Chem1991 1228-1230的方法制備

在治療由逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的疾病時，優(yōu)選將式I化合物以這樣一個量給藥，即使血漿水平約在10至1000nM，而且更優(yōu)選是在100至500nM。根據(jù)所需制劑的生物利用度，這相當(dāng)于0.001至100mg/kg/日、優(yōu)選10至50mg/kg/日的劑量。
按HIV抑制劑通常使用慣例，最好將一種至三種其它的抗病毒制劑例如AZT、ddI、ddC、D4T、ritonavir、saquinavir、indinavir、nelfinavir、DMP 266、delavirdine、nevirapine、trovirdine、PFA、H2G等共同給藥。對這樣共同給藥的抗病毒藥的摩爾比率進行選擇以反映抗病毒藥各自的EC50。相對于式I化合物而言，摩爾比率為25∶1至1∶25通常比較方便。
盡管可以將所述活性藥物單獨給藥，但是最好是作為藥用制劑的一部分。這樣的制劑含有上述定義的活性藥物和一種或多種可接受的載體及任選的其它治療成份。所述載體必須在與該制劑的其它成份相容并且對接受者無害的意義上是可接受的。
所述制劑包括適于口服、直腸、鼻內(nèi)、局部(包括口腔及舌下)、陰道或非腸道(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈及皮下)給藥的制劑。所述制劑可方便地以單位劑型例如片劑及緩釋膠囊形式提供，并且可以通過任何制藥領(lǐng)域熟知的方法制備。
這樣的方法包括將上述定義的活性藥物與載體混合。通常而言，所述制劑是通過將活性藥物與液體載體或精細(xì)的固體載體或兩者均勻而緊密的結(jié)合，然后如果必要使所得產(chǎn)物成形制備。
在本發(fā)明中口服給藥的制劑可以是獨立的單位，例如膠囊劑、扁囊劑或片劑，每個含有預(yù)定量的活性藥物；可以是粉劑或顆粒劑；可以是活性藥物在水性液體或非水性液體中的溶液或混懸液；或可以是水包油型液體乳液或油包水型液體乳液及大丸劑等。
關(guān)于口服給藥的組合物(例如片劑及膠囊劑)，術(shù)語合適的載體包括普通賦形劑，例如粘合劑像糖漿、阿拉伯樹膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、聚乙烯吡咯烷酮(Povidone)、甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、蔗糖、及淀粉；填充劑及載體例如玉米淀粉、明膠、乳糖、蔗糖、微晶纖維素、陶土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉及藻酸；及潤滑劑例如硬脂酸鎂及其它金屬硬脂酸鹽、硬脂酸、硅酮液體、滑石粉蠟、油及膠體硅。矯味劑例如薄荷、冬青油、櫻桃矯味劑等也可以使用。也可以加入著色劑使劑型容易辨認(rèn)。片劑也可以用本領(lǐng)域熟知的方法包衣。
片劑可以壓制或模制，任選含有一種或多種輔助成份。壓制片的制備是將自由流動的活性藥物例如粉末或顆粒(任選與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性或分散劑混合)在合適的機器中壓制而成。模制片是將粉狀化合物用一種惰性液體稀釋劑潤濕后在合適的機器中模制而成?？扇芜x將所述片劑包衣或刻痕，并且可配制以提供活性藥物的緩釋或控釋。
適于局部給藥的制劑包括糖錠劑，在矯味基質(zhì)通常是蔗糖及阿拉伯樹膠或黃蓍膠中含有所述活性藥物；錠劑，在惰性基質(zhì)例如明膠及甘油，或蔗糖及阿拉伯樹膠中含有所述活性藥物；及漱口劑，在合適的液體載體中含有所述活性藥物。
用于皮膚的局部給藥制劑可以是軟膏、霜劑、凝膠劑及糊劑，它們含有所述活性藥物及藥用活性載體。典型的局部傳送系統(tǒng)是含有所述活性藥物的透皮貼劑。
直腸或陰道給藥制劑可以是具有適當(dāng)?shù)幕|(zhì)的栓劑或陰道藥栓，所述基質(zhì)包括例如可可脂或水楊酸酯。其它陰道制劑可以是塞子、霜劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑，除了所述活性藥物外還含有本領(lǐng)域熟知的適當(dāng)載體。
用于鼻內(nèi)給藥的制劑(其中載體為固體)包括粗粉，其顆粒大小在例如20至500微米范圍，給藥方式是鼻吸入給藥，即從靠近鼻子的含有粉末的容器中快速吸入給藥。其中載體為液體的用于給藥的適當(dāng)制劑(例如鼻噴霧劑或鼻滴劑)包括所述活性藥物的水或油溶液。
用于非腸道給藥的制劑包括水或非水無菌注射溶液，可以含有抗氧劑、緩沖劑、制菌劑及溶質(zhì)，這些成份使制劑與目的接受者的血液等滲；及水或非水無菌混懸液，可以含有懸浮劑及增稠劑。所述制劑可以以單劑量或多劑量的容器例如密封的安瓿及管制瓶提供，，并可在冷凍干燥(凍干)條件下貯存，使用前僅需加入無菌液體載體例如注射用水。現(xiàn)配制的注射溶液及混懸液可從無菌粉劑、顆粒劑及先前描述的片劑制備。
本發(fā)明實施方案的詳述現(xiàn)將通過下述非限定實施例進一步闡述本發(fā)明。
實施例1N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺

簡言之，用硝酸氧化L-甘露糖(mannonic)-γ-內(nèi)酯得到L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯結(jié)晶，再用三氯乙酰亞氨酸二芐酯及三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯芐化，得到2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯。此內(nèi)酯通過加入任一伯胺或大多數(shù)仲胺打開，在這種情況下通過加入N-甲基-L-纈氨酸得到標(biāo)題化合物，總收率為10-30％。
更詳細(xì)地講，上述合成流程是按下述進行的A.在氮氣流、98℃下，將L-甘露糖-γ-內(nèi)酯(8.1g)的HNO3(120ml)水溶液(65％)保持1-2小時。濃縮至膠粘塊后，加入水(50ml)，然后將溶液濃縮至近干。在真空中干燥16小時，然后加入乙醇(5ml)及乙醚(100ml)，并通過超聲及機械磨碎使固體均勻分散。除去溶液，用乙醇(10ml)洗滌固體。剩余固體在乙醇中重結(jié)晶，得到4.3gL-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯。
13C-NMR(DMSO-d6)δ69.2(C2，C5)，75.9(C3，C4)，174.3(C1，C6)。
B.將三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯或三氟甲基甲磺酸(從Pasteur吸管滴出44滴)加入到L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(696mg)及三氯乙酰亞氨酸芐酯(3040mg)的二噁烷(140ml)充分?jǐn)嚢璧娜芤褐小?.5小時后，通過一個1cm的二氧化硅、1cm NaHCO3及1cm的二氧化硅板過濾溶液，用二噁烷(20ml)洗滌，濃縮至干并從CHCl3中重結(jié)晶得到1.85固體。將該固體在熱乙醚中制成淤漿并過濾。收集剩余的固體(900mg)，為2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯。
13C-NMR(DMSO-d6)δ72.3，74.6，75.1(CH2O，C2，C3，C4，C5)，128.2，128.3，128.7，137.2(Ar)，172(C1，C6)。
C.將2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(50mg)與N-甲基-L-纈氨酸(110mg)的乙腈(0.5ml)溶液在70℃保持16小時。冷卻后，產(chǎn)物用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 9∶1)純化，得到(35mg)。
實施例2N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3S，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺A.制備(2R，3S，4S，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-O-亞異丙基-3，4-二羥基已烷二酸。
向2，5-二O-芐基-3，4-O-亞異丙基-L-艾杜糖醇(1.84g，4.57mmol)的CH2Cl2(90ml)溶液中加入TEMPO(36mg，0.23mmol)、溴化鉀(104mg，0.87mmol)、四丁基溴化銨(163mg，0.51mmol)及碳酸氫鈉飽和水溶液(20ml)。將混合物冷至0℃，并用1.5小時加入加入次氯酸鈉溶液(42ml，1.2M，50.4mmol)。在0℃下攪拌30分鐘，分離有機層，并用NaHCO3(水溶液)(3×40ml)和水(3×40ml)洗滌。向合并的水相加入乙醇(50ml)，并攪拌該溶液30分鐘。然后加入EtOAc(100ml)，通過加入H+-Dowex將混合物pH從9調(diào)至2。濾除Dowex，分離各層，用EtOAc(4×100ml)萃取水相，在減壓不加熱條件下干燥并濃縮，得到(1.40g，3.25mmol，71％)。
13C-NMR(CD3OD-丙酮-d6 2∶1)δ 27.1(CH3isoprop)，73.7，77.4，78.0 111.0(isoprop)，128.8，129.1，129.3及138.6(芳香C)，172.7(COOH)。
B.制備N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4S，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-O-亞異丙基-3，4-二羥基已烷二酰胺。
在氬存在下，將從步驟A中得到的粗產(chǎn)物(1.40g，3.25mmol)溶于干燥的CH3CN(21ml)中，加入吡啶(1.58ml，19.5mmol)及二-N-琥珀酰亞氯基碳酸酯(DSC)(3.30g，12.9mmol)。在室溫下將該混合物攪拌15分鐘，用EtOAc(50ml)稀釋，用水(3×20ml)及鹽水(1×30ml)洗滌，干燥，濃縮并用硅膠柱層析純化。
在氬下，將從上面得到的活化的二酸(974mg，1.64mmol)溶于2∶1CH2Cl2-THF(7ml)混合物中，并加入L-纈氯酸甲酰胺(560mg，4.30mmol)。在室溫下將反應(yīng)物攪拌18小時，用CH2Cl2(50ml)稀釋并用NH4Cl(水溶液)(30ml)洗滌。干燥有機層、濃縮并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，得到產(chǎn)物844mg，1.29mmol，79％。
13C-NMR(CDCl3)δ16.7及19.7(val CH3)，26.2(val CH3NH)，27.2(CH3isoprop)，28.9(val CHMe2)，57.8(val CHNH)，73.7，77.1，77.0，110.0(isoprop)，128.2，128.4，128.7，129.0及135.7(芳香C)，169.8及170.9(CONH及val CO)。
C.制備N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3S，4S，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺。
將從步驟B中得到的產(chǎn)物(775mg，1.18mmol)溶于5∶1的CH3CN-H2O混合物(309ml)中，加入2，3-二氯-5，6-二氰基苯醌(DDQ)(30mg，0.13mmol)，并且將溫度保持在75℃。在2天和4天后，再加入DDQ(2×60mg)，在6天后濃縮反應(yīng)物。將殘余物溶于EtOAc(50ml)中，用水(2×30ml)洗滌，通過一個活性炭、硅藻土及Na2SO4板過濾，并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，得到產(chǎn)物(501mg，0.81mmol，69％)。[α]D-22.9°(c 1.4g/100ml CHCl3)。
13C-NMR(CDCl3)δ16.7及19.7(val CH3)，26.2(val CH3NH)，28.6(val CHNH)，57.7(val CHNH)，69.6，73.7，77.6，128.2，128.9及135.9(芳香C)，170.8及172.3(CONH及val CO)。C32H46N4O8的分析計算值C 62.52；H 7.54；N 9.11。實測值C 62.41；H 7.39；N 8.98.
D.制備N1，N6-二[(1 S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3S，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺。
在氬環(huán)境下，將從步驟C中得到的產(chǎn)物(58mg，94μmol)溶于干燥的THF(5ml)中，并加熱到45℃，然后加入N，N-硫代羰基二咪唑(40mg，0.22mmol)。將反應(yīng)混合物回流30小時，濃縮并用硅膠柱層析(氯仿-甲醇20∶1)純化，得到硫代碳酸酯(60mg，91μmol，97％)13C-NMR(CDCl3)δ17.2及19.5(val CH3)，26.4(val CH3NH)，29.7(val CHMe2)，58.7(val CHNH)，75.6，78.0，83.4，128.3，128.9及135.2(芳香C)，167.7及170.6(CONH及val CO)，189.6CS)。
用20分鐘，將硫代碳酸酯(60mg，91μmol)、三丁基氫化錫(tributylin hydride)(50μl，0.19mmol)及α，α’-偶氮異丁腈(azaisobutyronitrile)(15mg，91μmol)的干燥甲苯(4ml)混懸液滴加入回流的甲苯(2ml)中。將該混合物回流45分鐘，冷卻并濃縮。將殘余物溶于乙腈(10ml)中，并用已烷(2×5ml)洗滌。濃縮乙腈層，并用硅膠柱層析(甲苯-丙酮1∶1)純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物，收率33％(18mg，30μmol)。[α]D+6.1°(c 0.7g/100ml CHCl3)。
13C-NMR(CDCl3)δ17.3，17.4及19.6(val CH3)，26.3(val NHCH3)，29.5(val CHMe2)，34.5()58.0，及58.1(val CHNH)，68.5，72.7，76.8，81.1，()，127.9，128.3，128.5，128.6，128.8，136.2及136.5(芳香C)，171.1，171.4，171.6及172.5(NHCO及val CO)。
實施例3N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺在氬環(huán)境下，將從實施例1中得到的產(chǎn)物(144mg，0.23mmol)溶于干燥的THF(8ml)中，并加熱到45℃，然后再加入N，N-硫代羰基二咪唑(104mg，0.58mmol)。將該反應(yīng)混合物回流17小時，濃縮并用硅膠柱層析(氯仿-甲醇20∶1)，得到硫代碳酸酯(125mg，0.19mmol，83％)。
13C-NMR(CDCl3)δ17.4及19.4(val CH3)，26.3(val CH3NH)，30.2(val CHMe2)，58.4(val CHNH)，75.8，77.7，82.4()，128.9，129.1及135.3(芳香C)，167.0及170.6(CONH及val CO)m 190.7(CS)。
在氬環(huán)境下，將硫代碳酸酯(125mg，0.19mmol)懸浮于干燥甲苯(4ml)中，并加熱至回流，用10分鐘加入三丁基氫化錫(153μl，0.57mmol)及α，α’-偶氮異丁腈(47mg，0.28mmol)的干燥甲苯(3ml)溶液。將該混合物回流20小時，冷卻并濃縮。將殘余物溶于乙腈(15ml)中，并用已烷(2×10ml)洗滌。濃縮乙腈層并用硅膠柱層析(HCl3-MeOH20∶1)純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物，收率35％(40mg，67μmol)。[α]D+1.8°(c 0.8g/100ml CHCl3)。
13C-NMR(CDCl3)δ17.5，18.0，19.4及19.6(val CH3)，26.1及26.3(valCH3NH)，29.5及30.6(val CHMe2)，35.5，58.2，58.3(val CHNH)，70.2，73.0，73.3，77.2，83.0，127.9，128.0，128.4，128.6，136.7，(芳香C)，170.5，171.3，121.4，及173.1(CONH及val CO)。C32H46N4O7分析計算值C64.19；H 7.74；N 9.36。實測值C 64.00；H 7.50；N 9.15。
實施例4N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丁基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-羥基已烷二酰胺于70℃，將從實施例1中得到的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(50mg)及N-甲基-L-異亮氨酸(120mg)的乙腈溶液保持16小時。冷卻后，產(chǎn)物用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 19∶1)純化，得到純的化合物。
13C-NMR(CD3OD)δ11.7，16.1 25.1，26.3，37.2，58.5，72.3，73.4，80.8，128.7，129.1，137.7，172.7，173.1。
實施例5N1，N6-二[(1S)-1-(甲基氨基甲?；?-2-苯基乙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-羥基已烷二酰胺將從實施例1中得到的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(30mg，0.085mmol)溶于二氯甲烷(3ml)中，并向該攪拌的溶液中加入苯丙氨酸-N-甲酰胺(91mg，0.51mmol)。將溶液回流(40℃)18小時，然后濃縮。粗品用硅膠柱層析(氯仿-甲醇20∶1)純化。
13C-NMR(CD3OD)δ72.8，73.7，81.9，127.1，127.8，128.4，128.7，128.8，129.0，135.0，136.4，170.0，172.1.
實施例6N1，N6-二[(1S)-1-(甲基氨基甲?；?-2-(4-羥基苯基)乙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-羥基已烷二酰胺將從實施例1中得到的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(40mg，0.113mmol)溶于二氯甲烷(4ml)中，并向該攪拌的溶液中加入酪氨酸N-甲酰胺(132.2mg，0.677mmol)。將溶液回流(40℃)18小時，然后濃縮。粗品用硅膠柱層析(氯仿-甲醇20∶1)純化。
13C-NMR(CD3OD)δ26.1，37.1，55.3，72.9，72.9，81.1，116.1，128.8，129.2，130.9，138.3，157.2，172.9，173.6.
實施例7N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-氟代芐基)氧基]-3，4-羥基已烷二酰胺A向冷卻的(-10℃)的在CH2Cl2(10ml)中的4-氟代芐醇(0.85ml，δ1.168g/ml，7.93mmol，leq)及KOH(50％水溶液10ml)的溶液中加入四丁基硫酸氫銨(0.015g)。攪拌5分鐘后，加入三氯乙腈(0.953ml，c 1.44g/ml，9.51mmol，1.2eq)，然后將反應(yīng)混合物在-5℃保持30分鐘，再加溫至室溫。分離有機層，用CH2Cl2(2×10ml)萃取水相。合并的萃取液用MgSO4干燥并濃縮至三分之一。通過硅藻土過濾后真空中除去溶劑，得到為棕黃色油狀物的二內(nèi)酯，1.82g(85％產(chǎn)率)。
1H-NMR(CHCl3250MHz)δ5.30(s，2H)，7.00-7.15(m，2H)，7.40(m，2H)，8.40(b，1H)。
B制備2，5-二-O-(4-氟芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯。
向從步驟A中得到的二內(nèi)酯(0.200g，1.12mmol)的二噁烷(40ml)溶液中加入4-氟芐基三氯乙酰亞氨酸酯(0.72g，c 1.353g/ml 3.37mmol，3eq)。將反應(yīng)容器置于N2(g)環(huán)境中并攪拌(10分鐘)。分次加入TMS-OTf(0.08ml，c 1.230g/ml，0.45mmol，0.4eq)。4小時后將該混合物通過一個SiO2-NaHCO3-SiO2板過濾，從CHCl3中重結(jié)晶，用Et2O(2ml)制成淤漿并過濾，得到(0.315g，71.8％收率)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ4.75，4.80(d，J＝7.1Hz，4H)，4.90(d，J＝3.7Hz，2H)，5.3(d，J＝5.8Hz，2H)，7.15-7.25(m，4H)，7.40-7.55(m，4H)。13C-NMR(DMSO-d662.9MHz)δ71.4，74.4，74.7，115.1，115.5，130.2，130.3，133.3，160.0，164.0，171.8。
C向上述得到的芐基化二內(nèi)酯(0.050g，0.128mmol，1.0eq)的CH3CN(pa，2ml)中加入L-纈氨酸-N-甲酰胺(0.050g，3.84mmol，3.0eq)。將該反應(yīng)混合物加熱至70℃并攪拌24小時。濃縮得到棕色油狀物(粗品0.107g)，用硅膠快速層析(9∶1 CHCl3∶MeOH)(12∶1CHCl3∶MeOH+1％HOAc)及(12∶1 CHCl3∶MeOH)純化，得到0.006g標(biāo)題產(chǎn)物(收率7.2％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ0.90-0.95(m，6H)，1.90-2.05(m，2H)，2.55(m，6H)，3.80-3.90(m，2H)，3.95-4.05(d，J＝7.8Hz)，2H)，4.10-4.20(m，2H)，4.40-4.45(m，4H)，4.75-4.65(d，J＝7.47Hz，2H)，7.10-7.20(m，4H)，7.25-7.40(m，4H)，7.75-7.80(d，J＝8.94Hz，2H)，7.85-7.90(d，J＝4.64Hz，2H)。13C-NMR(DMSO-d662.9MHz)δ18.0，19.1，25.3，57.5，69.6，70.26，79.2，93.0，114.7，115.0，129.5，129.6，134.1，159.5，163.4，170.3，171.0，115.1，115.5，130.2，130.3，133.3，160.0，164.0，171.8。
實施例8N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(環(huán)丙基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-羥基已烷二酰胺根據(jù)與實施例2B中類似的方法，但是使用L-纈氨酸-N-環(huán)丙酰胺(117mg，0.27mmol)，得到為灰白色固體的相應(yīng)中間體(147mg，0.25mmol，93％)。
13C-NMR(CDCl3)δ6.7(CH2環(huán)丙基)，17.4，19.4(val CH3)，22.6(val CHMe2)，27.1(CH3 isoprop)，30.1(CHNH-環(huán)丙基)，57.8(NHCH)，74.2(C3，C4)，76.6(C2，C5)，78.9(OCH2Ph)，110.3(isoprop)，128.4，128.7，128.9，136.5(arom C)，169.3(val C＝O)，172.1(NHC＝O)。
使該中間體(86mg，0.16mmol)經(jīng)歷實施例2C的步驟，得到為灰白色固體的標(biāo)題化合物(52mg，0.010mmol，65％)。[α]D-17°(c.0.86CHCl3)。
13C NMR(CDCl3)δ5.8，6.3(CH2-環(huán)丙基)，16.8，19.5(val CH3)，22.8(val CHMe2)，28.9(CHNH-環(huán)丙基)，58.0(NHCH)，73.4(C3，C4)，73.4(C2，C5)，82.2(OCH2Ph)，128.6，128.8，129.3，136.2(arom C)，171.1(val C＝O)，(172 NHC＝O)。
實施例9N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(2-甲基芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺A將1，6-二-(二甲基-叔丁基硅烷基)-3，4-O-異丙基-L-甘露糖醇(1.834g，4.07mmol)溶于干燥四氫呋喃(25ml)中。然后將溶液冷卻至0°C，加入氫氧化鈉(60％水溶液0.556g，13.44mmol，3.3eq)。移去冷卻浴，在室溫下將反應(yīng)物攪拌15分鐘。加入2-甲基芐基溴(120ml，8.96mmol 2.2eq)及四丁基碘化銨(0.285g，0.77mmol，0.19eq)，然后在室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜。用乙醚(200ml)稀釋溶液并用水(200ml)洗滌3次。干燥有機相并濃縮。產(chǎn)物用硅膠快速層析(甲苯)純化，得到二甲硅烷基醚(1.86g，70％)。
1H-NMR(CDCl3250MHz)δ0.10(s，12H，2x CH3C[CH3]2-Si)，0.90(s，12H，2x [CH3]2-Si)，1.30(s，6H，2x CH3C[CH3]2-Si)，1.40(s，6H，2xisoprop，CH3)，2.30(s，6H，2x Ph-CH3)，3.63-3.78(m，4H，H-1，H-6)，3.86-3.94(dd，2H，H-2，H-5，J＝7.47，3.20Hz)，4.17-4.24(dd，2H，H-3，h-4，J＝1.72，1.29Hz)，4.50-4.82(dd，4H，2x O-CH2-Ph，J＝52.55，11.86Hz)，7.08-7.36(m，8H，2x Ph)。
13C-NMR(CDCl362.9MHz)δ5.47([CH3]2-Si)，18.61(CH3C[CH3]2-Si)，25.90(2x CH3C[CH3]2-Si，27.25(isoprop.C)，29.72(2x Ph-CH3)，63.70(C-1，C-6)，71.38(C-2，C-5)，78.29(2x O-CH2-Ph)，81.47(C-3，C-4)，109.49(isoprop.C)125.65，127.42，128.32，129.31(2xPh)。
B制備2，5-二-O-(2-甲基芐基)-3，4-亞異丙基-L-甘露糖醇將從步驟A中得到的二甲硅烷基醚(1.749g，2.65mmol)溶于干燥的四氫呋喃中。加入在THF中的四丁基氟化銨(6.92ml，1.0M，2.6eq)。在室溫下將溶液攪拌2.5小時并濃縮。產(chǎn)物用硅膠快速層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)純化，得到標(biāo)題二醇(0.99g，88％)。
1H-NMR(CDCl3，250MHz)δ1.40(s，6H，2x isoprop.CH3)，2.35(s，6H，2x Ph-CH3)，3.60-3.68(m，4H，H-1，H-6)，3.75-3.85(m，2H，H-2，H-5)，4.19-4.25(dd，2H，H-3，H-4，J＝2.40，1.35Hz)，4.52-4.71(dd，4H，Ph-CH2-O，J＝13.49，11.58Hz)，7.10-7.25(m，8H，2xPh)。
13C-NMR(CDCl362.9MHz)δ61.26(C-2，C-5)，70.68(C-1，C-6)，78.95(2xO-CH2-Ph)，80.94(C-3，C-4)，125.92，127.47，128.69，129.32(2x Ph)。
C制備2，5-二-O-(2-甲基芐基)-亞異丙基-L-甘露糖酸向在二氯甲烷(3.6ml)中的步驟B得到的二醇(0.126g，0.51mmol)中加入2，2，6，6-四甲基哌啶-1-基氧基游離基(0.003g，0.02mmol，0.03eq)及溴化鉀溶液(0.006g，0.05mmol，0.09eq)及四甲基溴化銨(0.008g，0.03mmol，0.05eq)及飽和碳酸氫鈉水溶液(2.20ml)。將該溶液冷至0°C，用45分鐘加入次氯酸鈉溶液(14％，4.32ml，10.2mmol，20eq)、飽和亞氯酸鈉水溶液(2.30ml)及飽和碳酸氫鈉水溶液(1.20ml)。再攪拌1小時后，用3×15ml H2O洗滌有機層，用1M鹽酸酸化合并的水相至pH2。然后用乙酸乙酯(15ml)洗滌酸水相3次，干燥有機層并濃縮得到標(biāo)題二酸。產(chǎn)物可直接用于下步。
D(i)制備N-(芐氧基羰基)-N’-甲基-L-纈氨酰胺將Cbz-纈氨酸(2.55g，10.17mmol)、鹽酸甲胺(0.824g，12.20mmol，1.2eq)及1-羥基苯并三唑(2.06g，15.25mmol，1.5eq)溶于二氯甲烷(125ml)中，加入三乙胺(5.52ml，39.65mmol，3.9eq)調(diào)pH至7.5。將該溶液冷至0℃，加入N，N’-二環(huán)已基碳二亞胺(2.94g，14.24mmol，1.4eq)，在冷卻浴中再攪拌1小時。然后再在室溫下攪拌該溶液過夜。過濾反應(yīng)物，濃縮并溶于乙酸乙酯(176ml)中。有機相用水(125ml)及碳酸氫鈉(125ml)洗滌，干燥并濃縮。產(chǎn)物通過在乙酸乙酯-已烷中重結(jié)晶純化，得到標(biāo)題產(chǎn)物(2.04g，75％)。
1H-NMR(CDCl3，250MHz)δ0.90-1.00(m，6H，[CH3]2CH-CH)，1.66(s，1H，CH-CH[CH3]2，3.80(d，3H，J＝4.82Hz)，3.88-3.99(m，1H，H-3)，5.10(s，2H，H-5)，5.25-5.41(d，1H，NH-CO，J＝7.67MHz)，5.90-6.05(s，1H，NH-COO)，7.30-7.42(m，5H，Ph)。
13C-NMR(ClCl3，69.2MHz)δ19.24(C-1)，26.14(CH-CH[CH3]2)，30.67(CH-CH-[CH2]2)，60.67(C-3)，67.06(C-5)，128.02，128.20，128，54，136.19(Ph)，156.45(C-2)，171.80(C-4)。
D(ii)制備N-甲基-纈氨酰胺將從上步得到的N-(芐氧基羰基)-N’-甲基-L-纈氨酰胺(2.49g，9.42mmol)溶于乙醇(100ml)中，加入在活性炭鈀(10％，0.399g)。將此混合物在室溫下氫化(約230ml H2)過夜。然后用硅藻土板過濾Pd/C并濃縮。產(chǎn)物用硅膠快速層析(二氯甲烷-丙酮1∶1)純化，得到N-甲基-纈氨酰胺(0.870g，71％)。
1H-NMR(CDCl3，250MHz)δ0.79-0.85(m，6H，CH-CH[CH3]2)，1.76(m，1H，CH-CH[CH3]2，2.74-2.76(d，2H，H-1，J＝4.99Hz)，3.75-3.77(d，1H，H-3，J＝4.43)，6.76(s，2H，NH2)，7.26(s，1H，NH-CH3)。
13C-NMR(CDCl3，69.2MHz)δ19.68(C-1)，26.23(CH-CH[CH3]2)，30.77(CH-CH-[CH3]2)，60.21(C-3)，166.10(C-2)。
D(iii)制備N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-3，4-O-亞異丙基-2，5-二[(2-甲基芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺將從步驟C得到的二酸(0.247g，0.56mmol)及從步驟D(ii)得到的酰胺(0.211g，1.62mmol，2.9eq)與1-羥基苯并三唑(0.270g，2.00mmol，3.6eq)共同溶于二氯甲烷(5.8ml)及四氫呋喃(2.9ml)中。加入三乙胺(0.18ml，1.28mmol，2.3eq)調(diào)pH至7.5。將反應(yīng)混合物冷至0℃，加入1-(3-二甲基氯基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.287g，1.50mmol，2.7eq)，并在冷卻浴中攪拌該溶液1小時。然后再在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時。再用二氯甲烷(30ml)稀釋，并用碳酸氫鈉3×30ml洗滌，干燥并濃縮。產(chǎn)物用硅膠柱層析(二氯甲烷-甲醇，3∶1)純化，得到標(biāo)題二酰胺(0.291g)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ0.78-0.94(m，12H，2x(H-CH[CH3]2)，1.22(s，6H，isoprop.CH3)，1.87-1.93(m，2H，H-4，H-13)，2.24(s，6H，2x Ph-CH3)，2,56(d，6H，H-1，H-16，J＝4.38Hz)，4.11-4.14(m，6H，2x CH-CH[CH3]2，H-7，H-8，H-9，H-10)，4.46-4.50(d，4H，Ph-CH2-O，J＝9.92)，6.48-7.05(m，8H，Ph)，7.70-7.75(d，2H，2x CH-NH-CO，J＝11.32Hz)，8.00(d，2H，2x CH3-NH，J＝4.44)。
E 制備N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(2-甲基芐基)氧基]-3，4-羥基已烷二酰胺將鹽酸，45的甲醇(2ml)加到步驟D的最后產(chǎn)物二胺(0.060g，0.090mmol)中。在室溫下將該反應(yīng)混合物攪拌60分鐘然后濃縮。產(chǎn)物用硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇9∶1)純化，得到標(biāo)題二酰胺(0.042g74％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ0.82-0.87(t，12H，2xCH-CH[CH3]2，J＝6.06)，1.94-2.02(m，2H，CH-CH[CH3]2)，2.25(s，6H，2xPh-CH3)，2.60(d，6H，H-1，H-16，J＝4.42)，3.86-3.88(m，2H，H-4，H13)，4.01-4.04(d，2H，H-8，H-9，J＝7.27)，4.18-4.19(m，2H，H-7，H-10)，4.47(s，4H，Ph-CH2-O)，7.15-7.31(m，8H，Ph)，7.70-7.74(d，2H，2x CH-NH-CO，J＝8.82)，7.90-7.92(d，2H，2x CH3-NH，J＝4.49)。
13C-NMR(DMSO-d6，69.2MHz)δ17.99 CH-CH[CH3]2，19.13(Ph-CH3)，25.31(CH-CH[CH3]2)，30.40(C-1，C-16)，57.57(C-4，C-13)，69.37(Ph-CH2-O)，69.80(C-7，C-10)，79.29(C-8，C-9)，125.47，127.59，128.30，129.78，131.48，136.42(Ph)，170.38(C-3，C-14)，172.03(C-6，C-11)。
實施例10N1，N6-二[(1S)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-羥基已烷二酰胺將0.915g(2.2eq.，mmol)(1S，2R)-1-氨基-2-茚滿醇懸浮子12mlCHCl3中并加熱至45℃。立即加入從實施例1中得到的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(1.0g，1.0eq.，2.82mmol)，并在50℃持續(xù)攪拌4小時。然后用飽和NH4Cl(2x)及水(2x)萃取反應(yīng)混合物，并用MgSO4干燥并濃縮。從甲醇中重結(jié)晶得到白色固體(0.65g，35％)。
13C-NMR(CDCl3)δ39.2，57.8，71.6，72.5，73.5，81.5，124.0，125.3，127.0，128.2，128.3，128.6，136.7，139.8，140.8，171.6。分析(C38H40N2O8)C，H，N。[α]D-20.7(c 0.68，CHCl3)。
實施例11N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺，將208mg(1.0eq.1.41mmol)(1S，2R)-1-氨基-2-茚滿醇混懸于4mlCH3CN中并加熱至55℃。立即加入從實施例1中得到的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(0.5g，1.0eq.，1.41mmol)，并在50℃與1mlCH3CN一起攪拌1.5小時中。在3.5小時后，加入另一部分L-纈氨酸甲酰胺(184mg，1.0eq.1.41mmol)。在22小時后將混合物濃縮并用硅膠快速層析(CHCl3-MeOH 30∶1及EtOAc-MeOH 10∶1)純化，得到(14mg，1.6％)。
13C-NMR(CDCl3)δ17.2，19.5，39.3，58.0，58.4，72.2，72.4，72.8，73.4，81.4，81.8，123.9，125.4，127.0，128.1，128.2，128.4，128.5，128.7，128.8，136.4，139.6，140.8，170.9，172.0。
實施例12N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺A制備2-氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯。
按實施例7A描述的方法，但是使用2-氟代芐基醇，得到(2.79g，74％)。
1H-NMR(CDCl3，250MHz)δ5.36(s，2H，H-4)，7.23-7.49(m，6H，Ph)，8.45(s，1H，NH)。
13C-NMR(CDCl3，62.9MHz)δ64.65(C-4)，91.14(C-1)，115.14，115.45，123.97，128.90，129.97，130.11(Ph)，162.18(C-2)。
B制備2，5-二-O-(2-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯。
按實施例7B描述的方法，但是使用2-氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯，得到白色固體(0.303g，73％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ4.83(d，4H，2x Ph-CH2，J＝8.00)，4.93(d，2H，H-3，H-4，J＝3.72)，5.31(d，2H，H-2，H-5，J＝3.78)，7.19-7.54(m，8H，2x Ph)13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ65.78(C-3，C-4)，74.22(C-2，C-5)，74.95(2x Ph-CH2)，115.04，115.37，124.41，130.25，130.38，130.58(2x Ph)，170.41(C-1，C-6)。
C按實例10描述的方法，但使用2，5-二-O-(2-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯，得到標(biāo)題化合物(0.056g，33％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ2.77-3.11(d+dd，4H，H-1，H-14，J＝4.58，11.56，16.07)，3.96(t，2H，H-3，H-12，J＝7.28)，4.16(d，2H，H-7，H-8，J＝7.69)，4.44(q，2H，H-6，H-9，J＝3.83，4.43)，4.62(d，4H，2x Ph-CH2；J＝3.40)，4.92(d 2H，2x OH-CH，J＝7.23)，5.08(d，2H，CH2-OH，J＝4.10)，5.27(q，2H，C-2，C-13，J＝3.61，5.53)，7.11-7.51(m，16H，4xPh)，7.82(d，2H，NH，J＝8.72)13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ54.79(C-1，C-14)，56.57(C-3，C-12)，64.88(2x Ph-CH2)，69.81(C-7，C-8)，72.01(C-2，C-13)，79.53(C-6，C-9)，114.80，115.15，124.18，125.70，124.91，126.09，127.16，129.55，129.68，130.10，140.55，141.90，157.86，161.76(4x Ph)170.64(C-5，C-10)。
實施例13N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(4-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺A制備4-氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯按實施例7A描述的方法，但是使用4-氟代芐醇，得到(3.036g，81％)。
1H-NMR(CDCl3，250MHz)δ5.29(s，2H，H-4)，7.18-7.43(m，6H，Ph)，8.45(s，1H，NH)。
13C-NMR(CDCl3，62.9MHz)δ70.02(C-4)，91.35(C-1)，115.32，115.67，129.77，129.90，131.26，(Ph)，162.40(C-2)。
B 制備2，5-二-O-(4-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯按實施例7B描述的方法，但是使用4-氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯，得到白色固體(0.242g，54％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ4.74(d，4H，2x Ph-CH2，J＝6.87)，4.87(d，2H，H-3，H-4，J＝4.00)，5.24(d，2H，H-2，H-5，J＝4.02)，7.18-7.47(m，8H，2x Ph)13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ71.17(C-3，C-4)，74.25(C-2，C-5)，74.68(2x Ph-CH2)，114.92，115.27，130.00，130.13，133.07，171.54(C-1，C-6)。
C按實例10描述的方法，但使用2，5-二-O-(4-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯，得到標(biāo)題化合物(0.053g，40％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ2.78-3.11(d+dd，4H，H-1，H-14，J＝4.63，11.53，16.08)，3.95(t，2H，H-3，H-12，J＝7.64)，4.11(d，2H，H-7，H-8，J＝8.04)，4.45(m，2H，H-6，H-9)，4.51(d，4H，2x Ph-CH2；J＝6.02)，4.89(d 2H，2x OH-CH，J＝7.45)，5.10(d，2H，CH2-OH，J＝4.16)，5.27(q，2H，C-2，C-13，J＝3.59，4.96)，7.09-7.84(m，16H，4x Ph)，8.30(d，2H，NH，J＝8.74)13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ54.80(C-1，C-14)，56.56(C-3，C-12)，69.72(2x Ph-CH2)，70.38(C-7，C-8)，72.02(C-2，C-13)，79.36(C-6，C-9)，114.68，115.01，124.23，124.71，126.09，127.18，129.62，129.74，134.15，140.56，141.92，159.55，163.40(4x Ph)170.81(C-5，C-10)。
實施例14N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-苯基芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺A制備4-溴代芐基三氯乙酰亞氨酸酯按實施例7A描述的方法，但是使用4-溴代芐醇，得到產(chǎn)物(3.2g，90％)。
1H-NMR(CDCl3，250MHz)δ5.3(s，2H)，7.3(d)，7.5(d)，8.4(s)。
13C-NMR(CDCl3，62.9MHz)δ69.84，122.32，129.40，131.65，134.38，162.32。
B制備2，5-二-O-(4-溴代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯按實施例7B描述的方法，但是使用4-溴代芐基三氯乙酰亞氨酸酯，得到產(chǎn)物(0.739g，83％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ4.7(d)，4.8(d)，4.9(d)，5.3(d)，7.4(d)，7.6(d)。
13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ71.27，74.40，74.92，130.08，131.36，136.44，171.68。
C制備N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-溴代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺按實例10描述的方法，但使用2，5-二-O-(4-溴代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯，得到標(biāo)題化合物(0.0746g，66％)。
13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ17.93，19.81，26.32，30.84，58.93，72.11，72.51，80.72，122.67，130.36，132.29，136.80，172.35，172.88。
D制備標(biāo)題化合物。在氮氣環(huán)境中，將上述得到產(chǎn)物(30mg，0.039mmol)、苯基硼酸(23.6mg，0.194mmol)、Pd(PPh3)4(2.2mg，0.0019mmol)、NaCO3(77.6μl，2M)、EtOH(60μl)、H2O(80μl)及二甲氧基乙烷(240μl)在一個帶螺絲帽的反應(yīng)管中混合。將該管用微波45W照射4分鐘。將管在水中冷卻，再濃縮反應(yīng)混合物并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，得到28mg產(chǎn)物。
13C-NMR(CDCl3，62.9MHz)δ17.08，19.79，26.18，29.04，58.42，73.28，73.64，81.96，127.20，127.68，128.96，129.01，135.26，140.51，141.71，170.55，172.53。
實施例15N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-(3-噻吩基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺制備標(biāo)題化合物。在氮氣環(huán)境中，將從上述實施例14C得到的產(chǎn)物(33mg，0.043mmol)、3-噻吩硼酸(23.9mg，0.214mmol)、Pd(PPh3)4(2.5mg，0.00214mmol)、NaCO3(85μl，2M)、EtOH(65μl)、H2O(90μl)及二甲氧基乙烷(270μl)在一個帶螺絲帽的反應(yīng)管中混合。將該管用微波45W照射4分鐘。將該管在水中冷卻，再濃縮反應(yīng)混合物并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，得到30mg產(chǎn)物。
13C-NMR(CDCl3/MeOH-d462.9MHz)δ16.55，18.42，24.91，29.54，57.64，70.96，71.77，79.38，119.70，125.34，125.63，125.76，128.00，135.14，141.08，171.32，171.66。
分析計算值C，61.61；H，6.47；N，7.19。實測值C，61.2；H，6.5；N 7.2。
實施例16N1，N6-二[(1S)-1-苯基-1-(甲基氨基甲酰基)甲基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺將從實施例1中得到的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯(150mg，0.423mmol)溶于乙腈(1ml)中，并向攪拌的溶液中加入苯甘氨酸-N-甲酰胺(271mg，1.67mmol)。將溶液加熱至65°共14小時，然后濃縮。粗品用硅膠柱層析(氯仿-甲醇9∶1)純化。
13C-NMR(CDOD及CDCl3)δ26.3，26.4，57.1，71.8，73.4，80.3，127.4，128.3，128.4，128.5，128.6，129.0，136.5，137.2，170.3，171.3。
分析計算值C，66.85；H，6.20；N，8.21.實測值C，66.74 H，6.34；N 8.12。
實施例17N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(3-氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺A將四丁基硫酸氫銨(30mg，0.09mmol)加入到在CH2Cl2(15ml)及KOH(50％，15ml)中的3-氟代芐醇(1.6g，12.4mmol)中。先將該混合物冷至-15℃，然后加入三氯乙腈(1.5ml，14.9mmol)。在-10℃ 30分鐘，在室溫2.5小時后，分離各相。水相用CH2Cl2萃取兩次。合并有機相用MgSO4干燥，并用硅膠柱層譜(甲苯)純化，得到為清澈油狀物的3-氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯(3.27g，95％)。
1H-NMR(CDCl3)δ5.3(s)，7.0-7.15(m)，7.3-7.45(m)，8.4(s)。
B制備2，5-二-O-(3-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯按實施例7B描述的方法，但是使用3-氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯，得到白色固體(0.220g，33％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ4.8(d，4H，J＝5.8)，4.9(d，2H，J＝4.1)，5.25(d，2H，J＝3.9)，7.15-7.25(m，8H)，7.3-7.35(m，2H)13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ71.08，74.27，74.67，114.45，114.80，123.59，130.30，130.53，139.8，171.55。
C按實施例7C的方法，但是使用2，5-二-O-(3-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯，得到為白色固體的N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲酰基)丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(3-氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺(0.030g，16％)。
實施例18N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(3-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺按實施例10的方法制備，但是使用從實施例17B中得到的2，5-二-O-(3-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯(0.03g，0.08mmol)及(1S，2R)-1-氨基-2-茚滿醇(0.046g，0.31mmol)，得到標(biāo)題化合物(0.04g，76％)。
13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ39.4，56.6，69.7，70.2，72.0，79.5，113.8，113.9，114.2，114.3，123.2，124.2，124.7，126.1，127.2，130.0，130.1，140.6，141.0，141.1，141.9，160.1，164.0，170.7。
實施例19N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺按實施例7C的方法制備，但是使用2，5-二-O-(2-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯(實施例12B)，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.062g，38％)。
13C-NMR(DMSO-d6，62.9MHz)δ17.90，19.11，25.29，30.43，57.49，64.78，69.74，79.38，114.82，115.15，124.18，124.59，129.59，130.14，170.14，170.93。
實施例20N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2，4-二氟代芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺A 將四丁基硫酸氫銨(15mg)加入到在CH2Cl2(10ml)及KOH(50％，10ml)中的2，4-二氟代芐醇(1.0g，6.94mmol)中。將該混合物冷至-15℃，然后加入三氯乙腈(1.2ml，8.32mmol)。在在-15℃ 30分鐘及在室溫3小時，分離各相。水相用CH2Cl2萃取兩次。合并有機相用MgSO4干燥并濃縮至三分之一。殘余物通過硅藻土過濾并濃縮，得到為黃色油狀物的2，4-二氟芐基三氯乙酰亞氨酸酯粗品(1.83g，92％)。
1H-NMR(CDCl3)δ5.35(s)，6.75-6.90(m)，7.50(m)，8.50(s)。13C-NMR(CDCl3，62.9MHz)δ64.1，91.1，103.9，111.1，118.6，131.2，158.9，161.0，162.3，162.9，165.2。
B制備2，5-二-O-(2，4-二氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯按實施例7B描述的方法，但是使用2，4-二氟代芐基三氯乙酰亞氨酸酯，得到為白色固體的標(biāo)題芐基化的二內(nèi)酯(0.97g，99％)。
1H-NMR(DMSO-d6，250MHz)δ4.75(t，4H，J＝2.1，3.3)，5.20(d，4H，J＝6.6)，6.9-7.1(m，4H)，7.5-7.65(m，2H)。
C將從上述得到的芐基化二內(nèi)酯(0.11g，0.28mmol)與N-甲基-L-纈氨酸(0.22g，1.66mmol)在二氯甲烷(1ml)中回流過夜。濃縮并用硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇9∶2)純化，得到標(biāo)題二酰胺(0.042g，23％)，為白色固體。
13C-NMR(MeOH-d4，62.9MHz)δ18.4，19.7，26.2，31.2，59.9，66.8，72.1，81.4，104.2，104.6，104.9，112.0，112.4，121.7，122.1，133.1，133.2，173.3，173.8。
實施例21N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2，4-二氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺按實施例20C中的方法，但是使用(1S，2R)-1-氨基-2-茚滿醇(0.16g，1.09mmol)，得到為白色固體的標(biāo)題化合物(0.048g，25％)。
1H-NMR(MeOH-d4，62.9MHz)δ2.90(2d，2H)，3.15(2d，2H)，4.20(d，2H)，4.62(m，4H)，4.7(s，2H)，5.4(d，2H)，6.8-7.0(m，4H)，7.2-7.4(m，8H)，7.45-7.65(m，6H)。
實施例22N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-吡啶基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺在氮氣環(huán)境中，將從上述實施例14C得到的產(chǎn)物(30mg，0.039mmol)、三甲基-2-吡啶基錫(47.0mg，0.194mmol)、Pd(PPh3)4(2.25mg，0.0010mmol)、DMF(1ml)及CuO(3.1mg，0.039mmol)在一個帶螺絲帽的反應(yīng)管中混合。將該管用微波60W照射2分鐘。該混合物用CH2Cl2(50ml)稀釋，用鹽水(3×20ml)洗滌，濃縮并用硅膠柱層析(CH2Cl2-MeOH 15∶1)純化，得到標(biāo)題化合物16mg。
13C-NMR(CDCl3/MeOH-d462.9MHz)δ18.6，20.0，26.4，31.9，60.1，72.3，73.2，81.6，122.7，123.9，128.3，129.7，139.1，140.1，150.4，158.7，173.7，174.1。
實施例23N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-吡啶基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺根據(jù)與實施例22相同的方法，但是使用三甲基-3-吡啶基錫(47.0mg，0.194mmol)，用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 9∶1)純化，得到標(biāo)題化合物15mg。
13C-NMR(CDCl3/MeOH-d462.9MHz)δ18.1，20.0，31.1，59.2，72.4，73.0，81.0，125.1，128.1，129.7。
實施例24N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[(4-(3-硝基苯基)芐基)氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺在氮氣環(huán)境中，將從上述實施例14C得到的產(chǎn)物(200mg，0.259mmol)、3-硝基苯基硼酸(216.1mg，1.294mmol)、Pd(PPh3)4(15.0mg，0.0129mmol)、NaCO3(259μl，2M)、EtOH(773μl)、H2O(1288μl)及二甲氧基乙烷(3091μl)在一個帶螺絲帽的反應(yīng)管中混合。將該管置于80℃中過夜。該混合物用CH2Cl2(50ml)稀釋，用鹽水(3×20ml)洗滌，濃縮并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，得到標(biāo)題化合物206mg。
13C-NMR(DMSO-d662.9MHz)δ18.1，19.2，25.4，30.5，57.6，69.8，70.7，79.5，120.9，122.0，126.8，128.4，130.4，133.1，137.0，138.5，141.4，148.4，170.0，171.1。
實施例25N1，N6-二[(1S)-2-甲基-1-(甲基氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二[4-(2-噻吩基)芐氧基]-3，4-二羥基已烷二酰胺在氮氣環(huán)境中，將從上述實施例14C得到的產(chǎn)物(100mg，0.129mmol)、2-噻吩硼酸(82.8mg，0.647mmol)、Pd(PPh3)4(7.49mg，0.0065mmol)、NaCO3(129μl，2M)、EtOH(386μl)、H2O(644μl)及二甲氧基乙烷(1546μl)在一個帶螺絲帽的反應(yīng)管中混合。將該管置于80°C中過夜。該混合物用CHCl3(50ml)稀釋，用鹽水(3×20ml)洗滌，濃縮并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，得到標(biāo)題化合物88.8mg。
13C-NMR(CDCl3/MeOH-d462.9MHz)δ17.0，18.3，19.6，26.0，29.0，50.7，58.3，72.9，73.0，81.4，123.4，125.2，126.2，128.1，128.6，131.9，134.6，135.3，143.5，170.7，172.1。
分析實測值C，68.9；H，6.33；N，7.36。
實施例26N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺A在0℃、氬氣環(huán)境下，向上述實施例10得到的產(chǎn)物(400mg，620mmol)在CH2Cl2(3ml)的攪拌溶液中加入盧剔啶(142μl，1.22mmol)及叔丁基二甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(296μl，1.29mmol)。4小時后，加入1M NaOH(0.5ml)，并且用1M HCl及鹽水洗滌混合物。將有機層干燥、濃縮并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 80∶1)純化，得到二甲硅烷基化的化合物(313mg，355μmol，57％)。
13C-NMR(CDCl3)δ-4.8，17.9，25.7，40.6，56.3，71.1，74.0，77.2，124.5，124.8，126.9，127.9，128.2，128.5，136.7，139.8，140.9，176.2。
B向上述步驟a)得到的產(chǎn)物(922mg，1.05mmol)在CH2Cl2(21ml)中的溶液中加入N，N-硫代羰基二咪唑(598mg，3.36mmol)。將該混合物回流22小時，濃縮并用硅膠柱層析(甲苯-EtOAc 3∶1)純化，得到中間體(887mg，0.961mmol，92％)。
13C-NMR(CDCl3)δ-4.8，-4.9，17.8，25.6，40.5，56.9，74.3，75.2，78.2，82.7，124.6，124.8，126.6，128.6，128.8，129.0，135.6，140.0，141.5，165.7，192.0。
C在氬環(huán)境下、用20分鐘，向上述步驟b)中得到的產(chǎn)物在甲苯中的回流溶液中并加入三丁基氫化錫(0.70ml，2.6mmol)及α，α′-偶氮異丁腈(284mg，1.73mmol)在甲苯中的溶液。在20小時后，再加入三丁基氫化錫(0.23ml)及α，α′-偶氮異丁腈(71mg)。再過4小時，將混合物濃縮，溶于甲苯中，并用2.5M NaOH及水洗滌，干燥并濃縮。殘余物用硅膠柱層析(甲苯-EtOAc 3∶1)純化，得到(150mg，0.17mmol，20％)。
13C-NMR(CDCl3)δ-4.7，-4.8，18.0，25.7，36.4，40.5，40.6，56.3，56.4，69.8，73.3，74.0，74.5，82.0，124.5，124.7，124.8，126.9，127.0，127.1，127.7，127.9，128.0，128.2，128.3，128.4，128.5，136.7，139.7，141.2，141.3，171.3，173.4。
D向從上述步驟c)中得到的產(chǎn)物(150mg，0.17mmol)在MeOH(6ml)中的攪拌溶液中加入H+-Dowex。在室溫下在3天后，將混合物過濾、濃縮并用硅膠柱層析(CHCl3-MeOH 20∶1)純化，然后從MeOH中重結(jié)晶，得到N1，N6-二[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-(2R，3R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3-羥基已烷二酰胺(38mg，0.060mmol，34％)。
13C-NMR(CDCl3-MeOH-d6)δ35.9，39.8，57.2，57.3，69.2，72.5，72.7，73.4，74.0，77.6，84.0，124.1，124.2，125.5，127.2，128.3，128.4，128.5，128.8，137.1，140.2，140.4，140.6，140.7，171.4。
實施例27
N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(2-氯代-6-氟代芐基)-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺A在固體載體上制備(1S，2R)-1-苯二酰亞氨基-2-茚滿醇。

將干燥的帶一個二氫吡喃連接基團(linker)的Merrifield樹脂(300mg，2.1mmol/g，0.65mmol連接基團)在氬氣環(huán)境下于1，2-二氯乙烷(4.2ml)中溶脹。加入無水PPTS(300mg，1.2mmol)及(1S，2E)-1-苯二酰亞氨基-2-茚滿醇(501mg，1.8mmol)，然后將混合物加熱至75C。在20小時后，將混合物冷至室溫，然后用CH2Cl2(20ml)、THF(10ml)洗滌固體并在真空中干燥。
B在固體載體上制備(1S，2R)-1-氨基-2-茚滿醇。

將在乙醇中的甲胺(4.0ml，33％)加入到從上步得到的固體原料中，并攪拌16小時。得到的固體用CH2Cl2(10ml)、THF(10ml)，MeOH(10ml)及CHCl3(10ml)洗滌并在真空中干燥。
C在固體載體上制備N1-(2，5-二-O-(2-氟代芐基)-1，4-甘露糖內(nèi)酯-6-酰胺-N6-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]。

在氬環(huán)境中，將從上步得到的固體原料在1，2-二氯乙烷(4.5ml)中溶脹40分鐘，。加入2，5-二-O-(2-氟代芐基)-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯(實施例12B)(502mg，1.29mmol)，該混合物在50℃下保持16小時，然后冷卻并用CH2Cl2(10ml)及CHCl3(10ml)洗滌。
D在固體載體上制備N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(2-氯代-6-氟代芐基)-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺。

在氬環(huán)境中，將從上步得到的固體原料放在CH3CN(4.5ml)中溶脹40分鐘。加入2-氯代-6-氟代芐胺(249mg，1.56mmol)，該混合物在50℃下保持16小時，然后冷卻并用CH2Cl2(10ml)及CHCl3(10ml)洗滌。
E制備N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(2-氯代-6-氟代芐基)-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(2-氟代芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺。

將在甲醇中2.3M HCl(8.5ml)加入到從上步得到的固體原料中。在氬環(huán)境中、4小時后，固體用CH2Cl2(20ml)及MeOH(20ml)洗滌。將收集合并的有機層，并用CHCl3(20ml)稀釋，再用飽和NaHCO3(2×30ml)水溶液洗滌。合并的水層用CHCl3(2×40ml)萃取。濃縮合并的有機層并用硅膠層析(CHCl3-MeOH 40∶1)純化，得到標(biāo)題化合物(68mg，23％以投料計產(chǎn)率)。
13C-NMR(CDCl3)δ34.3，34.3，39.2，57.8，67.4，68.2，71.3，71.5，72.4，72.5，79.8，80.9，114-140，159.1，159.2，162.8，162.9，163.4，171.2，172.1。
實施例28N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(2-甲基-1-([2-吡啶基甲基]氨基甲?；?丙基]-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺A制備N1-(2，5-二-O-芐基)-1，4-甘露糖內(nèi)酯-6-酰胺-N6-[叔丁基纈氨酸酯]。將叔丁基纈氨酸酯(0.4g)及從實施例1B中得到的產(chǎn)物CH2Cl2(50ml)中在4℃保持16小時。濃縮并用硅膠柱層析(EtOAc-已烷1∶2)純化，得到產(chǎn)物(120mg)。
B制備N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(叔丁基纈氨酸酯)-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺。將(1S，2R)-1-氨基-2-茚滿醇加入到從上述得到的產(chǎn)物的CH2Cl2溶液中，并放置16小時。濃縮并用硅膠柱層析(EtOAc-已烷1∶2)純化，得到產(chǎn)物(135mg)。
C制備N1-[(1S，2R)-2-羥基-2，3-二氫-1H-1-茚基]-N6-(纈氨酸)-(2R，3R，4R，5R)-2，5-二(芐氧基)-3，4-二羥基已烷二酰胺。從上面得到的產(chǎn)物(120mg)用TFA(5ml)處理20分鐘。濃縮并在真空中干燥，得到產(chǎn)物(96mg)。
D制備標(biāo)題化合物。向在CH2Cl2中的上述得到的產(chǎn)物中加入1-羥基苯并三唑水合物(14μl)、2-氨基甲基吡啶(20mg)及1，3-二環(huán)已烷基碳二亞胺(35mg)。1小時后，混合物直接用硅膠柱層析(EtOAc-MeOH9∶1)純化，得到產(chǎn)物(38mg)。實施例29

按上述描述，使實施例7的化合物的對-溴代類似物的P1及P1′填加基團伸展。在冰浴上、氮氣環(huán)境中，將苯乙烯(12.1mg，0.1165mmol)及少量THF加入到一個干燥的容器中。在攪拌下通過注射加入9-BBN。使混合物升至室溫并攪拌4小時。在氮氣環(huán)境中，加入用類似于實施例7的方法制備的溴化中間體(30mg，0.002mmol)、K2CO3(21.45mg，0.155mmol)及Pd(PPh3)(2.70mg，0.002mmol)的1mlDMF液，并于50℃加熱過夜。加入約50ml氯仿，并將混合物與3×30ml鹽水一起振搖，干燥并在真空中蒸發(fā)過夜。將上述的產(chǎn)物經(jīng)硅膠層析純化。
13C-NMR(CDCl3)δ172.5，170.2，142.4，141.4，133.6，128.9，128.3，128.1，126.0，82.0，73.6，73.3，58.3，37.5，28.7，25.9，19.7，16.8。實施例30

將三丁基-2-噻唑基錫(72.6mg，0.19mmol)、Pd(PPh3)4(2.25mg，0.002mmol)、實施例7的溴化類似物(30mg，0.034mmol)、Ag2O(9.0mg，0.04mmol)的1ml DMF液加入至一個微管(microtube)中，在60W微波輻射2分鐘。加入50ml氯仿，并用3×20ml鹽水洗滌混合物。將有機相干燥并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物。
13C-NMR(CDCl3)δ173.3，172.7，144.0，140.4，133.8，129.4，127.5，120.4，81.2，72.8，72.2，59.3，31.1，26.5，19.9，18.1。實施例31

在氮氣流下，將實施例7的溴化類似物(38.6mg，0.05mmol)、丙烯酸甲酯(21.5mg，0.25mmol)、二異丙基乙胺(25.8mg，0.2mmol)、Pd(OAc)2(1.12mg，0.05mmol)、(o-tol)3P(3.65mg，0.012mmol)及水(0.15ml)的DMF(0.85ml)的混合物脫氣10分鐘。將反應(yīng)混合物攪拌并加熱至100C共48小時。冷卻該反應(yīng)混合物，并倒入飽和氯化鈉水溶液(10ml)中。用二氯甲烷(3×10ml)萃取水層，合并有機相，用飽和氯化鈉水溶液(3×5ml)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。殘余物在硅膠柱上純化，得到上面描述的產(chǎn)物(27mg，69％)。
13C-NMR(CDCl3)δ171.7，171.6，171.5，167.7，14.4，139.2，134.3，131.7，129.6，128.4，118.0，80.5，77.7，77.2，76.7，72.4，71.8，51.8，49.7，49.4，49.1，48.8，48.5，29.8，25.9，19.4，17.3。實施例32 重復(fù)實施例31的反應(yīng)條件，采用2-乙氧基-3-酮-1-環(huán)已二烯，得到化合物的混合物，用7％MeOH的二氯甲烷展開分離所述混合物(制備板)，得到66mg上述粗品產(chǎn)物。
13C-NMR(CDCl3)δ171.5，137.3，137.0，128.5，128.2，128.0，127.4，80.5，77.5，77.2，77.0，76.5，72.4，71.8，67.9，58.0，50.0，49.7，49.3，49.0，48.7，48.4，48.1，38.7，30.6，29.5，25.6，22.3，19.3，17.1，15.1。實施例33 在-78C、用5分鐘向?qū)嵤├?2得到的化合物(18mg，0.02mmol)的CH2Cl2溶液中滴加1-N-三溴化硼(0.1ml)。在該溫度下，將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后于-12℃在冰箱中保持2小時。然后將該反應(yīng)混合物倒入飽和NaCl水溶液(5ml)中，用二氯甲烷(3×5ml)萃取，再用飽和NaCl水溶液(2×5ml)洗滌合并的有機層，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。殘余物在硅膠柱上純化，得到上面描述結(jié)構(gòu)的粗品(9.8mg，58％)。
13C-NMR(CDCl3)δ171.5，136.5，128.4，127.9，127.6，80.3，77.5，76.5，72.4，71.8，58.0，49.9，49.6，48.6，48.3，48.0，35.7，29.5，28.6，25.7，22.4，19.3，17.1。
生物實施例1在分光光度酶測定中，用生色的酶底物His-Lys-Ala-Arg-Val-Leu-p-硝基-Phe-Glu-Ala-Nle-Ser-酰胺和純化的HIV蛋白酶，測試代表性化合物的HIV蛋白酶活性及。連續(xù)記錄在300nm處吸收度的變化來檢測斷裂率。由劑量反應(yīng)曲線計算代表化合物濃度的IC50(抑制酶活性的50％的濃度)。但是，本發(fā)明的化合物是如此的有活性，因此可以用親合常數(shù)(Ki)來提供化合物之間更有效的比較。
也在細(xì)胞培養(yǎng)中測試化合物對HIV蛋白酶的活性。用10 TCIDHIV-1(每2×105細(xì)胞)感染生長于RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基(含有10％胎牛血清)中的MT4細(xì)胞，并培養(yǎng)6小時。加入XTT，在隨后的6小時中產(chǎn)生的XTT甲？的量代表存活的細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果用ED50表示，即為抑制病毒復(fù)制50％的本發(fā)明的化合物的濃度，以μg/ml表示。
表1


權(quán)利要求
1.式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽及前體藥物
其中A′及A″獨立為相同或不同的式II基團
其中R′是H、CH3、C(CH3)2、-ORa、-N(Ra)2、-N(Ra)ORa或-DPR是H或CH3；Ra是H、C1-C3烷基；D是一個鍵、C1-3亞烷基、-C(＝O)-、S(O)-或-S(O)2；P是一個任選取代的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)；R″是H、在天然氨基酸中發(fā)現(xiàn)的任一側(cè)鏈、carboxacetamide或基團(CH2)nDP；M是一個鍵或-C(＝O)N(R)-；Q不存在、一個鍵、-CH(OH)-或-CH2-；或R″與Q、M及R’定義為一個任選取代的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)，其任選與另一個5或6元碳環(huán)或雜環(huán)稠合；前提為如果M是一個鍵及Q不存在，那么R′是-ORa、-N(Ra)2-、-N(Ra)ORa或-DP；X是H、OH、OCH3；Y是H、OH、OCH3，但X及Y不都是H；Z’及Z″獨立為-(CH2)mP，其中P是按上述定義；n及m獨立為0、1或2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中A′及/或A″是式IIa基團
其中n是0、1或2；R′是甲基或甲氧基；及R″是氫、甲基、乙基、異丙基，環(huán)烷基例如環(huán)丙基、環(huán)丁基或環(huán)已基、環(huán)烯基、芐基、carboxacetamide或4-咪唑基甲基或在天然氨基酸中發(fā)現(xiàn)的側(cè)鏈。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中n是0及R′是甲基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中A′及/或A″是式IIb基團
其中R″是按權(quán)利要求2定義，及R是氫或甲基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1化合物，其中A′及/或A″是式IIc基團
其中Q是一個鍵、亞甲基或-C(OH)-，R′是一個任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)基團；及R″及R按權(quán)利要求2定義。
6.根據(jù)權(quán)利要求3、4或5化合物，其中R′是亮氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、組氨酸或脯氨酸的側(cè)鏈，最優(yōu)選為纈氨酸的側(cè)鏈。
7.根據(jù)權(quán)利要求1化合物，其中A′及/或A″是式III基團
其中R是H或CH3，R1是H、NR4R4、C(＝O)R3、CR3R4或一個單環(huán)，任選取代的碳環(huán)或雜環(huán)；R2是OH、或與R1一起是＝O，或者如果R1是NR4R4，那么R2可是H；R3是H、鹵，C1-C3烷基、OR5、NR4R4；R4是H、C1-C3烷基；R5是H或一個藥學(xué)上可接受的酯；R6是OH、NH2、氨基甲?；螋然?；R7是氫、C1-C4直鏈或支鏈烷基或者與相鄰的碳原子形成一個稠合苯基或嘧啶。
8.根據(jù)權(quán)利要求8化合物，其中所述式III部分的結(jié)構(gòu)為
9.根據(jù)權(quán)利要求1化合物，其中A′及A″是相同的。
10.根據(jù)權(quán)利要求1化合物，其中Z′及/或Z″是未取代或由一至三個選自下列的取代基取代的芐基鹵、甲氧基、羥基、氨基、氰基、羥甲基、氨基甲基、嗎啉乙氧基、烷基磺?；?、氨基甲酰基、芐氧基苯基(其本身的取代按在此定義)，或包含一或兩個雜原子的5或6元雜環(huán)例如噻吩、嘧啶、N-嗎啉、N-哌啶、N-哌嗪、N′-甲基-N-哌嗪、N-吡咯酮、N-吡咯烷等，任選按在此定義取代。
11.根據(jù)權(quán)利要求10化合物，其中Z′及/或Z″是芐基、2-氟代芐基、2-甲基芐基、2，4-二氟代芐基、4-氟代芐基、4-溴代芐基、4-苯基芐基、4-苯硫基(thiophenyl)芐基、4-(4′-硝基苯基)芐基、4-噻吩芐基、4-噻唑基芐基或4-(吡啶基)芐基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1化合物，其中Y是H及/或X是OH。
13.根據(jù)權(quán)利要求1化合物，有2R，3R，4R，5R構(gòu)型。
14.藥用組合物，它包括前述權(quán)利要求任何一項所定義的化合物及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
15.抑制HIV復(fù)制的方法，它包括給予患有所述疾病的患者有效量的權(quán)利要求1至13中任何一項所定義的化合物。
16.制備式I化合物的方法，其中X、Y、Z′及Z″按權(quán)利要求1中定義，且每個A′及A″獨立為式II基團或常規(guī)的蛋白酶P-2/P-2′填加(filling)基團，該方法包括i)使L-甘露糖-1，46，3-二-內(nèi)酯O-烷基化形成Z′及Z″基團，ii)用類似或不同的伯或仲胺打開內(nèi)酯分別形成A′及A″基團；及iii)任選將C-3及C-4轉(zhuǎn)化為適當(dāng)?shù)腦及Y″基團。
17.式IV化合物
其中Z′及Z″如權(quán)利要求1所定義。
18.按權(quán)利要求17定義的化合物，具有下面的立體化學(xué)
19.根據(jù)權(quán)利要求17的化合物，其中Z′及Z″各自獨立為芐基、2-氟代芐基、2-甲基芐基、2，4-二氟代芐基、4-氟代芐基、4-溴代芐基、4-苯基芐基、4-苯硫基芐基、4-(4′-硝基苯基)芐基、4-噻吩芐基、4-噻唑基芐基或4-(吡啶基)芐基。
20.根據(jù)權(quán)利要求17的化合物，其中Z′及Z″是相同的。作為HIV天冬氨酰基蛋白酶抑制劑的式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽及前體藥物。它們可以從新的2，5-二-O-芐基-L-甘露糖-1，46，3-二內(nèi)酯中間體用簡單的兩步合成法制得，式(I)如下
其中A′及A″獨立為相同或不同的式II基團
其中R′是H、CH3、C(CH3)2、-ORa、-N(Ra)2、-N(Ra)ORa或-DPR是H或CH3；Ra是H、C1-C3烷基；D是一個鍵、C1-3亞烷基、-C(＝O)-、-S(O)-或-S(O)2；P是一個任選取代的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)或雜環(huán)；R″是H、在天然氨基酸中發(fā)現(xiàn)的任一側(cè)鏈、carboxacetamide或基團(CH2)nDP；M是一個鍵或-C(＝O)N(R)-；Q不存在、一個鍵、-CH(OH)-或-CH2-；或R″與Q、M及R’定義為一個任選取代的5或6元碳環(huán)或雜環(huán)，其任選與另一個5或6元碳環(huán)或雜環(huán)稠合；前提為如果M是一個鍵及Q不存在，那么R’是-ORa、-N(Ra)2-、-N(Ra)ORa或-DP；X是H、OH、OCH3；Y是H、OH、OCH3，但X及Y不都是H；Z’及Z″獨立為-(CH2)mP，其中P是按上述定義；n及m獨立為0、1或2；
全文摘要
作為HIV天冬氨?；鞍酌敢种苿┑氖舰窕衔锛捌渌帉W(xué)上可接受的鹽及前體藥物。它們可以從新的2,5－二－O－芐基－L－甘露糖－1,4:6,3－二內(nèi)酯中間體用簡單的兩步合成法制得。在式(Ⅰ)中A’及A”獨立為相同或不同的式Ⅱ基團,其中:R’是H、 CH
文檔編號C07D213/30GK1258301SQ98805589
公開日2000年6月28日 申請日期1998年4月3日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月4日
發(fā)明者B·克拉松, I·S·A·克瓦恩斯特倫, B·B·薩穆埃爾松 申請人:美迪維爾公司