一種外消旋2，3-二苯基丙酸的手性拆分方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種外消旋2，3-二苯基丙酸的手性拆分方法：(1)將有機(jī)溶劑A、有機(jī)溶劑B與含有羥丙基-e-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按體積比1?9:1?9:10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；(2)將外消旋2，3-二苯基丙酸用所得有機(jī)相溶解，制成樣品;(3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋2，3-二苯基丙酸；(4)從收集的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收，分別得到右旋2，3-二苯基丙酸單體和左旋2，3-二苯基丙酸單體；本發(fā)明首次采用逆流色譜拆分外消旋2，3-二苯基丙酸，所述方法適用于各種型號(hào)的制備型逆流色譜儀，分離所得單體的純度大于97%、回收率大于85%。
【專利說(shuō)明】一種外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法 (一）

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種外消旋體的拆分方法，具體涉及一種從外消旋2, 3-二苯基丙酸 中拆分出左旋2, 3-二苯基丙酸和右旋2, 3-二苯基丙酸的方法。 (二）

【背景技術(shù)】
[0002] 2, 3-二苯基丙酸作為一種重要的藥物中間體，可用于合成芳代氨基磺酸類衍 生物，用于治療血管滲漏綜合癥、眼部水腫、新血管形成及其相關(guān)疾病等。獲得光學(xué)純的 2, 3-二苯基丙酸也是藥物合成的必然要求。因此，對(duì)外消旋2, 3-二苯基丙酸進(jìn)行手性拆分 研究，建立快速、有效的拆分方法是一個(gè)具有理論及實(shí)際意義的課題。
[0003] 含有手性中心的化合物，其對(duì)映體通常具有極為相近的理化性質(zhì)，但藥理和毒理 作用卻存在很大差異，往往一種立體異構(gòu)體有藥效而它的鏡像分子卻很小，甚至完全沒(méi)有 藥效或具有副作用，使得獲得純的對(duì)映體顯得尤為重要。美國(guó)食品和藥物管理局早在1992 年就規(guī)定，今后凡開(kāi)發(fā)具有不對(duì)稱中心的藥物，必須給出手性拆分的結(jié)果。
[0004] 制備色譜分離是獲得單一對(duì)映體的經(jīng)典方法，而高速逆流色譜技術(shù)（high speed countercurrent chromatography，HSCCC)得益于其兩相均為液體的性質(zhì)，可避免樣品的不 可逆吸附、失活和變性等問(wèn)題，還具有一次性分離制備量大、儀器簡(jiǎn)單易維修且運(yùn)行成本低 等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于手性分離來(lái)說(shuō)是一種理想的制備色譜技術(shù)，因此逆流色譜技術(shù)近年來(lái)已逐步 發(fā)展成為一種備受關(guān)注的制備色譜分離技術(shù)。 (三）


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的是提供一種采用高速逆流色譜技術(shù)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸的方 法。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明以外消旋2, 3-二苯基丙酸為拆分對(duì)象，以羥丙 基-β -環(huán)糊精作為手性試劑，將其添加到水相中，采用液-液分配手性萃取拆分的方法篩 選溶劑體系，并用高速逆流色譜法得到左旋2, 3-二苯基丙酸和右旋2, 3-二苯基丙酸。
[0007] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0008] -種外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，所述方法按如下步驟進(jìn)行：
[0009] (1)將有機(jī)溶劑Α、有機(jī)溶劑B與含有羥丙基_β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按照體 積比1?9:1?9:10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；所述羥 丙基-β -環(huán)糊精的取代度為4. 5?8. 0 ;所述含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的 pH值為I. 0?8. 0 ;所述含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥丙基-β -環(huán)糊精的 濃度為〇. 02?0. 40mol/L ;所述有機(jī)溶劑A為Cl?C8的烷烴；所述有機(jī)溶劑B為C2?C8 的醚或C3?C8的酯類；
[0010] (2)將外消旋2, 3-二苯基丙酸用步驟（1)所得的有機(jī)相溶解，制成樣品；
[0011] (3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：以步驟（1)得到的有機(jī)相 為固定相，水相為流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為2?35°C，開(kāi)啟速度控制 器，轉(zhuǎn)速為200?2000rpm，以0. 1?3. OmL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體 系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)，將步驟（2)制得的樣品由 進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)190?400nm下檢測(cè)流出液，按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收 集器分別收集35min到280min之間梯度時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體 雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二 苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋 2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液；所述前峰是指對(duì)映體雙峰中先出來(lái)的主峰，所述后峰 是指對(duì)映體雙峰中后出來(lái)的主峰；
[0012] (4)從步驟（3)中收集得到的前峰洗脫液中回收，得到右旋2, 3-二苯基丙酸單體； 從步驟（3)中收集得到的后峰洗脫液中回收，得到左旋2, 3-二苯基丙酸單體。
[0013] 本發(fā)明所述的外消旋2,3_二苯基丙酸的手性拆分方法步驟（1)中，優(yōu)選所述有 機(jī)溶劑A為正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷或石油醚；優(yōu)選所述有機(jī)溶劑B為乙醚、甲基 叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯；優(yōu)選所述的含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽 緩沖液的PH值為1. 5?4. 5 ;優(yōu)選所述的含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥 丙基-β -環(huán)糊精的濃度為0. 05?0. 25mol/L ;優(yōu)選所述羥丙基-β -環(huán)糊精的取代度為 5. 5 ?8. 0〇
[0014] 本發(fā)明所述步驟（1)中，特別優(yōu)選所述溶劑體系為正己烷、乙酸乙酯與pH值為 2. 7的含羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液以體積比8:2:10混合制成，其中所述含羥丙 基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥丙基-β -環(huán)糊精的濃度為〇. lmol/L。
[0015] 本發(fā)明所述步驟（2)中，優(yōu)選所述樣品中外消旋2,3_二苯基丙酸的濃度為1? 10mg/mL 〇
[0016] 本發(fā)明所述步驟（3)中，推薦所述梯度時(shí)間間隔為每0. 5?5min收集一次，優(yōu)選 為每2min時(shí)間間隔收集一次洗脫液。
[0017] 本發(fā)明所述步驟⑶中，優(yōu)選所述柱溫為5?30°C ;所述轉(zhuǎn)速為800?1800rpm ; 所述流動(dòng)相泵入柱內(nèi)的流速為〇. 5?2. 5mL/min。
[0018] 本發(fā)明所述步驟（4)中，推薦所述的回收方法為：將前峰洗脫液和后峰洗脫液分 別用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至1?2,再用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中 性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸除溶劑，即分別獲得右旋2, 3-二苯基丙酸單體和左旋 2, 3-二苯基丙酸單體。
[0019] 具體的，最優(yōu)的，推薦本發(fā)明所述拆分方法按如下步驟進(jìn)行：
[0020] (1)將正己烷、乙酸乙酯與pH值為2. 7的含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液 按照體積比8:2:10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；所述羥丙 基-β -環(huán)糊精的取代度為5. 5?8. 0 ;所述含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥 丙基-β -環(huán)糊精的濃度為〇· lmol/L ;
[0021] (2)將外消旋2, 3-二苯基丙酸用步驟（1)所得的有機(jī)相溶解，制成外消旋2, 3-二 苯基丙酸濃度為1?lOmg/mL的樣品；
[0022] (3)采用高速逆流色譜法拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：以步驟（1)得到的有機(jī) 相為固定相，水相為流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5?25°C，開(kāi)啟速度控 制器，轉(zhuǎn)速為800?1800rpm，以0. 5?2. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑 體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)，將步驟（2)制得的樣品 由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)190?400nm下檢測(cè)流出液，按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份 收集器分別收集35min到280min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中 對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋 2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組 分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液；
[0023] (4)從步驟（3)中收集得到的前峰洗脫液中回收，得到右旋2, 3-二苯基丙酸單體； 從步驟（3)中收集得到的后峰洗脫液中回收，得到左旋2, 3-二苯基丙酸單體；所述回收的 方法為：將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1?2,再用乙酸乙酯萃取2? 3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸除溶劑，即分別獲得右 旋2, 3-二苯基丙酸單體和左旋2, 3-二苯基丙酸單體。
[0024] 本發(fā)明可采用分析型、半制備和制備型逆流色譜儀（分析型分離柱柱體積為 20ml，半制備型分離柱柱體積為300ml，制備型分離柱柱體積為1000ml)，逆流色譜儀由恒 流泵、主機(jī)（分離柱）、紫外檢測(cè)器、記錄儀等組成。
[0025] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明首次采用逆流色譜拆分 外消旋2, 3-二苯基丙酸，本方法可以基本達(dá)到分離目的，并且該方法適用于各種型號(hào)的制 備型逆流色譜儀，可以分離得到左旋2, 3-二苯基丙酸和右旋2, 3-二苯基丙酸的單體，其純 度均大于97 %、回收率大于85 %。 (四）

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0026] 圖1 :實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0027] 圖2 :實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0028] 圖3 :實(shí)施例3實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0029] 圖4 :實(shí)施例4實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0030] 圖5 :實(shí)施例5實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0031] 圖6 :實(shí)施例6實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0032] 圖7 :實(shí)施例7實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0033] 圖8 :實(shí)施例8實(shí)驗(yàn)條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0034] 圖9 :實(shí)施例9實(shí)驗(yàn)條件下的半制備型高速逆流色譜圖；
[0035] 圖10 :圖9中A部分（130min?182min)洗脫液的高效液相色譜檢測(cè)譜圖，即右 旋2, 3-二苯基丙酸；
[0036] 圖11 :圖9中B部分（198min?250min)洗脫液的高效液相色譜檢測(cè)譜圖，即左 旋2, 3-二苯基丙酸。 (五）

【具體實(shí)施方式】
[0037] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此：
[0038] 實(shí)施例1
[0039] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用0· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2.7,含有0. 10m〇l/L羥丙基-β-環(huán)糊精，取代度為8.0)按 照8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0040] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相溶解，溶解后制成樣品溶液，待 用。
[0041] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型號(hào) UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有限 公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集60min到115min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù) 紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即60?85min內(nèi)收集的洗 脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即 86?115min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫 液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖1所示），計(jì)算分離度為0.87。將含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯 基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效 液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于98 %。高效液相色譜法檢測(cè)條件為：B〇st〇n Green 0DS(5ym，150mmX4.6mm)色譜柱；柱溫：45°C ;流動(dòng)相：水（水ρΗ4·0,0·5%乙酸-三乙胺 調(diào)節(jié)，含25mmol七1輕丙基-β -環(huán)糊精）：甲醇（60 :40, ν/ν)等度洗脫；流速I. OmL/min ; 檢測(cè)波長(zhǎng)254nm ;進(jìn)樣量：20 μ L。
[0042] 實(shí)施例2
[0043] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用0· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2. 7,含有0. lOmol/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為7. 5)按 照9:1:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0044] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0045] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集35min到55min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根 據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即35?44min內(nèi)收集的 洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段， 即45?55min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫 液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖2所示），計(jì)算分離度為0.68。將含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯 基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效 液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于97%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。 [0046] 實(shí)施例3
[0047] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用0· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2. 7,含有0. lOmol/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為7. 5)按 照7:3:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0048] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0049] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集IlOmin到280min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并 根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即110?180min內(nèi)收 集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí) 間段，即181?280min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的 后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖3所示），計(jì)算分離度為0.68。將含目標(biāo)組分右旋 2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液 進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于97%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施 例1。
[0050] 實(shí)施例4
[0051] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用〇· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2. 7,含有0. lOmol/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為7. 5)按 照8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0052] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0053] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為25°C，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集80min到155min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根 據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即80?112min內(nèi)收集的 洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段， 即113?155min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗 脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖4所示），計(jì)算分離度為0.70。將含目標(biāo)組分右旋2, 3-二 苯基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高 效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于97%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0054] 實(shí)施例5
[0055] (1)將正己烷：甲基叔丁基醚：含有羥丙基環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用 0· lmol/L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2. 7,含有0· lOmol/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為 7.5)按照8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上 下相分開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0056] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0057] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集IOOmin到260min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并 根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即100?170min內(nèi)收 集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí) 間段，即171?260min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的 后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖5所示），計(jì)算分離度為0.72。將含目標(biāo)組分右旋 2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液 進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于97%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施 例1。
[0058] 實(shí)施例6
[0059] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用0· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2.0,含有0. lOmol/L羥丙基-β-環(huán)糊精，取代度為7.5)按 照8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0060] ⑵稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0061] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集70min到HOmin之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根 據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即70?97min內(nèi)收集的 洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段， 即98?HOmin內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗 脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖6所示），計(jì)算分離度為0.79。將含目標(biāo)組分右旋2, 3-二 苯基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高 效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于98%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0062] 實(shí)施例7
[0063] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用0· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 4. 0,含有0. lOmol/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為7. 5)按 照8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0064] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0065] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集70min到HOmin之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根 據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即70?IOOmin內(nèi)收集的 洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段， 即101?HOmin內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗 脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖7所示），計(jì)算分離度為0.88。將含目標(biāo)組分右旋2, 3-二 苯基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高 效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于99%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。 [0066] 實(shí)施例8
[0067] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用0.2m〇l/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2. 7,含有0. 10m〇l/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為7. 5)按 照8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分 開(kāi)，有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0068] (2)稱取2mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用ImL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶液， 待用。
[0069] (3)采用分析型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-20A)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為20mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱填 滿固定相，柱溫為KTC，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0. 5mL/min的流速將流動(dòng)相泵 入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)），由 進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器型 號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠有 限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集46min到82min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液，并根 據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即46?61min內(nèi)收集的 洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段， 即62?82min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫 液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖7所示），計(jì)算分離度為0.62。將含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯 基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液進(jìn)行高效 液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于97%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí)施例1。
[0070] 實(shí)施例9
[0071] (1)將正己烷：乙酸乙酯：含有羥丙基-β_環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液（用〇· Imol/ L磷酸鹽緩沖溶液配制，pH = 2. 7,含有0. lmol/L羥丙基-β -環(huán)糊精，取代度為7. 5)按照 8:2:10的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時(shí)間后，將上下相分開(kāi)， 有機(jī)相作為固定相，水相作為流動(dòng)相。
[0072] (2)稱取50mg外消旋2, 3-二苯基丙酸用5mL有機(jī)相相溶解，溶解后制成樣品溶 液，待用。
[0073] (3)采用半制備型高速逆流色譜儀（上海同田生物技術(shù)有限公司，儀器型號(hào) TBE-200V)拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：分離柱體積為200mL，進(jìn)樣前，將逆流色譜分離柱 填滿固定相，柱溫為l〇°C，開(kāi)啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為800rpm，以2. OmL/min的流速將流動(dòng)相 泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后（即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)）， 由進(jìn)樣閥開(kāi)始進(jìn)樣。然后以波長(zhǎng)254nm的紫外檢測(cè)器（上海金達(dá)生化儀器有限公司，儀器 型號(hào)UVD-200UV)檢測(cè)流出液，并按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集器（上海滬西分析儀器廠 有限公司，儀器型號(hào)SBS-100)分別收集130min到250min之間每2min時(shí)間間隔的洗脫液， 并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段，即130?182min內(nèi) 收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng) 時(shí)間段，即198?250min內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體 的后峰洗脫液。根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖（見(jiàn)圖8所示），計(jì)算分離度為0.66。將含目標(biāo)組分右 旋2, 3-二苯基丙酸單體的前峰洗脫液和含目標(biāo)組分左旋2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫 液進(jìn)行高效液相檢測(cè)，兩個(gè)單體洗脫液的純度均大于98%。高效液相色譜的檢測(cè)條件同實(shí) 施例1。
[0074] 從洗脫液中回收樣品：將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)pH至1?2， 再用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾 液蒸除溶劑，即分別獲得右旋2, 3-二苯基丙酸單體和左旋2, 3-二苯基丙酸單體。右旋 2, 3-二苯基丙酸單體，純度為98. 8 %，回收率為87. 6 %，左旋2, 3-二苯基丙酸單體，純度為 98. 8%，回收率為85. 2%。
【權(quán)利要求】
1. 一種外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于，所述方法按如下步驟進(jìn) 行： (1) 將有機(jī)溶劑A、有機(jī)溶劑B與含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液按體積比 1?9:1?9:10組成溶劑體系，混合均勻，靜置分層，分液得到有機(jī)相和水相；所述羥丙 基-β -環(huán)糊精的取代度為4. 5?8. 0 ;所述含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的pH 值為I. 0?8. 0 ;所述含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥丙基-β -環(huán)糊精的濃度 為0. 02?0. 40mol/L ;所述有機(jī)溶劑A為Cl?C8的烷烴；所述有機(jī)溶劑B為C2?C8的 醚或C3?C8的酯類； (2) 將外消旋2, 3-二苯基丙酸用步驟（1)所得的有機(jī)相溶解，制成樣品； (3) 采用高速逆流色譜法拆分外消旋2, 3-二苯基丙酸：以步驟（1)得到的有機(jī)相為 固定相，水相為流動(dòng)相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為2?35°C，開(kāi)啟速度控制器， 轉(zhuǎn)速為200?2000rpm，以0. 1?3. OmL/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系 達(dá)到流體動(dòng)力學(xué)平衡后，即當(dāng)流動(dòng)相從色譜柱出口處流出時(shí)，將步驟（2)制得的樣品由進(jìn) 樣閥進(jìn)樣，紫外檢測(cè)器在波長(zhǎng)190?400nm下檢測(cè)流出液，按照時(shí)間梯度，用自動(dòng)部份收集 器分別收集35min到280min之間梯度時(shí)間間隔的洗脫液，并根據(jù)紫外檢測(cè)譜圖中對(duì)映體 雙峰出現(xiàn)的時(shí)間段，將前峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分右旋2, 3-二 苯基丙酸單體的前峰洗脫液，將后峰對(duì)應(yīng)時(shí)間段內(nèi)收集的洗脫液合并即得含目標(biāo)組分左旋 2, 3-二苯基丙酸單體的后峰洗脫液；所述前峰是指對(duì)映體雙峰中先出來(lái)的主峰，所述后峰 是指對(duì)映體雙峰中后出來(lái)的主峰； (4) 從步驟（3)中收集得到的前峰洗脫液中回收，得到右旋2, 3-二苯基丙酸單體；從 步驟（3)中收集得到的后峰洗脫液中回收，得到左旋2, 3-二苯基丙酸單體。
2. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（1) 中，所述有機(jī)溶劑A為正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷或石油醚。
3. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（1) 中，所述有機(jī)溶劑B為乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯或甲酸乙酯。
4. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（1) 中，所述的含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液的PH值為1. 5?4. 5。
5. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（1) 中，所述的含有羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥丙基-β -環(huán)糊精的濃度為〇. 05? 0.25mol/L〇
6. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（1) 中，所述羥丙基-β -環(huán)糊精的取代度為5. 5?8. 0。
7. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（1) 中，所述溶劑體系為正己烷、乙酸乙酯與PH值為2. 7的含羥丙基-β -環(huán)糊精的磷酸鹽緩 沖液以體積比8:2:10混合制成，其中所述含羥丙基-β-環(huán)糊精的磷酸鹽緩沖液中羥丙 基-β -環(huán)糊精的濃度為〇· lmol/L。
8. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（2) 中，所述樣品中外消旋2, 3-二苯基丙酸的濃度為1?10mg/mL。
9. 如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟（3) 中，所述梯度時(shí)間間隔為每0. 5?5min收集一次。
10.如權(quán)利要求1所述的外消旋2, 3-二苯基丙酸的手性拆分方法，其特征在于步驟 (4)中，所述的回收方法為：將前峰洗脫液和后峰洗脫液分別用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1?2,再 用乙酸乙酯萃取2?3次，合并乙酸乙酯層，用水洗至中性，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液蒸 除溶劑，即分別獲得右旋2, 3-二苯基丙酸單體和左旋2, 3-二苯基丙酸單體。
【文檔編號(hào)】C07C51/47GK104211593SQ201410442516
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月2日
【發(fā)明者】童勝?gòu)?qiáng), 張虎, 沈芒芒, 顏繼忠 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)