專利名稱：nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，提供一類能夠抑制nNOS-Capon偶聯(lián)的小分子化合物，及其該化合物在預(yù)防和治療焦慮中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
焦慮癥又稱焦慮性神經(jīng)癥，是以廣泛性焦慮癥(慢性焦慮癥)和發(fā)作性驚恐狀態(tài)(急性焦慮癥)為主要臨床表現(xiàn)，常伴有頭暈、胸悶、心悸、呼吸困難、口干、尿頻、尿急、出汗、震顫和運(yùn)動(dòng)性不安等癥。隨著社會(huì)的發(fā)展，人們的生活節(jié)奏普遍加快，來至于社會(huì)、生活和工作上的壓力越來越大，因此焦慮癥患者日漸怎多。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國城市人口的患病率已達(dá)2% 3%，發(fā)達(dá)國家近10%，且仍層增長趨勢。急性焦慮癥不但嚴(yán)重危害身心健康，而且伴隨著焦慮必然會(huì)出現(xiàn)失眠、注意力無法集中、精力減退，思維混亂、理不出頭緒、靜不下心等癥狀，引起工作效率的明顯下降。嚴(yán)重的，還可能出現(xiàn)身體不適，例如手腳出汗、胸悶、動(dòng)不動(dòng)就想小便等。目前，臨床上用于治療焦慮癥的藥物主要有:(I)作用于苯二氮卓受體的藥物，如地西泮、阿普唑侖等，這類藥物起效快，但毒副作用也大，且易形成耐受和成癮，停藥后會(huì)出現(xiàn)戒斷癥狀；(2)5-羥色胺部分激動(dòng)劑，如丁螺環(huán)酮，雖然安全性較好但起效緩慢；(3)用于治療抑郁癥的藥物，如丙咪嗪、阿米替林、西酞普蘭、文拉法辛米氮平等，這些藥物長時(shí)間給藥后也具有抗焦慮的作用，但這些化合物都有著起效慢，不良反應(yīng)多，如惡心、嗜睡、性功能障礙等缺點(diǎn)。焦慮癥患者一般需要較長時(shí)間的維持治療，但由于目前臨床使用藥物的毒副作用，使得一些病人不遵醫(yī)囑服藥，存在很大的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)；另外，目前的治療藥物對許多病人無效；因此尋找副作用小、作用機(jī)制新的抗焦慮藥是臨床的需要。目前，世界多個(gè)制藥公司都在積極開展抗焦慮藥物的研究，主要集中在Y-氨基丁酸(GABA)受體，外周苯二氮卓受體、5-羥色胺(5-HA)受體、膽囊收縮素受體(CCK-B)、促腎上腺皮質(zhì)激素(CRF)受體、組胺H3受體、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體等靶點(diǎn)的研究。近二十年來，人們逐漸認(rèn)識到抑制NMDA受體的活性具有抗焦慮作用。例如，競爭性NMDA受體拮抗劑3-(2-羧基-4-哌啶基)_丙基_1_磷酸(CPP)、2_氨基-5-膦酰庚酸(AP5)、2-氨基-7-膦酰庚酸(AP7)和非競爭性NMDA受體阻斷劑地佐環(huán)平(dizocilpine，MK-801)、苯環(huán)利定(phencyclidine，PCP)都具有抗焦慮樣活性；作用于NMDA受體甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)的拮抗劑7-氯-犬尿酸(7-CKA)、作用于NMDA受體NR2亞單位的多胺作用位點(diǎn)的拮抗劑艾芬地爾(ifenprodil)也都顯示抗焦慮作用。盡管針對NMDA受體但拮抗劑的藥物開發(fā)很誘人，但由于NMDA受體介導(dǎo)的生理作用多種多樣，拮抗NMDA受體所體現(xiàn)出來的記憶損害、精神疾病、運(yùn)動(dòng)障礙等副作用使NMDA受體拮抗劑很難成為臨床治療藥物(Br.J.Pharmacol，2009，158,494-506)。因此，研制不影響NMDA受體正常的生理功能、作用于NMDA受體信號通路中下游部分的藥物是抗焦慮藥物開發(fā)的新途徑。研究表明NMDA受體可以和骨架蛋白PSD-95和神經(jīng)元一氧化氮合酶(nNOS)形成NMDA受體一PSD-95 — nNOS三元復(fù)合物，經(jīng)由NMDA受體內(nèi)流的Ca2+激活nNOS產(chǎn)生NO。研究表明，NO是一個(gè)致焦慮分子，敲除nNOS基因、用nNOS的抑制劑7-硝基吲唑(7-NI)抑制其活性降低NO的產(chǎn)生均具有抗焦慮作用。因此，可以認(rèn)為，NMDA受體拮抗劑的抗焦慮作用是通過降低I丐離子內(nèi)流，從而降低nNOS激活產(chǎn)生NO而起作用的(Brain Res., 2008,1240,
39-46)。許多研究表明，NO是重要的信號分子，它不僅調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、神經(jīng)元的存活、調(diào)節(jié)神經(jīng)元樹突、軸突結(jié)構(gòu)發(fā)育及參與突觸可塑性的形成，還和學(xué)習(xí)和記憶等其它重要生理功能有關(guān)。所以，直接用nNOS合成酶抑制劑抑制NO的產(chǎn)生也是不合適的。因此，理想的藥物是阻斷和焦慮有關(guān)的NO靶標(biāo)蛋白和nNOS的聯(lián)系，抑制焦慮信號向下傳遞，但不抑制NO其它的功能。NO是細(xì)胞內(nèi)的一個(gè)信號分子，它通過作用于其它生物分子起作用。由于NO是一個(gè)高度活潑的自由基型氣體分子，在生物體內(nèi)存在很多的還原性物質(zhì)，如谷胱甘肽，可以萃滅NO，因此，一般來說NO激活的是和它在空間上靠近的生物分子。nNOS是一個(gè)含有羧基端NO合成酶功能域和一個(gè)氮端PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白分子,nNOS可以通過它的PDZ結(jié)構(gòu)域和多種其它分子發(fā)生蛋白蛋白之間的相互作用，例如，它可以和肌肉型6-磷酸果糖激酶(PEK-M)(J.Biol.Chem.，1999，274，10545-10550)、Vacl4 (FEBS Lett.，2006，580，6948-6954)、RGSZ2(Antioxid.Redox Signal.，2011，15，873-887)、nNOS PDZ 結(jié)構(gòu)域羧基末端結(jié)合蛋白(Capon) (Neuron，1998，20，115-124)等蛋白發(fā)生相互作用。在這些蛋白之中，研究表明，Capon和精神疾病，如精神分裂癥、狂郁癥有關(guān)(Schizophrenia Res.，2006,82, 283-285)。Capon是nNOS的一個(gè)重要接頭蛋白，它 的C-端可以和nNOS的PDZ結(jié)合，N-端含有一個(gè)磷酸酪氨酸(PTB)結(jié)合域。研究表明，Capon 可以和 Dexrasl (Neuron, 2000, 28,183-193)、Synapsin (Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 2002,99, 3199-3204) >Scribble (J.Neurosc1., 2010，30，4796-4805)結(jié)合。Capon和Scribble的相互作用和突觸的棘突的發(fā)生有關(guān)。Synapsin是突觸前膜囊泡蛋白，它和NO —樣具有調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)釋放的功能。Capon的另一個(gè)相互作用蛋白是Dexrasl,該蛋白是小G蛋白Ras家族的一員。研究表明，nNOS、Capon、Dexrasl可以組成nNOS-Capon-Dexrasl三兀復(fù)合物,Dexrasl的活化需要nNOS產(chǎn)生的NO (Neuron,2000，28，183-193)。研究表明，Dexrasl具有抑制腺苷環(huán)化酶(AC)從而抑制Creb活性的作用(Biochem.Biophys.Res.Commun.,2004,316,307-312)。藥理學(xué)研究表明，在焦慮狀態(tài)下，nNOS表達(dá)增加，Creb磷酸化水平下降；而在抗焦慮藥的作用下，nNOS的表達(dá)下降，Creb磷酸化水平升高(J.Neurosc1.，2010，30，2433-2441 )。從這些研究來看，如果抑制nNOS和Capon的聯(lián)系，則能抑制nNOS對Dexrasl的活化作用，從而抑制Dexrasl下調(diào)Creb活性的作用，從而表現(xiàn)抗焦慮作用。另有研究表明，在焦慮狀態(tài)下，Erk磷酸化水平顯著增加，抑制Erk信號通路具有抗焦慮作用(J.Psychia.Res.，2008，43，55-63)。有研究表明，Dexrasl具有提高 Erk 活性的作用(J.Biol.Chem.，2002，277，10876-10882)，因此，抑制 Dexrasl 活性具有降低Erk活性的作用，從而表現(xiàn)抗焦慮作用。抑制nNOS和Capon的聯(lián)系還能影響nNOS對Synapsin的調(diào)節(jié)作用，Synapsin對神經(jīng)遞質(zhì)釋放的調(diào)節(jié)作用，可能是Synapsin通過 nNOS-Capon-Synapsin 三兀復(fù)合物由 nNOS 產(chǎn)生的 NO 介導(dǎo)的(Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,2002，99，3199-3204)，斷開nNOS和Capon的聯(lián)系可以降低nNOS對Synapsin的調(diào)節(jié)作用，從而抑制神經(jīng)遞質(zhì)，如谷氨酸，過量釋放入突觸間隙，從而起抗焦慮作用。上述的藥理學(xué)研究表明，抑制nNOS-Capon之間的相互作用，可以分別抑制由Dexrasl、Synapsin介導(dǎo)的致焦慮作用，Capon在nNOS PDZ上的結(jié)合位點(diǎn)，是抗焦慮藥物的新革El點(diǎn)。nNOS-Capon解偶聯(lián)試劑的研制是開發(fā)抗焦慮藥物的新途徑。

發(fā)明內(nèi)容
解決的技術(shù)問題:本發(fā)明提供了一類抑制nNOS-Capon偶聯(lián)的小分子抑制劑，及其在焦慮的預(yù)防和治療中的應(yīng)用。技術(shù)方案:nN0S-Capon解偶聯(lián)化合物,符合下述結(jié)構(gòu)通式:
權(quán)利要求
1.nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物，其特征在于符合下述結(jié)構(gòu)通式:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物，其特征在于結(jié)構(gòu)式為:
3.權(quán)利要求2所述nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物的制備方法，其特征在于步驟為:_15°C下將9mmol D-繳氨酸甲酯鹽酸鹽加入到35mL 二氯甲燒中溶解,滴加18.45mmol N-甲基嗎啉，滴完后攪拌5分鐘，再滴加9.45mmol丙二酸單甲酯酰氯，攪拌30分鐘，然后30°C繼續(xù)攪拌22小時(shí)；停止反應(yīng)，將溶劑蒸干，加水8mL，乙酸乙酯50mLX4次萃取，10%wt檸檬酸25mLX 2次洗滌，飽和氯化鈉洗滌，之后5%wt碳酸氫鈉25mLX 2次洗滌，再用飽和氯化鈉洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液蒸干，濃縮液呈黃色，用體積比乙酸乙酯:石油醚=1:2的流動(dòng)相進(jìn)行柱層析，最終得到產(chǎn)物。
4.權(quán)利要求1或2所述nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物在制備預(yù)防或治療焦慮癥藥物中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1或2所述nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物在預(yù)防或治療焦慮癥中的應(yīng)用。
全文摘要
nNOS-Capon解偶聯(lián)化合物及其制備方法和應(yīng)用，化合物符合下述結(jié)構(gòu)通式其中，R1為氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或冰片基，R2為異丙基、2-甲基丙基、異丁基、苯甲基或4-羥基苯甲基，R3為羧基、羧基的甲酯、乙酯、丙酯、異丙酯、冰片基酯、磷酸基或5-四氮唑基，a=0或1，b=0或1，c=1～6的整數(shù)，當(dāng)a=0時(shí)b=0，a=1時(shí)b=0或1。本發(fā)明的化合物作用于nNOS蛋白的PDZ結(jié)構(gòu)域，不影響nNOS的酶活性，因此，本發(fā)明的化合物可以克服作用于NMDA受體或直接抑制nNOS酶活性而導(dǎo)致的副作用。
文檔編號C07C69/347GK103193669SQ20131006255
公開日2013年7月10日 申請日期2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月27日
發(fā)明者朱東亞, 厲廷有, 常磊, 朱麗娟, 馬玉, 陳佳佳 申請人:南京醫(yī)科大學(xué)