專利名稱：一種艾替班特的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種艾替班特的制備方法。
背景技術(shù)：
遺傳性血管水腫(hereditary angioedema, HAE)又稱Cl抑制物缺乏癥，是罕見(jiàn)的由遺傳缺陷引起的常染色體顯性遺傳病，是由于一種稱為Cl抑制劑的蛋白水平低或功能障礙引起的，發(fā)病率為1/10000-1/50000。HAE其特征是不可預(yù)知的手、腳、臉、喉頭和腹部的發(fā)作性水腫和腫脹，導(dǎo)致毀容、失能或死亡。如喉部腫脹能導(dǎo)致窒息，消化道水腫可引起腹痛、惡心和嘔吐，腸道腫脹患者經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)胃部嚴(yán)重疼痛，惡心和嘔吐。病人通常有該病的家族史。HAE病人可出現(xiàn)手、足、四肢、面部、腸道、喉頭或氣管的快速水腫，這可能而呼吸道水腫則使病人有窒息的危險(xiǎn)。艾替班特，英文名Firazyr，是由Shire公司研發(fā)的HAE專治藥物，于2011年8月 25日獲FDA批準(zhǔn)用于18歲及以上成年人的遺傳性血管水腫急性發(fā)作治療，也是FDA批準(zhǔn)的第3個(gè)用于治療HAE發(fā)作的藥物。艾替班特有相似于緩激肽的結(jié)構(gòu)d合成十肽，但是，其中有5個(gè)非蛋白源的氨基酸。艾替班特的所有手性氨基酸是L-構(gòu)型除了精氨酸(位1)和 1，2，3，4-四氫異喹啉-3-羧酸(位8)，其分子式為C59H89N19O13S,分子量為1304. 5，十個(gè)氨基酸順序組成如下H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OHo艾替班特是一種強(qiáng)力的選擇性的緩激肽2型(B》受體的選擇性競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，通過(guò)抑制與HAE的栓塞局部腫脹、炎癥、疼痛癥狀有關(guān)的緩激肽的影響而治療急性HAE的栓塞局部腫脹。HAE只是艾替班特可能治療的幾種適應(yīng)癥的第一個(gè)，其他潛在適應(yīng)癥還有哮喘、 肝硬化和其他類型的血管性水腫。所以說(shuō)艾替班特具有很高的藥用價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。然而現(xiàn)有的艾替班特的制備方法仍舊主要沿用1990年左右，由德國(guó)赫切斯特股份公司發(fā)明的固相合成方法，該方法制得的艾替班特產(chǎn)品純度低、雜質(zhì)含量高、收率低，不適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，應(yīng)用價(jià)值低。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種艾替班特的制備方法， 所述制備方法艾替班特的收率高，制得的艾替班特的雜質(zhì)含量低、純度高，適合于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種艾替班特的制備方法，包括以下步驟1)由Fmoc-Arg (Pbf) -OH和替代度為0. 5 1. OmmoΙ/g的2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂出發(fā)，得到 Fmoc-Arg (Pbf) -CTC 樹(shù)脂；2)將Fmoc-Arg(I^bf)-CTC樹(shù)脂采用逐一偶聯(lián)的方式合成得到艾替班特-CTC樹(shù)脂；
3)最后對(duì)艾替班特-CTC樹(shù)脂進(jìn)行裂解得到艾替班特粗肽，純化得到艾替班特。優(yōu)選的，所述艾替班特的制備方法步驟1)所述Fmoc-Arg (Pbf) -CTC樹(shù)脂是 Fmoc-ArgO^fO-OH與2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂在堿性條件的作用下生成的。具體的是2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂經(jīng)過(guò)DMF或DCM浸泡溶脹，然后加入Fmoc-Arg (Pbf) -0H,在堿性條件的作用下反應(yīng)制得Fmoc-Arg(I^bf)-CTC樹(shù)脂。其中，所述堿性條件的作用優(yōu)選為二異丙基乙胺的作用。進(jìn)一步的，所述2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂的替代度優(yōu)選為0. 8 1. Ommol/g，更優(yōu)選為 0.9mmol/g0本發(fā)明所述制備方法步驟2~)通過(guò)多肽固相合成法采用從C端向N端逐一偶聯(lián)的方式從Fmoc-Arg (I^bf)-CTC樹(shù)脂N端逐個(gè)加入氨基酸合成艾替班特-CTC樹(shù)脂。其中，所述逐一偶聯(lián)方式所使用的偶聯(lián)劑優(yōu)選為二異丙基碳二亞胺和化合物A混合物或化合物A、 化合物B和化合物C的混合物，其中所述化合物A為1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-偶氮苯并三唑，所述化合物B為0-苯并三唑-N，N, N, N-四甲基脲鐺六氟磷酸鹽、0-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N, N, N, N-四甲基脲鐺六氟磷酸鹽、2- (7-氮雜苯并三氮唑)-N，N，N'， N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、0-(苯并三唑-1-氧)-N，N，N，N-四甲基脲鐺六氟硼酸鹽或(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鐺六氟磷酸鹽，所述化合物C為二異丙基乙胺或2，4，6-三甲基吡啶。進(jìn)一步地，上述二異丙基碳二亞胺和化合物A的混合物中二異丙基碳二亞胺與化合物A的物質(zhì)的量比優(yōu)選為1 1 1.5 1，更優(yōu)選為1.3 1。進(jìn)一步地，上述化合物A、化合物B和化合物C的混合物中化合物A與化合物B和化合物C的物質(zhì)的量?jī)?yōu)選比為1 1.5 1 1，更優(yōu)選為1.2 1 1。本發(fā)明所述逐一偶聯(lián)的Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸分別為Fmoc-Oic-OH、 Fmoc-D-Cit-0H> Fmoc-Ser (tBu)-0H> Fmoc-Thi-OH> Fmoc—Gly—OH、 Fmoc-Hyp (tBu)-0H> Fmoc-Pro-0H、Fmoc-Arg(Pbf)-OH 禾口 Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH。本發(fā)明所述制備方法步驟幻通過(guò)裂解劑對(duì)艾替班特-CTC樹(shù)脂進(jìn)行裂解，得到艾替班特粗肽。其中，所述裂解劑優(yōu)選為三氟乙酸、三異丙基硅烷和水的混合物。進(jìn)一步地，上述裂解劑中三氟乙酸與三異丙基硅烷和水的體積比為90 95 3 5 2 5，更優(yōu)選為95 3 2。本發(fā)明所述制備方法步驟幻裂解得到的艾替班特粗肽進(jìn)一步純化得到艾替班特，所述純化優(yōu)選為反相高效液相色譜純化。反相高效液相色譜，英文名 reversed phase high performance liquid chromatography,簡(jiǎn)稱，RP-HPLC，是由非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系。 它正好與由極性固定相和弱極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相反。RP-HPLC 是當(dāng)今液相色譜的最主要的分離模式，幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機(jī)物的分離純化。本發(fā)明所述制備方法將步驟3裂解得到的艾替班特粗肽采用反相高效液相色譜法轉(zhuǎn)成醋酸鹽溶液。優(yōu)選的，所述反相高效液相色譜法具體為以反相十八烷基硅烷或八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，裂解得到的艾替班特粗肽溶液上樣后，用0. 醋酸溶液/乙腈流動(dòng)相轉(zhuǎn)鹽，凍干即得。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述制備方法操作簡(jiǎn)單、原料投入少、成本低艾替班特收率高，適合于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，并且制得的艾替班特純度高、雜質(zhì)含量低，具有可觀的經(jīng)濟(jì)實(shí)用價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。


圖1示本發(fā)明實(shí)施例的制備方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種艾替班特的制備方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中所使用的縮寫(xiě)的含義列于下表中
權(quán)利要求
1.一種艾替班特的制備方法，其特征在于，包括以下步驟1)由Fmoc-Arg(I^bf)-OH和替代度為0. 5 1. Ommol/g的2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂出發(fā)， 得到 Fmoc-Arg (Pbf) -CTC 樹(shù)脂；2)將Fmoc-Arg(Pbf) -CTC樹(shù)脂采用逐一偶聯(lián)的方式合成得到艾替班特-CTC樹(shù)脂；3)最后對(duì)艾替班特-CTC樹(shù)脂進(jìn)行裂解得到艾替班特粗肽，純化得到艾替班特。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟1)所述Fmoc-Arg(I^bf)-CTC樹(shù)脂是Fmoc-Arg (Pbf) -OH和2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂在堿性條件的作用下生成的。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述制備方法，其特征在于，所述堿性條件的作用為二異丙基乙胺的作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟2)所述逐一偶聯(lián)方式的偶聯(lián)劑為二異丙基碳二亞胺和化合物A的混合物或化合物A、化合物B和化合物C的混合物，其中所述化合物A為1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-偶氮苯并三唑，所述化合物B為O-苯并三唑-N，N, N, N-四甲基脲鐺六氟磷酸鹽、O- (7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N, N, N, N-四甲基脲鐺六氟磷酸鹽、2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N，N，N' ,N'-四甲基脲四氟硼酸鹽、0-(苯并三唑-1-氧)-N, N, N, N-四甲基脲鐺六氟硼酸鹽或(苯并三唑-1-氧)三吡咯烷子基磷鐺六氟磷酸鹽，所述化合物C為二異丙基乙胺或2，4，6_三甲基吡啶。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述制備方法，其特征在于，所述二異丙基碳二亞胺和化合物A的混合物中二異丙基碳二亞胺與化合物A的物質(zhì)的量比為1 1 1.5 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述制備方法，其特征在于，所述化合物A、化合物B和化合物C的混合物中化合物A與化合物B和化合物C的物質(zhì)的量比為1 1.5 1 1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟幻所述裂解的裂解劑為三氟乙酸、 三異丙基硅烷和水的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述制備方法，其特征在于，所述三氟乙酸與三異丙基硅烷和水的體積比為90 95 3 5 2 5。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟幻所述純化為反相高效液相色譜純化。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種艾替班特的制備方法。本發(fā)明所述艾替班特的制備方法包括以下步驟1)由Fmoc-Arg(Pbf)-OH和替代度為0.5～1.0mmol/g的2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂出發(fā)，得到Fmoc-Arg(Pbf)-CTC樹(shù)脂；2)將Fmoc-Arg(Pbf)-CTC樹(shù)脂采用逐一偶聯(lián)的方式合成得到艾替班特-CTC樹(shù)脂；3)對(duì)艾替班特-CTC樹(shù)脂進(jìn)行裂解得到艾替班特粗肽，純化得到艾替班特。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述制備方法操作簡(jiǎn)單、原料投入少、成本低艾替班特收率高，適合于大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，并且制得的艾替班特純度高、雜質(zhì)含量低，具有可觀的經(jīng)濟(jì)實(shí)用價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C07K1/04GK102532267SQ20121002837
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2012年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月9日
發(fā)明者潘俊鋒, 袁建成, 陳大來(lái), 馬亞平 申請(qǐng)人:深圳翰宇藥業(yè)股份有限公司