專利名稱：一種度骨化醇的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種度骨化醇的提純方法。
背景技術(shù)：
維生素D類化合物不僅能夠促進(jìn)骨骼對(duì)鈣磷的吸收，保證體內(nèi)鈣磷的充分供應(yīng)， 促進(jìn)骨骼的正常鈣化，還具有更為廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞分化、調(diào) 節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)等。研究表明，維生素D本身不具備生理功能，只有轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的活性形 式，如1 a _羥基維生素D等才能發(fā)揮正常的生理作用。維生素D在人體內(nèi)活化成為1 a -羥 基維生素D的過程受多種因素影響，往往不能正常進(jìn)行，因此，研究1 a _羥基維生素D類化 合物及其類似物的合成具有重要意義。目前用于臨床的1 a -羥基維生素D類化合物及其類似物主要有度骨化醇、骨化三 醇、他骨化醇、帕立骨化醇和阿法骨化醇等，其中，由于度骨化醇對(duì)伴有繼發(fā)性甲旁亢的血 透患者沒有副反應(yīng)而獲得廣泛應(yīng)用。度骨化醇，英文名稱為Doxercalciferol，CAS :54573-75_0，分子式為 C28H4402，具
有式⑴結(jié)構(gòu) 度骨化醇進(jìn)入血液后經(jīng)肝臟微粒體25-羥基化酶的作用，在C-25位上羥基化后生 成la，25-羥基維生素D2，與受體結(jié)合后發(fā)揮促進(jìn)鈣磷吸收、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤 細(xì)胞轉(zhuǎn)移等作用?，F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)公開了多種度骨化醇等1 a -羥基維生素D類化合物及其類似物的 合成方法，如光化學(xué)方法、會(huì)聚合成法和結(jié)構(gòu)修飾法等。其中，光化學(xué)方法是首先將天然維 生素D或其類似物進(jìn)行1 a -羥基化，然后通過光照開環(huán)合成1 a -羥基維生素D類化合物 及其類似物；會(huì)聚合成法是將A環(huán)維生素D及其類似物與CD環(huán)合成子通過耦合反應(yīng)得到 1 a -羥基維生素D類化合物及其類似物；結(jié)構(gòu)修飾法是直接對(duì)維生素D及其類似物進(jìn)行結(jié) 構(gòu)修飾得到1 a -羥基維生素D類化合物及其類似物。但是，在度骨化醇的合成過程中，1 a -羥基化過程中會(huì)產(chǎn)生1 0 -羥基副產(chǎn)物或具 有式(II)結(jié)構(gòu)的EPBP3等其他同分異構(gòu)體雜質(zhì)，導(dǎo)致1 a _羥基維生素D類化合物及其類 似物純度低、收率低。目前市場上出售的度骨化醇純度一般在99%以下，其中的單個(gè)已知雜 質(zhì)，如EPBP3不能滿足小于0. 15%的要求，導(dǎo)致度骨化醇難以直接作為藥品使用。
3(II)

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種度骨化醇的提純方法，通過 本發(fā)明提供的方法提純后，度骨化醇的純度達(dá)到99. 80wt%以上，雜質(zhì)EPBP3的含量不超過 0. 10wt%。本發(fā)明提供了一種度骨化醇的提純方法，包括a)將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析分離、提純，得到第一中間產(chǎn)品；b)將所述第一中間產(chǎn)品在酯類溶劑中進(jìn)行第一次析晶，得到第二中間產(chǎn)品；c)將所述第二中間產(chǎn)品在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中進(jìn)行第二次析晶，得到 第三中間產(chǎn)品；d)將所述第三產(chǎn)品在酮類溶劑中進(jìn)行第三次析晶，得到度骨化醇成品。優(yōu)選的，所述步驟a)中，柱層析過程中的洗脫為梯度洗脫。優(yōu)選的，進(jìn)行梯度洗脫時(shí)的流動(dòng)相為石油醚和乙酸乙酯的混合液，或者為石油醚 和丙酮的混合液，或者為甲醇和二氯甲烷的混合液，或者為甲醇和三氯甲烷的混合液，或者 為環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合液或者為正己烷和乙酸乙酯的混合液，或者為異丙醚和乙酸乙 酯的混合液。優(yōu)選的，所述步驟b)中的酯類溶劑為含2 6個(gè)碳原子的酯類溶劑。優(yōu)選的，所述酯類溶劑為乙酸乙酯、甲酸甲酯或甲酸乙酯中的一種或多種。優(yōu)選的，所述酯類溶劑與第一中間產(chǎn)品的重量比為50 70 1。優(yōu)選的，所述步驟c)中的醚類溶劑為含2 4個(gè)碳原子的醚類溶劑。優(yōu)選的，所述醚類溶劑為乙醚、正丙醚、異丙醚或丁醚中的一種或多種。優(yōu)選的，所述醚類溶劑與第二中間產(chǎn)品的重量比為15 35 1。優(yōu)選的，所述步驟c)中的酮類溶劑為含3 6個(gè)碳原子的酮類溶劑。優(yōu)選的，所述酮類溶劑為丙酮、丁酮或丙酮和丁酮的混合液。優(yōu)選的，所述酮類溶劑與第二中間產(chǎn)品的重量比為1.5 6 1。優(yōu)選的，所述步驟d)中，酮類溶劑與第三中間產(chǎn)品的重量比為10 40 1。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首先將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析分離提純，然后將得到 的第一中間產(chǎn)品依次在酯類溶劑、醚類和酮類的混合液、酮類溶劑中進(jìn)行三次析晶，得到度 骨化醇。在柱層析過程中，與度骨化醇極性不同的雜質(zhì)與度骨化醇相分離；依次經(jīng)過三次析 晶后，度骨化醇粗品中與度骨化醇溶解度不同的大部分雜質(zhì)被分離，得到純度為99. 80%以 上的度骨化醇，其總雜質(zhì)含量不超過0. 20%，已知雜質(zhì)EPBP3的含量不超過0. 10%，其他最 大未知單個(gè)雜質(zhì)不超過0. 10%，能夠滿足度骨化醇作為藥品應(yīng)用的要求。此外，本發(fā)明提供的提純方法操作簡單，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求不高，易于操作，成本較低。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的系統(tǒng)適用性溶液的高效液相色譜圖；圖2為本發(fā)明實(shí)施例2提純的度骨化醇的高效液相色譜圖；圖3為本發(fā)明實(shí)施例3提純的度骨化醇的高效液相色譜圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例4提純的度骨化醇的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種度骨化醇的提純方法，包括a)將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析分離、提純，得到第一中間產(chǎn)品；b)將所述第一中間產(chǎn)品在酯類溶劑中進(jìn)行第一次析晶，得到第二中間產(chǎn)品；c)將所述第二中間產(chǎn)品在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中進(jìn)行第二次析晶，得到 第三中間產(chǎn)品；d)將所述第三產(chǎn)品在酮類溶劑中進(jìn)行第三次析晶，得到度骨化醇成品。本發(fā)明首先將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析，使度骨化醇粗品中極性與度骨化醇不同 的雜質(zhì)與度骨化醇相分離。通過柱層析，度骨化醇的純度能夠從70wt%提高到91wt%。在進(jìn)行柱層析之前，需要將度骨化醇粗品溶解，為了使度骨化醇粗品溶解更充分， 本發(fā)明優(yōu)選使用超聲波發(fā)生器將度骨化醇粗品溶解在有機(jī)溶劑中。本發(fā)明對(duì)所述有機(jī)溶劑 沒有特殊限制，包括但不限于二氯甲烷。在進(jìn)行柱層析過程中，使用的固定相可以為硅膠，也可以為氧化鋁、氧化鎂、活性 炭等吸附劑，優(yōu)選為柱層析硅膠，所述柱層析硅膠的粒度優(yōu)選為150目-250目；為了提高 層析效率，優(yōu)選對(duì)所述度骨化醇粗品進(jìn)行梯度洗脫，進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，使用的流動(dòng)相為非極 性溶劑和極性溶劑兩種有機(jī)溶劑的混合液，優(yōu)選為石油醚和乙酸乙酯的混合液或者石油醚 和丙酮的混合液或者甲醇和二氯甲烷的混合液或者甲醇和三氯甲烷的混合液或者環(huán)己烷 和乙酸乙酯的混合液或者正己烷和乙酸乙酯的混合液或者異丙醚和乙酸乙酯的混合液，更 優(yōu)選為石油醚和乙酸乙酯的混合液或者環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合液或者正己烷和乙酸乙 酯的混合液或者異丙醚和乙酸乙酯的混合液，最優(yōu)選為環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合液；本發(fā) 明優(yōu)選進(jìn)行4級(jí)梯度洗脫，進(jìn)行各級(jí)洗脫時(shí)優(yōu)選非極性溶劑和極性溶劑的體積比依次為 3 1、2 1、1 1和 1 2。本發(fā)明優(yōu)選使用薄層色譜或高效液相色譜監(jiān)測柱層析過程中的洗脫液，將含有度 骨化醇的洗脫液收集后進(jìn)行濃縮，得到第一中間產(chǎn)品。本發(fā)明中，所述濃縮優(yōu)選為真空減壓 濃縮。將經(jīng)過柱層析后得到的第一中間產(chǎn)品在酯類溶劑中進(jìn)行第一次析晶，經(jīng)過第一次 析晶后，在酯類溶劑中溶解度較高的雜質(zhì)與度骨化醇相分離。度骨化醇經(jīng)過柱層析，再經(jīng)過 酯類溶劑第一次析晶后，純度可以能夠達(dá)到96wt %。所述酯類溶劑的作用是作為結(jié)晶溶劑去除溶解度較高的雜質(zhì)，優(yōu)選為含2 6 個(gè)碳原子的酯類溶劑，更優(yōu)選為乙酸乙酯、甲酸甲酯或甲酸乙酯中的一種或多種。為了使 第一中間產(chǎn)品更易溶解并結(jié)晶，本發(fā)明中酯類溶劑與第一中間產(chǎn)品的重量比優(yōu)選為40
580 1，更優(yōu)選為50 70 1。為了提高第一中間產(chǎn)品的溶解度，本發(fā)明優(yōu)選在加熱的條件下將第一中間產(chǎn)品溶 解在酯類溶劑中，加熱溫度優(yōu)選為15°C 50°C，更優(yōu)選為30°C 35°C。在進(jìn)行第一次析晶之前，本發(fā)明優(yōu)選將所述溶解了第一中間產(chǎn)品的酯類溶液進(jìn)行 濃縮，更優(yōu)選為濃縮至原重量的1/4 1/6。為了使度骨化醇第一次析晶更為充分，本發(fā)明優(yōu)選在低溫條件下進(jìn)行第一次析 晶，所述第一次析晶時(shí)的低溫優(yōu)選為-10°C 10°C，更優(yōu)選為0°C 5°C;第一次析晶的時(shí)間 優(yōu)選為lh 24h，更優(yōu)選為20h 24h。將經(jīng)過酯類溶劑析晶后得到的第二中間產(chǎn)品在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中 進(jìn)行第二次析晶，在此過程中，與度骨化醇在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中溶解度不同 的雜質(zhì)與度骨化醇相分離。經(jīng)過第二次析晶后，度骨化醇的純度能夠達(dá)到99wt%。醚類溶劑和酮類溶劑的混合液作為結(jié)晶溶劑去除溶解度較高的雜質(zhì)，其中，所述 醚類溶劑優(yōu)選為含2 4個(gè)碳原子的醚類溶劑，更優(yōu)選為乙醚、正丙醚、異丙醚或丁醚中的 一種或多種；所述酮類溶劑優(yōu)選為含3 6個(gè)碳原子的酮類溶劑，更優(yōu)選為丙酮、丁酮或丙 酮和丁酮的混合液。為了使第二中間產(chǎn)品更易溶解并結(jié)晶，本發(fā)明中，醚類溶劑與第二中間產(chǎn)品的重 量比優(yōu)選為15 35 1，更優(yōu)選為20 30 1 ；酮類溶劑與第二中間產(chǎn)品的重量比優(yōu)選 為1. 5 6 1，更優(yōu)選為3 5 1。為了提高第二中間產(chǎn)品的溶解度，本發(fā)明優(yōu)選在加熱的條件下將第二中間產(chǎn)品 溶解在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中，加熱溫度優(yōu)選為15°C 50°C，更優(yōu)選為30°C 35 °C。在進(jìn)行第二次析晶之前，本發(fā)明優(yōu)選將所述溶解了第二中間產(chǎn)品的醚類溶劑和酮 類溶劑的混合液進(jìn)行濃縮，更優(yōu)選為濃縮至原重量的1/4 1/6。為了使度骨化醇第二次析晶更為充分，本發(fā)明優(yōu)選在低溫條件下進(jìn)行第二次析 晶，所述低溫優(yōu)選為-10°C 10°C，更優(yōu)選為0°C 5°C ；第二次析晶時(shí)間優(yōu)選為lh 24h， 更優(yōu)選為20h 24h。將經(jīng)過第二次析晶后得到的第三中間產(chǎn)品在酮類溶劑中進(jìn)行第三次析晶，在此過 程中，與度骨化醇在酮類溶劑中溶解度不同的雜質(zhì)與度骨化醇相分離。經(jīng)過第三次析晶后， 度骨化醇的純度能夠達(dá)到99. 80wt%以上。所述酮類溶劑的作用是作為結(jié)晶溶劑去除溶解度較高的雜質(zhì)，優(yōu)選為含3 6個(gè) 碳原子的酮類溶劑，更優(yōu)選為更優(yōu)選為丙酮、丁酮或丙酮和丁酮的混合物。為了使第三中間 產(chǎn)品更易溶解并結(jié)晶，本發(fā)明中酮類溶劑與第三中間產(chǎn)品的重量比優(yōu)選為10 40 1，更 優(yōu)選為20 30 1。為了提高第三中間產(chǎn)品的溶解度，本發(fā)明優(yōu)選在加熱的條件下將第三中間產(chǎn)品溶 解在酮類溶劑中，加熱溫度優(yōu)選為15°C 50°C，更優(yōu)選為30°C 35°C。在進(jìn)行第三次析晶之前，本發(fā)明優(yōu)選將所述溶解了第三中間產(chǎn)品的酮類溶液進(jìn)行 濃縮，更優(yōu)選為濃縮至原重量的1/4 1/6。為了使度骨化醇第三次析晶更為充分，本發(fā)明優(yōu)選在低溫條件下進(jìn)行第三次析 晶，所述低溫優(yōu)選為-10°C 10°C，更優(yōu)選為0°C 5°C ；第三次析晶時(shí)間優(yōu)選為lh 24h，
6更優(yōu)選為20h 24h。將第三中間產(chǎn)品進(jìn)行第三次析晶后得到的度骨化醇含有少量溶劑，本發(fā)明優(yōu)選將 其進(jìn)行真空干燥，得到可以直接應(yīng)用的度骨化醇成品。所述真空干燥的溫度優(yōu)選為20°C 60°C，更優(yōu)選為30°C 35°C。為了提高度骨化醇的析晶率，在上述三次析晶過程中，均可以在冷卻析晶之前或 之間向溶液中加入度骨化醇晶體作為晶種，加快析晶時(shí)間，提高析晶效率。此外，在進(jìn)行析晶得到中間產(chǎn)品之后的剩余溶液可以回收利用，以降低成本。同 時(shí)，由于析晶不充分，該剩余溶液中會(huì)含有少量度骨化醇，重復(fù)利用能夠提高度骨化醇的回 收率，如第一次析晶后的剩余溶液繼續(xù)用作下一批產(chǎn)品進(jìn)行第一析晶時(shí)的結(jié)晶溶劑，第二 次析晶后的剩余溶液繼續(xù)用作下一批產(chǎn)品進(jìn)行第二析晶時(shí)的結(jié)晶溶劑，第三次析晶后的剩 余溶液繼續(xù)用作下一批產(chǎn)品進(jìn)行第三次析晶時(shí)的結(jié)晶溶劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首先將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析分離提純，然后將得到 的第一中間產(chǎn)品依次在酯類溶劑、醚類和酮類的混合液、酮類溶劑中進(jìn)行三次析晶，得到度 骨化醇。在柱層析過程中，與度骨化醇極性不同的雜質(zhì)與度骨化醇相分離；依次經(jīng)過三次析 晶后，度骨化醇粗品中與度骨化醇溶解度不同的大部分雜質(zhì)被分離，得到純度為99. 80%以 上的度骨化醇，其總雜質(zhì)含量不超過0. 20%，已知雜質(zhì)EPBP3的含量不超過0. 10%，其他最 大未知單個(gè)雜質(zhì)不超過0. 10%，能夠滿足度骨化醇作為藥品應(yīng)用的要求。此外，本發(fā)明提供 的提純方法操作簡單，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求不高，易于操作，成本較低。為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的度骨化醇的提純方法進(jìn) 行詳細(xì)描述。實(shí)施例1為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，按照《人用藥品注冊技術(shù)國際協(xié)調(diào)會(huì)議》 (ICH)的要求，本發(fā)明中每次使用高效液相色譜儀對(duì)度骨化醇進(jìn)行檢測之前均使用以下儀 器、試劑和步驟進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1. 1儀器及其參數(shù)高效液相色譜儀美國Agilent公司生產(chǎn)的Agilentl200型高效液相色譜儀；檢測波長205nm；流速1. 7mL/min ；進(jìn)樣量對(duì)照品溶液10 u L，系統(tǒng)適應(yīng)性溶液5 ii L ；柱溫35°C；色譜柱YMC-Pack0DS-AQ 150X4. 6mm S-3 u m ；流動(dòng)相組成過濾和脫氣后的水和過濾和脫氣后的乙腈的混合液；在進(jìn)行檢測時(shí)，所述混合液按照以下程序洗脫首先將體積比為25 75的水和乙腈組成的混合液進(jìn)行15min的線性梯度洗脫， 得到體積比為23 77的水和乙腈的混合液；然后將體積比為23 77的水和乙腈的混合 液進(jìn)行5min的線性梯度洗脫，得到體積比為10 90的水和乙腈的混合液；將體積比為 10 90的水和乙腈的混合液進(jìn)行l(wèi)Omin的常液洗脫，再進(jìn)行6min的梯度洗脫，得到100% 的乙腈，最后將乙腈進(jìn)行4min的常液洗脫。1. 2 試齊[J
7
配制體積比為1 4的乙酸乙酯和乙腈的混合液，作為稀釋液備用；取2份重慶泰濠制藥有限公司生產(chǎn)的純度為99. 87%的度骨化醇10mg，分別置 于10mL量瓶中，分別加入稀釋液溶解所述度骨化醇并稀釋至刻度，搖勻，分別得到濃度為 1. Omg/mL的第1對(duì)照品溶液和第2對(duì)照品溶液；取1. 5mg美國LFP公司生產(chǎn)的、純度為65%、EPBP3含量為35%的度骨化醇，置于 lOOmL量瓶中，加入稀釋液溶解所述度骨化醇并稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0. 015mg/mL 的系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，置于冰箱中冷凍保藏備用。1. 3實(shí)驗(yàn)步驟分別將1針稀釋液、5針第1對(duì)照品溶液和1針系統(tǒng)適應(yīng)性溶液加入高效液相色譜 儀中，每針之間的平衡時(shí)間為5min ；記錄第1對(duì)照品溶液的色譜圖至25min，記錄稀釋液和 系統(tǒng)適用性溶液的色譜圖至50min，結(jié)果參見圖1和表1、表2，圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供 的系統(tǒng)適用性溶液的高效液相色譜圖，其中a為EPBP3的峰，b為度骨化醇的峰；表1為本 發(fā)明提供的第1對(duì)照品溶液的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果，表2為本發(fā)明提供的度骨化醇和EPBP3的 分離度結(jié)果。表1本發(fā)明提供的第1對(duì)照品溶液的系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果
(%)
表2本發(fā)明提供的度骨化醇和EPBP3的分離度結(jié)果
根據(jù)表2及圖1，計(jì)算EPBP3的相對(duì)保留時(shí)間以及度骨化醇和EPBP3的分離度，分 別為0. 93和6. 78。ICH對(duì)高效色譜儀檢測度骨化醇的系統(tǒng)適應(yīng)性要求為對(duì)照品溶液5針的相對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏差不超過1. 5% ；系統(tǒng)適用性溶液中EPBP3的相對(duì)保留時(shí)間約為0. 94且度骨化醇與 EPBP3的分離度不小于1. 5。本發(fā)明提供的第1對(duì)照品溶液5針的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0. 16% ；系統(tǒng)適應(yīng)性溶液中
8EPBP3的相對(duì)保留時(shí)間為0. 93且度骨化醇和EPBP3的分離度為6. 78，滿足系統(tǒng)適應(yīng)性要 求，說明本發(fā)明用液相色譜儀對(duì)度骨化醇進(jìn)行的檢測分析是可靠的。將2針第2對(duì)照品溶液分別加入高效液相色譜儀中，每針之間的平衡時(shí)間為5min， 記錄第2對(duì)照品溶液的色譜圖至25min，得到的色譜圖以及系統(tǒng)適應(yīng)性結(jié)果與第1對(duì)照品溶 液基本相同，說明本發(fā)明進(jìn)行的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)是可靠的。實(shí)施例2將30g重慶泰濠制藥有限公司生產(chǎn)的、純度為75. 69%、含1. 38% EPBP3的度骨化 醇粗品溶解在90mL二氯甲烷中，得到粗溶液。將粗溶液進(jìn)行柱層析，層析時(shí)以200目的柱層 析硅膠為固定相，分別以體積比為3 1的環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液；體積比為2 1的 環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液；體積比為1 1的環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液和體積比為1 2 的環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行4級(jí)梯度洗脫，用高效液相色譜儀監(jiān)測洗脫液， 收集含度骨化醇的洗脫液，然后將度骨化醇濃縮蒸干，得到19. 5g度骨化醇蒸干品；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg度骨化醇蒸干品，用實(shí)施例1 中制備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度 為92. 08%,EPBP3含量為0. 31% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；向19. 48g度骨化醇蒸干品中加入1170mL甲酸甲酯，加熱至38°C使固體全部溶解 后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為225g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在3°C的溫度下靜置結(jié)晶 24h，然后抽濾，得到16. 8g第一濾餅；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg第一濾餅，用實(shí)施例1中制 備的稀釋液將濾餅配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度為 97. 10%,EPBP3含量為0. 09% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；將16. 78g的第一濾餅加入到420mL異丙醚和60mL丙酮的混合溶液中，加熱至 38°C使濾餅完全溶解后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為74g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在3°C 的溫度下靜置結(jié)晶20h，然后抽濾，得到15. lg第二濾餅；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg第二濾餅，用實(shí)施例1中制 備的稀釋液將濾餅配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度為 99. 14%，EPBP3含量為0. 02% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；將15. 08g的第二濾餅加入到380mL丙酮的混合溶液中，加熱至38°C使濾餅完全 溶解后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為60g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在2V的溫度下靜置 結(jié)晶23h，然后抽濾，得到濾餅，將濾餅置于真空干燥箱中，在32°C的溫度下減壓干燥，得到 12. 8g成品；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg成品，用實(shí)施例1中制備的稀 釋液將成品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀對(duì)成品進(jìn)行測試，結(jié)果參見圖2， 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2提純的度骨化醇的高效液相色譜圖，對(duì)圖2進(jìn)行分析，分析結(jié)果見表 3，表3為本發(fā)明實(shí)施例2的提純的度骨化醇的高效液相色譜分析結(jié)果。表3本發(fā)明實(shí)施例2的提純的度骨化醇的高效液相色譜分析結(jié)果 其中，各組分含量百分比是按照面積歸一化法(扣除稀釋液峰)計(jì)算得到的，公式 如下含量％= Ai/AU*100%其中，Ai為各組分的峰面積；AU為總峰面積；由表3可知，通過本發(fā)明提供的方法提純后，度骨化醇的純度為99. 80wt%,EPBP3 含量為0. 00 %，其他單個(gè)最大未知雜質(zhì)含量不超過0. 05wt %，總雜質(zhì)為0. 2wt %。實(shí)施例3將30g重慶泰濠制藥有限公司生產(chǎn)的、純度為72. 58%、含1. 43% EPBP3的度骨化 醇粗品溶解在90mL二氯甲烷中，得到粗溶液。將粗溶液進(jìn)行柱層析，層析時(shí)以200目的柱層 析硅膠為固定相，分別以體積比為3 1的正己烷、乙酸乙酯混合溶液；體積比為2 1的 正己烷、乙酸乙酯混合溶液；體積比為1 1的正己烷、乙酸乙酯混合溶液和體積比為1 2 的正己烷、乙酸乙酯混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行4級(jí)梯度洗脫，用高效液相色譜儀監(jiān)測洗脫液， 收集含度骨化醇的洗脫液，然后將度骨化醇濃縮蒸干，得到18. 8g度骨化醇蒸干品；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg度骨化醇蒸干品，用實(shí)施例1 中制備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度 為92. 35%,EPBP3含量為0. 25% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；向18. 78g蒸干品中加入1150mL乙酸甲酯，加熱至38°C使固體全部溶解后減壓蒸 餾,當(dāng)剩余溶液重量為211g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在;TC的溫度下靜置結(jié)晶20h，然后 抽濾，得到16. 2g第一濾餅；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg第一濾餅，用實(shí)施例1中制 備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度為 97.91%4 8 3含量為0. 08% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；將16. 18g的第一濾餅加入到420mL乙醚和60mL丙酮的混合溶液中，加熱至38°C
10使濾餅完全溶解后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為77g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在3°C的溫 度下靜置結(jié)晶20h，然后抽濾，得到14. 4g第二濾餅；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg第二濾餅，用實(shí)施例1中制 備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度為 99. 62%，EPBP3含量為0.01% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；將14. 38g的第二濾餅加入到400mL丙酮的混合溶液中，加熱至38°C使濾餅完全 溶解后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為63g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在2V的溫度下靜置 結(jié)晶20h，然后抽濾，得到濾餅，將濾餅置于真空干燥箱中，在32°C的溫度下減壓干燥，得到 12. lg成品；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg成品，用實(shí)施例1中制備的稀 釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，結(jié)果參見圖3，圖 3為本發(fā)明實(shí)施例3提純的度骨化醇的高效液相色譜圖；由圖3可知，度骨化醇的純度為 99. 80wt %，EPBP3含量為0. 00 %，其他單個(gè)最大未知雜質(zhì)含量不超過0. 05wt %，總雜質(zhì)不 超過 0. 2wt%。實(shí)施例4將30g重慶泰濠制藥有限公司生產(chǎn)的、純度為74. 33%、含1. 27% EPBP3的度骨化 醇粗品溶解在90mL二氯甲烷中，得到粗溶液。將粗溶液進(jìn)行柱層析，層析時(shí)以200目的柱層 析硅膠為固定相，分別以體積比為3 1的環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液；體積比為2 1的 環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液；體積比為1 1的環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液和體積比為1 2 的環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶液為流動(dòng)相進(jìn)行4級(jí)梯度洗脫，用高效液相色譜儀監(jiān)測洗脫液， 收集含度骨化醇的洗脫液，然后將度骨化醇濃縮蒸干，得到19. 2g度骨化醇蒸干品；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg度骨化醇蒸干品，用實(shí)施例1 中制備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度 為92. 0%,EPBP3含量為0. 26% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；向19. 18g蒸干品中加入1200mL甲酸甲酯，加熱至38°C使固體全部溶解后減壓蒸 餾，當(dāng)剩余溶液重量為207g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在;TC的溫度下靜置結(jié)晶20h，然后 抽濾，得到16. 9g第一濾餅；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg第一濾餅，用實(shí)施例1中制 備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度為 97. 77%，EPBP3含量為0. 09% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；將16.88g的第一濾餅加入到420mL異丙醚和60mL丙酮的混合溶液中，加熱至 38°C使濾餅完全溶解后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為66g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在3°C 的溫度下靜置結(jié)晶20h，然后抽濾，得到15. lg第二濾餅；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg第二濾餅，用實(shí)施例1中制 備的稀釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，其純度為 99. 56%，EPBP3含量為0. 03% ；其中，溶液制備到進(jìn)樣在5min內(nèi)完成；將15. 08g的第二濾餅加入到400mL丙酮的混合溶液中，加熱至38°C使濾餅完全 溶解后減壓蒸餾，當(dāng)剩余溶液重量為59g時(shí)停止蒸餾，并將剩余溶液在2V的溫度下靜置 結(jié)晶20h，然后抽濾，得到濾餅，將濾餅置于真空干燥箱中，在32°C的溫度下減壓干燥，得到12. 9g成品；進(jìn)行如實(shí)施例1所述的系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)后，取20mg成品，用實(shí)施例1中制備的稀 釋液將蒸干品配置成4. Omg/mL的溶液，使用高效液相色譜儀進(jìn)行測試，結(jié)果參見圖4，圖 4為本發(fā)明實(shí)施例4提純的度骨化醇的高效液相色譜圖；由圖4可知，度骨化醇的純度為 99. 82wt %，EPBP3含量為0. 02wt %，其他單個(gè)最大未知雜質(zhì)含量不超過0. 05wt %，總雜質(zhì) 不超過0. 2wt%0以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì) 于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行 若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種度骨化醇的提純方法，其特征在于，包括a)將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析分離、提純，得到第一中間產(chǎn)品；b)將所述第一中間產(chǎn)品在酯類溶劑中進(jìn)行第一次析晶，得到第二中間產(chǎn)品；c)將所述第二中間產(chǎn)品在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中進(jìn)行第二次析晶，得到第三中間產(chǎn)品；d)將所述第三產(chǎn)品在酮類溶劑中進(jìn)行第三次析晶，得到度骨化醇成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提純方法，其特征在于，所述步驟a)中，柱層析過程中的洗脫 為梯
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提純方法，其特征在于，進(jìn)行梯度洗脫時(shí)的流動(dòng)相為石油醚 和乙酸乙酯的混合液，或者為石油醚和丙酮的混合液，或者為甲醇和二氯甲烷的混合液，或 者為甲醇和三氯甲烷的混合液，或者為環(huán)己烷和乙酸乙酯的混合液或者為正己烷和乙酸乙 酯的混合液，或者為異丙醚和乙酸乙酯的混合液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提純方法，其特征在于，所述步驟b)中的酯類溶劑為含2 6個(gè)碳原子的酯類溶劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提純方法，其特征在于，所述酯類溶劑為乙酸乙酯、甲酸甲酯 或甲酸乙酯中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提純方法，其特征在于，所述酯類溶劑與第一中間產(chǎn)品的重 量比為50 70 1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提純方法，其特征在于，所述步驟c)中的醚類溶劑為含2 4個(gè)碳原子的醚類溶劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提純方法，其特征在于，所述醚類溶劑為乙醚、正丙醚、異丙 醚或丁醚中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提純方法，其特征在于，所述醚類溶劑與第二中間產(chǎn)品的重 量比為15 35 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提純方法，其特征在于，所述步驟c)中的酮類溶劑為含3 6個(gè)碳原子的酮類溶劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的提純方法，其特征在于，所述酮類溶劑為丙酮、丁酮或丙酮 和丁酮的混合液。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的提純方法，其特征在于，所述酮類溶劑與第二中間產(chǎn)品的 重量比為1.5 6 1。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提純方法，其特征在于，所述步驟d)中，酮類溶劑與第三中 間產(chǎn)品的重量比為10 40 1。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種度骨化醇的提純方法，包括a)將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析分離、提純，得到第一中間產(chǎn)品；b)將所述第一中間產(chǎn)品在酯類溶劑中進(jìn)行第一次析晶，得到第二中間產(chǎn)品；c)將所述第二中間產(chǎn)品在醚類溶劑和酮類溶劑的混合液中進(jìn)行第二次析晶，得到第三中間產(chǎn)品；d)將所述第三產(chǎn)品在酮類溶劑中進(jìn)行第三次析晶，得到度骨化醇成品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首先將度骨化醇粗品進(jìn)行柱層析，然后依次在酯類、醚類和酮類的混合液、酮類中進(jìn)行三次析晶，得到純度為99.80％以上的度骨化醇，其總雜質(zhì)含量不超過0.20％，已知雜質(zhì)EPBP3的含量不超過0.10％，其他最大未知單個(gè)雜質(zhì)不超過0.10％。
文檔編號(hào)C07C401/00GK101863809SQ20101019771
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月12日
發(fā)明者應(yīng)振培, 李靖, 楊顯梅, 陳波 申請(qǐng)人:重慶泰濠制藥有限公司