專利名稱：曲古抑菌素a衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及曲古抑菌素A衍生物及其制備方法，還涉及因所述曲 古抑菌素A衍生物具有組蛋白去乙?；敢种苹钚远鳛榭鼓[瘤藥物的用途。
背景技術(shù)：
核心組蛋白的乙?；腿ヒ阴；?與基因調(diào)控密切相關(guān)，負(fù)責(zé)組蛋 白乙酰化和去乙?；氖且粚?duì)功能相互拮抗的酶即組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶 (HAT)和組蛋白去乙?；?HDAC)。 HAT可乙?；M蛋白末端堿 性氨基酸即賴氨酸的氨基，舒展核小體結(jié)構(gòu)，激活基因轉(zhuǎn)錄。與HAT 的功能相反，HDAC抑制基因轉(zhuǎn)錄。HAT和HDAC的動(dòng)態(tài)平衡控制著 染色體的結(jié)構(gòu)和基因的表達(dá)。HDAC作為調(diào)控基因的關(guān)鍵蛋白酶，其 功能異常被證實(shí)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有直接的關(guān)系。當(dāng)HDAC過度表 達(dá)并被轉(zhuǎn)錄因子募集時(shí)，就會(huì)抑制某些基因的正常表達(dá)，從而導(dǎo)致腫 瘤和其他疾病。近年的研究結(jié)果顯示，抑制HDAC的活性可抑制腫瘤 細(xì)胞的生長并且i秀導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的分化，從而在一些腫瘤中產(chǎn)生抗癌效 應(yīng)，所以組蛋白去乙酰化酶被認(rèn)為是最具潛力的癌癥治療藥物的靶點(diǎn) 之一。目前，雖然有部分HDAC抑制劑已進(jìn)入臨床研究，但現(xiàn) 有的HDAC抑制劑存在著諸如體內(nèi)代謝穩(wěn)定性差和特異性差 等問題，因此，迫切需要開發(fā)出具有更強(qiáng)抗癌作用以及更為穩(wěn)定的組 蛋白去乙?；敢种苿Ｇ乓志谹 (Trichostotin A， TSA)是一種自吸濕鏈霉菌屬分離得到的具有抗菌活性的天然產(chǎn)物。研究表明，曲古抑菌素A具有抑制細(xì) 胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞分化與凋亡(Yoshida， Cancer Res.， 1987， 47， 3688-3691 )，阻滯細(xì)胞周期(Yoshida, Exp. Cell Res" 1988, 177, 122-131 ) 等多種作用，對(duì)此作用的機(jī)理研究最終確認(rèn)曲古抑菌素A為強(qiáng)效組蛋 白去乙酰4匕酶4中制劑(Yoshida, J. Biol. Chem.， 1990, 265， 17174 )。雖然 曲古抑菌素A具有很高的體外組蛋白去乙?；敢种苹钚?ICso為幾 納摩爾)，但其體內(nèi)代謝不穩(wěn)定性導(dǎo)致其失去了臨床應(yīng)用的可能，有關(guān) TSA類似物的合成及生物活性研究已有一些文獻(xiàn)報(bào)道，由于TSA含有 一個(gè)和羰基相鄰的手性中心，其合成具有相當(dāng)大的難度，目前報(bào)道的 TSA衍生物大多是一些TSA的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)化物，和母體化合物TSA相比， 簡(jiǎn)化后的衍生物的活性有較大程度的下降。因此開發(fā)新的曲古抑菌素A 衍生物作為針對(duì)HDAC為靶點(diǎn)的新型抗胂瘤藥物有著極大的應(yīng)用前 景。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供具有良好的組蛋白去乙?；敢种苹钚耘c癌 細(xì)胞增殖抑制作用的新穎的曲古抑菌素A衍生物，為尋找新型抗腫瘤 藥物開辟新的途徑。本發(fā)明的另一目的在于提供所述曲古抑菌素A衍 生物的制備方法。本發(fā)明的還一目的是提供所述曲古抑菌素A衍生物 在制備抗腫瘤藥物中的用途。曲古抑菌素A結(jié)構(gòu)如下:本發(fā)明所述曲古抑菌素A^f汙生物的具體結(jié)構(gòu)可由以下通式(I)表<formula>formula see original document page 10</formula>(I)其中，R4和R2相同或不同，為H、 C1 C5直鏈或支鏈烷基、取代或 未取代的C3 ~ C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳 香烷基或R,和R2與鄰接的N原子相連成取代或未取代的含氮飽和雜 環(huán)基，即-NR,R2;Ra與Rb相同或不同，為H、 C1 C3直鏈或支鏈烷基，優(yōu)選Ra與Rb 其中一個(gè)為H，另一個(gè)為C1 C3直鏈或支鏈烷基；R3為H、 C1~C3直鏈或支鏈烷基。本發(fā)明的C1 C5直鏈或支鏈烷基，可以列舉例如甲基、乙基、 正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊 基等。C3 C6環(huán)烷基，可以列舉例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán) 己基等。芳香基與芳香烷基可以列舉例如苯基，千基等。C3 C6環(huán) 烷基、芳香基與芳香烷基可帶有1 ~2個(gè)取代基，取代基可以列舉例如: 烷基，烷氧基、羥基、面素等。作為R,和R2與鄰接的氮原子相連形成 的雜環(huán)，可以列舉例如吡咯烷環(huán)、哌啶環(huán)、嗎啡啉環(huán)、哌n秦環(huán)等。優(yōu)選的化合物是(R，2E，4E ) -7- ( 4-氨基苯基)->^羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰 胺(TA-1 );(R，2E,4E) -7- (4- (二乙氨基)苯基)->^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-2 );(R，2E,4E) -7- (4- (二丙氨基)苯基)-1^-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-3 );(R,2E,4E ) -7- ( 4- ( 二丁絲)苯基)-1^羥基-4,6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-4 );(R，2E，4E) -7- (4- (N, N-二 (4-曱氧基千基)苯基)-N-羥基 -4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-5);(R，2E，4E) -7- (4-(甲基M)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺 (TA-6);(艮2E，4E ) -7- ( 4-(異丙基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-7 );(K2E，4E) -7- (4-(異丁基絲)苯基).N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺 (TA-8 );(R,2E，4E ) -7- ( 4-(芐基氨基)苯基)-^羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-9 );(R，2E，4E) -7- (4- (N- (4-甲氧基爺基)氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-10);(艮2E,4E) -7- (4-(環(huán)戊基氨基)苯基)-N-羥基4,6-二曱基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-11);(R，2E，4E ) -7- ( 4-(環(huán)己基M)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2,4-二烯庚跣胺(TA-12);(R,2E，4E ) ->!-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- ( 4- ( 1-吡咯烷基)苯基)-2,4-二烯庚酰胺(TA-13);(R，2E，4E) -1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- ( l-哌咬基)苯基)-2，4-二烯庚酰胺(TA-14);(R,2E，4E ) -6- ( 4- ( 二曱氨基)苯曱?；?->!-羥基-4-甲基-2，4-二烯辛 酰胺(TA-15);(2E,4E) -7- (4- (二曱氨基)苯基)-1^羥基-4,6，6-三甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-16);(R，2E，4E) -7- (4- (二曱氨基)笨基)->1-羥基-6-曱基-7-氧代-2，4-二 烯庚酰胺(TA-17)。本發(fā)明還提供上述通式(I )所表示化合物的制備方法，其中方 法一為首先通過以下流程制備中間體XI:RaHCHORbOMD或L-脯氨酸02NCHOPh3P~<'C02MeOMVI02NOM■C02MeD舊AL-HMn0202N(EtO)2^CH2C02EtOM^^C02Et林德拉催化劑> Ra Rb R3XRaH對(duì)硝基笨甲醛與不同的醛 CHO在D型或L型脯氨酸的催化下進(jìn)行羥 醛縮合反應(yīng)得到化合物VI;化合物VI經(jīng)維悌希(Wittig)反應(yīng)生成化合物VII;化合物VD經(jīng)DIBAL-H (二異丁基氫化鋁)還原和二氧化錳氧化 連續(xù)兩步反應(yīng)得到化合物K;化合物IX與再經(jīng)過一步wittig反應(yīng)得到化 合物X;化合物X在林德拉催化劑下催化氬化得到中間體XI (中間體 XI制備可參考專利申請(qǐng)申請(qǐng)?zhí)?00510030149.5 )以上合成路線中，Ra、 Rb和Rs定義如前。M為氫原子或常用的 羥基保護(hù)基，在制備過程中，可在各中間體階段根據(jù)需要用適當(dāng)?shù)谋?護(hù)基取代該羥基，然后根據(jù)需要除去保護(hù)基，即可獲得所需的化合物。 作為羥基保護(hù)基，可以列舉Greene和Wuts著的"Protective Groups in Organic Synthesis (有機(jī)合成中的保護(hù)基)"中記載的羥基保護(hù)基，如， 烷基硅烷類(例如叔丁基二曱基硅烷等)、烷?；?例如乙?；?。 可根據(jù)反應(yīng)條件適當(dāng)使用這些保護(hù)基?；衔颴I與醛或酮在三乙酰氧基硼氫化鈉的作用下進(jìn)行還原氨化 反應(yīng)，可得到化合物Xfl，在室溫下，以四氬呋喃或l, 2-二氯乙烷為溶 劑進(jìn)4亍反應(yīng)。^^C02Et醛或酮NaBH(OAc)3 R其中，Ra、 Rb、 R3和M定義如前，當(dāng)R!和R2相同，為C1 C5 直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3 ~ C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳 香基、取代或未取代的芳香烷基時(shí)，相對(duì)于1摩爾化合物XI,使用2 10 摩爾醛或酮(優(yōu)選3 5摩爾)和2 10摩爾三乙酰氧基硼氫化鈉(優(yōu) 選3 5摩爾)。當(dāng)R,和R2其中一個(gè)為氫，另一個(gè)為C1-C5直鏈或支鏈烷基、取 代或未取代的C3 ~ C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代 的芳香烷基時(shí)，相對(duì)于1摩爾化合物XI，使用1~1.5摩爾餒或酮(優(yōu) 選1 - 1.2摩爾)和1 ~ 1.5摩爾三乙酰氧基硼氫化鈉(優(yōu)選1 ~ 1.2摩爾)。化合物Xfl進(jìn)一步氨解，得到羥肟酸化合物，該化合物被氧化得到 通式(I )所表示化合物。NHOHNHOHR2，氣應(yīng)以鹽酸雍胺為原料，在室溫下，以甲醇為溶劑進(jìn)行反應(yīng)。氧化反應(yīng)所用氧化劑為2，3-二氯-5,6-二氰基對(duì)苯二醌(DDQ),在室溫14下，以二氧六環(huán)為溶劑進(jìn)行反應(yīng)。方法二首先通過以下流程制備中間體F除由化合物A制備化合物B時(shí)采用對(duì)溴苯曱醛為原料外，各步驟 反應(yīng)采用與方法一中由化合物V制備化合物X相同的步驟進(jìn)行。中間體F與環(huán)狀烷胺或取代環(huán)烷胺在4巴催化劑催化下及堿的作用 下通過偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物G<formula>formula see original document page 15</formula>該偶聯(lián)反應(yīng)所用的堿可列舉曱醇鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、碳酸 鉀、碳酸銫、DBU ( 1，8-二氮雙環(huán)[5.4.0]十一烯-7)、 DABCO ( 1，4-二氮頁雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷)等。反應(yīng)所用溶劑只要為一般偶聯(lián)反應(yīng)所用的溶劑 即可，并無特別限制，例如甲苯、四氬呋喃等?？稍谑覝叵禄蚣訜嵯?進(jìn)行，優(yōu)選在70 110。C加熱下進(jìn)行反應(yīng)。其中，Ra、 Rb、 R3和M定義如前，R,和R2與鄰#"的N原子相連 成取代或未取代的含氮飽和雜環(huán)基，即-NR，R2;反應(yīng)所用鈀催化劑可使用常見的鈀催化劑，例如Pd(OAc)2 (醋酸 把)、Pd(PPh3)4 (四三苯基膦合4巴)、Pd2(dba)3 (三(二亞芐基丙酮)二鈀) 等。所用配體可列舉以下化合物1和2等，接著，化合物G先后經(jīng)過與方法一相同的氨解、氧化反應(yīng)得到通 式(I )所表示化合物。由本發(fā)明上述方法一和二制備的通式(I )所表示的化合物，在 細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞抹有強(qiáng)烈的抑制作用，這類新化合物具 有抗肺瘤作用，可在制備預(yù)防和治療腫瘤藥物中應(yīng)用。


圖1為試驗(yàn)實(shí)施例2中通過HDAC熒光檢測(cè)/藥物篩選試劑盒 (HDAC Fluorimeteic Assay/Drug Discovery Kit)檢測(cè)的活性化合物對(duì) HDAC的抑制作用；Ip—t16圖2為試驗(yàn)實(shí)施例2中TA-15對(duì)乙?；M蛋白H3、乙酰化組蛋白 H4和p21蛋白的表達(dá)的影響；圖3為試-瞼實(shí)施例2中TA-15對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116和HT-29 細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響。
具體實(shí)施方式
在下列實(shí)施例中將更具體地說a月本發(fā)明的一些有代表性的式(I) 的曲古抑菌素A衍生物及其制備方法。實(shí)施例1: ( R,2E，4E ) -7- ( 4-氨基苯基)_:^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-1 )的制備A:中間體(2E，4E6R,7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-4， 6-二甲基-2,4-二烯庚酸乙酯的制W其制備可參考專利申請(qǐng)申請(qǐng)?zhí)?00510030149.5)(1) 將1.51g對(duì)硝基苯甲醛溶于35ml DMF中，加入230mg L-脯氨 酸，然后加入1.44ml丙醛，室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入100ml水，乙酸乙 酯提取三次，合并有機(jī)層，硫酸鎂干燥，過濾，將濾液濃縮，得到的 粗產(chǎn)物，直接投入下一步。(2) 將上步得到的粗產(chǎn)物溶于30ml二氯甲烷，加入9.6g wittig試 劑Ph3P=C(CH3)C02Me，加熱回流12小時(shí)，蒸干溶劑，硅膠柱層析(乙 酸乙酯/石油醚-l/2(V/V))，得到2.67g如下結(jié)構(gòu)的化合物，兩步產(chǎn)率 96%。(3)將2.19g上步得到的化合物溶于無水30mlTHF中，冷至-78。C， 10分鐘內(nèi)滴加1M的DIBAL-H的溶液19ml,滴畢繼續(xù)攪拌15分鐘， 加入飽和酒石酸鈉鉀溶液，升至室溫，繼續(xù)攪拌6小時(shí)，加入乙酸乙 酯萃取，有機(jī)層用硫酸鎂干燥濃縮得到粗產(chǎn)物；將此粗產(chǎn)物溶于二氯 曱烷25ml，加入5.4g活性二氧化錳，室溫?cái)嚢?0分鐘，過濾，濾液 濃縮得到黃色油狀粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物用硅膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚 =1/3(V/V))，得到1.27g具有如下結(jié)構(gòu)的化合物，兩步產(chǎn)率65%。(4) 60%NaH 200rng懸浮于5ml干燥的THF，滴加1.35ml膦?；?乙酸三乙酯，滴畢攪拌10分鐘,將500mg步驟(3 )的產(chǎn)物溶于15mlTHF 溶液，然后將此溶液滴加入上述NaH與膦?；宜崛阴サ姆磻?yīng)液中， 滴畢繼續(xù)攪拌30分鐘，加入水，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用硫酸鎂干 燥濃縮，將粗產(chǎn)物用硅膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/5 (V/V)),得到 601mg具有如下結(jié)構(gòu)的化合物，產(chǎn)率89%。(5)將上步得到的化合物600mg溶于18ml甲醇，加入910mg林德 拉催化劑及42(Hil喹啉，常溫常壓下用氫氣催化氫化20小時(shí)，過濾除 去催化劑，濾液濃縮后用硅膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚=1/2 (V/V)), 得到具有如下結(jié)構(gòu)的化合物。'H-NMR (CD3OD， 300Hz, Sppm): 5 7,35 (1H， dd， J-15.6, 0.9Hz)， 7.11 (2H， d， J-8.4Hz)， 6.67 (2H， d， J=8.4Hz), 5.84 (1H, d， J=9.6Hz), 5.81(1H, d, J=15.6Hz)， 4.36 (1H， d， J-7.5Hz), 4.21 (2H， q， J-7.2Hz), 2.84 (1H: m)， 1.77(3H, d， J-1.2Hz)， 1.30 (3H， t， J-7.2Hz), 0.86 (3H， d， J=6.9Hz);B:將10mg (2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-樣苯基)-7-羥基-4， 6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯溶于0.2ml甲醇，加入0.5ml 1.5M的NH20H MeOH溶液， 氬氣保護(hù)下室溫?cái)嚢?小時(shí)，向反應(yīng)液加入飽和NaHC03溶液，加入 乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，過濾，將濾液濃縮 得到粗產(chǎn)物14mg;將此粗產(chǎn)物溶于lml二氧六環(huán)，另將10mgDDQ溶 解于0.5ml 二氧六環(huán)中，將此溶液滴加入上述凈且產(chǎn)物的二氧六環(huán)溶液 中，TLC (薄層層析)跟蹤至反應(yīng)完全，將反應(yīng)液過濾，濾液濃縮后 硅膠柱層析(洗脫劑二氯曱烷/甲醇=10/1 (V/V))純化產(chǎn)品，得到 1.8mg (兩步產(chǎn)率20%)具有如下結(jié)構(gòu)的化合物。- NMR ( CD3OD, 300Hz, Sppm): d-7.71 (2H， d, J=8.7Hz)， 7.14 (1H， d, J=15.3Hz)， 6.61 (2H， d， J=8.7Hz), 5.88 (1H， d, J=9.0Hz), 5.80 (1H， d, J-15.3 Hz)， 4.41 (1H, m)， l.即H, s)， L25(3H， d， J=6.9Hz)o 9實(shí)施例2: (R，2E，4E) -7- (4- ( 二乙氨基)苯基)->1-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-2)的制備A:將I50mg實(shí)施例1中A部分制得的中間體(2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-4，6-二曱基-2，4-二烯庚酸乙酯溶于5ml四氫呋喃，加入685mg的40%乙醛水溶液(3eq.),室溫?cái)嚢?0分鐘后加入530mg 三乙酰氧基硼氬化鈉，繼續(xù)室溫?cái)嚢?0小時(shí)后，加入飽和NaHC03溶 液，加入乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相。將有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌， 無水硫酸鎂千燥，過濾，將濾液濃縮。殘余物用硅膠柱層析純化(乙 酸乙酯/石油醚=1/5 (V/V)),得到148mg (2E，4E,6R，7R)-(4-(二乙氨基) 苯基)-7-羥基-4，6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯(收率83% )。B:將上步所得到的產(chǎn)物以與實(shí)施例1中B部分相同條件的氨解， 氧化反應(yīng)得到79mg (兩步產(chǎn)率56%)具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300他，Sppm): d=7.72 (2H， d, J=9.0Hz)， 7.11 (1H， d， J=14.7Hz)， 6.52 (2H, d， J=9.0Hz), 5.86 (1H, d， J=9.3Hz)，5.67 (1H， d， J=14.7Hz)， 4.28 (1H， m)， 3.31(4H， q， J=4.8Hz), L79(3H， s)， U9(3H，d， J=6.9Hz), U0(6H， t， J-4.8Hz)實(shí)施例3: ( R，2E，4E ) -7- ( 4- ( 二丙絲)苯基)-1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-3)的制備操作同實(shí)施例2，用丙醛代替乙醛，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz， Sppm): d=7.68 (2H, d， J=9.3Hz)， 7.07 (1H， d， J=15.6Hz)， 6.49 (2H， d, J=9.3Hz)， 5.82 (1H， d， J-10.2HzP.66 (1H， d， J=15,6Hz)， 4.26 (1H， m), 3.22(4H， t， J=7.2Hz)， L77(3H， s)， L50(4H， m)， L17(3H， d， J=6.6Hz), 0.82(6H， t， J=7.2Hz)實(shí)施例4: (R，2E,犯)-7- ( 4- ( 二丁綠)苯基)->}-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-4)的制備搡作同實(shí)施例2，用丁醛代替乙醛，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300他，Sppm): d=7.81 (2H, d， J=9.3Hz), 7.20 (1H, d， J=15.6Hz), 6.58 (2H, d, J=9.3Hz), 5.97 (1H， d， J=9.3Hz)，5.79 (1H， d， J=15.6Hz)， 4.38 (1H, m)， 3.36 (4H, t， J=7.8Hz)， L91(3H, s)， 1.61 (4H， m), 1.40 (4H， q, J=7,2Hz)， 1.30 (3H， d, J=6.9Hz), 0.97 (6H， t， J=7.2Hz)實(shí)施例5: (R，2E,4E) -7- (4- (N, N-二 (4-甲氧基千基)氨基)苯基) 一N-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2，4-二埽庚酰胺(TA-5)的制備操作同實(shí)施例2,用10叫4-甲軋基苯甲醛代替3eq.乙醛，使用lOeq.三乙酰氧基硼氬化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC1產(chǎn)5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.63 (2H, d, J=9.0Hz)， 7.14 (4H， d， J=6.6Hz)， 7.09 (4H， d， J=6.6Hz)， 6.46 (2H， d， J-15.6Hz)， 5.80 (1H， d， J-9.0他)，5.65 (1H， d， J=15.6Hz)， 4.26 (2H， s) 4.23(1H, m)， 4.19 (2H， s), 3.68 (3H， s)， 3.57 (3H, s)， 1.72(3H， s)， U4(3H， d: J-6.0Hz)實(shí)施例6: (R，2E，4E) -7- (4-(曱基^)苯基)-1^-羥基-4，6-二曱基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-6)的制備操作同實(shí)施例2，用1.2eq.甲醛代替3eq.乙醛，使用1.2eq.三乙酰 氧基硼氬化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d-7.64 (2H， d， J=9.6Hz), 7.02 (1H， d， J=15.3Hz)， 6.38 (2H， d, J=9.6Hz)， 5.80 (1H， d， J-9.0Hz),5.75 (1H， d, J=15.3Hz), 4.25 (IH， m)， 2.67(3H， s), 1.71(1H， s), L11(3H， d， J=6.9Hz)實(shí)施例7: (R，2E，4E) -7- (4-(異丙基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二甲 基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-7)的制備操作同實(shí)施例2，用1.5叫.丙酮代替3eq.乙醛，使用1.5叫.三乙酰 氧基硼氯化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz， Sppm): d=7.67 (2H, d,22J=9.0Hz), 7.10 (1H， d，河5.3Hz)， 6.42 (2H， d， J=9.0Hz), 5.85 (1H, d: J=9.0Hz)，5,67 (1H， d， J=15.3Hz)， 4.26 (IH， m),3.63 (1H, m)， 1.78 (3H， s): U8 (3H， d, J=6.9 Hz), 1.12 (6H, d, J=6.9Hz)實(shí)施例8: (R，2E,4E) -7- (4-(異丁基氨基)苯基)-N-羥基-4,6-二甲 基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-8)的制備操作同實(shí)施例2，用1.5eq.異丁醛代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 酰氧基鄰氫化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.77 (2H, d, J=6.0Hz)， 7.16 (1H， d， J=14.7Hz), 6.58 (2H, d, J=6.0Hz)， 5.83 (IH, d， J=6.3Hz)，5.67 (1H， d， J=14.7Hz)， 4.51 (IH， m)，2.% (2H, d， J=6.0Hz)， 2.00 (3H, s)， 1.96 (IH, m)， 1.25 (3H, d， J=6.3Hz), 0.96 (6H， d, J=6.0Hz)實(shí)施例9: (R，2E，4E) -7- (4-(爺基氨基)苯基)-^[-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-9)的制備操作同實(shí)施例2，用1.5eq.苯甲醛代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 酰氣基硼氳化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300他，5ppm): d=7.77 (2H， d，J=6.9Hz)， 7.34 (5H，m) 7.19 (1H， d， J=15.3ttz)， 6.60 (2H， d, J=6.9Hz)， 5.95 (1H， d， J=9.9Hz)，5.78 (1H， d， J=15.3Hz)， 4.40 (2H, s)， 4.37 (1H， m), L89(3H， s)， L29(3H， d, J=6.9Hz)<formula>formula see original document page 24</formula>實(shí)施例10: (R，2E,4E) -7- (4- (N- (4-曱氧基節(jié)基)氨基)苯基)-N-羥基_4,6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-10)的制備操作同實(shí)施例2,用1.5eq.4-甲氧基苯曱醛代替3叫乙醛，使用1.5eq. 三乙酰氧基硼氫化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.64 (2H， d, J=8.1Hz)， 7.13 (2H, d， J=9.0Hz), 7.03 (1H， d, J=13.5Hz)，6.75 (2H， d, J=9.0Hz)， 6.46 (2H, d， J=8.1Hz)， 5.82 (1H, d， J=7.8Hz)，5.65 (1H, d， J=13.5Hz)， 4.25 (1H， m), 4.20 (2H， s)， 1.74(3H， s)， L15(3H, d， J=6.9Hz)<formula>formula see original document page 24</formula>實(shí)施例11: (R，2E，4E) -7- (4-(環(huán)戊基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二甲 基_7_氧代_2，4-二烯庚酰胺(TA-11)的制備操作同實(shí)施例2，用1.5eq.環(huán)戊酮代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 酰氧基硼iL化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz, Sppm): d=7.62 (2H, d，J=8.4Hz)， 7.05 (1H， d， J-15.0Hz)， 6.41 (2H， d， J=8.4Hz)， 5.80 (1H， d: J=8.7Hz)， 5.65 (1H， d, J=15.0Hz)， 4.25 (IH， m)， 3.71 (1H, m)， 1.88 (2H m)， 1.73 (3H， s), 1.58 (4H， m)， 1.37 (2H， m)， 1.13 (3H， d, J=6.9Hz)實(shí)施例12: (R，2E，4E) -7- (4-(環(huán)己基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二曱 基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺(TA-12)的制備操作同實(shí)施例2，用1.5eq.環(huán)己酮代替3eq.乙醛，使用1.5eq.三乙 酰氧基硼氫化鈉，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, Sppm): d=7.66 (2H, d， J=9.0Hz)， 7.10 (1H， d， J=15.0Hz), 6.43 (2H, d， J=9.0Hz), 5.85 (1H， d， J=9.6Hz),5.67 (IH， d， J=15,0Hz)， 4.26 (1H， m), 3.26 (IH， m), 1.93 (2H, m)， 1.78 (3H, s)， 1.74 (2H， m)， 1.57 (2H， m)， 1.19 (3H， d， J=6.9Hz)， 1.15 (4H， m)實(shí)施例13: (2E，4E，6RJR)-7-(4-溴苯基)-7-羥基-4，6 二甲基-2，4-二烯庚酸 乙酯的制備(中間體)(1)將1.85g對(duì)溴苯甲醛和230mg L-脯氨酸溶于30mlDMF中，將 1.44ml丙醛溶于5mlDMF,用注射泵14小時(shí)內(nèi)加入上迷對(duì)溴苯甲醛和脯氨酸的DMF溶液中。反應(yīng)結(jié)束后加入水，用乙酸乙酯提取三次，合 并有機(jī)層，疏酸鎂干燥，濃縮，得到的粗產(chǎn)物，直接投入下一步。(2)將上步得到的粗產(chǎn)物溶于40ml二氯曱烷，加入12.2gwittig試 劑Ph3P=C(CH3)C02Me ,加熱回流12小時(shí)，蒸干溶劑，硅膠柱層析(乙 酸乙酯/石油醚-l/5(V/V)),得到2.7g如下結(jié)構(gòu)的化合物，兩步產(chǎn)率 93%。(3)將2.7g上步得到的化合物溶于無水THF中，冷至-78。C, 10 分鐘內(nèi)滴加1M的DIBAL-H的溶液25ml,滴畢繼續(xù)攪拌15分鐘，加 入飽和酒石酸鈉鉀溶液，升至室溫，繼續(xù)攪拌6小時(shí)，加入乙酸乙酯 萃取，有機(jī)層用硫酸4美千燥濃縮得到粗產(chǎn)物；將此粗產(chǎn)物溶于二氯甲 烷20ml，加入4.2g活性二氧化錳，室溫?cái)嚢?0分鐘，過濾濃縮，將 粗產(chǎn)物石i激柱層析(乙酸乙酯/石油醚-l/5(V/V)),得到1.6g具有如下 結(jié)構(gòu)的化合物純品。兩步產(chǎn)率62%。(4) 60%NaH 200mg懸浮于20ml干燥的THF，滴加1.4ml膦?；?乙酸三乙酯，滴畢攪拌10分鐘，將550mg步驟(3)中產(chǎn)物溶于15mlTHF 溶液，然后將此溶液滴加入上述NaH與膦?；宜崛阴サ姆磻?yīng)液中， 滴畢繼續(xù)攪拌30分鐘，加入水，用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用硫酸鎂千 燥濃縮，粗產(chǎn)物硅膠柱層析(乙酸乙酯/石油醚-1/5 (V/V)),得到490mg 具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物，產(chǎn)率76%。!H-應(yīng)R (CDC13， 300Hz， Sppm): d-7.46 (2H, d, J=8.7Hz)， 7.33 (1H, d， J=15.6Hz)， d=7.20 (2H， d， J=8.7Hz) 5.85-5.80 (2H, m)， 4.48 (1H， d, J=7.2Hz)， 4.21 (2H， q， J=7.2Hz)，2.83 (1H, m), 1.73 (3H， s), 1.30 (3H, J=7.2Hz), O.卯(3H， d， J=6.6Hz)(5)將!350mg步驟4的化合物溶于4ml DMF，加入272mg的咪唑， 450mg的TBSC1(叔丁基二甲基氯化硅)，室溫?cái)嚢?0小時(shí)，加入水， 用乙酸乙酯萃取，將酯層干燥濃縮，將粗產(chǎn)物硅膠柱層析(乙酸乙酯/ 石油醚=1/5 (V/V)),得到520mg具有如下結(jié)構(gòu)的化合物，產(chǎn)率90%。實(shí)施例14: ( R，2E，4E ) ->}-羥基-4，6-二甲基-7_氧代-7- ( 4- ( 1-吡咯烷基) 苯基)-2，4-二烯庚酰胺(TA-13)的制備A:將35mg實(shí)施例13制得的中間體(2E，4E，6R，7R)-7-(4-溴苯基)-7-幾基-4，6 二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯， 6mg配體化合物2， 2mg醋酸把， llmg叔丁醇鈉置于干燥的兩口瓶中，抽真空排除空氣后充氬氣，加入 16^1吡咯烷在2.5ml干燥四氬呋喃的溶液，反復(fù)進(jìn)行三次抽氣充氬氣， 加熱至IO(TC回流1.5小時(shí)，冷卻，向反應(yīng)液中加入水，加入乙酸乙酯 萃取，合并有機(jī)相。有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鎂干燥，過 濾，濾液濃縮。殘余物用硅膠柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚=1/5 (V/V))， 得到22rr^油狀產(chǎn)物(2E，4E，6RJR)-7-(4-( 1-吡咯烷基)苯基)>7-羥基-4，6 二甲基-2，4-二秌庚酸乙酯(收率65% )B:將上步所得產(chǎn)物以與實(shí)施例l相同條件的氨解，氧化反應(yīng)得到 26mg (兩步產(chǎn)率46%)具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz, 5ppm): d=7.74 (2H, d, J=9.0Hz)， 7.12 (1H, d， J=15.3Hz)， 6.42 (2H， d， J=9.0Hz), 5.88 (1H， d， J=8.1Hz)，5.68 (IH, d, J=15.3Hz)， 4.28 (1H， m), 3.26 (4H, m)， 1.93 (4H, m) 1.80 (3H, s), 1.20 (3H， d, J=6.9Hz)o 9實(shí)施例15: (R,2E，4E) ^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- (l-哌錄) 苯基)-2，4-二烯庚酰胺(TA-14)的制備操作同實(shí)施例14,使用六氫哌啶代替吡咯烷，得到具有如下結(jié)構(gòu) 的標(biāo)題化合物。iNMR (CD3OD: CDC13=5: 1, 300Hz， 5ppm): d=7.76 (2H, d， J=8.7Hz), 7.16 (IH， d， J=15.3Hz)， 6.78 (2H， d， J=8.7Hz), 5.92 (1H， d， J=6.9Hz)，5.72 (1H， d， J=15.3Hz)， 4.31 (1H， m)， 3.31 (4H， m)， 1.78 (3H， s), 1.65 (6H， m)， 1.22 (3H， d, J=6.9Hz)o 9實(shí)施例16: (&2E，4E) >6- (4- (二甲tt)苯曱?；?-N-雍基斗甲基 -2，4-二烯辛酰胺(TA-15)的制備A:中間體(R^E，犯)-6-((11)-(4-氨基苯基)(羥基)甲基)-4-甲基-2,4-二烯辛酸乙酯的制備以正丁醛代替丙醛，其余各步操作同實(shí)施例1中的A部分，得到 具有如下結(jié)構(gòu)的化合物。B:以本實(shí)施例A部分制得的中間體代替實(shí)施例2中的中間體(2E, 4E 6R， 7R)-7-(4-M苯基)-7-羥基-4，6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯，以曱 醛代替乙醛進(jìn)行還原氨化，其余操作同實(shí)施例2，得到具有如下結(jié)構(gòu)的 標(biāo)題化合物。'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz， Sppm): d=7.86 (2H, d， J=9.0Hz)， 7.23 (1H， d, J=15.6Hz), 6.68 (2H， d, J=9.0Hz)， 5.93 (1H， d， J=9.6Hz)，5.78 (1H， d， J-15.6Hz)， 4.28 (1H， m)， 3.09 (6H， s)，1.90 (3H， s)， 1.66 (2H， m)， 0.90 (3H， t ， J=7.2Hz)o 9實(shí)施例17: (2E，4E) -7- (4- (二甲氨基)苯基)->1-羥基"4，6，6-三甲基 -7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-16)的制備A:中間體(IUE,4E)"7"(4-氨基苯基)-7-羥基-4，6,6-三甲基-2,4-二烯 庚酸乙酯的制備(1)以異丁醛代替丙酪，其余操作同實(shí)施例1中A部分的步驟(l)， 得到的如下結(jié)構(gòu)的粗產(chǎn)物直接投入下步反應(yīng)。(2)上步粗產(chǎn)物930mg溶于10ml 二氯甲烷，加入1.2ml乙酸酐、 51mg N, N-二甲氨基吡啶以及L7ml三乙胺，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入 水，二氯甲烷萃取三次，有機(jī)層無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮得 到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物硅膠柱層析(乙酸乙酯/石油酸-l/6(V/V))得到羥基 被乙?；Ｗo(hù)的具有如下結(jié)構(gòu)的化合物994mg,產(chǎn)率90%。(3)將上步得到的化合物900mg溶于4ml 二氯曱烷，加入2.34g wittig試劑Ph3P=C(CH3)C02Me ，加熱回流26小時(shí)，蒸干溶劑，硅膠 柱層析(乙酸乙酯/石油醚-l/6(V/V)),得到288mg如下結(jié)構(gòu)的化合物， 產(chǎn)率25%。(4)將416mg上步得到的化合物溶于無水5ml THF中，冷至-78。C， 2分鐘內(nèi)滴加1M的DIBAL-H的溶液3.5ml，滴畢繼續(xù)攪拌15分鐘， 加入飽和酒石酸鈉鉀溶液，升至室溫，繼續(xù)攪拌6小時(shí)，加入乙酸乙 酯萃取，有機(jī)層用石危酸鎂干燥濃縮得到乙?；瑫r(shí)被脫去的具有如下 結(jié)構(gòu)的粗產(chǎn)物420mg;(5)將上步粗產(chǎn)物420mg溶于8ml 二氯曱烷，加入1.2g活性二氧 化錳，室溫?cái)嚢?0分鐘，過濾，濾液濃縮得到如下結(jié)構(gòu)的黃色油狀粗 產(chǎn)物，直接投入下步反應(yīng)。(6)以上步得到的化合物為底物，其余操作同實(shí)施例1的A部分 的步驟(4)一(5),得具有如下結(jié)構(gòu)的化合物'H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz, Sppm): d=7.31 (1H, d， J=15.9Hz)， 7.08 (2H， d， J=8.1Hz), d=6.62 (2H, d, J=8.1Hz) 5.97 (1H， s)， 5.79 (2H， d, J=15.9Hz)， 4.50 (IH， s)， 4.20 (2H, q, J=7.2Hz)， 1.83 (3H, s), 1.30 (3H， t， J=7.2Hz),1.16 (3H， d， J=5.4Hz)B:以本實(shí)施例A部分制得的中間體代替實(shí)施例2中的中間體(2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-絲苯基)-7-羥基-4，6-二甲基-2，4-二烯庚酸乙酯，以曱 酪代替乙醛進(jìn)行還原氨化，其余操作同實(shí)施例2，得到具有如下結(jié)構(gòu)的 標(biāo)題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC1產(chǎn)5: 1， 300Hz， Sppm): d=7.77 (2H， d，J=9.0Hz), 7.23 (1H， d， J=15.6Hz)， 6.48 (2H， d, J=9.0Hz)， 6.28 (1H, s)， 5.59 (IH, d, J=15.6Hz), 2.94 (6H， s), 1.37 (3H， s), 1.34 (6H， s)實(shí)施例18: (R，2E，4E) -7- (4- (二曱氨基)苯基)-^羥基-6-甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺(TA-17)的制備A:中間體(2E，4E，6R，7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-6-曱基-2，4-二烯庚酸乙酯的制備。以Ph3P=CHC02Me代替Ph3P=C(CH3)C02Me,其余各步操作同實(shí) 施例1中的A部分，得到具有如下結(jié)構(gòu)的化合物。B:以本實(shí)施例A部分制得的中間體來代替實(shí)施例2中的中間體(2E， 4E 6R, 7R)-7-(4-氨基苯基)-7-羥基-4，6-二曱基-2,4-二烯庚酸乙酯，以甲 酪代替乙醛進(jìn)行還原氨化，得到具有如下結(jié)構(gòu)的標(biāo)題化合物。!H-NMR (CD3OD: CDC13=5: 1， 300Hz, Sppm): d=7.88 (2H， d， J=8.7Hz), 7.13 (IH, d， J=15.3Hz), 6.67 (2H, d, J=8.7Hz), 6.24 (1H， d， J=5.1Hz)， 5.76 (1H， d, J=15.3Hz)， 4.24 (1H， m)， 3.08(6H， s), 1.33(3H， d， J=6.6Hz)32<formula>formula see original document page 33</formula>試驗(yàn)實(shí)施例1:抗腫瘤活性測(cè)定分別用磺酰羅丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B， SRB )和四氮 唑鹽(microculture tetrazolium， MTT)還原法對(duì)合成的化合物進(jìn)行抗肺 瘤活性的研究(Cancer Res. 1988, 48(3)， 589)。磺酰羅丹明B蛋白染色法SRB是一種蛋白結(jié)合染料，可與生物大 分子中的堿性氨基酸結(jié)合，其在515nm的光密度(OD)讀數(shù)與細(xì)胞數(shù) 成良好的線性關(guān)系，故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。人肺癌細(xì)胞A-549或小 鼠白血病細(xì)胞p-388或人白血病細(xì)胞k-562用含10%小牛血清的 RPMI- 1640培養(yǎng)，測(cè)定時(shí)將對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞配成細(xì)胞懸液，接種于 96孔培養(yǎng)板上。實(shí)驗(yàn)組每孔分別加入l(Hil不同濃度的化合物，對(duì)照組 加等體積含最高濃度溶劑(二甲亞砜)的RPMI - 1640培養(yǎng)液，在37°C, 5%二氧化碳條件下培養(yǎng)72小時(shí)后，用三氯乙酸固定，毎孔加入100mJ SRB液，洗去未結(jié)合的SRB,用自動(dòng)分光光度平板讀數(shù)計(jì)測(cè)定OD值。 以不加藥物的腫瘤細(xì)胞組為對(duì)照，計(jì)算藥物對(duì)該腫瘤細(xì)胞的生長抑制 率。抑制率=[(對(duì)照組-給藥組)/對(duì)照組]xiooy。四氮唑鹽還原法活細(xì)胞的線粒體中存在與NADP相關(guān)的脫氫酶， 可將黃色的MTT還原為不溶性的藍(lán)色物質(zhì)曱臜(formazan)，而死細(xì) 胞此酶消失，MTT不被還原，用酶標(biāo)測(cè)定儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)物的OD值， 可對(duì)活細(xì)胞計(jì)數(shù)。本法采用小鼠白血病P-388、人肺癌A-549和人白血病K562細(xì)胞系，實(shí)驗(yàn)方法同SRB法，培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí)，數(shù)據(jù) 分析同SRB法。結(jié)果評(píng)定無效10'5mol/L<85%;弱效10-5mol/L285。/。或l(T6mol/L>50%;強(qiáng)效10-611101/1^85%或l(T7mol/L>50%。 測(cè)定的部分化合物活性數(shù)據(jù)如下 表l:(結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)見實(shí)施例)濃度 P - 388(M) 評(píng)價(jià) l(T4 l(T5 10-6 l(T7 10-8樣品編號(hào)TA-1 76.3 92.1 96.3 67.3 21.5 強(qiáng)效TA-2 99.2 99.3 99.5 96.9 70.6 強(qiáng)效TA-3 99.5 100 100 84.4 47.1 強(qiáng)效TA-4 98.8 100 97.4 3.3 4.5 強(qiáng)效TA-698 92.9 93.9 96.1 96.4 強(qiáng)效TA-7 97.6 100 98.6 98.9 73.9 強(qiáng)效TA-8* 85.2 84.4 17.6 14.8 18.2 弱效TA-9 98.9 99.4 100 97.3 84 強(qiáng)效TA-10 100 98.9 100 79 75.7 強(qiáng)效34TA-11* 94.3 92.6 63.5 19.7 19.1 強(qiáng)效TA-12 100 100 100 99.5 76 強(qiáng)效TA-13 卯.4 97.7 100 97.5 85.8 強(qiáng)效TA-14 98.4 86.7 80.3 84.6 79.2 強(qiáng)效TA-15 98.4 100 97.8 98.7 80.6 強(qiáng)效TA-16 19.1 17.30 0 0 無效TA-17 100 83.7 17.6 7.8 12.9 無效TSA 97.4 98.8 98.7 98.6 21.4 強(qiáng)效 *: TA-8與TA-11采用K- 562 (人白血病細(xì)胞)測(cè)定。 表2:(結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)見實(shí)施例)濃度 A - 549(M) 評(píng)價(jià) 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8樣品編號(hào)TA-1 63.8 93.3 89.5 51.9 17.6 強(qiáng)效TA-2 98.2 98.5 98.2 89.2 17.6 強(qiáng)效TA-3 98.5 97.9 97.8 85.4 52.4 強(qiáng)效TA-4 98.8 100 97.4 3.3 4.5 強(qiáng)效TA-6 95.6 95.3 94.8 93.0 56.1 強(qiáng)效TA-7 98.4 98.3 98.4 85.5 26.6 強(qiáng)效TA-8 97.5 98.8 0.8 0.40 弱效TA-9 94.8 96.1 94.9 94.6 87.9 強(qiáng)效TA-10 96.2 95.6 96.2 87.8 42.6 強(qiáng)效TA-ll 96.3 95.5 0.4 .0.8 2.5 弱效TA-12 98.6 98.0 98.1 82.6 0 強(qiáng)效TA-13 96.5 95.3 94.8 93.0 56.1 強(qiáng)效TA-14 93.2 93.3 92.7卯.8 86.7 強(qiáng)效TA-15 98.1 98.2 97.7 93.8 36.7 強(qiáng)效TA-16 11.8 10.8 0 0 0 無效TA-17 97.6 86.4 10.2 16.5 14.6 弱效TSA 97.7 96.9 97.3 72.4 19.0 強(qiáng)效如表1和表2所示，這一類化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞林有強(qiáng)烈的細(xì)胞毒活 性，是有前途的抗腫瘤藥物。試驗(yàn)實(shí)施例2:分子及細(xì)胞水平檢測(cè)活性化合物對(duì)HDAC的抑制 作用以及對(duì)相關(guān)周期蛋白的作用1)分子水平采用KOMOL公司的HDAC熒光檢測(cè)/藥物篩選試劑盒的熒ibir測(cè) 系統(tǒng)測(cè)定化合物對(duì)HDAC酶活的抑制作用。分別將10pL檢測(cè)緩沖液，稀釋的TSA及待測(cè)抑制劑加入96孔板中。在需測(cè)定的孔中加入稀釋的 Hela核提取物，待所有試劑平衡至室溫(25°C )后，每孔加入25^iL稀 釋的底物，徹底混勻后開始進(jìn)行HDAC反應(yīng)。反應(yīng)10分鐘后加入50nL 熒光顯色劑(FluofDeLys Developer)終止反應(yīng)。室溫(25°C)孵育 10 15分鐘后用熒光分光光度計(jì)(Polar Star)讀板進(jìn)行測(cè)定，選擇激 發(fā)波長為355nm,吸收波長為460nm。2) 細(xì)胞水平將處于指數(shù)生長期的受試腫瘤細(xì)胞(5xl0S個(gè)/孔)接種于6孔板。 待貼壁后，棄孔中培液，加入1 ml/孔的新鮮培液，同時(shí)加入不同濃度 的活性化合物處理不同時(shí)間。棄上清，孔中細(xì)胞用lxSDS凝膠加樣緩 沖液(50mMTris.Cl (pH6.8)、 100mMDTT、 2%SDS、 0.1%溴酚 藍(lán)、10%甘油)裂解，收集于小離心管中，煮沸10min提取總蛋白。 冷卻后將等量樣品上樣于10%的聚丙烯酰胺凝膠，在Tris-甘氨酸電泳 緩沖液(25 mM Tris、 250 mM甘氨酸、0.1 % SDS )中以80 ~ 100 V 電泳約2 ~2.5h。用半千法將蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素濾膜。轉(zhuǎn) 移條件為轉(zhuǎn)移緩沖液(39mM甘氨酸、48mMTris堿、0.037 %SDS、 20%甲醇)；轉(zhuǎn)移電流(50mA);轉(zhuǎn)移時(shí)間(2h)。轉(zhuǎn)移結(jié)束，用麗 春紅(Ponceau S)染色確定轉(zhuǎn)移情況和蛋白條帶在硝酸纖維素濾膜上 的位置，標(biāo)記后用含5 %脫脂奶粉的封閉液[5 %脫脂奶粉，20 mM Tris-HCl (pH 7.2 ~ 7.4 )、 150 mMNaCl、 0.1 % (v/v) Tween20]于搖床 室溫封閉2h。然后，加入特異性一抗于4。C雜交過夜。用洗液[20mM Tris-HCl (pH 7.2-7.4 )、 150mMNaCl、 0.1 % (v/v) Tween20]室溫洗 3次，15min/次。加入辣根過氣化物酶標(biāo)記的二抗，室溫置于搖床上平 緩搖動(dòng)1 h。再用洗液洗三次，15min/次。最后，用電化學(xué)發(fā)光法(ECL)發(fā)色后暴光、顯影、定影、拍照。 1 )分子水平檢測(cè)采用BIOMOL公司的HDAC熒光檢測(cè)/藥物篩選試劑盒檢測(cè)活性化 合物對(duì)HDAC的抑制作用，如圖1所示。活性化合物對(duì)相關(guān)周期蛋白的影響采用蛋白質(zhì)印跡方法，檢測(cè)不同濃度的TA-15分別作用結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT-11,6 12小時(shí)及24小時(shí)后，乙?；M蛋白H3(Acetyl-H3)、乙?；M 蛋白H4 (Acetyl-H4)和p21蛋白的表達(dá)情況；以及250nMTA-15分別處 理細(xì)胞8小時(shí)、12小時(shí)和24小時(shí)，p21蛋白的表達(dá)情況(圖2)， (3-肌動(dòng)蛋 白為內(nèi)參照。已有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TA-15在作用細(xì)胞3小時(shí)后即引起細(xì)胞G2/M 期阻滯，所以我們檢測(cè)了不同濃度的TA-15處理結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和 HCT-116后對(duì)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的影響(圖3)，發(fā)現(xiàn)TA-15可下調(diào)細(xì) 胞周期蛋白D和Cdc25c蛋白的表達(dá)水平，P-肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參照。
權(quán)利要求
1.一種具有通式(I)所示結(jié)構(gòu)的曲古抑菌素A衍生物id="icf0001" file="A2007100373730002C1.gif" wi="123" he="52" top= "42" left = "59" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中，R1和R2相同或不同，為H、C1～C5直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3～C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳香烷基或R1和R2與鄰接的N原子相連成取代或未取代的含氮飽和雜環(huán)基，即-NR1R2；Ra與Rb相同或不同，為H、C1～C3直鏈或支鏈烷基；R3為H、C1～C3直鏈或支鏈烷基。
2、 #4§權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物，其特征在于，Ra和 Rb其中一個(gè)為H時(shí)，它們中的另一個(gè)為C1 C3直鏈或支鏈烷基。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物，其特征在于，所述 C1~C5直鏈或支鏈烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁 基、仲丁基、叔丁基、正戊基或新戊基；所述芳香基為苯基；所述芳香烷 基為芐基；所述R,和R2與鄰接的氮原子相連形成的雜環(huán)為吡咯烷環(huán)、哌 咬環(huán)、嗎啡啉環(huán)或哌溱環(huán)；所述取代為選自垸基、烷氧基、羥基或卣素中的一個(gè)或兩個(gè)取代基對(duì) C3 C6壞烷基、芳香基、芳香烷基或含氮飽和雜環(huán)基的取代。
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物，其特征在于所述化 合物為(R，2E，4E) -7- (4-氨基苯基)-N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺；(R，2E,4E ) -7- (4- ( 二乙絲)苯基)-^羥基-4,6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺；(R，2E，4E) -7- (4- ( 二丙氨基)笨基)-1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺；(R,2E，4E) -7- (4- ( 二丁絲)苯基)-1^-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺；(R，2E，4E) -7- (4- (N, N陽二 (4-曱氧基千基)氨基)苯基)-N-羥 基-4,6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺；(R,2E，4E) -7- (4-(曱基tt)苯基)-^羥基-4,6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺；(R,2E,4E) -7- (4-(異丙基絲)笨基)-^羥基-4，6-二曱基-7-氧代 -2,4-二烯庚酰胺；(R,2E，4E) -7- (4-(異丁基氨基)苯基)-1^-羥基-4，6-二曱基-7-氧代 -2，4-二烯庚酰胺；(R，2E，4E ) -7- ( 4-(芐基氨基)苯基)-^羥基-4,6-二曱基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺；(RJE，4E) -7- (4- (N- (4-甲氧基千基)氨基)苯基)一N-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-2，4-二烯庚酰胺;(R,2E,4E) -7- (4-(環(huán)戊基氨基)苯基)-N-羥基-4，6-二曱基-7-氣代 一2,4-二烯庚酰胺；(R,2E，4E) -7- (4-(環(huán)己基氨基)苯基)->1-羥基-4,6-二甲基-7-氧代 -2，4-二烯庚酰胺；(R，2E，4E) ->}-羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- (l-吡咯烷基)苯基) -2，4-二烯庚酰胺；(R，2E，4E) -^羥基-4，6-二甲基-7-氧代-7- (4- ( 1-哌咬基)苯基)-2,4-二烯庚酰胺；(R，2E，4E) -6- (4- (二曱氨基)苯曱酰基)—N-羥基-4-曱基-2，4-二烯辛酰胺；(2E,4E ) -7- (4- ( 二甲氨基)苯基)-N-羥基-4,6，6-三甲基-7-氧代-2，4_ 二烯庚酰胺；或(艮2E，4E) -7- (4- (二甲M)苯基)->1-羥基-6-曱基-7-氧代-2,4-二烯庚酰胺。
5、 一種權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物的制備方法，其特征 是，使用以下通式XI所示的化合物經(jīng)鹽酸幾胺氨解，而后經(jīng)2,3-二氯-5,6-二氰基對(duì)笨二醌氧化得到R,和R2均為H的通式(I )的化合物；或者通式XI所示的化合物經(jīng)還原氨化、鹽酸羥胺氨解和2，3-二氯-5,6-二氰基對(duì)笨二醌氧化三步反應(yīng)得到Ri和R2不同時(shí)為H的通式(I )的化 合物，即<formula>formula see original document page 5</formula>其中，R，、 R2相同或不同，為H、 C1 C5直鏈或支鏈烷基、取代或未取 代的C3 ~ C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳香烷基； Ra、 Rb和R3的定義如權(quán)利要求1所述，M為氫原子或常用羥基保護(hù)基。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的曲古抑菌素A衍生物的制備方法，其特征 是，所述還原氨化是式XI所示的化合物與醛或酮在三乙酰氧基硼氫化鈉的 作用下，在室溫下，以四氫呋喃或1，2-二氯乙烷為溶劑進(jìn)行反應(yīng)，得到xn 所示的化合物；所述氨解反應(yīng)是XH所示的化合物與鹽酸羥胺，在室溫下，以曱醇為溶 劑進(jìn)行反應(yīng)，得到其羥肟酸化合物；所述氧化反應(yīng)所用氧化劑為2，3-二氯-5，6-二氰基對(duì)苯二醌，在室溫下， 以二氧六環(huán)為溶劑，X!I所示化合物的羥肟酸化合物被氧化，得到通式(I ) 的化合物。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的曲古抑菌素A衍生物的制備方法，當(dāng)所述 R,和R2相同時(shí)，在還原氨化反應(yīng)中，相對(duì)于1摩爾化合物XI，使用2~10 摩爾醛或酮和2 10摩爾三乙酰氧基硼氫化鈉；當(dāng)！^和R2其中一個(gè)為氫，另一個(gè)為C1 C5直鏈或支鏈烷基、取代或未取代的C3 C6環(huán)烷基、取代或未取代的芳香基、取代或未取代的芳 香烷基時(shí)，在還原氨化反應(yīng)中，相對(duì)于l摩爾化合物XI,使用1~1.5摩爾 醛或酮和1 ~ 1.5摩爾三乙酰氧基硼氬化鈉。
8、 一種權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物的制備方法，其特征作用下通過偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物G;化合物G經(jīng)鹽酸羥胺氨解，而后經(jīng) 2，3-二氯-5，6-二氰基對(duì)苯二醌氧化得到通式(I )的化合物<formula>formula see original document page 6</formula>其中，Ra、 Rb、 R3的定義如權(quán)利要求1所述，M為氫原子或常用羥基保 護(hù)基，Ri和R2與鄰接的N原子相連成含氮飽和雜環(huán)基。
9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的曲古抑菌素A衍生物的制備方法，其特征 在于，所述中間體F與環(huán)狀烷胺或取代環(huán)烷胺在鈀催化劑催化及堿的作用 下通過偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物G，反應(yīng)在室溫下或加熱下進(jìn)行，所用溶劑為 曱苯或四氫呋喃；所述的堿為甲醇鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀、碳酸鉀、碳酸銫、1，8-二 氮雙環(huán)[5.4.0]十一烯-7或1，4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷；所述的鈀催化劑為醋酸鈀、四三苯基膦合鈀或三(二亞千基丙網(wǎng))二鈀； 并采用下面化合物1或2為配體
10、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的曲古抑菌素A衍生物的制備方法，其特征 在于，所述氨解反應(yīng)是化合物G與鹽酸羥胺，在室溫下，以甲醇為溶劑進(jìn) 行反應(yīng)，得到其羥肟酸化合物；所述氧化反應(yīng)所用氧化劑為2，3-二氯-5,6-二氰基對(duì)苯二醌，在室溫下， 以二氧六環(huán)為溶劑，化合物G的羥肟酸化合物被氧化，得到通式(I )的 化合物。
11、 一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物的用途，其特征 在于它為組蛋白去乙?；敢种苿?。
12、 權(quán)利要求1所述的曲古抑菌素A衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了其結(jié)構(gòu)通式如下的曲古抑菌素A衍生物及其制備方法；所述曲古抑菌素A衍生物具有組蛋白去乙?；敢种苹钚裕捎米骺鼓[瘤藥物。
文檔編號(hào)C07C239/16GK101239929SQ20071003737
公開日2008年8月13日 申請(qǐng)日期2007年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月9日
發(fā)明者健 丁, 張士磊, 敏 桂, 段文虎, 曦 趙 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院上海藥物研究所