專利名稱：喹唑啉衍生物和它們在治療血小板增多癥中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用于治療血小板增多癥的化合物。本發(fā)明也涉及可用于減少血小板數(shù)量的化合物。
背景技術(shù)：
血小板增多癥是與血小板產(chǎn)生增加或異常有關(guān)的慢性障礙。由于血小板參與血液凝固，它們的異常產(chǎn)生可以導(dǎo)致不適當(dāng)?shù)难耗龎K生成或者出血，其后果是患者胃腸出血、心臟病發(fā)作和中風(fēng)的危險(xiǎn)增加。
阿那格雷是喹唑啉衍生物類磷酸二酯酶抑制劑，用于治療自發(fā)性血小板增多癥和各種其他骨髓增生障礙。在美國和加拿大，阿那格雷于1997年被批準(zhǔn)并投放市場用于自發(fā)性血小板增多癥的治療。在1998年12月，US FDA批準(zhǔn)擴(kuò)充阿那格雷的標(biāo)簽——具體而言，用于治療繼發(fā)于骨髓增生障礙的血小板增多癥患者，包括真性紅細(xì)胞增多癥(PV)和慢性髓性白血病(CML)。
由本發(fā)明所涵蓋的化合物是3-羥基阿那格雷。它是阿那格雷的代謝產(chǎn)物(參見例如美國專利申請No.10/762,566，被公布為U.S.Pub.No.20040209907)。
各種阿那格雷代謝產(chǎn)物已有文獻(xiàn)研究Erusalimsky等人(2002)“阿那格雷的血小板降低活性是通過它的主要代謝物2-氨基-5，6-二氯-3，4-二氫喹唑啉(RL603)介導(dǎo)的嗎？”Exp Hematol.30625-7；Lane等人(2001)“在小鼠中阿那格雷代謝物通過抑制巨核細(xì)胞成熟誘導(dǎo)血小板減少而不誘導(dǎo)血小板聚集”Exp Hematol.291417-241；和Gaver等人(1981)“血小板聚集抑制劑阿那格雷的特性”Clin Pharmacol Ther.29381-6。
本發(fā)明的目的是提供可以用于治療血小板增多癥、與阿那格雷相關(guān)的化合物。
發(fā)明概述在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供這樣一種化合物，它是 其平衡形式、其可藥用鹽或者其平衡形式的可藥用鹽，其中R1是H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基或C6-10芳基；R2是 或 R3是OH、鹵素、SH、O-C1-6烷基或羥基模擬基團(tuán)；且X和Y獨(dú)立地是H或鹵素。
優(yōu)選的上述化合物在芐基環(huán)的5和6位包括X和Y取代基。
式(I)至(III)化合物可用于治療血小板增多癥和減少血小板。式(I)至(III)化合物可以與至少一種其他治療劑聯(lián)合使用。
本發(fā)明也提供藥物制劑，包含任意式(I)至(III)化合物和可藥用載體或賦形劑。
在另一實(shí)施方案中，提供式(I)至(III)化合物在制備用于治療血小板增多癥的藥物中的用途。
附圖的簡要說明

圖1是劑量-響應(yīng)圖，比較阿那格雷和化合物#1對TPO-誘發(fā)的巨核細(xì)胞(MK)成熟的影響，在下文實(shí)施例3中有更充分的描述。
圖2是比較阿那格雷和化合物#1對巨核細(xì)胞生成的選擇性抑制作用的圖，在下文實(shí)施例3中有更充分的描述。
發(fā)明詳述除非另有定義，本文所用的所有科學(xué)技術(shù)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同含義。本文提到的所有出版物、專利申請、專利和其他參考文獻(xiàn)都全文引用在此作為參考。在有沖突的情況下，本說明書、包括定義將優(yōu)先。另外，材料、方法和實(shí)施例僅供闡述，而非意欲限制。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物包含其中獨(dú)立或組合地存在下列實(shí)施方案的那些。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供下式化合物
其平衡形式、其可藥用鹽或者其平衡形式的可藥用鹽，其中R1是H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基或C6-10芳基；R2是 或 R3是OH、鹵素、SH、O-C1-6烷基或羥基模擬基團(tuán)；且X和Y獨(dú)立地是H或鹵素。
優(yōu)選的實(shí)施方案在芐基環(huán)的5和6位包括X和Y取代基。
在一種實(shí)施方案中，R1是H或C1-6烷基。在另一種實(shí)施方案中，R1是H或CH3。在另一種實(shí)施方案中，R1是H。
在一種實(shí)施方案中，R3是OH或O-C1-6烷基。在另一種實(shí)施方案中，R3是OH或OCH3。在另一種實(shí)施方案中，R3是OH。
在一種實(shí)施方案中，X是H或鹵素。在另一種實(shí)施方案中，X是H。在另一種實(shí)施方案中，X是Cl。在另一種實(shí)施方案中，Y是H或Cl。在另一種實(shí)施方案中，Y是H。在另一種實(shí)施方案中，Y是Cl。
在一種實(shí)施方案中，所治療的血小板增多癥與骨髓增生性血液障礙有關(guān)。
在一種實(shí)施方案中，血小板增多癥與自發(fā)性血小板增多癥(essentialthrombocythemia)(ET)、慢性髓性白血病(CML)、真性紅細(xì)胞增多癥(PV)、特發(fā)性骨髓外化生(AMM)或鐮狀細(xì)胞貧血(SCA)有關(guān)。
在另一實(shí)施方案中，血小板增多癥是由ET、CML、PV、AMM或SCA所導(dǎo)致的。
在另一實(shí)施方案中，式(I)至(III)化合物可以用于減少個(gè)體的血小板數(shù)量。
根據(jù)本發(fā)明的化合物包括 化合物#1，它是N-(5，6-二氯-3，4-二氫喹唑啉-2-基)-2-氧代乙酰胺； 化合物#2，它是N-(5，6-二氯-3，4-二氫喹唑啉-2-基)-2-氧代乙酰胺水合物； 化合物#3，它是6，7-二氯-3-羥基-1，5-二氫-咪唑并[2，1-b]喹唑啉-2-酮； 化合物#4，它是6，7-二氯-3-羥基-1，5-二氫-咪唑并[2，1-b]喹唑啉-2-酮；和
化合物#5，它是6，7-二氯-1-羥基-3，5-二氫-咪唑并[1，2-a]喹唑啉-2-酮。
按照本發(fā)明，這些化合物是基本上純凈的形式。
本申請所用的術(shù)語“基本上純凈的形式”意味著這些化合物根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分析方法所測定是至少80％純的，優(yōu)選至少85％純的，更優(yōu)選至少90％純的，仍然更優(yōu)選至少95％純的，最優(yōu)選至少99％純的。
不受任何理論所限(對機(jī)理的理解不是實(shí)施本發(fā)明所必需的，本發(fā)明也不限于任何特定的機(jī)理)，本發(fā)明人相信本發(fā)明化合物是平衡形式。本發(fā)明化合物的平衡形式如下描繪 本文所用的術(shù)語“平衡形式”包括式(I)至(III)化合物的互變體。
本發(fā)明化合物的平衡形式也可以如下代表
所有這類平衡形式都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解，式(I)至(III)化合物可以存在互變體或旋光異構(gòu)體。這類化合物的所有平衡異構(gòu)體和互變體都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。單一的旋光異構(gòu)體或?qū)τ丑w可以借助本領(lǐng)域熟知的方法獲得，例如手性HPLC、酶拆分和手性助劑，或者可以立體選擇性地合成。
本文所用的“羥基模擬基團(tuán)”描述與羥基(-OH)相關(guān)的化學(xué)官能團(tuán)。它們是能夠充當(dāng)氫鍵供體和受體的官能團(tuán)。羥基模擬基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括-NH2和-SH。
還提供本發(fā)明化合物的可藥用鹽。術(shù)語通式(I)至(III)化合物的“可藥用鹽”意指從可藥用的無機(jī)和有機(jī)酸和堿衍生的那些鹽。適宜的酸的實(shí)例包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對-甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。其他的酸例如草酸，盡管本身不是可藥用的，不過也可以作為中間體用于得到本發(fā)明化合物和它們的可藥用酸加成鹽。
從適宜的堿衍生的鹽包括堿金屬(例如鈉)、堿土金屬(例如鎂)、銨和NR4+(其中R是C1-4烷基)的鹽。
本申請所用術(shù)語“烷基”代表未取代或者(被鹵素、硝基、CONH2、COOH、O-C1-6烷基、O-C2-6鏈烯基、O-C2-6炔基、羥基、氨基或COOQ，其中Q是C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基)取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴部分(例如異丙基、乙基、氟己基或環(huán)丙基)。術(shù)語烷基也意欲包括其中一個(gè)或多個(gè)氫原子被鹵素代替的烷基，更優(yōu)選地，鹵素是氟(例如-CF3或-CH2CF3)。
本文所用的術(shù)語“鏈烯基”和“炔基”代表含有至少一個(gè)不飽和基團(tuán)的(如上所定義的)烷基(例如烯丙基)。
當(dāng)存在硫原子時(shí)，硫原子可以處于不同的氧化水平S、SO或SO2。所有這類氧化水平都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本文的鹵素表示氟、氯、溴和碘。
狀態(tài)、障礙或病癥的“治療”包括(1)預(yù)防或延緩在哺乳動(dòng)物中形成的該狀態(tài)、障礙或病癥的臨床癥狀的出現(xiàn)，所述哺乳動(dòng)物可能患有或傾向于該狀態(tài)、障礙或病癥，但是尚未經(jīng)歷或顯示該狀態(tài)、障礙或病癥的臨床或亞臨床癥狀，(2)抑制該狀態(tài)、障礙或病癥，即阻止、減少或延緩該疾病的形成或其復(fù)發(fā)(在維持治療的情況下)或者其至少一種臨床或亞臨床癥狀，或者(3)緩解該疾病，即導(dǎo)致該狀態(tài)、障礙或病癥或者至少一種其臨床或亞臨床癥狀的消退。
“治療有效量”意指化合物當(dāng)施用于個(gè)體用于治療狀態(tài)、障礙或病癥時(shí)足以實(shí)現(xiàn)這類治療的化合物的量。“治療有效量”將因化合物、疾病及其嚴(yán)重性和所要治療個(gè)體的年齡、體重、身體條件和響應(yīng)性而異。
有需要的個(gè)體是這樣一種個(gè)體，例如將受益于本發(fā)明化合物施用的人或其他哺乳動(dòng)物。
對于所治療個(gè)體的益處是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的，或者至少是患者或醫(yī)師可感受到的。
應(yīng)該理解，本發(fā)明化合物用于治療所需的量將不僅因所選擇的特定化合物而異，而且也因施用途徑、需要治療的病癥屬性和患者的年齡和狀況而異，并將最終取決于主治醫(yī)師或獸醫(yī)的判斷。不過一般而言，適宜的劑量將是約0.001至約50mg/kg體重每天，優(yōu)選約0.001至約5mg/kg體重每天，更優(yōu)選約0.001至約可取地0.5mg/kg體重每天，或者最可取約0.001至約0.1mg/kg體重每天。在其他實(shí)施方案中，該范圍可以是約0.1至約750mg/kg體重每天、0.5至60mg/kg/天和1至20mg/kg/天。
所需劑量可以方便地呈現(xiàn)單一劑量或者按適當(dāng)間隔施用的分次劑量，例如每天兩次、三次、四次或更多次。如果化合物以透皮或者以延時(shí)釋放形式施用，化合物可以每天施用一次或一次以下。
化合物在單位劑型中方便地施用，例如每單位劑型含有0.1至50mg、方便地0.1至5mg或者最方便地0.1至5mg活性成分。在另一實(shí)施方案中，化合物可以方便地在單位劑型中施用，例如每單位劑型含有10至1500mg、優(yōu)選20至1000mg或者更優(yōu)選50至700mg活性成分。
理想地，活性成分的施用應(yīng)達(dá)到如下活性化合物的峰血漿濃度約0.01至約5μM、約0.01至約1μM、約1至約75μM、約2至50μM或者約3至約30μM。這可以如下達(dá)到例如靜脈內(nèi)注射活性成分任選地在鹽水中的0.1至5％溶液，或者口服施用含有約0.1至約5mg或者約1至約500mg活性成分的大丸劑。連續(xù)輸注以提供約0.0001至約1.0mg/kg/小時(shí)或者約0.0001至約0.5mg/kg/小時(shí)，或者間歇性輸注約0.001至約0.1mg/kg活性成分，可以維持所需的血液水平。在另一實(shí)施方案中，連續(xù)輸注以提供約0.01至約5.0mg/kg/小時(shí)，或者間歇性輸注約0.4至約15mg/kg活性成分，可以維持所需的血液水平。
盡管就治療應(yīng)用而言有可能施用本發(fā)明化合物的原料藥，不過優(yōu)選在藥物制劑中呈遞活性成分。本發(fā)明因而進(jìn)一步提供藥物制劑，該制劑包含式(I)至(III)化合物或其平衡形式以及一種或多種可藥用載體并任選其他治療和/或預(yù)防成分。載體必須是“可接受的”意即與制劑其他成分可相容并且對其接受者無害。
藥物制劑包括適合于口服、直腸、鼻、局部(包括口腔和舌下)、透皮、陰道或腸胃外(包括肌內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi))施用的那些或者適合于吸入或吹入施用的形式。制劑酌情可以方便地存在于離散的劑量單位中，并且可以借助藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任何方法制備。所有方法都包括使活性化合物與液體載體或微細(xì)粉碎固體載體或此二者聯(lián)合的步驟，然后如果必要的話使產(chǎn)物成形為所需制劑。
適合于口服施用的藥物制劑可以方便地以離散單位存在，例如膠囊、扁囊或片劑(各自含有預(yù)定量的活性成分)；粉劑或顆粒劑；或者溶液、混懸液或乳液?；钚猿煞忠部梢宰鳛榇笸鑴?、藥糖或糊劑呈遞?？诜┯玫钠瑒┖湍z囊可以含有常規(guī)賦形劑，例如粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或濕潤劑。片劑可以利用本領(lǐng)域熟知的方法包衣?？诜后w制劑可以是例如水或油懸液、溶液、乳液、糖漿或酏劑的形式，或者可以作為用于于使用前用水或其他適合的溶媒復(fù)原的干產(chǎn)物存在。這類液體制劑可以含有常規(guī)添加劑，例如懸浮劑、乳化劑、非水性溶媒(可以包括食用油)或防腐劑。
本發(fā)明化合物也可以配制供腸胃外施用(例如注射，例如快速濃注或連續(xù)輸注)，并且可以以單位劑型在安瓿、預(yù)填充注射器、小容量輸注瓶中或在加有防腐劑的多劑量容器中呈遞。組合物可以采取在油性或水性溶媒中的混懸液、溶液或乳液等形式，并且可以含有配制劑，例如懸浮、穩(wěn)定和/或分散劑?；蛘撸钚猿煞挚梢允欠勰┬问?，通過無菌分離無菌固體或者冷凍干燥溶液而得，在使用前用適宜的溶媒例如無菌無熱原的水復(fù)原。
就表皮局部施用而言，本發(fā)明化合物可以被配制成軟膏、霜?jiǎng)┗蛳磩蛘咄钙べN劑。這類透皮貼劑可以含有滲透增強(qiáng)劑，例如里哪醇、香芹酚、百里酚、檸檬醛、薄荷醇或t-茴香腦。軟膏和霜?jiǎng)├缈梢杂盟曰蛴托曰|(zhì)配制，加入適宜的增稠和/或膠凝劑。洗劑可以用水性或油性基質(zhì)配制，一般也將含有一種或多種乳化劑、穩(wěn)定劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑或著色劑。
適合于口內(nèi)局部施用的制劑包括在經(jīng)過矯味的通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠的基質(zhì)中包含活性成分的錠劑(lozenge)；在惰性基質(zhì)例如明膠和甘油或者蔗糖和阿拉伯膠中包含活性成分的錠劑(pastille)；和在適宜的液體載體中包含活性成分的漱口劑。
其中載體是固體的適合于直腸施用的藥物制劑最優(yōu)選地以單位劑量栓劑呈遞。適宜的載體包括可可脂和本領(lǐng)域常用的其他材料，栓劑可以方便地如下制成混合活性化合物與軟化或熔化的載體，然后冷卻并在模具中成形。
適合于陰道施用的制劑可以以陰道栓、棉塞、霜?jiǎng)?、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧劑呈遞，除了活性成分以外酌情還含有本領(lǐng)域已知的載體。
就鼻內(nèi)施用而言，本發(fā)明化合物可以被用作液體噴霧劑或可分散粉劑或者滴劑的形式。滴劑可以用水性或非水性基質(zhì)配制，也包含一種或多種分散劑、增溶劑或懸浮劑。液體噴霧劑方便地從壓力包裝中遞送。
就吸入施用而言，本發(fā)明化合物方便地從吹入器、霧化器或壓力包裝或者其他方便于遞送氣霧噴霧劑的裝置中遞送。壓力包裝可以包含適宜的拋射劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適宜的氣體。在壓力氣霧劑的情況下，通過提供遞送計(jì)量量的閥門可以確定劑量單位。
或者，就吸入或吹入施用而言，本發(fā)明化合物可以以干粉組合物的形式提供，例如該化合物與適宜粉末基質(zhì)例如乳糖或淀粉的粉末混合物。粉末組合物可以以單位劑型呈遞，例如在膠囊或藥筒中，或者例如在明膠或泡眼包裝中，從中可以借助吸入器或吹入器施用粉末。
在需要時(shí)，可以調(diào)整上述制劑以提供活性成分的持續(xù)釋放。
在另一實(shí)施方案中，提供可用于治療血小板增多癥的組合，其包含至少一種式(I)至(III)的化合物和至少一種選自如下的其他治療劑阿那格雷、羥基脲、P32、白消安、阿司匹林、氯吡格雷、α-干擾素、噻氯匹定和雙嘧達(dá)莫。
在另一實(shí)施方案中，提供可用于治療血小板增多癥的組合，其包含至少一種式(I)至(III)的化合物和至少一種選自如下的其他治療劑阿那格雷、羥基脲、白消安和α-干擾素。
上文提到的組合可以方便地以藥物制劑形式呈遞使用；因而，包含如上所定義的組合以及可藥用載體的藥物制劑構(gòu)成本發(fā)明的另一實(shí)施方案。
這類組合的個(gè)別組分可以先后或同時(shí)、在分開或組合的藥物制劑中施用。
當(dāng)式(I)至(III)化合物或其平衡形式與第二治療劑聯(lián)合使用時(shí)，每種化合物的劑量可以相同或不同于該化合物在單獨(dú)使用時(shí)的劑量。適當(dāng)?shù)膭┝繉⑷菀诪楸绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解。
本發(fā)明化合物與第二治療劑之間的比例將容易為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解。例如，可以使用約1∶5000至約1∶500、約1∶500至約1∶100、約1∶1至約1∶50、約1∶1至約1∶30、約1∶1至約1∶20、約1∶1至約1∶15、約1∶1至約1∶10、約1∶1至約1∶5或者約1∶1至約1∶3的本發(fā)明化合物第二治療劑。如果加入另外的治療劑，將相應(yīng)地調(diào)整比例。
美國臨時(shí)申請No.60/598,432(2004年8月4日提交)及其同時(shí)提交的非臨時(shí)申請都涉及治療外周動(dòng)脈疾病和抑制磷酸二酯酶III的化合物，本文引用它們的全文作為參考。
提供下列實(shí)施例闡述本發(fā)明的各種實(shí)施方案，這不應(yīng)視為對其范圍的限制。
實(shí)施例1本發(fā)明化合物#1的制備合成化合物#1即N-(5，6-二氯-3，4-二氫喹唑啉-2-基)-2-氧代乙酰胺(1)，m/z為271?；衔?1也可以以其水合物(2)存在。
化合物#1的制備 獲得所需醛(1)的該方法涉及利用二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)型偶聯(lián)法的2-氨基-5，6-二氯-3，4-二氫喹唑啉(A)與乙醛酸水合物(B)的反應(yīng)。
(A)與乙醛酸(B)的偶聯(lián)使用二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、二甲基氨基吡啶(DMAP)、在二氯甲烷(DCM)中進(jìn)行。借助本領(lǐng)域已知的方法可以得到產(chǎn)物(A)(參見例如2001年2月27日發(fā)布的美國專利6,194,420)。加入少量二甲基甲酰胺(DMF)以有助于產(chǎn)物(A)的溶解。當(dāng)在二氯甲烷溶劑中混合這些試劑時(shí)，有沉淀生成。過濾該沉淀，蒸發(fā)溶劑。用LC-MS分析這種粗反應(yīng)混合物，顯示90％的原料和7％的質(zhì)量為271的物質(zhì)。
該反應(yīng)以150mg規(guī)模進(jìn)行。收集并分析在該反應(yīng)中生成的沉淀(170mg)，連同濾液的含量。根據(jù)LC-MS分析，沉淀由兩種主要組分組成，產(chǎn)物(A)(根據(jù)峰面積為25％)和質(zhì)量271的物質(zhì)(根據(jù)峰面積為66％)；不過，相同物質(zhì)的NMR分析表明主要組分實(shí)際上是二環(huán)己基脲(DCU)，即偶聯(lián)劑DCC的反應(yīng)形式。嘗試用HPLC純化這種物質(zhì)，導(dǎo)致DCU被除去(根據(jù)NMR分析確定)，但是得到(A)(根據(jù)峰面積為18％)與質(zhì)量為271的物質(zhì)(根據(jù)峰面積為73％)的混合物。不過，在NMR光譜中觀察到僅有一種含有產(chǎn)物的芳族峰。
利用反相色譜法成功地實(shí)現(xiàn)化合物#1的純化。從水到甲醇的梯度洗脫得到三種不同的級分首先為(A)，其次為質(zhì)量為271的物質(zhì)，最后為DCM(通過NMR和HPLC分析確定)。
如上所示，化合物#1是化合物#3與化合物#4的平衡形式。因此如上所述，在這些實(shí)施例的條件下，相信這些化合物是相互轉(zhuǎn)化的，并且也存在化合物#3和化合物#4(均已知為3-羥基阿那格雷)。
實(shí)施例2化合物#1的替代合成步驟1方案1原料(RL603)
使用2.2當(dāng)量氫化鈉和1.1當(dāng)量2，3-亞異丙基甘油酸乙酯能夠可靠地酰化RL603，得到產(chǎn)物B(方案1)，收率適中至良好。在惰性氣氛下，與氫化鈉在50℃THF中加熱30min，生成RL603的陰離子。然后將混合物冷卻至室溫，加入酯，將反應(yīng)攪拌3天。產(chǎn)物的快速純化和使用是優(yōu)選的，目的是避免熒光性氧化雜質(zhì)的生成。用常規(guī)水性萃取和二氧化硅色譜(用40-50％乙酸乙酯/60-50％汽油洗脫)實(shí)現(xiàn)純化。
方案22，3-亞異丙基甘油酸乙酯的合成 制備2，3-亞異丙基甘油酸乙酯。將1，2:5，6-二-亞異丙基-甘露醇用高碘酸鈉或高碘酸四丁基銨處理，然后用高錳酸鉀處理，得到亞異丙基-甘油酸鉀粗品，其可從乙醇中重結(jié)晶純化。優(yōu)選用碘代乙烷或硫酸二乙酯(后者的使用使回收產(chǎn)物更困難)在DMF中處理，生成乙酯(方案2)。然后如果必要蒸餾該酯。
步驟2方案3化合物B到化合物C的水解
將縮醛-?；腞L603衍生物B用0.1M HCl在50∶50水∶THF混合物中的溶液處理過夜，得到大致等量的RL603與所需二醇(C)的混合物(方案3)。使用5∶3水∶三氟乙酸達(dá)一小時(shí)，非常簡潔和選擇性地得到所需二醇(C)，除了除去溶劑以外無需純化。
步驟3化合物(C)到化合物#1的轉(zhuǎn)化和HPLC在含水甲醇或丙酮中使用高碘酸鈉獲得二醇(C)向化合物#1的轉(zhuǎn)化。二醇的溶解性差。注意到水解回到RL603和似乎為化合物#1異構(gòu)體的生成(似乎這種異構(gòu)化合物#1是從中間體醛環(huán)閉合的替代方式衍生的，該中間體從二醇(C)的高碘酸裂解形成)。
化合物#1的異構(gòu)化和異構(gòu)化合物#1(化合物#5的互變體)如下所示 異構(gòu)化合物#1實(shí)施例3在來自臍帶血(cord blood)CD34+細(xì)胞的分化巨核細(xì)胞培養(yǎng)物中評價(jià)化合物#1材料和方法化學(xué)品?；衔?1保持在室溫。在DMSO或PBS pH 5.0中制備儲(chǔ)備溶液(10mM)，如文中所示。在向細(xì)胞懸液加入之前，在培養(yǎng)基中迅速稀釋儲(chǔ)備溶液。
細(xì)胞培養(yǎng)和巨核細(xì)胞分化分析細(xì)胞培養(yǎng)和藥物方案。臍帶血CD34+細(xì)胞購自Biowhittacker USA或者利用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法借助免疫磁性選擇法新鮮分離。將細(xì)胞接種在24-孔組織培養(yǎng)平板中，密度為0.15×106細(xì)胞/ml，在含有40ng/ml TPO的Iscove′s改性Dulbecco′s培養(yǎng)基中與阿那格雷、化合物#1或溶媒(DMSO)培養(yǎng)12-14天(如Mathur A，Hong Y，Martin JF，Erusalimsky JD(2001)“巨核細(xì)胞分化伴隨細(xì)胞遷移潛力降低”Br J Haematol 112459所述)。
細(xì)胞計(jì)數(shù)。利用Sysmex CDA-500粒子分析儀測定細(xì)胞密度。
巨核細(xì)胞分化的分析。使用抗-GPIIIa抗體、通過流式細(xì)胞測量法對CD61表達(dá)(巨核細(xì)胞分化的標(biāo)志)進(jìn)行定量。利用Sysmex CDA-500粒子分析儀確定細(xì)胞直徑。
結(jié)果化合物#1對于TPO-誘導(dǎo)的CD34造血祖代巨核細(xì)胞成熟的影響的評價(jià)通過記錄培養(yǎng)物中GPIIIa陽性細(xì)胞的百分比，評估阿那格雷和化合物#1對于與血小板生成素(TPO)生長在含血漿培養(yǎng)基中的CD34+細(xì)胞巨核細(xì)胞成熟的影響。阿那格雷和化合物#1在低達(dá)30nM的濃度下導(dǎo)致這種過程的顯著抑制(阿那格雷和化合物#1相對于對照的抑制分別為28％和20％，P＝0.004和0.005)。
阿那格雷與化合物#1之間關(guān)于它們對抗巨核細(xì)胞成熟的活性非常接近(圖1)，表明在考慮劑量影響時(shí)這兩種化合物之間沒有顯著差異(根據(jù)ANOVA，化合物#1相對阿那格雷的P＝0.38)。事實(shí)上，這兩種化合物是等效的，IC50約110-130nM，最大作用出現(xiàn)在1μM。圖1中的結(jié)果相對于平行進(jìn)行的未處理樣品表示。如文中所示，數(shù)值代表2-4次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(SE)。用來自不同供體的細(xì)胞進(jìn)行每次實(shí)驗(yàn)。
化合物#1對體外巨核細(xì)胞生成的總體影響表1顯示阿那格雷和化合物#1在大量巨核細(xì)胞分化參數(shù)上具有相當(dāng)和相似的抑制作用，包括最終細(xì)胞密度、GPIIIa陽性細(xì)胞的比例、這種抗原的相對表達(dá)水平和細(xì)胞大小(后者是細(xì)胞質(zhì)成熟和DNA含量的函數(shù))。
為了評估阿那格雷和化合物#1在這些培養(yǎng)物中的抑制活性是否是巨核細(xì)胞譜系選擇性的，評價(jià)了這些化合物對非巨核細(xì)胞性細(xì)胞生長的影響。在12日對照培養(yǎng)物中，這些細(xì)胞(CD61-)代表全部數(shù)量的20-30％。如圖2所描繪，與表現(xiàn)巨核細(xì)胞特征的細(xì)胞的最終數(shù)量減少形成強(qiáng)烈對比的是，阿那格雷和化合物#1都不抑制非巨核細(xì)胞性細(xì)胞的生長。
表1阿那格雷和化合物#1對巨核細(xì)胞生長和分化參數(shù)的影響
在有或沒有如材料和方法下所述所示化合物(1.0μM)存在下，在補(bǔ)充有TPO的含血漿培養(yǎng)基中培養(yǎng)CD34+細(xì)胞達(dá)12天。圖2中的結(jié)果相對于未處理樣品表示。數(shù)值代表用來自不同供體的細(xì)胞進(jìn)行的所示數(shù)量獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均值±SE。*P＜0.05；**P＜0.01，相對于對照。
實(shí)施例46，7-二氯-3-羥基-1，5-二氫-咪唑并[2，1-b]喹唑啉-2-酮(化合物#3)的合成
試劑和條件步驟(i)KMnO4，KOH，水，室溫(rt)，4h，過濾和蒸發(fā)，然后DMF，乙基碘，rt，過夜，水性后處理，56％總收率。
步驟(ii)2-氨基-5，6-二氯-3，4-二氫喹唑啉， NaH，THF，50℃，30min，然后rt，48h，水性后處理和柱色譜，50％收率。
步驟(iii)CF3CO2H，水，rt，1h，蒸發(fā)，冷凍干燥和與乙醚一起研磨，100％收率。
步驟(iv)NaIO4，pH 5.1緩沖液，丙酮，10℃，20min，蒸發(fā)，冷凍干燥和柱色譜，31％收率。
純化產(chǎn)物的色譜分離(從異構(gòu)體化合物#5(6，7-二氯-1-羥基-3，5-二氫-咪唑并[1，2-a]喹唑啉-2-酮)拆分)在壓縮空氣壓力下于正相二氧化硅玻璃柱上進(jìn)行，用0-10％甲醇/100-90％乙酸乙酯的梯度洗脫。用TLC(薄層色譜)分析級分，用含有幾滴濃氨的THF(四氫呋喃)洗脫。
分析數(shù)據(jù)NMR1H NMR(300MHz，DMSO-D6)7.47(1H，d，J＝8.7Hz)、6.96(1H，d，J＝8.7Hz)、6.91(1H，d，J＝8.7Hz)、5.01(1H，d，J＝6.7Hz)、4.58+4.47(2H，AB系統(tǒng)，J＝14.6Hz)。
13C NMR(75MHz，DMSO-D6)130.00、129.49、125.32、120.41、113.05、81.29、41.89(微弱的樣品，有些信號未解析)。
紅外光譜IR(純)1643、1563、1471cm-1。
質(zhì)譜(EI)271(M+，100％)、214(86％)、199(34％)。％)，199(35％)。
分子量確定高分辨MS理論值270.991532。實(shí)測值270.992371熔點(diǎn)M.p170℃(分解)
權(quán)利要求
1.基本上純凈形式的下式化合物 其平衡形式、化合物可藥用鹽或者其平衡形式的可藥用鹽，其中R1是H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C1-6烷氧基或C6-10芳基；R2是 R3是OH、鹵素、SH、O-C1-6烷基或羥基模擬基團(tuán)；且X和Y獨(dú)立地是H或鹵素。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中該化合物具有下式
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R2為
4.權(quán)利要求2的化合物，其中R1為H或C1-6烷基。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中R1為H。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中X是H或鹵素。
7.權(quán)利要求2的化合物，其中Y是H或Cl。
8.權(quán)利要求2的化合物，其中X是Cl。
9.權(quán)利要求2的化合物，其中Y是Cl。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中該化合物為
11.治療血小板增多癥的方法，該方法包括對有需要的個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。
12.權(quán)利要求11的方法，其中該血小板增多癥與自發(fā)性血小板增多癥(ET)、慢性髓性白血病(CML)、真性紅細(xì)胞增多癥(PV)、特發(fā)性骨髓外化生(AMM)或鐮狀細(xì)胞貧血(SCA)有關(guān)。
13.治療血小板增多癥的方法，該方法包括對有需要的個(gè)體施用治療有效量的如權(quán)利要求10所定義的化合物。
14.權(quán)利要求13的方法，其中該血小板增多癥與自發(fā)性血小板增多癥(ET)、慢性髓性白血病(CML)、真性紅細(xì)胞增多癥(PV)、特發(fā)性骨髓外化生(AMM)或鐮狀細(xì)胞貧血(SCA)有關(guān)。
15.組合物，其包含至少一種如權(quán)利要求1所定義的化合物和至少一種選自如下的治療劑阿那格雷、羥基脲、P32、白消安、阿司匹林、氯吡格雷、α-干擾素、噻氯匹定和雙嘧達(dá)莫。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療個(gè)體血小板增多癥的方法，該方法包括施用治療有效量的式(I)至(III)化合物或其平衡形式。
文檔編號C07D239/00GK101027060SQ200580032109
公開日2007年8月29日 申請日期2005年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月4日
發(fā)明者R·富蘭克林 申請人:夏爾控股公司