專利名稱：穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物及其藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有抗菌、消炎、解熱作用的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物及含有它們的藥物組合物。
背景技術：
穿心蓮(Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees)為爵床科穿心蓮屬植物，別名一見喜、斬蛇草、苦草、橄欖蓮，原產(chǎn)于印度，我國廣東福建等地區(qū)也廣泛栽培?；瘜W和藥理實驗表明穿心蓮的活性成分為以穿心蓮內(nèi)酯為代表的二萜類化合物及葡萄糖苷衍生物，穿心蓮內(nèi)酯結構為 分子式C20HmO5，為無色方型或長方型結晶，m.p.230-232℃，[α]D20-126°(c0.2，H2O)。味極苦，可溶于甲醇、乙醇、丙醇、吡啶中，微溶于氯仿、乙醚，難溶于水及石油醚。因穿心蓮內(nèi)酯不溶于水，給制備注射液帶來了困難。目前，已有多種方法被用來轉化穿心蓮內(nèi)酯成各種衍生物，以改善穿心蓮內(nèi)酯的水溶性。本申請發(fā)明人曾申請過“水溶性穿心蓮內(nèi)酯磺化工藝”(專利號ZL01131382.x.)，其中對穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物的結構認定是錯誤的，實際上穿心蓮內(nèi)酯磺化后生成的總磺化物是一混合物，因而難以制定質量標準，并影響到產(chǎn)品的質量控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是如何從“水溶性穿心蓮內(nèi)酯磺化工藝”(專利號ZL01131382.x.)中得到的混合物(即總磺化物)中，分離出穿心蓮內(nèi)酯磺化后生成的各種衍生物，即穿心蓮內(nèi)酯的各種磺化衍生物，鑒定其化學結構，研究并篩選出具有優(yōu)良抗菌、消炎、解熱作用的結構明確的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物，包括由結構明確的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物組成的混合物，以及含有它們與藥學上可用載體的藥物組合物。
為解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術方案下述通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物 通式(I)通式(I)中R1、R2各自獨立地選自-H、-SO3H；R3為羥基時，R4為-ONa，或者R3＝R4＝-O-；
通式(II)通式(II)中R1、R2各自獨立地選自-H、-SO3H；R3為R體的H或S體的H；R4為S體的甲基。
所述通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物的混合物是指通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物可以任意組配，即選自通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物中的二種或二種以上，可達到11種。
前述通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物，其中
通式(I)R1 R2 R3 R4化合物1HSO3H OH ONa化合物2SO3HH OH ONaR3＝R4化合物3SO3HSO3H O化合物4HSO3H O化合物5SO3HH O 通式(II)R1 R2R3 R4化合物6 HH 化合物7 HSO3H化合物8 SO3HH化合物9 HH化合物10 HSO3H化合物11 SO3H H 上述通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物，其中混合物是指選自通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物中的二種或二種以上混合物。其中較好的混合物是指選自化合物1、化合物4、化合物5、化合物8中的二種或二種以上混合物。
本發(fā)明通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與藥學上可接受載體組成。
本發(fā)明通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與注射用水組成。
本發(fā)明通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與甘露醇凍干粉針輔料組成。
本發(fā)明通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與口服制劑輔料組成。
本發(fā)明提供新的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物，同時提供含有它們的藥物組合物在制備抗菌，消炎，解熱，抗病毒藥物中的應用。
本發(fā)明以穿心蓮內(nèi)酯為原料，采取磺化工藝，制備了一系列新的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物，這些磺化物衍生物結構明確，具有良好的抗菌，消炎，解熱，抗病毒活性，制成各類制劑后化學成份明確、質量可控、制劑穩(wěn)定，對肺炎，支氣管炎等上呼吸道感染有很好的治療作用。與穿心蓮內(nèi)酯以及穿心蓮內(nèi)酯總磺化物相比，這些穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物單體水溶性好、純度高，且質量可控。
本發(fā)明包括從穿心蓮內(nèi)酯總磺化物中分離得到上述十一種穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物，均為首次獲得的新成分，具有良好的水溶性、穩(wěn)定性，可制成各種制劑，尤其適用于制備靜脈注射劑。十一種穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物均具有良好的抗菌、消炎、解熱作用。
穿心蓮內(nèi)酯總磺化物的制備方法參見發(fā)明專利ZL01131382.x.穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物的分離、純化方法取穿心蓮內(nèi)酯總磺化物50g，加水50mL使完全溶解，過濾，樣品液上預先處理好的D101型大孔樹脂柱，依次用水、10％、20％、30％、40％、50％、80％、90％的乙醇進行梯度洗脫，初步分成六個段[F1(10％)，F(xiàn)2(20％)，F(xiàn)3(30％)，F(xiàn)4(40％-50％)，F(xiàn)5(80％)，F(xiàn)6(90％)]后上硅膠H、ODS(反相柱)及Sephadex LH-20(凝膠)柱等進行分離純化，最終得到十一個化合物。F1段通過ODS柱，20％～25％的甲醇進行洗脫，得化合物1(穿心蓮內(nèi)酯19-硫酸酯，16-羧酸鈉鹽)和化合物2(穿心蓮內(nèi)酯3-硫酸酯，16-羧酸鈉鹽)；F2段通過ODS柱，用30％～40％的甲醇進行洗脫后得化合物3(3，19-二硫酸酯穿心蓮內(nèi)酯)和化合物5(3-硫酸酯穿心蓮內(nèi)酯)；F3段用氯仿-甲醇(6∶1)反復三次上硅膠H柱進行分離，經(jīng)Sephadex LH-20進行純化，得化合物4(19-硫酸酯穿心蓮內(nèi)酯)；F5和F6段用氯仿-甲醇(9∶1)反復三次進行硅膠柱層析，得化合物6(8(12)-環(huán)氧穿心蓮內(nèi)酯(8S，12S))和化合物9(8(12)-環(huán)氧穿心蓮內(nèi)酯(8S，12R))的混合物，再經(jīng)過HPLC進行制備的化合物6和化合物9的純品；F4段濃縮后反復用硅膠H柱分離三次，用氯仿-甲醇(6∶1～4∶1)進行洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20進行純化，并結合HPLC制備型柱進行制備，最終得化合物7(8(12)-環(huán)氧，19-硫酸酯，穿心蓮內(nèi)酯(8S，12S))，化合物8(8(12)-環(huán)氧，3-硫酸酯，穿心蓮內(nèi)酯(8S，12S))，化合物10(8(12)-環(huán)氧，19-硫酸酯，穿心蓮內(nèi)酯(8S，12R))和化合物11(8(12)-環(huán)氧，3-硫酸酯，穿心蓮內(nèi)酯(8S，12R))。
具體實施例方式
實施例1用穿心蓮內(nèi)酯磺化工藝制備穿心蓮內(nèi)酯總磺化物(參見ZL0131382.x.)。
穿心蓮內(nèi)酯的提取取穿心蓮1000g，加入90％以上濃度的乙醇5000ml，冷浸，第一次72小時，第二次24小時，將冷浸液抽至回流罐中，按穿心蓮葉投料量計算，加入15-18％活性炭，回流2小時；回流脫色后的液體過濾，濾液濃縮至尚有10％左右乙醇時放出，靜止24小時結晶，將粗結晶用乙醇連續(xù)浸泡兩次，每次時間不低于6小時，過濾，將結晶加入8倍量乙醇，加熱溶解后，靜止24小時過濾得白色結晶，將結晶真空干燥得穿心蓮內(nèi)酯。
穿心蓮內(nèi)酯的磺化取無水乙醇1000ml，置反應瓶中，緩緩滴加硫酸600ml，攪勻后，加入1000g穿心蓮內(nèi)酯，攪拌均勻，室溫放置72小時。置水浴中加入乙醇1000ml，攪勻，調(diào)pH至7.0，加入乙醇，至含醇量達80％，靜止24小時，加入少量活性炭，過濾，濾液回收乙醇，濃縮成稠膏，真空干燥即得穿心蓮內(nèi)酯的總磺化物。
實施例2化合物1、化合物2的分離、純化(高效硅膠板及硅膠H是青島海洋化工廠生產(chǎn)；C18(ODS柱)為默克公司產(chǎn)品；所有試劑均為分析純。下同。)取穿心蓮內(nèi)酯總磺化物50g加水50ml溶解，過濾后上預先處理好的D101大孔樹脂柱，依次用水、10％、20％、30％、40％、50％、80％、90％的乙醇進行梯度洗脫。
取D101大孔樹脂柱的10％乙醇洗脫液，濃縮后上ODS柱，先用20％甲醇洗脫，再用25％甲醇洗脫。
20％甲醇洗脫液濃縮后用甲醇重結晶，過濾，結晶真空干燥(60℃)得化合物1。25％甲醇洗脫液濃縮后甲醇重結晶，過濾，結晶真空干燥(60℃)得化合物2。
化合物1的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，14，19-三羥基-8(9)，12(13)-賴百當二烯-16-羧酸鈉，19-硫酸酯。
無色針晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。
分子式C20H31O8SNa，分子量493.11；mp230-232℃；[α]D24-62.0(c 0.1，MeOH).
ESI-MS493[M+Na]+1H-NMR(CD3OD)δ6.45(1H，dd.J＝4.8Hz，7.8Hz，H-12)，4.58(1H，dd，J＝4.8Hz.7.5Hz，H-14)，3.67(1H，dd，J＝11.1，7.7Hz，H-15)，3.50(1H，dd，J＝11.1，4.9Hz，H-15)，4.18(2H，q，J＝10.2Hz，H-19)，3.25(1H，dd，J＝11.1，5.1Hz，H-3)，3.0(1H，dd，J＝17.3，7.9Hz，H-11)，2.73(1H，dd，J＝17.3，4.9Hz，H-11)，1.54(3H，s，H-17)，1.19(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-20)13C-NMR(CD3OD)δ19.7(C-17)，20.5(C-20)，21.2(C-6)，23.4(C-18)，27.4(C-11)，28.6(C-2)，35.7(C-7)，36.7(C-1)，40.0(C-10)，43.5(C-4)，53.7(C-5)，67.3(C-15)，70.9(C-19)，72.0(C-14)，80.0(C-3)，129.2(C-8)，134.8(C-13)，139.6(C-9)，141.5(C-12)，175.9(C-16).
化合物2的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，14，19-三羥基-8(9)，12(13)-賴百當二烯-16-羧酸鈉，3-硫酸酯無色針晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。
分子式C20H31O8SNa，分子量493.11；mp242-244℃；[α]D24-53.0(c 0.1，MeOH).
ESI-MS493[M+Na]+1H-NMR(CD3OD)δ6.46(1H，dd，J＝4.8Hz，7.8Hz，H-12)，4.60(1H，dd，J＝2.8Hz，9.0Hz，H-14)，4.16(2H，q，J＝6Hz，H-19)，3.67(1H，dd，J＝11.1，7.7Hz，H-15)，3.50(1H，dd，J＝11.1，4.9Hz，H-15)，3.26(1H，dd，J＝11.1，4.6Hz，H-3)，3.0(1H，dd，J＝10.4，4.8Hz，H-11)，2.73(1H，dd，J＝10.4，2.8Hz，H-11)，1.54(3H，s，H-17)，1.20(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-20)；13C-NMR(CD3OD)δ19.7(C-17)，20.6(C-20)，21.2(C-6)，23.3(C-18)，27.4(C-11)，28.6(C-2)，35.7(C-7)，36.7(C-1)，39.9(C-10)，43.4(C-4)，54.0(C-5)，67.1(C-15)，70.8(C-19)，72.0(C-14)，88.1(C-3)，129.3(C-8)，134.6(C-13)，139.5(C-9)，141.5(C-12)，175.9(C-16).
實施例3化合物3、化合物5的分離、純化取實施例2中D101大孔樹脂柱20％的乙醇洗脫液，濃縮后上ODS柱，先用30％甲醇洗脫，再用35-40％甲醇洗脫。30％甲醇洗脫液濃縮后用甲醇重結晶，過濾，結晶真空干燥(60℃)得化合物3。
35-40％甲醇洗脫液濃縮后甲醇重結晶，過濾，結晶真空干燥(60℃)得化合物5。
化合物3的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，14，19-三羥基-8(9)，12(13)-賴百當二烯-15，16-內(nèi)酯-19-硫酸酯。
無色針晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。
分子式C20H30O11S2，分子量510；mp251-253℃；[α]D24-27.0(c 0.1，MeOH).
IRmaxKBrcm-13437(OH)，1759，1669(C＝C-C＝O)，1630，1637(C＝C)，1293，1254，1204，1068，995，972，436，418；ESI-MS511[M+H]+，350[M-SO3H]+，430[M-SO3H-SO3H]+；1H-NMR(CD3OD)δ6.74(1H，m，H-12)，5.07(1H，dd，J＝1.4Hz，4.5Hz，H-14)，4.49(1H，dd，J＝10.2，6.2Hz，H-15)，4.15(1H，dd，J＝10.2，2.3Hz，H-15)，4.36(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.05(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.0(1H，dd，J＝12.2，4.4Hz，H-3)，3.27(1H，dd，J＝17.7Hz，4.9Hz，H-11)，3.12(1H，dd，J＝17.7，5.0Hz，H-11)，1.62(3H，s，H-17)，1.27(3H，s，H-18)，1.17(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ19.8(C-17)，20.2(C-20)，21.8(C-6)，23.6(C-18)，25.8(C-2)，29.2(C-11)，35.8(C-7)，36.6(C-1)，40.0(C-10)，43.0(C-4)，54.0(C-5)，66.8(C-14)，71.0(C-19)，76.0(C-15)，86.8(C-3)，129.1(C-13)，130.5(C-8)，138.0(C-9)，149.5(C-12)，172.7(C-16)化合物5的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，14，19-三羥基-8(9)，12(13)-賴百當二烯-15，16-內(nèi)酯-3-硫酸酯。
無色針晶(甲醇)，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。
分子式C20H30O8S，分子量430；mp159-161℃；[α]D24-36.0(c 0.1，MeOH).
IRmaxKBrcm-13414(OH)，1749，1670(C＝C-C＝O)，1470，1427(C＝C)，1254，1230，1218，1197，1060，1033，966，981，，922，832，582；ESI-MS429[M-H]+，349[M-SO3H]+，412[M-H2O]+；1H-NMR(CD3OD)δ6.72(1H，m，H-12)，5.06(1H，dd，J＝1.4Hz，4.5Hz，H-14)，4.49(1H，dd，J＝10.2，62Hz，H-15)，4.15(1H，dd，J＝10.2，2.3Hz，H-15)，4.36(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.05(1H，d，J＝10.1Hz，H-19)，4.04(1H，dd，J＝1.8，4.4Hz，H-3)，3.26(1H，dd，J＝17.6Hz，5.2Hz，H-11)，3.10(1H，dd，J＝17.6，5.0Hz，H-11)，1.61(3H，s，H-17)，1.22(3H，s，H-18)，1.03(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ19.8(C-17)，20.6(C-20)，20.7(C-6)，23.1(C-18)，25.7(C-2)，29.0(C-11)，35.4(C-7)，36.3(C-1)，39.8(C-10)，44.3(C-4)，53.9(C-5)，64.1(C-14)，66.9(C-19)，76.0(C-15)，87.9(C-3)，129.2(C-13)，130.4(C-8)，137.9(C-9)，149.3(C-12)，172.6(C-16).
實施例4化合物4的分離、純化取實施例2中D101大孔樹脂柱30％的乙醇洗脫液，濃縮后反復三次上硅膠H柱進行分離，洗脫溶劑均為氯仿-甲醇(6∶1)，再經(jīng)Sephadex LH-20進行純化，甲醇重結晶得化合物4。
化合物4的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，14，19-三羥基-8(9)，12(13)-賴百當二烯-15，16-內(nèi)酯-19-硫酸酯。
類白色或淡黃色粉末，易溶于甲醇、水，微溶于丙酮，不溶于氯仿、乙醚和石油醚。
分子式C20H30O8S，分子量430；mp166-168℃；[α]D24-48.0(c 0.1，MeOH).
UVλmaxMeOHnm227；IRmaxKBrcm-13431(OH)，1734，1636(C＝C-C＝O)，1541，1457(C＝C)，1214，1070，983；436，418；ESI-MS429[M-H]+，349[M-SO3H]+，412[M-H2O]+；1H-NMR(CD3OD)δ6.74(1H，m，H-12)，5.06(1H，d，J＝4.8Hz，H-14)，4.48(1H，dd，J＝10.2，6.2Hz，H-15)，4.15(1H，dd，J＝10.2，2.3Hz，H-15)，3.20(1H，dd，J＝17.6，5.0Hz，H-11)，3.08(1H，dd，J＝17.6，5.2Hz，H-11)，1.60(3H，s，H-17)，1.14(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ19.9(C-17)，20.5(C-20)，21.2(C-6)，23.4(C-18)，28.6(C-2)，29.1(C-11)，35.7(C-7)，36.8(C-1)，40.0(C-10)，43.5(C-4)，53.6(C-5)，66.9(C-14)，71.0(C-19)，76.1(C-1 5)，79.8(C-3)，129.2(C-13)，130.5(C-8)，138.1(C-9)，149.6(C-12)，172.7(C-16).
實施例5化合物6、化合物9的分離、純化取實施例2中D101大孔樹脂柱80％～90％的乙醇洗脫液，濃縮后用氯仿-甲醇(9∶1)作洗脫溶劑，反復三次進行硅膠柱層析，洗脫液再經(jīng)HPLC進行制備，色譜條件為色譜柱phe-nomenex C18-ODS(250mm×10.0mm 5μm)；流動相為甲醇∶水(30∶70)，流速2ml/min時，制備得化合物6；流動相為甲醇∶水(45∶55)，流速2ml/min時，制備得化合物9。
化合物6的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，19-二羥基-8(12)環(huán)氧-13(14)-賴百當烯-15，16-內(nèi)酯。
無色針晶，易溶于甲醇、丙酮，微溶于氯仿，不溶于乙醚和石油醚。
分子式C20H30O5，分子量350.1；mp210-212℃；[α]D24-16.4(c 0.1，MeOH).
IRmaxKBrcm-13489，3425cm-1(OH)，1758，1650cm-1，(C＝C-C＝O)，1450，1380(C＝C)，1223，1196，1083，1031，1019，988，963，846；ESI-MS349[M-H]+，301[M-CH2OH-H2O]+，257[M-H2O-CH2OH-CO2]+；1H-NMR(CD3OD)δ7.43(1H，t，J＝1.5Hz，H-14)，4.85(2H，m，H-15)，4.80(1H，t，J＝6.7Hz，H-12)，4.03(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.46(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.21(1H，dd，J＝4.7，11.9Hz，H-3)，2.18(1H，dd，J＝11.3，12.2Hz，H-11)，1.64(1H，t，J＝10.2Hz，H-11)，1.20(3H，s，H-18)，1.19(3H，s，H-17)，0.90(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ39.1(C-1)，28.3(C-2)，81.2(C-3)，43.7(C-4)，57.7(C-5)，22.0(C-6)，41.1(C-7)，83.3(C-8)，59.4(C-9)，37.0(C-10)，29.7(C-1 1)，72.0(C-12)，137.1(C-13)，148.4(C-14)，72.4(C-15)，174.8(C-16)，21.8(C-17)，23.5(C-18)，65.0(C-19)，15.9(C-20).
化合物9的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，19-二羥基-8(12)環(huán)氧-13(14)-賴百當烯-15，16-內(nèi)酯為白色粉末，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚。
分子式C20H30O8S，分子量430；1H-NMR(CD3OD)δ7.46(1H，m，H-14)，4.86(2H，m，H-15)，4.60(1H，m，H-12)，3.80(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，3.60(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，4.03(1H，m，H-3)，1.22(3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ40.3(C-1)，25.1(C-2)，87.9(C-3)，44.3(C-4)，54.3(C-5)，37.2(C-6)，19.8(C-7)，84.3(C-8)，58.0(C-9)，36.8(C-10)，33.8(C-11)，72.3(C-12)，138.4(C-13)，147.0(C-14)，74.2(C-15)，175.0(C-16)，31.9(C-17)，23.4(C-18)，64.0(C-19)，16.6(C-20).
實施例6
化合物7、化合物8的分離、純化取實施例2中D101大孔樹脂柱的40％～50％的乙醇洗脫液，濃縮后反復三次上硅膠H柱，每次均用氯仿-甲醇(6∶1～4∶1)進行梯度洗脫，經(jīng)Sephadex LH-20進行純化，得化合物7，8的混合物，再經(jīng)HPLC進行制備，色譜條件色譜柱Waters Novapak C18(40mm×150mm.6μm)，流動相為甲醇∶水∶磷酸(30∶70∶0.2)時，得化合物7；流動相為甲醇∶水∶磷酸(40∶60∶0.2)時，得化合物8.
化合物7的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，19-二羥基-8(12)環(huán)氧-13(14)-賴百當烯-15，16-內(nèi)酯-19硫酸酯。
無色針晶，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚分子式C20H30O8S，分子量430；mp255-257℃；[α]D24-18.4(c 0.1，MeOH).
ESI-MS429[M-H]+，301[M-CH2OH-H2O-SO3H]+；1H-NMR(CD3OD)δ7.43(1H，t，J＝1.5Hz，H-14)，4.85(2H，m，H-15)，4.83(1H，m，H-12)，4.20(1H，d，J＝10.2Hz，H-19)，4.15(1H，d，J＝10.2Hz，H-19)，3.21(1H，dd，J＝4.7，11.9Hz，H-3)，1.22(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ39.5(C-1)，27.9(C-2)，80.0(C-3)，43.5(C-4)，57.9(C-5)，23.0(C-6)，41.4(C-7)，83.5(C-8)，59.5(C-9)，37.1(C-10)，29.7(C-11)，71.9(C-12)，137.2(C-13)，148.5(C-14)，72.4(C-15)，174.9(C-16)，21.6(C-17)，23.3(C-18)，71.0(C-19)，15.5(C-20).
化合物8的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，19-二羥基-8(12)環(huán)氧-13(14)-賴百當烯-15，16-內(nèi)酯-3硫酸酯。
為白色粉末，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚。
分子式C20H30O8S，分子量430；1H-NMR(CD3OD)δ7.43(1H，m，H-14)，4.86(2H，m，H-15)，4.56(1H，m，H-12)，4.03(1H，m，H-19)，3.60(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，4.56(1H，m，H-3)，1.20(3H，s，H-18)，1.19(3H，s，H-17)，0.93(3H，s，H-20)13C-NMR(CD3OD)δ39.1(C-1)，25.1(C-2)，88.2(C-3)，44.3(C-4)，58.1(C-5)，23.2(C-6)，41.1(C-7)，83.2(C-8)，59.1(C-9)，36.8(C-10)，29.7(C-11)，71.9(C-12)，137.2(C-13)，148.4(C-14)，72.4(C-15)，174.8(C-16)，21.6(C-17)，23.4(C-18)，64.0(C-19)，15.3(C-20).
實施例7化合物10、化合物11的分離、純化取實施例中D101大孔樹脂柱的40％～50％的乙醇洗脫液，濃縮后反復三次上硅膠H柱，用氯仿-甲醇(6∶1～4∶1)進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)HPLC制備型柱進行純化，色譜條件色譜柱Waters Novapak C18(40mm×150mm.6μm)，先用流動相為水∶乙腈∶0.05M磷酸(58∶12∶30)；再用流動相為水∶乙腈∶0.05M磷酸(30∶40∶30)。
流動相為水∶乙腈∶0.05M磷酸(58∶12∶30)時，得化合物10；流動相為水∶乙腈∶0.05M磷酸(30∶40∶30)時，得化合物11。
化合物10的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，19-二羥基-8(12)環(huán)氧-13(14)-賴百當烯-15，16-內(nèi)酯。
無色針晶，易溶于甲醇、丙酮，微溶于氯仿，不溶于乙醚和石油醚。
分子式C20H30O5，分子量350.1；mp210-212℃；[α]D21-21.4(c 0.1，MeOH).
IRmaxKBrcm-13489，3425cm-1(OH)，1758，1650cm-1，(C＝C-C＝O)，1450，1380(C＝C)，1223，1196，1083，1031，1019，988，963，846；ESI-MS349[M-H]+，305[M-CO2-H]+；1H-NMR(CD3OD)δ7.46(1H，m，H-14)，4.85(2H，m，H-15)，4.66(1H，m，H-12)，4.05(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.46(1H，d，J＝11.1Hz，H-19)，3.35(1H，dd，J＝4.9，11.6Hz，H-3)，2.37(1H，dd，J＝13.2，6.8Hz，H-11)，2.07(1H，td，J＝10.2Hz，H-11)，1.22(3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20).
13C-NMR(CD3OD)δ40.4(C-1)，28.4(C-2)，81.5(C-3)，43.5(C-4)，53.7(C-5)，37.2(C-6)，19.5(C-7)，84.4(C-8)，59.6(C-9)，36.9(C-10)，33.9(C-1 1)，74.3(C-12)，138.5(C-13)，146.5(C-14)，72.4(C-15)，175.0(C-16)，32.0(C-17)，23.5(C-18)，65.2(C-19)，17.0(C-20).
化合物11的理化性質和波譜數(shù)據(jù)化學中文名稱3，19-二羥基-8(12)環(huán)氧-13(14)-賴百當烯-15，16-內(nèi)酯。
無色針晶，易溶于水、甲醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚和石油醚分子式C20H30O8S，分子量430；mp255-257℃；[α]D21-18.4(c 0.1，MeOH).
IRmaxKBrcm-13489，3425cm-1(OH)，1758，1650cm-1，(C＝C-C＝O)；ESI-MS429[M-H]+，301[M-CH2OH-H2O-SO3H]+，；1H-NMR(CD3OD)δ7.41(1H，m，H-14)，4.84(2H，m，H-15)，4.64(1H，m，H-12)，4.28(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，3.14(1H，d，J＝11.2Hz，H-19)，3.24(1H，dd，J＝4.7，11.6Hz，H-3)，2.39(1H，dd，J＝13.2，6.8Hz，H-11)，2.07(1H，td，J＝10.2Hz，H-11)，1.20(3H，s，H-18)，1.13(3H，s，H-17)，1.0(3H，s，H-20)；13C-NMR(CD3OD)δ40.4(C-1)，28.4(C-2)，81.5(C-3)，43.5(C-4)，53.7(C-5)，37.2(C-6)，19.5(C-7)，84.4(C-8)，59.6(C-9)，36.9(C-10)，33.9(C-11)，74.3(C-12)，138.5(C-13)，146.5(C-14)，72.4(C-15)，175.0(C-16)，32.0(C-17)，23.5(C-18)，65.2(C-19)，17.0(C-20)..
實施例8一、動物急性毒性試驗1.試驗目的測定化合物1、2、3、4、5、7、8、化合物4與化合物5的組合物經(jīng)靜脈一次給藥小鼠的急性反應和死亡情況。
2.試驗材料2.1試驗藥物化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8、化合物4與化合物5的組合物，濃度均為0.1g/ml，由江西青峰藥業(yè)有限公司提供。批號20030806。
2.2受試動物ICR小鼠，體重18-20g，雌雄各半，由江西青峰藥業(yè)有限公司實驗動物中心供給。實驗動物使用許可證號SKYX(贛)2003-00013.試驗條件給藥前后，實驗小鼠雌雄分籠，全價顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水，室溫20±2℃、濕度45％-65％。
4.試驗方法及結果4.1方法取ICR小鼠180只，體重18-20g，雌雄各半。隨機均分為9組，每組20只。對照組0.9％氯化鈉注射液。樣品組100mg/ml的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8、化合物4與化合物5的組合物。樣品組分別一次給小鼠尾靜脈注射25ml/kg，對照組給予等量的09％氯化鈉注射液。連續(xù)觀察兩周，記錄受試小鼠行為、活動、攝食量、體重、糞便、死亡等情況，未死亡小鼠于兩周后處死進行尸檢。
4.2試驗結果

按2500mg/kg(100mg/ml×25ml/kg)劑量靜脈一次給藥的20只小鼠，當天見小鼠毛色光滑、活動、攝食、糞便色澤與質地正常，與對照組比較無明顯差異；且兩周內(nèi)無死亡及其它異?，F(xiàn)象發(fā)生，兩組同時處死后進行尸檢，各主要臟器(心、肝、脾、肺、腎)經(jīng)肉眼觀察未見異常改變，與對照組比較無明顯差異。
4.3試驗結論經(jīng)靜脈一次給藥的最大給藥量試驗結果表明160只小鼠給藥后均無明顯的毒性反應，兩周內(nèi)亦無死亡。因此，化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物7、化合物8、化合物4與化合物5組合物，一次經(jīng)靜脈給藥的小鼠最大給藥量為2500mg/kg，按臨床成人每日用量250mg/60kg計算，則相當于臨床成人用量的600倍。
二、藥效學研究1.材料1.1藥物化合物1、化合物4、化合物5、化合物8、化合物4與化合物5的組合物，由江西青峰藥業(yè)有限公司提供，批號20030816，高劑量300mg/kg，中劑量150mg/kg，低劑量75mg/kg，每次均新鮮配制。
注射用炎琥寧(14-脫羥-11.12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3.9-二琥珀酸半酯鉀鈉鹽)，重慶藥友制藥有限責任公司，批號20030509。
1.2動物小鼠，體重22-25g；Wistar大鼠，體重150-200g；家兔2.5-3.0kg，均雌雄兼用，由江西青峰藥業(yè)有限公司實驗動物中心提供。動物使用許可證SKYX(贛)2003-0001。
1.3試劑內(nèi)毒素10EU/支，中國藥品生物制品檢定所；2.4-二硝基苯酚，上?；瘜W試劑廠，批號20030312；營養(yǎng)瓊脂，中國藥品生物制品檢定所。
1.4菌株金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎球菌，均由江西醫(yī)學院提供。
1.5試驗環(huán)境溫度25±3℃，濕度45-65％。
2.實驗方法及結論2.1解熱作用2.1.1對內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響實驗前2天每日測家兔體溫1次，挑選體溫在38.0-39.5℃，且自身體溫變化小于0.3℃的家兔85只，2.5-3.0kg，雌雄各半，隨機分為17組，每組5只，一組于家兔左耳組織緣靜脈注射生理鹽水，二組于家兔左耳緣靜脈注射炎琥寧150mg/kg，三至十七組分別于家兔左耳靜脈注射化合物1、化合物4、化合物5、化合物8及化合物4與化合物5的組合物，高劑量300mg/kg，中劑量150mg/kg，低劑量75mg/kg，各組注射容積均為5ml/kg。于給藥前測量一次體溫作零日時基礎體溫，給藥后立即于家兔右耳緣靜脈注射內(nèi)毒素200EU/kg，測量給藥后1h、2h、3h、4h、6h時的體溫。(見下表)


2.1 2結果顯示化合物1、化合物4、化中物5、化合物8、化合物4與化合物5的組合物300mg/kg及150mg/kg，對內(nèi)毒素所致的家兔發(fā)熱均有良好的解熱作用，75mg/kg對解熱作用不明顯。
2.2抗炎作用2.2.1對蛋清致大鼠足腫的影響大鼠85只，180-210g，雌雄各半，隨機分為17組，每組5只，一組靜脈注射生理鹽水，二組靜脈注射炎琥寧200mg/kg，三、四、五組分別靜脈注射化合物1，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，六、七、八組分別靜脈注射化合物4，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，九、十、十一組分別靜脈注射化合物5，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，十二、十三、十四分別靜脈注射化合物8，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，十五、十六、十七組分別靜脈注射化合物4與化合物5的組合物，400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，各組注射容積均為0.1ml/10g。給藥前用記號筆標記大鼠右踝關節(jié)浸水邊界，排水容積法測量1次致炎前大鼠右足排水容積，給藥后立即于大鼠右后腳掌SC新鮮蛋清0.1ml/只。測量給藥后1h、2h、3h、5h時的大鼠足排水容積。(見下表)

2.2.2結論化合物1、化合物4、化合物5、化合物8以及化合物4與化合物5的組合物有良好的抗炎作用。
2.3抗菌試驗2.3.1體外抑菌試驗用生理鹽水將化合物1、化合物4、化合物5、化合物8、化合物4與化合物5的組合物配成2％的注射液，微孔濾膜過濾除菌后作初始濃度，再用注射用生理鹽水減半稀釋至1/2、1/4、1/8、1/6、1/32濃度。用注射用生理鹽水將注射用炎琥寧配制成2％注射液，過濾除菌后作初始濃度，再用生理鹽水減半稀釋至1/2、1/4、1/8、1/16、1/32濃度，分別吸取1ml于無菌試管內(nèi)，加入9ml營養(yǎng)瓊脂，搖勻，接種細菌后于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h觀察。


2.3.2結果化合物1、化合物4、化合物5、化合物8、化合物4與化合物5的組合物均有較強的抗菌作用。
實施例9化合物1-11的穩(wěn)定性試驗1、儀器與試劑儀器TV-1800SPC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。
試劑均為分析純；樣品由江西青峰藥業(yè)有限公司提供。
2、恒溫加速試驗法將化合物1-11樣品放置在37-40℃恒溫加速實驗箱內(nèi)，在0個月、1個月、2個月、3個月、6個月間隔時間取樣，按下述方法測定含量。
3、測定方法3.1對照品(化合物1-11，純度均在99％以上)溶液的配制精密稱取在105℃干燥至恒重的對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液。
3.2樣品(化合物1-11)溶液的配制精密稱取樣品50mg，置50ml容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度、搖勻。
3.3測定法精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置于10ml量瓶中，置20℃水浴中，精密加入2％3，5-二硝基苯甲酸乙醇溶液2ml搖勻，再精密加入氫氧化鉀溶液(1.22g→100ml)2ml，用60％乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置5分鐘，以相應的試劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄VB)在540nm的波長處分別測定吸收度，計算。
恒溫加速試驗結果 結論經(jīng)6個月的恒溫加速試驗證明化合物1-11化學性質穩(wěn)定。
實施例10稱取化合物4.25g，用注射用水約800ml溶解，加0.1％活性炭攪拌10分鐘，濾過，加注射用水至1000ml，濾過，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4.5-6.5，灌封(小容量注射劑，規(guī)格為2ml/支、5ml/支、10ml/支)，100℃，30分鐘滅菌，澄明度檢查、包裝、即得。
用法用量肌內(nèi)注射成人一次50-100mg，一日2-3次，小兒酌減或遵醫(yī)囑。靜脈滴注一日250-500mg，加入5％葡萄糖注射液或氯化鈉注射液250-500ml中滴注；小兒酌減或遵醫(yī)囑。
實施例11
稱取化合物4、化合物5，各1g，用葡萄糖等滲溶液約800ml溶解，加0.1％活性炭攪拌10分鐘，濾過，加葡萄糖等滲溶液至1000ml，濾過，用10％氫氧化鈉溶解調(diào)節(jié)pH值至4.5-6.5，灌封(大容量注射液，規(guī)格為50ml/瓶、100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶)100℃，30分鐘滅菌，澄明度檢查、包裝、即得。
用法用量靜脈滴注一日250-500mg。小兒酌減或遵醫(yī)囑。
實施例12稱取化合物4.25g，加注射用水600ml，攪拌溶解，加入25g甘露醇，攪拌溶解后，加注射用水至1000ml，混勻，用0.22μm微孔濾膜過濾，所得溶液分裝于7ml西林瓶中，每瓶2ml，蓋塞，放入凍干機中，按照設計的凍干曲線進行冷凍干燥，得化合物4凍干粉針(每支50mg)。
用法用量肌內(nèi)注射成人一次50-100mg，一日2-3次，小兒酌減或遵醫(yī)囑，靜脈滴注一日250-500mg，加入5％葡萄糖注射液或氯化鈉注射液250-500ml中滴注，小兒酌減或遵醫(yī)囑。
實施例13稱取化合物4.25g，用注射用水約800ml溶解，加0.1％活性炭攪拌10分鐘，濾過，加注射用水至1000ml，濾過，加入蔗糖200g攪拌溶解后，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4.5-6.5，濾過，濾液灌裝于10ml玻瓶中，100℃，30分鐘滅菌，澄明度檢查、包裝、即得。
用法用量口服一次1支，一日三次。
權利要求
1.下述通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物 通式(I)通式(I)中R1、R2各自獨立地選自-H、-SO3H；R3為羥基時，R4為-ONa，或者R3＝R4＝-O-； 通式(II)通式(II)中R1、R2各自獨立地選自-H、-SO3H；R3為R體的H或S體的H；R4為S體的甲基。
2.權利要求1通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物，其中 通式(I)R1R2R3 R4化合物1 H SO3H OH ONa化合物2 SO3H H OH ONaR3＝R4化合物3 SO3H SO3H O化合物4 H SO3H O化合物5 SO3H H O 通式(II)R1R2R3R4化合物6 H H 化合物7 H SO3H 化合物8 SO3H H 化合物9 H H 化合物10 H SO3H 化合物11 SO3H H
3.權利要求1的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物，所述混合物是指通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物可以任意組配。
4.權利要求2的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物，所述混合物是指選自通式(I)、(II)表示的穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物中的二種或二種以上混合物。
5.權利要求4的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物，所述混合物是指選自化合物1、化合物4、化合物5、化合物8中的二種或二種以上混合物。
6.含權利要求1的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與藥學上可接受載體組成。
7.權利要求6的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與注射用水組成。
8.權利要求6的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與甘露醇凍干粉針輔料組成。
9.權利要求6的通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物的藥物組合物，主要由通式(I)、(II)穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物或其混合物與口服制劑輔料組成。
全文摘要
本發(fā)明公開了具有抗菌、消炎、解熱作用的11種穿心蓮內(nèi)酯磺化衍生物及含有它們的藥物組合物，其療效顯著、化學性質穩(wěn)定、水溶性好，質量標準明確可控，用于制備凍干粉針、注射液或口服制劑，治療肺炎、支氣管炎、扁桃體炎、細菌性痢疾等疾病。
文檔編號C07D307/00GK1687049SQ20051003856
公開日2005年10月26日 申請日期2005年3月25日 優(yōu)先權日2005年3月25日
發(fā)明者唐春山, 葉文才, 胡永美, 楊小玲 申請人:唐春山