專利名稱：可抑制蛋白激酶的噻唑并、噁唑并和咪唑并喹唑啉化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及受約束的噻唑并、噁唑并和咪唑并嘧啶化合物以及它們的治療用途。更具體地，但不排他的，本發(fā)明涉及可抑制一種或多種蛋白激酶的化合物。
背景技術(shù)：
在真核生物中，所有生物功能包括DNA復(fù)制、細(xì)胞周期進(jìn)程、能量代謝以及細(xì)胞生長和分化均通過可逆的蛋白磷酸化調(diào)控。蛋白的磷酸化狀態(tài)不僅決定其功能、亞細(xì)胞分布和穩(wěn)定性，還決定其與何種其它蛋白或細(xì)胞成分相關(guān)聯(lián)。因此，在生物化學(xué)途徑中，全部蛋白質(zhì)組或個(gè)別成員的特定磷酸化的平衡被生物體用作維持穩(wěn)態(tài)的手段，從而適應(yīng)千變?nèi)f化的環(huán)境。實(shí)現(xiàn)這些磷酸化和脫磷酸化步驟的酶分別是蛋白激酶和磷酸酶。
真核蛋白激酶家族是人基因組內(nèi)最大的家族之一，包含約500個(gè)基因[1，2]。大多數(shù)激酶包含一個(gè)250-300個(gè)氨基酸殘基的具有保守核結(jié)構(gòu)的催化區(qū)域。該區(qū)域包含對于ATP(少數(shù)時(shí)候是GTP)的結(jié)合口袋(binding pocket)，激酶將其末端磷酸酯基共價(jià)鍵地轉(zhuǎn)移至其大分子底物。磷酸供體總是作為絡(luò)合物與二價(jià)離子(通常是Mg2+或Mn2+)結(jié)合。催化區(qū)域的另一重要功能是結(jié)合并定位大分子底物的磷酸轉(zhuǎn)移子。存在于大多數(shù)激酶中的催化區(qū)域或多或少是同源的。
本領(lǐng)域已知許多可通過拮抗ATP結(jié)合而抑制蛋白激酶功能的分子[3-7]。例如，本申請人先前公開了具有激酶抑制性質(zhì)特別是抑制細(xì)胞周期蛋白-依賴激酶(CDK)的2-苯胺基-4-雜芳基-嘧啶化合物[8-12]。CDK是與各種細(xì)胞周期蛋白亞單位相關(guān)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。這些絡(luò)合物對于調(diào)節(jié)真核細(xì)胞周期進(jìn)程和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄都起到重要作用[13，14]。
本發(fā)明尋求提供新型被稱為“受約束的”雜芳基-取代嘧啶衍生物，其中雜芳基取代基的自由轉(zhuǎn)動(dòng)被阻礙。更具體地，本發(fā)明涉及4，5-二氫-噻唑并-、噁唑并-和咪唑并-[4，5-h]喹唑啉-8-基胺，其在治療大量不同疾病中具有廣泛的治療用途和/或其可抑制一種或多種蛋白激酶。
發(fā)明概述本發(fā)明第一方面涉及式1化合物或其可藥用鹽 其中X是S、O或NH；“a”是單鍵；或“a”是雙鍵以及R3和R4之一和R5和R6之一不存在；R1是H；或選自烷基、環(huán)烷基、雜芳基、芳烷基、CO-烷基、SO2-烷基、CO2R13和芳基，其各自任選包含一個(gè)或多個(gè)雜原子，且任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代R2是H、R8或任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的烷基；R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、R8、烷基和烯基，其中所述烷基和烯基任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代；或R3和R4，和/或R5和R6一起代表＝O；R7是H、R8、NH(CH2)nR9、CO(CH2)nR9、NHCO(CH2)nR9、O(CH2)nR9或者烷基或苯基，其各自任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)所取代；R8是OR10、NR10R11、鹵原子、CF3、NO2、COR10，CN、COOR10、CONR10R11、SO2R10或SO2NR10R11；R9是飽和或不飽和的5-或6-元環(huán)基團(tuán)，任選包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，并任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代；R10、R11、R12和R13各自獨(dú)立是H或烴基；以及n是0、1、2或3。
本發(fā)明第二方面涉及一種藥物組合物，其包含一種或多種如上定義的式1化合物并混合有可藥用稀釋劑、賦形劑或載體。
本發(fā)明另一方面涉及一種或多種式1化合物在制備用于治療一種或多種如下病情的藥物中的用途增生病癥；病毒病癥；CNS病癥；糖尿病；心血管病癥；中風(fēng)；以及脫發(fā)。
本發(fā)明的另一方面涉及制備如上定義式1化合物的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物在測定法中的用途，其中該測定法用于鑒別可用于抑制一種或多種細(xì)胞周期蛋白依賴激酶、aurorakinase、GSK和PLK酶的其它候選化合物。
發(fā)明詳述化合物在第一方面中，本發(fā)明涉及如上式1所述的4，5-二氫-噻唑并-、噁唑并-和咪唑并-[4，5-h]喹唑啉-8-基胺。Fravolini等公開結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物2-甲基-8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉[15]，但是，沒有說明該化合物的生物學(xué)性質(zhì)。
如本文所述，術(shù)語“烴基”是指包含至少C和H的飽和或不飽和的、直鏈、支鏈或環(huán)狀基團(tuán)，其任選包含一個(gè)或多個(gè)其它適宜的取代基。這樣的取代基例如包括鹵素、烷氧基、羥基、CF3、CN、氨基、硝基或環(huán)狀基團(tuán)。除了取代基是環(huán)狀基團(tuán)外，取代基的組合可形成環(huán)狀基團(tuán)。如果烴基包含多于一個(gè)C，那么那些碳不需要彼此相連。例如，至少其中兩個(gè)碳可通過適宜元素或基團(tuán)連接。由此，該烴基可包含雜原子。適宜的雜原子對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，并包括例如硫、氮、氧、磷和硅。優(yōu)選地，烴基是芳基或烷基。
如本文所用，術(shù)語“烷基”包括飽和的直鏈和支鏈烷基，其可被(單-或多-)取代或未取代。優(yōu)選地，烷基是C1-20烷基，更優(yōu)選C1-15，更加優(yōu)選C1-12烷基，更加優(yōu)選C1-6烷基，更加優(yōu)選C1-3烷基。特別優(yōu)選的烷基包括例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基和己基。適宜的取代基包括例如一個(gè)或多個(gè)選自如上定義的R8和R9。
如本文所用，術(shù)語“環(huán)烷基”是指環(huán)狀烷基，其可被(單-或多-)取代或未取代。優(yōu)選地，環(huán)烷基是C3-12環(huán)烷基。適宜的取代基包括例如一個(gè)或多個(gè)選自如上定義的R8和R9基團(tuán)。
如本文所用，術(shù)語“芳基”是指C6-12芳香基團(tuán)，其可被(單-或多-)取代或未取代。典型的例子包括苯基和萘基等。適宜的取代基包括例如一個(gè)或多個(gè)選自如上定義的R8和R9基團(tuán)。
術(shù)語“芳烷基”用作表示上述術(shù)語烷基和芳基的結(jié)合。
如本文所用，術(shù)語“雜芳基”是指C3-12芳香的、(單-或多-)取代或未取代的基團(tuán)，其包含一個(gè)或多個(gè)雜原子。優(yōu)選的雜芳基包括吡咯、吡唑、嘧啶、吡嗪、吡啶、喹啉、噻吩和呋喃。此外，適宜的取代基包括例如一個(gè)或多個(gè)選自如上定義的R8和R9基團(tuán)。
如本文所用，術(shù)語“烯基”是指包含一個(gè)或多個(gè)碳-碳雙鍵的基團(tuán)，其可以是直鏈或支鏈的、(單-或多-)取代或未取代。優(yōu)選地，烯基是C2-20烯基，更優(yōu)選C2-15烯基，更優(yōu)選C2-12烯基，或優(yōu)選C2-6烯基，更優(yōu)選C2-3烯基。適宜的取代基包括例如一個(gè)或多個(gè)選自如上定義的R8和R9基團(tuán)。
本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案涉及式1a化合物，或其可藥用鹽，其中 X是S、O或NH；R1是H、烷基、環(huán)烷基、雜芳基或芳基，其中所述烷基、環(huán)烷基、雜芳基或芳基任選包含一個(gè)或多個(gè)雜原子，且任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代；R2是H、R8或任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的烷基；R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、R8、烷基和烯基，其中所述烷基和烯基任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代；或R3和R4，和/或R5和R6一起代表＝O；
R7是H、R8、NH(CH2)nR9、CO(CH2)nR9、NHCO(CH2)nR9、O(CH2)nR9或者烷基或苯基，各基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代；R8是OR10、NR10R11、鹵素、CF3、NO2、COR10、CN、COOR10、CONR10R11、SO2R10或SO2NR10R11；R9是飽和或不飽和的5-或6-員環(huán)狀基團(tuán)，任選包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，并任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代；R10、R11各自獨(dú)立是H或烴基；以及n是0、1、2或3。
在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，X是S。
優(yōu)選地，R10、R11和R12各自獨(dú)立是H或烷基。
優(yōu)選地，R13是烷基或烯基。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H、C1-C12烷基、C3-C12環(huán)烷基、C6-C12芳基或C3-12雜芳基，其中所述烷基、環(huán)烷基、雜芳基和芳基任選包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自N、O或S的雜原子，并任選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H；或選自CO2R13、C1-C12烷基、C3-C12環(huán)烷基、C6-C12芳基、(C1-C12烷基)-(C6-C12芳基)、C3-12雜芳基、SO2-(C6-C12芳基)和CO-(C6-C12芳基)，其中所述烷基、環(huán)烷基、雜芳基和芳基任選包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自N、O或S的雜原子，并任選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代。
在一個(gè)更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是苯基、吡啶-2-基或吡啶-3-基，各基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的取代基取代。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H，或選自苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、CH2-苯基、CO-苯基、SO2-苯基、CO2-烷基和CO2-烯基，各基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的取代基取代。
更加優(yōu)選地，R1是苯基，任選被一個(gè)或多個(gè)選自NO2、CF3、OH、嗎啉代(morpholino)和NMe2的取代基取代。
在一個(gè)更加優(yōu)選地實(shí)施方案中，R1是H，或選自苯基、CO-苯基、SO2-苯基、CH2-苯基和CO2-CH2CH2CH＝CH，各基團(tuán)可任選被一個(gè)或多個(gè)選自NO2、CF3、OH、嗎啉代和NMe2的取代基取代。
在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是苯基，任選在3-或4-位被選自NO2、CF3、OH、嗎啉基或NMe2的取代基取代。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H；或是苯基，任選在3-或4-位被選自NO2、CF3、OH、嗎啉基或NMe2的取代基取代；或R1是CO-苯基、CH2-苯基、SO2-苯基或CO2-CH2CH2CH＝CH。
優(yōu)選地，R2是H、R8或任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的C1-C3烷基。
在一個(gè)特別優(yōu)選地實(shí)施方案中，R2是H。
優(yōu)選地，R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、R8、任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的C1-C3烷基，以及任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的C2-C3烯基。
更優(yōu)選地，R2、R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立是H或任選被一個(gè)或多個(gè)羥基取代的C1-3烷基。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、CH3、CH2OH和CH2CH2OH。
在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3、R4、R5和R6均是H。
優(yōu)選地，R7是H、R8、苯基、NH(CH2)nR9、CO(CH2)nR9、NHCO(CH2)nR9、O(CH2)nR9或任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代的C1-C6烷基。
更優(yōu)選地，R7是C1-C6烷基或R8。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R7選自CH3、NH2、NHCH3、OCH3和OCH2CH3。
在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，R7是NH2或CH3。
更加優(yōu)選地，R8是OH、OMe、OEt、OiPr、NH2、NHMe、NMe2、NHEt、NHiPr、CF3、F、Cl、Br、I、NO2、COMe、COEt、COiPr、CN、COOH、COOMe、CONH2、CONHMe、CONMe2、SO2Me或SO2NH2。
更加優(yōu)選地，R8是OH、OMe、OEt、OiPr、NH2、NHMe、NMe2、NHEt、NHiPr、CF3或NO2。
更加優(yōu)選地，R9是嗎啉基。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，“a”是單鍵。
在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，“a”是雙鍵，以及R3或R4之一與R5或R6之一不存在。
在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物選自(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基-苯基)-胺；
3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；N，N-二甲基-N′-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺；(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；甲基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；甲基-(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺；N-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯甲酰胺；芐基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-氨基甲酸丁-3-烯酯；以及N-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯磺酰胺。
在本發(fā)明一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物選自(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基-苯基)-胺；3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；N，N-二甲基-N’-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；甲基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；
(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；以及N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺。
本發(fā)明更加優(yōu)選的化合物是(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺，(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基-苯基)-胺，3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚，(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺，4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚，以及N，N-二甲基-N′-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物能夠抑制一種或多種下列蛋白激酶CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、糖原合成酶激酶3、馬球-樣(polo-like)激酶、aurora kinases。更加優(yōu)選地，這些化合物可以在亞-微摩爾(sub-micromolar)IC50值抑制一種或多種前述蛋白激酶。
治療用途已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式1化合物具有抗增生活性，因此據(jù)信可用于治療增生性病癥，例如癌癥、白血病和其它與失控細(xì)胞增生有關(guān)的疾病，例如牛皮癬和再狹窄。如本文定義，在本發(fā)明的范圍內(nèi)的抗增生效果可以由在體外全細(xì)胞測定法中抑制細(xì)胞增生的能力得到證明，例如使用A549、HT29或Saos-2中的任何一種細(xì)胞系。利用這些測定法，可以確定一種化合物在本發(fā)明的意義上是否具有抗增生活性。
本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案涉及一種或多種式1化合物在制備用于治療增生性病癥的藥物中的用途。
如本文所用短語“藥物制備”，除了包括式1化合物在對于其它治療藥物的篩選程序中的用途，或在制造這樣藥物的任一步驟中的用途之外，還包括式1化合物直接作為藥物的用途。
優(yōu)選地，增生性病癥是癌癥或白血病。本文所用術(shù)語增生性病癥廣義上包括任意一種需要控制細(xì)胞周期的病癥，例如心血管病癥比如再狹窄、心肌癥和心肌梗塞，自身免疫疾病比如腎小球腎炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，皮膚學(xué)病癥比如牛皮癬，抗炎、抗真菌、抗寄生物疾病比如瘧疾、肺氣腫、脫毛癥，以及慢性阻塞性肺病。在這些病癥中，本發(fā)明化合物可在合意的細(xì)胞內(nèi)如所希望的那樣誘導(dǎo)凋亡或維持停滯(stasis)。
本發(fā)明的化合物可以抑制細(xì)胞周期中的任意步驟或階段，例如核被膜的形成、從細(xì)胞周期的靜止期(G0)退出、G1進(jìn)程、染色體去濃縮、核被膜破裂(nuclear envelope breakdown)、START、DNA復(fù)制的引發(fā)、DNA復(fù)制的進(jìn)程、DNA復(fù)制的終止、中心體復(fù)制、G2進(jìn)程、有絲分裂或減數(shù)分裂功能的激活、染色體聚集、中心體分離、微管成核、紡錘體生成與功能、與微管動(dòng)力蛋白的相互作用、染色單體分開(separation)與分離(segregation)、有絲分裂功能的失活、收縮環(huán)的生成和胞質(zhì)分裂功能。特別地，本發(fā)明的化合物可以影響某些基因功能，例如染色質(zhì)結(jié)合、復(fù)制復(fù)合體的生成、復(fù)制許可、磷酸化或其它二次修飾活性、蛋白水解性降解、微管結(jié)合、肌動(dòng)蛋白結(jié)合、septin結(jié)合、微管組織中心成核活性核與細(xì)胞周期信號(hào)通路組分的結(jié)合。
在一種實(shí)施方案中，式1化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量進(jìn)行給藥。
優(yōu)選地，式1化合物以足以抑制CDK2和/或CDK4中至少一種的量進(jìn)行給藥。
本發(fā)明另一方面涉及式1化合物在制備治療病毒病癥比如人巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)的藥物中的用途。
在本發(fā)明更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物以足以抑制一種或多種涉及病毒復(fù)制的宿主細(xì)胞CDKs，即CDK2、CDK7、CDK8和CDK9[23]的量進(jìn)行給藥。
如本文定義，本發(fā)明范圍內(nèi)的抗病毒作用可由抑制CDK2、CDK7、CDK8或CDK9的能力所證明。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種或多種式1化合物在治療CDK依賴型或敏感型病毒病癥中的用途。CDK依賴型病癥與一種或多種CDK酶的活性超過正常水平相關(guān)。這樣的病癥優(yōu)選與CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9異?；钚运较嚓P(guān)。在CDK敏感型病癥中CDK水平的異常不是主要原因，其主要原因是主要代謝下游的異常。在這樣的情況下，可認(rèn)為CDK2、CDK7、CDK8和/或CDK9是敏感代謝途徑的一部分，且因此CDK抑制劑具有治療這樣病癥的活性。
本發(fā)明另一方面涉及式1化合物或其可藥用鹽在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，糖尿病是II型糖尿病。
GSK3是磷酸化糖原合成酶(GS)的幾種蛋白激酶之一。在骨骼肌內(nèi)由胰島素刺激的糖原合成是由GS的脫磷酸化和激活引起的。因此GSK3對于GS的作用導(dǎo)致后者失活并由此抑制肌肉內(nèi)葡萄糖向糖原的轉(zhuǎn)化。
II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病mellitus)是多因素疾病。高血糖癥是由于肝臟、肌肉和其它組織內(nèi)的胰島素抑制，并伴有胰島素分泌的損害。骨骼肌是胰島素刺激葡萄糖攝入的主要位點(diǎn)，在那里其或者被排出循環(huán)或轉(zhuǎn)化為糖原。肌糖原沉積是葡萄糖體內(nèi)平衡的主要決定因素，II型糖尿病患者缺乏肌糖原存儲(chǔ)。已證明GSK3活性提高對于II型糖尿病是重要的[24]。此外，已證明GSK3在II型糖尿病患者肌肉細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)，并且骨骼肌GSK3活性和胰島素活性之間存在逆相關(guān)[25]。
因此，GSK3在治療糖尿病特別是II型和糖尿病性神經(jīng)病變中具有治療意義。
值得注意的是，已知GSK3磷酸化許多除GS外的底物，并由此涉及調(diào)節(jié)多種生化途徑。例如，GSK在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)高度表達(dá)。
本發(fā)明另一方面因此涉及式1化合物或其可藥用鹽在制備治療CNS病癥例如神經(jīng)變性病癥的藥物中的用途。
優(yōu)選地，該CNS病癥是阿爾茨海默病。
Tau是GSK-3底物，其牽涉阿爾茨海默病的病因?qū)W。在健康神經(jīng)細(xì)胞中，Tau與微管蛋白一起裝配成微管。但是，在阿爾茨海默病中，tau形成大的細(xì)絲纏結(jié)，其破壞了神經(jīng)細(xì)胞中的微管結(jié)構(gòu)，從而損害養(yǎng)分的轉(zhuǎn)運(yùn)以及神經(jīng)元信息的傳遞。
不希望受限于理論，據(jù)信GSK3抑制可預(yù)防和/或逆轉(zhuǎn)微管-相關(guān)蛋白tau的異常的高磷酸化，該異常的高磷酸化是阿爾茨海默病和大量其它神經(jīng)變性疾病比如進(jìn)行性核上性麻痹、corticobasal退化和皮克氏病的恒定特征。Tau基因的變異導(dǎo)致遺傳型額顳癡呆，進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了tau蛋白功能障礙與神經(jīng)變性過程的相關(guān)性[26]。
本發(fā)明另一方面涉及式1化合物或其可藥用鹽在制備治療雙相性精神障礙的藥物中的用途。
本發(fā)明另一方面還涉及式1化合物或其可藥用鹽在制備治療中風(fēng)的藥物中的用途。
在頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)、癲癇、和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元疾病領(lǐng)域，降低神經(jīng)元凋亡是重要的治療目標(biāo)[27]。因此，作為神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)的前-凋亡因子的GSK3，使得這一蛋白激酶成為設(shè)計(jì)治療這些疾病的抑制性藥物的有吸引力的治療靶點(diǎn)。
本發(fā)明另一方面還涉及式1化合物或其可藥用鹽在制備治療脫發(fā)的藥物中的用途。
毛發(fā)的生長受Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑特別是Wnt-3控制。在皮膚的組織培養(yǎng)模型體系中，β-連環(huán)蛋白的非降解突變體的表達(dá)導(dǎo)致具有更高增生潛能的推定的干細(xì)胞的群體(population)猛增[28]。這個(gè)干細(xì)胞群體表達(dá)更高水平的與非鈣粘著蛋白相關(guān)的β-連環(huán)蛋白[29]，這可能有助于它們的高增生潛能。此外，在皮膚中過度表達(dá)截短的(truncated)β-連環(huán)蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠重新經(jīng)歷毛囊形態(tài)發(fā)生，而該毛囊形態(tài)發(fā)生通常只是在胚胎形成過程中建立。因此，GSK3抑制劑的這種異位應(yīng)用在治療脫發(fā)以及在因化療引起脫發(fā)癥之后恢復(fù)毛發(fā)生長方面具有治療上的用途。
本發(fā)明再一方面涉及一種治療GSK3依賴型疾病的方法，所述方法包括向需要接受該治療的患者按照如上所定義的足以抑制GSK3的用量給予本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽。
優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽以足以抑制GSK3β的量進(jìn)行給藥。
在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量進(jìn)行給藥。
Polo樣激酶(PLK)構(gòu)成了絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族。有絲分裂的黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)在polo部位的突變體顯示紡錘體異常[30]，并且還發(fā)現(xiàn)polo編碼有絲分裂激酶[31]。人類存在三種密切相關(guān)的PLK[32]。它們含有高度同源的氨基末端催化激酶域，并且它們的羧基末端含有兩個(gè)或三個(gè)保守區(qū)即polo盒(polo boxes)。對于polo盒的功能目前尚未完全理解，但是它們顯示出由PLK向亞細(xì)胞間隔的靶向作用[33，34]、調(diào)節(jié)與其它蛋白的相互作用[35]、或者它們還可以構(gòu)成部分自調(diào)節(jié)區(qū)[36]。此外，polo盒依賴性PLK1活性對于適當(dāng)?shù)闹衅?后期轉(zhuǎn)換和胞質(zhì)分裂也是必需的[37，38]。
已有研究表明，人類PLK調(diào)節(jié)有絲分裂的某些基本方面[39，40]。特別地，據(jù)認(rèn)為PLK1活性對于處于G2晚期/早前期(early prophase)的中心體功能成熟以及隨后兩極紡錘體的建立是必需的。通過這種小干擾RNA(siRNA)技術(shù)對細(xì)胞PLK1的消耗，已經(jīng)證實(shí)了這種蛋白對于多重有絲分裂過程以及胞質(zhì)分裂的完成是必需的[41]。
在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物以足以抑制PLK1的量進(jìn)行給藥。
在三種人類PLK中，PLK1是最具特點(diǎn)的；它調(diào)節(jié)大量細(xì)胞分裂周期效應(yīng)，包括有絲分裂的啟動(dòng)[42，43]、DNA損傷檢測點(diǎn)活化[44，45]、后期促進(jìn)復(fù)合體(anaphase promoting complex)的調(diào)節(jié)[46-48]、蛋白酶體的磷酸化[49]、以及中心體復(fù)制和成熟[50]。
具體地說，有絲分裂的啟動(dòng)需要M期促進(jìn)因子(MPF)的活化，依賴周期蛋白的激酶CDK1與B型細(xì)胞周期蛋白之間的復(fù)合物的活化[51]。后者在細(xì)胞周期的S和G2期產(chǎn)生積累，通過WEE1、MIK1和MYT1激酶促進(jìn)對MPF復(fù)合物磷酸化的抑制。在G2期未期，通過與雙特異性磷酸酶CDC25C相對應(yīng)的脫磷酸化引發(fā)MPF的活化[52]。在分裂間期，細(xì)胞周期蛋白B定位于細(xì)胞質(zhì)[53]，然后使其在前期被磷酸化，這一活動(dòng)導(dǎo)致核易位[54，55]。活性MPF在前期產(chǎn)生核積累被認(rèn)為對于啟動(dòng)M期活動(dòng)是重要的[56]。然而，除非受CDC25C阻礙，核MPF可以保持不被WEE1活化。在分裂間期使定位于細(xì)胞質(zhì)的磷酸酶CDC25C自身，在分裂前期堆積于細(xì)胞核中[57-59]。細(xì)胞周期B[60]以及CDC25C[61]進(jìn)入細(xì)胞核均通過由PLK1的磷酸化得到加強(qiáng)[43]。這種激酶是啟動(dòng)M期的重要調(diào)節(jié)劑。
在一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物是PLK1的ATP拮抗性抑制劑。
在本發(fā)明上下文中，ATP拮抗作用是指抑制劑化合物降低或者抑止PLK催化活性的能力，也就是為了修補(bǔ)或消除ATP結(jié)合的方式，通過可逆或不可逆地結(jié)合于酶活性位點(diǎn)而將磷酸從ATP轉(zhuǎn)移至大分子PLK底物上的能力。
在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物以足以抑制PLK2和/或PLK的量進(jìn)行給藥。
哺乳動(dòng)物PLK2(又被稱作SNK)和PLK3(又被稱作PRK和FNK)最初被認(rèn)為是直接的早期基因產(chǎn)物。PLK3激酶活性似乎在S和G2晚期達(dá)到最大。它在DNA損傷檢測點(diǎn)活化期間也具有活性以及顯著的氧化應(yīng)激。PLK3在調(diào)節(jié)微管動(dòng)力學(xué)和細(xì)胞中心體功能方面也具有重要作用，而PLK3表達(dá)異常會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期休止和細(xì)胞凋亡[62]。PLK2是三種PLKs中最沒有得到清楚認(rèn)識(shí)的同族體。PLK2和PLK3都還具有其它重要的有絲分裂后功能[35]。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物可以以亞-微摩爾級(jí)IC50值抑制一種或多種下列蛋白激酶CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8、CDK9、糖原合成酶3、polo-樣激酶、aurora激酶。
更優(yōu)選地，所述式1化合物顯示了對于一種或多種上述蛋白激酶的低于0.1μM的IC50值。
由此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物選自(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；N，N-二甲基-N′-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；以及N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺。
更優(yōu)選地，所述式1化合物顯示的對于一種或多種上述蛋白酶的低于0.01μM的IC50值。
由此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述化合物選自(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；
(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；以及N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺。
更加優(yōu)選地，所述式1化合物顯示的對于一種或多種上述蛋白酶的低于0.001μM的IC50值。
由此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物是N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物可顯示對于人細(xì)胞系的抗增生作用，如標(biāo)準(zhǔn)的72h MTT細(xì)胞毒測定所測量的。
優(yōu)選地，式1化合物顯示了低于10μM的IC50值。
由此，在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物選自(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基-苯基)-胺；3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；N，N-二甲基-N’-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；以及(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺。
更優(yōu)選地，如通過所述MTT測定法，式1化合物顯示了低于5μM的IC50，更優(yōu)選低于1μM。
由此，在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，式1化合物是(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺。
藥物組合物本發(fā)明另一方面涉及一種藥物組合物，包含上述式1化合物并混合有一種或多種可藥用稀釋劑、賦形劑或載體。即使本發(fā)明的化合物(包括它們的可藥用鹽、酯和可藥用溶劑化物)能夠被單獨(dú)給藥，一般地將它們與藥物載體、賦形劑或稀釋劑混合給藥，特別是用于人類治療。該藥物組合物可在人類醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)中應(yīng)用于人或動(dòng)物。
這類適合于本文所述各種不同形式藥物組合物的賦形劑實(shí)例可以參見“Handbook of Pharmaceutical Excipients，2ndEdition，(1994)，Edited by A Wadeand PJ Weller。
用于治療用途的可接受載體或稀釋劑在藥學(xué)領(lǐng)域是熟知的，并描述于例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)”中。
可接受的載體例如包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、甘露醇、山梨醇等。適宜的稀釋劑例如包括乙醇、甘油和水。
藥學(xué)上的載體、賦形劑或稀釋劑的選擇可依據(jù)預(yù)期的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐進(jìn)行選擇。該藥物組合物可包含作為載體、賦形劑或稀釋劑的(或者此外，還含有)任何適宜的粘合劑、潤滑劑、懸浮劑、包衣劑、增溶劑。
粘合劑例如包括淀粉、明膠、天然糖比如葡萄糖、無水乳糖、自由流動(dòng)的乳糖、β-乳糖、玉米甜味劑、天然或合成樹膠比如阿拉伯膠、黃芪膠或藻酸鈉、羧甲基纖維素和聚乙二醇。
適宜的潤滑劑例如包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。
在該藥物組合物中還可含有防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及矯味劑。防腐劑例如包括苯甲酸鈉、山梨酸和對羥基苯甲酸酯。還可使用抗氧化劑和懸浮劑。
鹽/酯式1化合物可以以鹽或酯存在，特別是可藥用鹽或酯。
本發(fā)明化合物可藥用鹽包括其適當(dāng)?shù)乃峒映苫驂A鹽。適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上鹽的綜述見于Berge et al，J Pharm Sci，66，1-19(1977)。與各種酸形成鹽，例如與強(qiáng)酸比如礦酸如硫酸、磷酸或鹵酸；與強(qiáng)有機(jī)羧酸比如未取代或取代(如，被鹵素取代)的1至4個(gè)碳原子的烷羧酸比如乙酸；與飽和或不飽和的二羧酸例如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四酞酸(tetraphthalic)；與羥基羧酸例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；與氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸；與苯甲酸；或與有機(jī)磺酸比如未取代或取代(例如，被鹵素)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸比如甲磺酸或?qū)妆交撬嵝纬甥}。
根據(jù)被酯化的官能團(tuán)，可使用有機(jī)酸或醇/氫氧化物形成酯。有機(jī)酸包括羧酸比如未取代或取代(例如，被鹵素)的1至12個(gè)碳原子的烷羧酸比如乙酸；飽和或不飽和的二羧酸例如草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、鄰苯二甲酸或四酞酸；羥基羧酸例如抗壞血酸、羥基乙酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸或檸檬酸；氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或有機(jī)磺酸比如未取代或取代(例如，被鹵素)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸比如甲磺酸或?qū)妆交撬?。適宜的氫氧化物包括無機(jī)氫氧化物比如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁。醇包括未取代或取代(例如，被鹵素)的1-12個(gè)碳原子的烷醇。
對映體/互變異構(gòu)體在本發(fā)明前述所有方面，適當(dāng)?shù)脑?，本發(fā)明包括式1化合物的所有對映體和互變異構(gòu)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將識(shí)別具有光學(xué)性質(zhì)(一個(gè)或多個(gè)手性碳原子)或互變特征的化合物。可通過本領(lǐng)域已知的方法分離/制備相應(yīng)的對映異構(gòu)體和/或互變異構(gòu)體。
立體與幾何異構(gòu)體本發(fā)明的一些化合物可以作為立體異構(gòu)體和/或幾何異構(gòu)體存在，例如他們可以具有一種或多種不對稱和/或幾何中心并由此可存在一種或多種立體異構(gòu)和/或幾何形式。本發(fā)明包括那些抑制劑藥物所有的各立體異構(gòu)體和幾何異構(gòu)體以及其混合物的應(yīng)用。如果所述形式保留適當(dāng)?shù)墓δ芑钚?盡管不必相同的程度)，權(quán)利要求書所用的術(shù)語包括這些形式。
本發(fā)明還包括藥物或其藥學(xué)上可接受鹽的所有適宜的同位素異體。本發(fā)明將藥物或其藥學(xué)上可接受鹽的同位素異體定義為其中至少一個(gè)原子被具有相同原子序數(shù)但在自然界中原子量不同的原子替代的藥物或其鹽?？珊喜⑷胨幬锖推淇伤幱名}的同位素例如包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素比如分別是2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。某些藥物和其可藥用鹽的同位素異體，例如具有放射性同位素比如3H或14C的那些，適用于藥物和/或底物的組織分布研究。特別優(yōu)選氚代(即，3H)和碳-14(即，14C)同位素，因?yàn)樗鼈円子谥苽浜蜋z測。此外，同位素比如氘(即，2H)取代可提供某些治療優(yōu)勢導(dǎo)致更好的代謝穩(wěn)定性，例如提高體內(nèi)半衰期或降低所需劑量并由此在一些情況下優(yōu)選。本發(fā)明藥物的同位素異體通?？赏ㄟ^常規(guī)方法使用適宜試劑的適當(dāng)同位素異體制備。
溶劑合物本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的溶劑合物的應(yīng)用。權(quán)利要求書中所用術(shù)語包括這些形式。
多晶型本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的各種結(jié)晶形式、多晶型和無水/水合形式。在藥學(xué)工業(yè)中眾所周知的是，略微改變純化和/或分離方法，可以從用于合成制備這類化合物的溶劑中分離化合物的任意這類形式。
前藥本發(fā)明進(jìn)一步包括本發(fā)明化合物的前藥形式。這類前藥一般是這樣的式I化合物，其中一個(gè)或多個(gè)適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)已被修飾，以便在對人或哺乳動(dòng)物受試者給藥后可以逆轉(zhuǎn)該修飾。這種逆轉(zhuǎn)作用通常是由天然存在于受試者中的酶進(jìn)行的，不過也有可能將第二種藥物與這種前體藥物一起給藥，目的是進(jìn)行體內(nèi)逆轉(zhuǎn)作用。這類修飾的實(shí)例包括酯(例如任何一種上述那些酯)，其中逆轉(zhuǎn)作用可以由酯酶等實(shí)施。其它這類系統(tǒng)將是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
給藥本發(fā)明的藥物組合物適于經(jīng)口服、直腸、陰道、腸胃外的、肌肉注射、腹膜內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、支氣管內(nèi)、皮下注射、皮內(nèi)、靜脈注射、經(jīng)鼻、口腔或舌下等途徑給藥。
為了口服給藥，具體使用了壓制片、丸劑、片劑、gellules、滴劑和膠囊。優(yōu)選地，這些組合物的每一劑量包含1至250mg且更優(yōu)選10-100mg的活性成分。
其它的給藥形式包括溶液劑或乳劑，其可靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)注射，且其由無菌或可滅菌的溶液制備。本發(fā)明的藥物組合物還可以是栓劑、子宮托、懸浮液、乳劑、洗劑、軟膏劑、乳劑、凝膠劑、噴霧劑、溶液劑或撲粉劑(dusting powders)。
一種透皮給藥的可替代裝置是利用皮膚補(bǔ)片(skin patch)。例如，可將活性成分并入包含聚乙二醇或液體石蠟的含水乳液的乳膏中。還可將活性成分以1至10％重量份的濃度合并入包含白蠟或白色軟石蠟基質(zhì)，以及如果需要時(shí)還同時(shí)包含穩(wěn)定劑和防腐劑的軟膏中。
每一劑量的注射劑型可包含10-1000mg優(yōu)選10-250mg的活性成分。
組合物可以被配制成單元?jiǎng)┬?，也就是含有單元?jiǎng)┝侩x散部分或單元?jiǎng)┝康亩嘀鼗騺唵挝弧?br> 劑量本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在對受試者給藥時(shí)，不需要額外實(shí)驗(yàn)，能夠容易地確定本發(fā)明組合物之一的適當(dāng)劑量。通常，醫(yī)師將確定最適合于個(gè)體患者的實(shí)際劑量，這將取決于許多因素，包括所應(yīng)用的具體化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用長短、年齡、體重、一般健康、性別、飲食、給藥方式和時(shí)間、排泄率、藥物聯(lián)合、特定病情的嚴(yán)重程度以及個(gè)體所經(jīng)受的治療。本文所公開的劑量是一般情況的例證。當(dāng)然可以存在個(gè)別情況，其中更高或更低的劑量范圍也是合理的，也屬于本發(fā)明的范圍。
根據(jù)需要，可以以0.01至30mg/kg體重的劑量，比如0.1至10mg/kg，更優(yōu)選0.1至1mg/kg體重給藥。
在一個(gè)例示性實(shí)施方案中，將向患者給予一劑或多劑的10至150mg/天的劑量。
聯(lián)合在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種或多種化合物與一種或多種其它治療活性藥物聯(lián)合給藥，該其它治療活性藥物例如市場上可購得的現(xiàn)有藥物。在這些情況下，本發(fā)明化合物可以與一種或多種其它抗癌藥連續(xù)、同時(shí)或相繼給藥。
當(dāng)聯(lián)合使用時(shí)，通常的抗癌藥更加有效。特別地，為了避免主要毒性、作用機(jī)理和耐藥性機(jī)理的重疊，聯(lián)合療法是合意的。此外，最好以大多數(shù)藥物的最大耐受劑量，兩次給藥之間的時(shí)間間隔最小進(jìn)行給藥。聯(lián)合化療藥的主要優(yōu)點(diǎn)是，它可以通過生化相互作用促進(jìn)加和或者可能的協(xié)同效果，還可以減少早期腫瘤細(xì)胞耐藥性的出現(xiàn)，后者用單一藥物進(jìn)行初始化療時(shí)將出現(xiàn)應(yīng)答。生化相互作用在選擇藥物聯(lián)合中的用途實(shí)例由下列事實(shí)而得到證明，亞葉酸的給藥將增加5-氟尿嘧啶的活性細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物與其靶胸苷酸合酶的結(jié)合，從而增加其細(xì)胞毒性效果。
在目前癌癥和白血病的治療中使用大量聯(lián)用(combination)。更廣泛的醫(yī)療實(shí)踐評論可以參見由Springer出版、E.E.Vokes和H.M.Golomb編輯的“Oncologic Therapies”。
可以通過將受試化合物與已知或懷疑可用于最初的特定癌癥或源于該癌癥的細(xì)胞系治療的藥物一起而進(jìn)行的生長抑制活性研究，提示出有益的聯(lián)用。這種方法還可以用來確定藥物給藥的順序，即在給藥之前、同時(shí)或之后。這類時(shí)序安排可以是所有在這里鑒別的作用于細(xì)胞周期的藥物的特征。
測定方法本方面另一方面涉及如上定義的本發(fā)明化合物在鑒別可影響一種或多種蛋白激酶活性的其它候選化合物的測定方法中的應(yīng)用。
優(yōu)選地，該測定方法能鑒別可抑制一種或多種CDK酶、aurora激酶、GSK或PLK酶的候選化合物。
更優(yōu)選地，該測定是競爭性結(jié)合測定方法。
優(yōu)選地，候選化合物是通過對本發(fā)明化合物的常規(guī)SAR修飾生成的。
如本文所用，術(shù)語“常規(guī)SAR修飾”是指本領(lǐng)域已知的通過化學(xué)衍生法改變給定化合物的標(biāo)準(zhǔn)方法。
由此，在一方面，所鑒別的化合物可用作開發(fā)其它化合物的模型(例如，模板)。在該測試中所用的化合物可游離于溶液中、固定于固體載體、荷載于細(xì)胞表面上、或定位于細(xì)胞內(nèi)?？梢詫钚韵?，或者該化合物與被測試物之間的結(jié)合復(fù)合物的形成進(jìn)行測試。
本發(fā)明的測定方法可以是篩選，其中測試大量藥物。在一方面中，本發(fā)明的測定方法是高通量篩選。
本發(fā)明還關(guān)注了競爭性藥物篩選測定方法在中和能夠結(jié)合化合物，特別是能夠與測試化合物競爭結(jié)合化合物的抗體中的用途。
另一篩選技術(shù)提供了對底物具有合適的結(jié)合親和力的化合物的高通量篩選(HTS)，該技術(shù)基于WO 84/03564中所具體描述的方法。
據(jù)期望，本發(fā)明的測定方法可適合于小規(guī)模和大規(guī)模篩選測試化合物以及定量分析。
優(yōu)選地，該競爭性結(jié)合測定方法包括在所述蛋白激酶的已知底物存在下，使式1化合物與蛋白激酶接觸，并檢測所述蛋白激酶和所述已知底物之間的相互作用中所出現(xiàn)的任何變化。
本發(fā)明另一方面提供了一種檢測配體對蛋白激酶結(jié)合力的方法，所述方法包括下述步驟(i)在所述蛋白激酶的已知底物存在下，使配體與蛋白激酶接觸；(ii)檢測所述蛋白激酶與所述已知底物之間的相互作用中所出現(xiàn)的任何變化；并且其中所述配體是本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明一方面涉及一種包括下述步驟的方法(a)進(jìn)行上面所述的測定方法；(b)鑒別出能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的一種或多種配體；以及(c)制備一定量的所述一種或多種配體。
本發(fā)明另一方面提供了一種包括下述步驟的方法(a)進(jìn)行上文所述的測定方法(b)鑒別出能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的一種或多種配體；以及(c)制備含有所述一種或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面提供了一種包括下述步驟的方法(a)進(jìn)行上文所述的測定方法；(b)鑒別出能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的一種或多種配體；(c)對所述一種或多種能夠結(jié)合配體結(jié)合區(qū)域的配體進(jìn)行修飾；(d)進(jìn)行上文所述的測定方法；(e)任選制備含有所述一種或多種配體的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及通過上文所述方法鑒別得到的配體。
本發(fā)明再一方面涉及包含通過上文所述方法鑒別出來的配體的藥物組合物。
本發(fā)明另一方面涉及通過上文所述方法鑒別出來的配體在制備用于治療增生性疾病的藥物組合物中的用途。
上述方法可用于篩選用作一種或多種蛋白激酶酶抑制劑的配體。
合成通式1化合物可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法制備。在下面流程

圖1中描述了方便的合成路線。
流程圖1可烯醇化的甲基酮2(或來源于甲基酮的烯醇化物)與活化的烯烴3(其中Z是吸電子基團(tuán)比如CHO、COOR、CONH2、CN、NO2、SOR、SO2R等)的Michael反應(yīng)提供酮4，其Z基團(tuán)轉(zhuǎn)化為1，5-二羰基化合物5中的羧酸酯基團(tuán)(例如，R＝Me)。然后在堿性條件下環(huán)化成環(huán)己烷-1，3-二酮6[16-18]。溴化得到2-溴-環(huán)己烷-1，3-二酮7[19，20]，其隨后與羧酰胺(8，X＝O)、硫代酰胺(8，X＝S)或脒(8，X＝NH)反應(yīng)分別生成5，6-二氫-4H-苯并噁唑-7-酮(9，X＝O)，5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(9，R＝S)和3，5，6，7-四氫-苯并咪唑-4-酮(9，R＝NH)。然后這些化合物可與羰基化合物10(其中X是離去基團(tuán)比如Cl)?；?，3-二羰基化合物11；例如在文獻(xiàn)中已描述了5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮的甲?；?R2＝H)[21]。?；苌?1可與脒[15]或胍13直接縮合?？商娲兀；苌?1首先轉(zhuǎn)化為烯胺酮(enaminones)12[22]，由此可得到4，5-二氫-噁唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(1，X＝O)、4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(1，X＝S)和4，5-二氫-咪唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(1，X＝NH)。脒基化(guanylation)后，根據(jù)1中R1的性質(zhì)可?；?、烷基化或芳基化氨基吡啶的N-H官能團(tuán)。當(dāng)R1是芳基時(shí)，可發(fā)生所述的雜芳基胺的Pd催化的N-芳基化[63]。通過氧化可以得到1的完全芳香化類似物，即結(jié)構(gòu)14的化合物。
本發(fā)明另一方面因此涉及制備式1化合物的方法，所述方法包括下列步驟(i)使式7化合物與式8化合物反應(yīng)形成式9化合物 (ii)將所述的式9化合物轉(zhuǎn)化為式1化合物。
優(yōu)選地，該方法進(jìn)一步包括如下步驟 (i)使式9化合物與式10化合物反應(yīng)形成式11化合物；(ii)將所述的式11化合物轉(zhuǎn)化為式12化合物；(iii)使所述的式12化合物與式13化合物反應(yīng)形成式1a化合物。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法進(jìn)一步包含氧化所述式1a化合物形成式14化合物的步驟。
本發(fā)明進(jìn)一步通過下面的實(shí)施例舉例說明。
實(shí)施例縮寫NMR核磁共振光譜；r.t.室溫；DMSO二甲基亞砜。
本發(fā)明所選擇的化合物示于表2中。
概述化合物和溶劑通過商業(yè)途徑購得且除非另有說明直接使用。THF和Et2O在N2下通過使用二苯甲酮鈉加熱回流進(jìn)行干燥并經(jīng)蒸餾收集。甲苯在N2下通過使用鈉加熱回流進(jìn)行干燥。CH2Cl2在N2下通過使用CaH2加熱回流進(jìn)行干燥。所用的微波發(fā)生器是CEM″Discover″型，具有環(huán)形單模腔設(shè)計(jì)，使得微波輻射集中于樣品試管上。TLC(薄層色譜法)使用鋪有硅膠G60(0.25cm)的玻璃板進(jìn)行。展開后的板經(jīng)空氣干燥并在UV燈(254/365nm)下分析。除非另有說明，使用無水MgSO4作為有機(jī)溶劑的標(biāo)準(zhǔn)干燥劑?？焖僦V法使用Fluorochem硅膠(35-70μm)進(jìn)行。使用Electrothermal 9100毛細(xì)熔點(diǎn)儀測定熔點(diǎn)(mp)，且熔點(diǎn)未校正?？s寫(dec)表示分解點(diǎn)。1H-NMR光譜通過Bruker Avance 300(300.1MHz)或Varian Gemini 2000(300MHz)光譜儀記錄，任何時(shí)候均使用氘代溶劑作為固定并將殘留溶劑作為內(nèi)參照。使用PENDANT序列的13C-NMR譜記錄在Bruker Avance 300(75.5MHz)光譜儀上。所有其它13C-譜使用組合物加1H脫偶合，記錄于Varian Gemini 2000(75.5MHz)光譜儀上。偶合常數(shù)(J)被引證為最接近的0.1Hz。使用如下縮寫s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；qu，五重峰；m，多重峰以及br，寬峰。元素微量分析由Mrs S Williamson，School of Chemistry，Purdie Building，University of St.Andrews，UK.進(jìn)行。所得結(jié)果在計(jì)算值的0.4％之內(nèi)。電噴霧質(zhì)譜(ESI)通過Micromass LCT質(zhì)譜儀記錄，并且被偶聯(lián)于Waters 2975 HPLC上。分析型RP-HPLC使用偶聯(lián)于Dionex P580泵的Dionex ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行。為了分析的目的，使用了Phenomenex column(150×4.60mm，Synergi 4μ hydro-RP 80埃)，保持25℃溫度。使用Chromeleon軟件控制HPLC單元。使用H2O/MeCN系統(tǒng)(包含0.1％CF3COOH)進(jìn)行梯度洗脫，流速為1mL/min。通過色譜圖歸一化方法評價(jià)純度(λ＝254nm)。
2-溴-環(huán)己烷-1，3-二酮 于5℃攪拌1，3-環(huán)己二酮(50g，0.45mol)的CH2Cl2(111mL)溶液。在5-10分鐘內(nèi)逐滴加入溴(18mL，56.3g，0.35mol)的CH2Cl2(17mL)溶液。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)混合物1h。經(jīng)過濾收集所形成的棕色沉淀，用CH2Cl2/甲苯(100mL)洗滌，空氣干燥隨后從H2O中結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物，為淺黃色結(jié)晶(42.6g，50％)mp 167-168℃。
Anal.RP-HPLCtR7.9min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ2.49(t，4H，J 6.1，2×CH2)，1.85(qu，2H，J 6.1，CH2).MS(ESI-)m/z 190.90/188.90(M-H)+.
2-甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮 向2-溴-環(huán)己烷-1，3-二酮(20g，0.105mol)的吡啶(150mL)溶液中加入硫代乙酰胺(7.9g，0.105mol)并于50℃攪拌該混合物。16h后真空除去溶劑。加入10％NaCl水溶液(150mL)，并使用CH2Cl2(4×100mL)萃取產(chǎn)物。有機(jī)萃取物經(jīng)額外的10％NaCl水溶液(2×100mL)洗滌后干燥、過濾并真空濃縮。將得到的黑色粘稠油狀物使用Kugelrohr蒸餾單元得到產(chǎn)物，為黃色油狀物(6.97g，40％)1H-NMR(CDCl3)δ3.02(t，2H，J 6.1，CH2)，2.75(s，3H，CH3)，2.61(t，2H，J 6.1，CH2)，2.21(qu，2H，J 6.1，CH2).13C-NMR(CDCl3)δ192.1，173.3，166.8，130.9，37.8，27.1，23.1，20.0.MS(ESI+)m/z 168.03(M+H)+.
2-氨基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮
將2-溴-環(huán)己烷-1，3-二酮(1.0g，5.2mmol)和硫脲(0.4g，5.2mmol)在無水EtOH(7mL)中的溶液加熱回流3h。冷卻該反應(yīng)混合物，真空濃縮，使用Et2O(20mL)洗滌。將殘留物溶解于H2O(10mL)并逐滴加入6M NH4OH(4mL)水溶液。收集黃色沉淀，干燥并從EtOH中結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色結(jié)晶(0.41g，47％)mp280-282℃。分析RP-HPLCtR7.2min(0-60％MeCN，純度100％)。
Anal.RP-HPLCtR7.2min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ8.10(s，2H，NH2)，2.65(t，2H，J 6.1，CH2)，2.34(t，2H，J 6.1，CH2)，1.97(qu，2H，J 6.1，CH2).
13C NMR(DMSO-d6)δ189.8，173.8，168.5，118.8，37.1，27.0，22.8.MS(ESI-)m/z 166.99(M-H)+.
2-甲基氨基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮 于室溫混合2-溴-環(huán)己烷-1，3-二酮(8.0g，41.9mmol)和甲基硫脲的吡啶(63mL)溶液16h。真空濃縮該反應(yīng)混合物，使用CH2Cl2/10％NaCl水溶液萃取、干燥、過濾，并真空濃縮。使用EtOAc結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色結(jié)晶(3.26g，43％)mp180-182℃。
Anal.RP-HPLCtR8.4min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ7.90(s，1H，NH)，2.99(s，3H，CH3)，2.72(t，2H，J 6.1，CH2)，2.49(t，2H，J 6.1，CH2)，2.10(qu，2H，J 6.1，CH2).13C-NMR(CDCl3)δ191.0，176.6，168.0，120.0，37.5，32.5，27.7，23.2.MS(ESI+)m/z 183.07(M+H)+.
2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑-6-甲醛 向己烷-洗滌的NaH(1.1g，44.8mmol)的干燥Et2O(70mL)中加入干燥MeOH(6.1mL)。當(dāng)釋放H2平息后，加入新鮮蒸餾的甲酸乙酯(7.3mL，6.7g，89.7mmol)，隨后加入2-甲基-5，6-二氫-4H苯并噻唑基-7-酮(3.0g，17.9mmol)的干燥Et2O(12mL)溶液。室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)混合物16h。加入10％HCI水溶液(150mL)并使用EtOAc(5×150mL)萃取產(chǎn)物。干燥合并的有機(jī)萃取物，過濾，真空濃縮得棕色油狀粗產(chǎn)物。經(jīng)快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)純化得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(2.30g，66％)mp107-108℃。
Anal.RP-HPLCtR12.6min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ9.90(s，CHO)，7.20(s，1H，CH)，2.91(t，2H，J 7.1，CH2)，2.67(s，3H，CH3)，2.58(t，2H，J 7.1，CH2).13C-NMR(CDCl3)δ198.6，186.3，174.2，165.7，162.6，131.0，108.4，27.0，24.5，20.7.MS(ESI-)m/z 193.98(M-H)+.
2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮 向2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑-6-甲醛(2.0g，10.2mmol)的干燥甲苯(8.1mL)溶液中加入嗎啉(1.0mL，1.0g，11.3mmol)。該反應(yīng)混合物回流加熱2h。冷卻時(shí)形成棕色沉淀。真空除去溶劑并通過快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)分餾該棕色固體殘留物得到黃色固體，其進(jìn)一步通過從EtOH中結(jié)晶得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色結(jié)晶(2.4g，87％)mp 186-187℃。
Anal.RP-HPLCtR12.7min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ7.50(s，1H，CH)，3.80(t，4H，J 4.6)，3.55(t，4H，J 4.6)，3.00(m，4H，CH2-CH2)，2.80(s，3H，CH3).13C-NMR(CDCl3)δ182.0，171.6，162.3，147.9，133.2，103.3，67.0，51.4，26.7，24.9，20.2.MS(ESI+)m/z 287.05(M+Na)+，265.07(M+H)+.Anal.(C13H16N2O2S)C，H，N.
(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺 將2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑-6-甲醛(200mg，1mmol)、間-硝基-苯基胍硝酸鹽(248mg，1)、NaOH(41mg，1mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)的混合物加熱回流至16h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。通過快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(18mg，5％)mp227-228℃。
Anal.RP-HPLCtR21.9min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ10.00(s，1H，NH)，8.89(t，1H，J 2.3，Ph-H)，8.30(s，1H，Py-H)，7.92(ddd，1H，J 8.3，2.3，0.7，Ph-H)，7.66(ddd，1H，J 8.3，2.3，0.7，Ph-H)，7.44(t，1H，J 8.3，Ph-H)，2.90(m，4H，CH2-CH2)，2.66(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ169.16，159.27，158.42，156.05，155.39，148.04，142.02，129.57，127.56，124.22，117.13，115.16，111.91，24.56，23.06，19.48.MS(ESI-)m/z 337.94(M-H)+.
(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基苯基)-胺 將2-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑-6-甲醛(200mg，1.02mmol)、N-(4-三氟甲基-苯基)-胍硝酸鹽(273mg，1.02mmol)、NaOH(41mg，1.02mmol)和2-甲氧基乙醇(1.25mL)的混合物加熱回流16h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。進(jìn)行快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)后，從EtOAc結(jié)晶得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為白色結(jié)晶狀固體(30mg，8％)mp212-213℃。
Anal.RP-HPLCtR21.8min(10-70％MeCN，純度95％).1H-NMR(CDCl3)δ8.17(s，1H，Py-H)，7.71(d，2H，J 8.4，Ph-H)，7.52(d，2H，J 8.4，Ph-H)，7.16(s，1H，NH)，3.04(t，2H，J 6.6，CH2)，2.94(t，2H，J 6.6，CH2)，2.72(s，3H，CH3).MS(ESI-)m/z 360.95(M-H)+.
3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚 將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(210mg，7.94mmol)、N-(3-羥基-苯基)-胍硝酸鹽(170mg，7.94mmol)、NaOH(32mg，7.94mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)的混合物加熱回流16h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。通過快速柱色譜法(10％MeOHEtOAc)得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(20mg，8％)mp 310℃(dec)。
Anal.RP-HPLCtR10.3min(0-60％MeCN，純度92％).1H-NMR(DMSO-d6)δ9.50(s，1H，OH/NH)，9.28(s，1H，OH/NH)，8.38(s，1H，Py-H)，7.37(t，1H，J 2.3，Ph-H)，7.27(ddd，1H，J 8.3，2.3，0.7，Ph-H)，7.08(t，1H，J 8.3，Ph-H)，6.40(ddd，1H，J 8.3，2.3，0.7，Ph-H)，3.05(m，4H，CH2-CH2)，2.78(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ168.71，159.05，158.88，157.42，155.97，155.20，141.75，128.81，127.83，115.89，109.69，108.35，105.87，24.72，23.09，19.38.MS(ESI+)m/z 311.06(M+H)+.
(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺 將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(200mg，7.6mmol)、N-4-嗎啉-4-基-苯基)-胍硝酸鹽(215mg，7.6mmol)、NaOH(30mg，7.6mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)的混合物加熱回流20h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。進(jìn)行快速柱色譜法(5％MeOHCH2Cl2)后，從EtOAc結(jié)晶得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為暗桔色結(jié)晶狀固體(60mg，21％)mp 236-237℃。
Anal.RP-HPLCtR13.4min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ9.26(s，1H，NH)，8.20(s，1H，Py-H)，7.58(d，2H，J 9.2，Ph-H)，6.84(d，2H，J 9.2，Ph-H)，3.70(t，4H，J 4.8，2×CH2)，2.99(t，4H，J 4.8，2×CH2)，2.90(m，4H，CH2-CH2)，2.66(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ168.99，159.53，159.19，155.75，146.24，133.60，120.14，115.97，115.61，66.52，49.67，25.12，23.45，19.80.MS(ESI+)m/z 380.10(M+H)+.
4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚 將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(200mg，7.6mmol)、N-(4-羥基-苯基)-胍硝酸鹽(163mg，7.6mmol)、NaOH(30mg，7.6mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)于120℃加熱24h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。通過快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(70mg，30％)mp 268-269℃。
Anal.RP-HPLCtR12.4min(10-70％MeCN，純度95％).1H-NMR(DMSO-d6)δ9.28(s，1H，OH/NH)，9.07(s，1H，OH/NH)，8.30(s，1H，Py-H)，7.58(d，2H，J 8.9，Ph-H)，6.75(d，2H，J 8.9，Ph-H)，3.02(m，4H，CH2-CH2)，2.80(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ168.94，159.64，159.13，156.26，155.73，152.35，132.70，120.94，115.44，115.19，25.13，23.45，19.79.MS(ESI+)m/z 311.06(M+H)+.
N，N-二甲基-N′-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-1，4-二胺 將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(119mg，4.5mmol)、N-(4-二甲基氨基-苯基)-胍硝酸鹽(137mg，4.5mmol)、NaOH(18mg，4.5mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)于100℃加熱5h。真空濃縮該反應(yīng)混合物?？焖僦V法(20％EtOAc己烷)得到標(biāo)題產(chǎn)物，為暗黃色固體(140mg，92％)mp 176-177℃。
Anal.RP-HPLCtR11.9min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ9.23(s，1H，NH)，8.28(s，1H，Py-H)，7.60(d，2H，J 9.2，Ph-H)，6.75(d，2H，J 9.2，Ph-H)，3.02(m，4H，CH2-CH2)，2.88(s，6H，NMe2)，2.75(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ168.90，159.67，159.08，155.77，146.32，131.16，120.65，115.25，113.32，41.14，25.15，23.45，19.79.MS(ESI+)m/z 338.10(M+H)+.
(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺
將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(200mg，0.76mmol)、N(6-氯-吡啶-3-基)-胍硝酸鹽(196mg，0.84mmol)、NaOH(34mg，0.84mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)于100℃加熱24h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。通過快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(40mg，16％)mp 252-253℃。
Anal.RP-HPLCtR16.8min(10-70％MeCN，純度92％).1H-NMR(DMSO-d6)δ9.98(s，1H，NH)，8.90(d，1H，J 2.9，Ph-H)，8.44(s，1H，Py-H)，8.29(dd，1H，J 8.7，2.4，Ph-H)，7.50(d，1H，J 8.7，Ph-H)，3.10(m，4H，CH2-CH2)，2.82(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ169.08，159.26，158.47，156.22，155.35，141.23，139.69，137.05，128.55，127.52，123.55，117.05，24.60，23.07，19.39.MS(ESI+)m/z 330.06(M+H)+.
(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺 將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(200mg，0.76mmol)、N-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-胍硝酸鹽(192mg，0.84mmol)、NaOH(34mg，0.84mmol)和2-甲氧基乙醇(2mL)于100℃加熱24h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。通過快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(20mg，8％)mp 210-211℃。
Anal.RP-HPLCtR11.6min(10-70％MeCN，純度93％).1H-NMR(CDCl3)δ8.42(d，1H，J2.4，Ph-H)，8.26(s，1H，Py-H)，8.08(dd，1H，J 9.1，2.9，Ph-H)，7.19(brs，1H，NH)，6.86(d，1H，J 9.1，Ph-H)，4.04(s，3H，OMe)，3.13(m，4H，CH2-CH2)，2.87(s，3H，CH3).13C-NMR(CDCl3)δ169.47，159.97，159.38，159.12，157.10，155.16，137.95，131.90，130.45，128.62，116.48，110.33，53.49，25.29，23.92，19.84.MS(ESI+)m/z 326.08(M+H)+.
甲基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺
在無水條件下向(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺(100mg，0.3mmol)的干燥DMF(2mL)溶液中加入NaH(7.8mg，0.3mmol)。當(dāng)停止冒出H2時(shí)，逐滴加入碘甲烷(22μL，50mg，0.4mmol)并室溫?cái)嚢柙摶旌衔镞^夜。然后經(jīng)真空濃縮并加入H2O(20mL)。產(chǎn)物用CH2Cl2(3×30mL)萃取。干燥合并的萃取物、過濾、真空濃縮。通過快速柱色譜法(10％EtOAc己烷)得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(40mg，38％)mp203-204℃。
Anal.RP-HPLCtR17.1min(10-70％MeCN，純度85％).1H-NMR(CDCl3)δ8.30(t，1H，J 2.3，Ph-H)，8.11(s，1H，Py-H)，7.95(ddd，1H，J 8.2，2.3，1.0，Ph-H)，7.65(ddd，1H，J 8.2，2.3，1.0，Ph-H)，7.44(t，1H，J 8.2，Ph-H)，3.58(s，3H，N-CH3)，2.98(m，4H，CH2-CH2)，2.69(s，3H，CH3).13C-NMR(CDCl3)δ169.86，160.70，159.30，157.05，155.27，148.71，146.74，131.42，129.33，120.81，119.36，116.63，38.18，25.68，24.22，20.17.MS(ESI+)m/z 354.09(M+H)+.
甲基-(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-萃基)-胺 在干燥條件下，將甲基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺(16mg，0.045mmol)和2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)(10.2mg，0.045mmol)在干燥甲苯(2mL)中混合物加熱回流16h。真空蒸發(fā)溶劑并經(jīng)快速柱色譜法(10％EtOAc己烷)純化殘留物，得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(10mg，68％).mp 209-210℃。
Anal.RP-HPLCtR23.4min(10-70％MeCN，純度98％).1H-NMR(CDCl3)δ9.09(s，1H，Py-H)，8.41(t，1H，J 2.3，Ph-H)，8.09(ddd，1H，J 8.2，2.3，1.0，Ph-H)，7.85(d，1H，J 8.7，Ph-H)，7.79(ddd，1H，J 8.2，2.3，1.0，Ph-H)，7.72(d，1H，J 8.7，Ph-H)，7.58(t，1H，J 8.2，Ph-H)，3.78(s，3H，N-CH3)，2.94(s，3H.Me).13C-NMR(CDCl3)δ171.04，161.09，158.53，157.16，148.54，148.04，146.25，131.74，129.31，125.29，121.01，119.85，119.30，116.97，38.39，20.48 missing 1 quat signal.MS(ESI+)m/z 352.08(M+H)+.
(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺
將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(300mg，1.1mmol)、N-苯基-胍硝酸鹽(449mg，2.3mmol)、NaOH(109mg，2.7mmol)和2-甲氧基乙醇(5mL)于100℃加熱8h。真空濃縮該反應(yīng)混合物。進(jìn)行快速色譜法后，從EtOH中結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物，為白色固體(154mg，46％)mp223-224℃。
Anal.RP-HPLCtR17.1min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ8.19(s，1H，Py-H)，7.64(d，2H，J 7.4，Ph-H)，7.33(t，2H，J 7.4，Ph-H)，7.27(brs，1H，NH)，7.02(t，1H，J 7.4，Ph-H)，3.02(m，4H，CH2-CH2)，2.76(s，3H，CH3).13C-NMR(CDCl3)δ169.47，159.20，159.10，157.05，155.22，139.82，128.96，128.84，122.22，118.89，116.57，25.38，24.03，19.93.MS(ESI+)m/z 295.08(M+H)+.
(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺 使用無水條件，將(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺(52mg，0.18mmol)和DDQ(48mg，0.21mmol)在甲苯(10mL)中加熱回流16h。該反應(yīng)混合物經(jīng)稀釋、過濾、真空濃縮。經(jīng)快速色譜法(20％EtOAc己烷)純化殘留物得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色固體(22mg，43％)mp 216℃(dec)。
Anal.RP-HPLCtR15.1min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ10.11(s，1H，NH)，9.38(s，1H，Py-H)，7.98(d，2H，J 7.7，Ph-H)，7.93(d，1H，J 8.7，CH)，7.84(d，1H，J 8.7，CH)，7.36(t，2H，J 7.7，Ph-H)，7.02(t，1H，J 7.7，Ph-H)，2.91(s，3H，CH3).MS(ESI+)m/z 293.07(M+H)+.
N′-(6-二甲基氨基亞甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑基-2-基)-N，N-二甲基-甲酰胺
在微波輻射下(300W，150℃)，加熱2-氨基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(0.5g，3mmol)和N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙縮醛(1.96mL，1.76g，14.8mmol)在EtOH(2mL)中的混合物30分鐘。真空濃縮該混合物后經(jīng)快速色譜法(50％EtOAc己烷)純化得到標(biāo)題產(chǎn)物，為棕褐色的固體(0.49g，59％)mp185-186℃。
Anal.RP-HPLCtR9.3min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ8.23(s，1H，CH)，7.44(s，1H，CH)，3.13(s，3H，CH3)，3.11(s，3H，CH3)，3.08(s，6H，N(CH3)2)，3.00(t，2H，J 6.6，CH2)，2.83(t，2H，J 6.6，CH2).MS(ESI+)m/z 279.15(M+H)+.
N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺 在微波輻射下(300W，100℃)，加熱N’-(6-二甲基氨基亞甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑基-2-基)-N，N-二甲基-甲酰胺(200mg，0.72mmol)、N-苯基-胍硝酸鹽(142mg，0.72mmol)、NaOH(57mg，1.44mmol)和2-甲氧基乙醇(4mL)的混合物30分鐘。真空濃縮該混合物后經(jīng)快速色譜法(20％EtOAc己烷)純化得到標(biāo)題產(chǎn)物，為暗黃色的固體(16mg，8％)mp240℃(dec)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ9.42(s，1H，NH)，8.23(s，1H，Py-H)，7.77(d，2H，J 7.7，Ph-H)，7.26(t，2H，J 7.7，Ph-H)，6.91(t，1H，J 7.2，Ph-H)，2.93(s，4H，CH2-CH2).MS(ESI+)m/z 296.07(M+H)+.
N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺
將N’-(6-二甲基氨基亞甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氫-苯并噻唑基-2-基)-N，N-二甲基-甲酰胺(188mg，0.68mmol)、間-硝基-苯基胍硝酸鹽(328mg，1.35mmol)、NaOH(54mg，1.35mmol)和2-甲氧基乙醇(5mL)的混合加熱回流24h。真空濃縮該混合物后經(jīng)快速色譜法(20％EtOAc己烷)純化得到標(biāo)題產(chǎn)物，為暗黃色的固體(25mg，11％)mp 320℃(dec)。
Anal.RP-HPLCtR14.7min(0-60％MeCN，純度100％).
1H-NMR(DMSO-d6)δ9.86(s，1H，NH)，8.99(t，1H，J 2.3，Ph-H)，8.14(s，1H，Py-H)，8.00(ddd，1H，J 8.2，2.3，0.7，Ph-H)，7.86(brs，2H，NH2)，7.73(ddd，1H，J 8.2，2.3，0.7，Ph-H)，7.51(t，1H，J 8.2，Ph-H)，2.82(m，4H，CH2-CH2).13C-NMR(DMSO-d6)δ171.80，159.94，158.36，157.39，152.89，148.11，142.40，129.49，124.08，115.88，114.81，114.59，111.77，25.22，23.02.MS(ESI+)m/z 340.94(M+H)+.
2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺 將2-甲基-6-嗎啉-4-基亞甲基-5，6-二氫-4H-苯并噻唑基-7-酮(2.24g，8.47mol)、胍鹽酸鹽(0.89g，9.32mol)和NaOH(0.37g，9.32mol)在EtOH(150mL)中的混合物加熱回流4h。真空濃縮該混合物。經(jīng)快速色譜法(50％EtOAc己烷)純化得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色的固體(1.66g，90％)mp241-243℃。
Anal.RP-HPLCtR8.7min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ8.06(s，1H，Py-H)，5.01(brs，2H，NH2)，2.99(m，4H，CH2-CH2)，2.76(s，3H，CH3).MS(ESI+)m/z 219.02(M+H)+.
N-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯甲酰胺
向2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(0.2g，0.92mmol)的吡啶(7mL)中加入苯甲酰氯(117μL，142mg，1mmol)。室溫?cái)嚢柙摶旌衔?h。加入水(100mL)并將產(chǎn)物萃取入EtOAc(3×50mL)。合并有機(jī)萃取物、干燥、過濾并真空濃縮?？焖僦V法(50％EtOAc己烷)后從EtOH中結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色結(jié)晶(173mg，59％)mp 229-231℃。
Anal.RP-HPLCtR13.5min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ8.59(s，1H，NH)，8.44(s，1H，Py-H)，7.95(m，2H，Ph-H)，7.54(m，3H，Ph-H)，3.09(m，4H，CH2-CH2)，2.77(s，3H，CH3).13C-NMR(CDCl3)δ170.70，165.50，160.05，158.04，157.02，155.77，134.89，132.66，129.15，128.92，127.89，121.44，25.39，24.50，20.31.MS(ESI+)m/z 323.05(M+H)+.Anal.(C17H14N4OS)C，H，N.
芐基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺 向冷卻至-78℃的2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(100mg，0.46mmol)的干燥THF(10mL)中加入LiHMDS(458μL，0.46mmol)。攪拌該混合物15分鐘后加入溴芐(65μL，94mg，0.55mmol)。于攪拌該溶液并允許在16h內(nèi)升至室溫。加入氯化銨溶液(100mL)并使用CH2Cl2(3×50mL)萃取產(chǎn)物。合并有機(jī)萃取物、干燥、過濾并真空濃縮?？焖僦V法(20％EtOAc己烷)后從EtOH中結(jié)晶得到標(biāo)題產(chǎn)物，為桔色結(jié)晶(28mg，20％)mp152-154℃。
1H-NMR(CDCl3)δ8.07(s，1H，Py-H)，7.40-7.25(m，5H，Ph-H)，5.47(brs，1H，NH)，4.64(d，2H，J 5.8，CH2)，2.98(m，4H，CH2-CH2)，2.75(s，3H，CH3).MS(ESI+)m/z309.11(M+H)+.Anal.(C17H16N4S)C，H，N.
(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-氨基甲酸丁-3-烯酯 向2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(100mg，0.46mmol)的吡啶(3mL)中加入3-丁烯基氯甲酸酯(68μL，74mg，0.55mmol)。將混合物在室溫中攪拌16h。加入氯化銨(50mL)并使用CH2Cl2(3×50mL)萃取產(chǎn)物。合并有機(jī)萃取物、干燥、過濾并真空濃縮得到黃色固體。從EtOH中結(jié)晶得到純的標(biāo)題產(chǎn)物，為黃色結(jié)晶(122mg，84％)mp204℃(dec)。
Anal.RP-HPLCtR14.1min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(CDCl3)δ8.36(s，1H，Py-H)，7.49(brs，1H，NH)，5.90-5.75(m，1H，CH)，5.19-5.07(m，2H，CH2)，4.27(t，2H，J 6.6，CH2)，3.06(m，4H，CH2-CH2)，2.77(s，3H，CH3)，2.45(m，2H，CH2).MS(ESI+)m/z 339.00(M+Na)+.
N-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯磺酰胺 無水條件下，將吡啶(5mL)加入到2-甲基-4，5-二氫噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺(148mg，0.68mmol)中。于60℃攪拌該混合物1h后加入苯磺酰氯(121μL，168mg，0.95mmol)。16h后冷卻該混合物并蒸發(fā)至干。通過快速柱色譜法(20％EtOAc己烷)得到標(biāo)題化合物，為棕褐色固體(86mg，35％)mp265℃(dec)。
Anal.RP-HPLCtR15.5min(0-60％MeCN，純度100％).1H-NMR(DMSO-d6)δ8.25(s，1H，Py-H)，8.03-7.98(m，2H，Ph-H)，7.62-7.55(m，3H，Ph-H)，2.92(m，4H，CH2-CH2)，2.73(s，3H，CH3).13C-NMR(DMSO-d6)δ170.15，160.04，156.92，155.66，153.95，140.76，132.51，128.60，127.70，126.97，118.96，24.35，22.94，19.51.MS(ESI+)m/z 380.97(M+Na)+.
生物活性在如前述的對于人腫瘤細(xì)胞系(72-h MTT測定)細(xì)胞周期蛋白-CDK激酶測定和細(xì)胞毒測定中測試了化合物[9]。結(jié)果概述于下表1中。
本發(fā)明進(jìn)行各種修飾和變型對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，只要其沒有偏離本發(fā)明范圍和主旨。盡管結(jié)合具體優(yōu)選的實(shí)施方案對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但是應(yīng)該理解的是，本發(fā)明并不僅僅限于這些具體的實(shí)施方案。實(shí)際上，為了完成本發(fā)明而對所述方案進(jìn)行于相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的各種變型也是被包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)的。
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表1生物活性概要
表2本發(fā)明選擇的化合物


權(quán)利要求
1.式I化合物或其可藥用鹽 其中X是S、O或NH；“a”是單鍵；或“a”是雙鍵以及R3和R4之一以及R5和R6之一不存在；R1是H；或選自烷基、環(huán)烷基、雜芳基、芳烷基、CO-烷基、SO2-烷基、CO2R13和芳基，各基團(tuán)任選包含一個(gè)或多個(gè)雜原子，且任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代；R2是H、R8或任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的烷基；R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、R8、烷基和烯基，其中所述烷基和烯基任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代；或R3和R4，和/或R5和R6一起代表＝O；R7是H、R8、NH(CH2)nR9、CO(CH2)nR9、NHCO(CH2)nR9、O(CH2)nR9、烷基或苯基，各基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)所取代；R8是OR10、NR10R11、鹵素、CF3、NO2、COR10、CN、COOR10、CONR10R11、SO2R10或SO2NR10R11；R9是飽和或不飽和的5-或6-員環(huán)基團(tuán)，其任選包含一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，并任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代；R10、R11、R12和R13各自獨(dú)立是H或烴基；以及n是0、1、2或3。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X是S。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中R10和R11各自獨(dú)立是H或烷基；以及R13是烷基或烯基。
4.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R1是H；或選自CO2R13、C1-C12烷基、C3-C12環(huán)烷基、C6-C12芳基或C3-12雜芳基、(C1-C12烷基)-(C6-C12芳基)、SO2-(C6-C12芳基)和CO-(C6-C12芳基)，其中所述烷基、環(huán)烷基、雜芳基和芳基任選包含一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自N、O或S的雜原子并任選被一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代；R2是H、R8或任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的C1-C3烷基；R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、R8、任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的C1-C3烷基和任選被一個(gè)或多個(gè)R8基團(tuán)取代的C2-C3烯基；R7是H、R8、苯基、NH(CH2)nR9、CO(CH2)nR9、NHCO(CH2)nR9、O(CH2)nR9或任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的基團(tuán)取代的C1-C6烷基。
5.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R1是H；或選自苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基、CO-苯基、CH2-苯基、SO2-苯基、CO2-烷基和CO2-烯基，各基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)選自R8和R9的取代基取代；R2、R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立是H或任選被一個(gè)或多個(gè)羥基取代的C1-C3烷基；以及R7是C1-C6烷基或R8；R8是OH、OMe、OEt、OiPr、NH2、NHMe、NMe2、NHEt，、NH1Pr、CF3、F、C、Br、I、NO2、COMe、COEt、CO1Pr、CN、COOH、COOMe、CONH2、CONHMe、CONMe2、SO2Me或SO2NH2。
6.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R8是OH、OMe、OEt、OiPr、NH2、NHMe、NMe2、NHEt、NHiPr、CF3或NO2；以及R9是嗎啉代。
7.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R1是H；或選自苯基、CO-苯基、SO2-苯基、CH2-苯基和CO2-CH2CH2CH＝CH，各基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)選自NO2、CF3、OH、嗎啉代和NMe2的取代基取代；R2是H；R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立選自H、CH3、CH2OH和CH2CH2OH；以及R7選自CH3、NH2、NHCH3、OCH3和OCH2CH3。
8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其中R1是H；或是任選在3-或4-位被選自NO2、CF3、OH、嗎啉代和NMe2的取代基取代的苯基；或者R1是CO-苯基、CH2-苯基、SO2-苯基或CO2-CH2CH2CH＝CH；R2是H；R3、R4、R5和R6均是H；以及R7是NH2或CH3。
9.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其選自(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基-苯基)-胺；3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉4-基-苯基)-胺；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；N，N-二甲基-N′-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺；(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；甲基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；甲基-(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基胺；N-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯甲酰胺；芐基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-氨基甲酸丁-3-烯基酯；以及N-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯磺酰胺。
10.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其選自下列化合物(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-三氟甲基-苯基)-胺；3-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；4-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基氨基)-苯酚；N，N-二甲基-N’-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯-1，4-二胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(4-嗎啉-4-基-苯基)-胺；(6-甲氧基-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；(6-氯-吡啶-3-基)-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-胺；甲基-(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-(3-硝基-苯基)-胺；(2-甲基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；(2-甲基-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-8-基)-苯基-胺；N8-苯基-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺；以及N8-(3-硝基-苯基)-4，5-二氫-噻唑并[4，5-h]喹唑啉-2，8-二胺。
11.一種藥物組合物，包含混合有可藥用稀釋劑、賦形劑或載體的根據(jù)前述任一權(quán)利要求的化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在制備治療增生性病癥的藥物中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中增生性病癥是癌癥或白血病。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中增生性病癥是腎小球腎炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬或慢性阻塞性肺病。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在制備治療病毒病癥的藥物中的用途。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中病毒病癥選自人巨細(xì)胞病毒(HCMV)、1型單純皰疹病毒(HSV-1)、1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)和水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)。
17.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在制備治療CNS病癥的藥物中的用途。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的用途，其中CNS病癥是阿爾茨海默病或雙相性精神障礙。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在制備治療脫發(fā)的藥物中的用途。
20.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在制備治療中風(fēng)的藥物中的用途。
21.根據(jù)權(quán)利要求12至20任一項(xiàng)的用途，其中式1化合物以足以抑制至少一種PLK酶的量給藥。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的用途，其中PLK酶是PLK1。
23.根據(jù)權(quán)利要求12至20的用途，其中式1化合物以足以抑制至少一種CDK酶的量給藥。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中CDK酶是CDK1、CDK2、CDK3、CDK4、CDK6、CDK7、CDK8和/或CDK9。
25.根據(jù)權(quán)利要求12至20任一項(xiàng)的用途，其中式1化合物以足以抑制aurora激酶的量給藥。
26.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的用途，其中糖尿病是II型糖尿病。
28.根據(jù)權(quán)利要求26或27任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中式1化合物以足以抑制GSK的量給藥。
29.根據(jù)權(quán)利要求26的用途，其中式1化合物以足以抑制GSK3β的量給藥。
30.一種制備如權(quán)利要求1中定義的式1化合物的方法，所述方法包括如下步驟(i)使式7化合物與式8化合物反應(yīng)形成式9化合物 (iii)將所述式9化合物轉(zhuǎn)化為式1化合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其進(jìn)一步包括如下步驟 (i)使所述式9化合物與式10化合物反應(yīng)以形成式11化合物；(ii)將所述式11化合物轉(zhuǎn)化為式12化合物；(iii)使所述式12化合物與式13化合物反應(yīng)以形成式1a化合物。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的方法，其進(jìn)一步包含氧化所述式1a化合物以形成式14化合物的步驟
33.根據(jù)權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的化合物在鑒定可抑制一種或多種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶、aurora激酶、GSK和PLK酶的其它候選化合物的測定法中的用途。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的用途，其中所述測定法是競爭性結(jié)合測定法。
全文摘要
式1化合物或其可藥用鹽，其中X是S、O或NH；“a”是單鍵；或“a”是雙鍵以及R
文檔編號(hào)C07D413/04GK1849325SQ200480025728
公開日2006年10月18日 申請日期2004年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月8日
發(fā)明者坎貝爾·麥金尼斯, 馬克·托馬斯, 王淑東, 尼爾·麥金泰爾, 尼古拉斯·韋斯特伍德, 彼得·費(fèi)希爾 申請人:西克拉塞爾有限公司