專利名稱：Trp－p8活性化合物和治病性治療方法
背景技術(shù)：
施加至皮膚上時(shí)產(chǎn)生生理上的寒冷感的化合物是已知的，例如參見(jiàn)“New Compounds with the Menthol Cooling Effect，”H.R.Watson，et al.，J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200。
Wei，E.T.，et al.，J.Pharm.Pharmacol，1983，35(2)，110-112描述了一種因其產(chǎn)生寒冷感的性能而命名為“icilin”的化合物(也稱作AG-3-5)或3-(2-羥苯基)-6-(3-硝基苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶-2-酮(3-(2-Hydroxy-phenyl)-6-(3-nitro-phenyl)-3，4-dihydro-1H-pyrimidin-2-one)，其通式如下 近來(lái)已經(jīng)報(bào)道了其他具有冷卻作用的化合物，參見(jiàn)H.Ottinger，et al.，J.Agric.Food Chem.，2001，49，5383-5390。
美國(guó)專利No.4,150,052公開(kāi)了例如具有通式IIa3-1的薄荷烷甲酰胺(menthene carboxamide)的化合物 據(jù)報(bào)道，該化合物對(duì)皮膚具有生理冷卻作用。
美國(guó)專利No.4,070,496公開(kāi)了具體的氧化膦(R1R2R3P＝O)化合物及其組合物，據(jù)報(bào)道，它們對(duì)皮膚具有生理冷卻作用。
美國(guó)專利No.3,821,221公開(kāi)了具體的四氫嘧啶-2-酮，據(jù)報(bào)道，其具有作為鎮(zhèn)靜劑或興奮劑的中樞神經(jīng)活性。
近來(lái)，已經(jīng)顯示特定TRP受體在熱感覺(jué)(thermosensation)中具有作用，參見(jiàn)D.D.McKerny，et al.，“Identification of a Cold Receptor Reveals a GeneralRole for TRP Channels in Thermosensation，”Nature，2002，Mar 7；416(6876)52-8。對(duì)于近來(lái)關(guān)于“The TRP Ton Channel Family，”的綜述，參見(jiàn)D.E.Clapham，et al.，Nature Reviews，Neuroscience，2001，2，387-396<www.nature.com/reviews/neuro>。Okazawa et al Neuroscience letters (2004Apr 8)，359(1-2)33-6；Nealen et al Journal of neurophysiology(2003 Jul)，90(1)515-20；Thut et al.，Neuroscience(2003)，119(4)1071-83。
通過(guò)篩選前列腺特異性的提取的(subtracted)cDNA庫(kù)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了基因Trp-p8。預(yù)知蛋白具有與Ca2+通道蛋白的瞬時(shí)感受器電位(Trp)家族顯著的同源性。Northern印跡分析表明，正常人組織內(nèi)的Trp-p8表達(dá)大多限于前列腺上皮細(xì)胞。原位雜交分析表明，Trp-p8 mRNA表達(dá)在正常前列腺組織中處于中等水平，在前列腺癌中表現(xiàn)出升高。Trp-p8 mRNA還在胸腺、結(jié)腸、肺和皮膚來(lái)源的許多非前列腺原發(fā)性腫瘤中表達(dá)，而在相應(yīng)的正常人組織中幾乎無(wú)法檢測(cè)到或沒(méi)有檢測(cè)到編碼Trp-p8的轉(zhuǎn)錄物(Tsavaler，et al CancerResearch(2001)，61(9)3760-3769)。
前列腺癌(PCa)的免疫療法主要依賴于存在于高百分比的前列腺腫瘤中的合適的靶抗原的鑒定。假定的鈣通道蛋白Trp-p8與Trp-p 8mRNA的表達(dá)損失以及明顯更短時(shí)間的PSA無(wú)復(fù)發(fā)存活相關(guān)。Trp-p8的鑒定與前列腺癌的結(jié)果相關(guān)，表明該受體在前列腺致癌作用中具有整體(integral)作用。已經(jīng)報(bào)道了來(lái)自前列腺特異性的蛋白瞬時(shí)感受器電位-p8(Trp-p8)的免疫源性肽，其被來(lái)自PCa患者的細(xì)胞毒素T淋巴細(xì)胞識(shí)別(Kiessling，et al(2003)Prostate56(4)270-279；Henshall，et al Cancer Research(2003)，63(14)4196-4203；Fuessel，et al International Journal of Oncology(2003)，23(1)221-228；US2003108963 A1)。鑒定在腫瘤、增生等疾病或病癥的治療中有效的治療劑仍然是重要的研究對(duì)象。近來(lái)的工作表明，與特定抗體制劑組合的特定治療劑能夠有效治療血管生成相關(guān)的疾病等疾病或病癥，例如參見(jiàn)美國(guó)專利No.6,582,959。
目前需要可用于治療與調(diào)節(jié)Trp-p8受體相關(guān)的疾病和病癥的治療劑和方法。還需要對(duì)癌細(xì)胞具有特異性和選擇性且對(duì)健康細(xì)胞具有低細(xì)胞毒性的治療劑和處理方法。還需要與其他化學(xué)治療劑(包括例如抗體制劑)組合的治療劑及其組合治療方法，所述治療劑和處理方法可以用于治療與調(diào)節(jié)Trp-p8受體相關(guān)的疾病和病癥。

發(fā)明內(nèi)容
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，包括一些已知能夠產(chǎn)生生理寒冷感(“致冷性”)的具體化合物表現(xiàn)出有用的生物活性，例如抗腫瘤活性，所述化合物例如是上面提到的四氫嘧啶-2-酮、氧化膦(phosphine oxide)、薄荷烷甲酰胺化合物(methanecarboxamide compound)、烷基取代的烷基酰胺化合物以及α-酮烯胺。
因此，本公開(kāi)在示例性實(shí)施方案中提供了能夠活化Trp-p8受體的化合物。在實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了化合物和處理方法，其導(dǎo)致流入癌細(xì)胞的鈣離子增加(即，“流量活化型”或“流量促進(jìn)型”化合物)。在實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供了化合物、藥物組合物以及處理方法，其通過(guò)引起細(xì)胞凋亡而抑制或殺傷癌細(xì)胞。
在實(shí)施方案中，本公開(kāi)還提供了包含本公開(kāi)的化合物和可藥用賦形劑的藥物組合物(該組合物優(yōu)選包含治療有效量的所述化合物或鹽)；用于治療腫瘤的藥物組合物，其包含本公開(kāi)的化合物或其組合；或者其可藥用鹽；以及可藥用載體。
治療哺乳動(dòng)物(例如人)中的疾病或病癥的方法，其中涉及Trp-p8受體且需要調(diào)節(jié)受體功能，該方法包括給藥調(diào)節(jié)有效量的本公開(kāi)的化合物；治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的疾病或Trp-p8受體相關(guān)的疾病(例如，腫瘤)的方法，包括給藥治療有效量的本公開(kāi)的化合物；用于醫(yī)學(xué)診斷或治療(例如，治療或預(yù)防Trp-p8受體相關(guān)疾病或病癥，例如腫瘤)的本公開(kāi)的化合物；本公開(kāi)的化合物在制備可用于治療或預(yù)防疾病或Trp-p8受體相關(guān)的疾病(例如，治療或預(yù)防Trp-p8受體相關(guān)的疾病或病癥，例如腫瘤)的藥物中的用途；治療癌癥例如腫瘤的方法，包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物給藥有效量的本公開(kāi)的化合物；
調(diào)節(jié)Trp-p8受體功能的方法，包括給藥調(diào)節(jié)有效量的本公開(kāi)的化合物；以及調(diào)節(jié)Trp-p8受體功能的方法，包括使Trp-p8受體接觸調(diào)節(jié)有效量的本公開(kāi)的化合物。
發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，本公開(kāi)的具體化合物(例如已知能夠產(chǎn)生生理上的寒冷感(“cool-genic”)的這些化合物和結(jié)構(gòu)上相關(guān)的化合物)在與其他化學(xué)治療劑(包括例如抗體)組合使用時(shí)具有有用的生物活性，例如抗腫瘤活性，所述化合物例如是上面提到的四氫嘧啶-2-酮、氧化膦、薄荷烷甲酰胺化合物、烷基取代的烷基酰胺化合物以及α-酮烯胺。
因此，本公開(kāi)在實(shí)施方案中提供本公開(kāi)的化合物(其能夠激活Trp-p8受體)和其他化學(xué)治療劑(包括例如抗體)的組合治療劑。在實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供能夠有效治療癌細(xì)胞的組合治療劑。在實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供組合治療劑及其治療方法，其能夠例如通過(guò)引起細(xì)胞凋亡、抑制血管生成或引起細(xì)胞凋亡和抑制血管生成而有效抑制或殺傷癌細(xì)胞。
在實(shí)施方案中，本公開(kāi)還提供包含與抗體和可藥用載體組合的本公開(kāi)的化合物的組合物；藥物組合物，包含本公開(kāi)的化合物和抗體的治療組合以及可藥用賦形劑(該組合物優(yōu)選包含治療有效量的所述化合物或鹽以及治療有效量的至少一種其他化學(xué)治療劑，例如，抗血管生成抗體)；用于治療腫瘤的藥物組合物，其包括有效量的本公開(kāi)的化合物或其可藥用鹽；其與有效抗腫瘤量的至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)和可藥用載體組合；治療哺乳動(dòng)物(例如人)中的疾病或病癥的方法，其中涉及Trp-p8受體(例如，其中所述疾病或病癥的特征在于過(guò)度表達(dá)Trp-p8受體)且需要調(diào)節(jié)受體功能，該方法包括聯(lián)用給藥調(diào)節(jié)有效量的本公開(kāi)的化合物與有效抗癌量的至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)；治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的疾病或Trp-p8受體相關(guān)的疾病(例如，腫瘤)的方法，包括給藥治療有效量的本公開(kāi)的化合物和至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)的組合；與至少一種其他化學(xué)治療劑(例如有效量的抗血管生成抗體)組合的本公開(kāi)的化合物，用于藥學(xué)診斷或治療(例如，治療或預(yù)防Trp-p8受體相關(guān)疾病或病癥，例如腫瘤)；與有效量的至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)組合的本公開(kāi)的化合物在制備可用于治療或預(yù)防疾病或Trp-p8受體相關(guān)的疾病(例如，治療或預(yù)防Trp-p8受體相關(guān)的疾病或病癥，例如腫瘤)的藥物中的用途；治療癌癥例如腫瘤的方法，包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物給藥與有效量的至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)組合的、有效量的本公開(kāi)的化合物；調(diào)節(jié)Trp-p8受體功能的方法，包括與有效量的至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)聯(lián)合給藥調(diào)節(jié)有效量的本公開(kāi)的化合物；以及調(diào)節(jié)Trp-p8受體功能的方法，包括使Trp-p8受體接觸與有效量的至少一種其他化學(xué)治療劑(例如抗血管生成抗體)組合的、調(diào)節(jié)有效量的本公開(kāi)的化合物。
發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，下面描述的特定的其他化合物例如特定的薄荷烷甲酰胺化合物的特征在于，它們還表現(xiàn)出有用的生物活性，例如殺傷細(xì)胞的抗腫瘤活性。
因此，在實(shí)施方案中，本公開(kāi)還可提供了具有以下通式IIa的化合物 其中R1是H或(C1-C6)烷基；R2是苯基或具有以下通式(-PhR3R4R5R6R7)的取代苯基 其中R3、R4、R6和R7各自獨(dú)立地是-H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基或鹵素；
R5是鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷氧基、-C(＝O)(C1-C6)烷基或(C1-C7)烷?；换騌5是-NR8R9，其中R8和R9各自獨(dú)立地是-H、(C1-C6)烷基，或者R8和R9與相連的氮一起形成嗎啉代(morpholino)、吡咯烷酮(pyrrolidino)、哌啶基(piperzino)、哌啶嗪基(piperzino)、吲哚滿基(indolino)、苯并咪唑啉基(benzimidazolino)、氮雜環(huán)丁烷基(azetidino)、吖丙啶基(aziridino)、吖庚因基(azepino)、1，4-噁嗪基(oxazino)或硫代嗎啉代環(huán)(thiomorpholino ring)；或R4和R5與相連的苯基一起形成具有4-7個(gè)碳原子的環(huán)，該環(huán)具有1-3的不飽和度；以及立體異構(gòu)形式，立體異構(gòu)形式的混合物；或其可藥用鹽；條件是當(dāng)-PhR3R4R5R6R7的R3、R4、R6和R7是-H時(shí)，R5不是-CH3、-OCH3、-OH、-F，或-NO2以及條件是R2不是3-羥基-4-甲基苯基；且條件是R2不是2-羥基萘基或吡啶基。
在實(shí)施方案中，本公開(kāi)還提供具有上述通式IIa的化合物，其特征在于，該化合物可以有效殺傷表達(dá)TRP-p8的細(xì)胞，但是表達(dá)細(xì)胞的鈣離子流量不必因所述化合物的存在而發(fā)生實(shí)質(zhì)上的變化。
在實(shí)施方案中，本公開(kāi)還提供殺傷哺乳動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)Trp-p8的靶細(xì)胞但不會(huì)實(shí)質(zhì)上改變哺乳動(dòng)物的靶細(xì)胞(例如腫瘤)的鈣流量特性的方法，該方法包括給藥治療有效量的具有通式IIa的本公開(kāi)的化合物；治療哺乳動(dòng)物(例如人)中的疾病或病癥的方法，包括給藥治療有效量的具有通式IIa的本公開(kāi)的化合物，該化合物對(duì)Trp-p8受體是細(xì)胞毒性的且增加鈣離子流量；治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的疾病或Trp-p8受體相關(guān)的疾病(例如腫瘤)的方法，其包括給藥治療有效量的具有通式IIa的本公開(kāi)的化合物，該化合物對(duì)Trp-p8受體是細(xì)胞毒性的；以及任何上述殺傷細(xì)胞、治療疾病或病癥，或者治療或預(yù)防疾病的方法都包括聯(lián)合給藥治療有效量的本公開(kāi)的化合物與本公開(kāi)的其他化合物、抗血管生成抗體或其混合物。
這里闡述這些和其他實(shí)施方案。


圖1A-D示出與不表達(dá)Trp-p8的人細(xì)胞的相對(duì)不敏感性相比，本公開(kāi)的所選致冷性化合物在殺傷表達(dá)Trp-p8的人細(xì)胞中的有效性。
圖2示出與不表達(dá)Trp-p8的對(duì)照細(xì)胞系(PC3-Neo)相比，表達(dá)Trp-p8的克隆的癌細(xì)胞系(PC3/Trp-p8)的相對(duì)生長(zhǎng)速率。
具體實(shí)施例方式
本公開(kāi)提供上述藥物組合物和治療方法。本公開(kāi)還提供上述具有通式IIa的本公開(kāi)的化合物、包含通式IIa的本公開(kāi)的化合物的藥物組合物，以及使用其進(jìn)行治療的方法，所述化合物和藥物組合物對(duì)Trp-p8表達(dá)細(xì)胞是細(xì)胞毒性的。
致冷性化合物的實(shí)例是，例如，具有通式(I-XIII)的化合物 其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基、Het或芳基，或如美國(guó)專利No.3,821,221所公開(kāi)的； 其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，或者如美國(guó)專利No.4,150,052和J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200中所公開(kāi)的；
其中R1、R2和R3各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，或者如J Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200(以及其中引用的文獻(xiàn)，例如參考文獻(xiàn)1)中所公開(kāi)的； 其中R1、R2和R3各自獨(dú)立地是直鏈或支化的烷基或環(huán)烷基，或者如美國(guó)專利No.4,070,496中所公開(kāi)的； 其中R3是-OH，-S(O)R1、-P(＝O)R1R2、-CO2H、-C(＝O)NH2、-OC(＝O)-CH(OH)CH3、-C(O)OC～H2～-OH，其中n是1-4、-NR1-C(＝O)NR1R2-SO2R1、-SO2NR1R2、-SONR1R2，且其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，且R4是H，或者R3和R4與相連的碳原子一起是五元縮酮環(huán)，其任選具有通式為-OCH2-CH(CH2-OH)-O-的羥甲基取代基，或者如J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200中所公開(kāi)的；選自VI組的(-X)取代的環(huán)狀或支化烴的核
其中X是N-烷基甲酰胺、-C(＝O)NR1R2，其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，或者R1和R2與相連的氮原子一起是5-或6-元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)環(huán)，其任選被氧(-O-)環(huán)雜原子取代，或者如J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200中所公開(kāi)的； 其中X是N-烷基甲酰胺、-C(＝O)NHR1，其中R1是烷基或取代的烷基，例如在-C(＝O)NHEt或-C(＝O)NHCH2CO2Et中；或者是烷基砜，例如在-SO2Bt中，或者如J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200中所公開(kāi)的；
烷基取代的脲化合物，例如，具有通式VIII 或者如J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200中所公開(kāi)的； 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或者R1和R2與相連的氮原子一起是5-或6-元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)，其任選被氧(-O-)環(huán)雜原子(例如嗎啉代環(huán))取代，且該環(huán)可以任選被α-CO2H或α-CO2CH3取代基取代，以及R3、R4和R5各自獨(dú)立地是H或烷基，或者如J.Agric.Food Chem.，2001，49，5383-5390中所公開(kāi)的； 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或者R1和R2與相連的氮原子一起是5-或6-元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)環(huán)，R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立地是H或烷基，或者如J.Agric.Food Chem.，2001，49，5383-5390中所公開(kāi)的； 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或R1和R2與相連的氮原子一起是5-或6-元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)環(huán)，且R3和R4各自獨(dú)立地是H或烷基，或者如J.Agric.Food Chem.，2001，49，5383-5390中公開(kāi)的； 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或R1和R2一起形成5-或6-元飽和或不飽和環(huán)，以及R3和R4各自獨(dú)立地是H或烷基，或者如J.Agric.Food Chem.，2001，49，5383-5390中所公開(kāi)的；或者 其中R1-R5各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，R6是-OH，-S(O)R8，-P(＝O)R8R9，-CO2H，-C(＝O)NH2，-OC(＝O)-CH(OH)-CH3，-C(＝O)OCnH2n-OH，其中n是1-4，-NR8-C(＝O)NR8R9，-SO2R8，-SO2NR8R9，或-SONR8R9，且其中R6的R8和R9各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，且R7是H，或R6和R7與相連的碳原子一起是具有羥甲基取代基的5-元縮酮環(huán)，其具有通式-OCH2-CH(CH2-OH)-O-；或其可藥用鹽。
除非另外指出，使用以下定義鹵素是氟、氯、溴或碘。烷基、烷氧基等表示直鏈和支化基團(tuán)；但是提及單個(gè)基團(tuán)例如“丙基”僅包括直鏈基團(tuán)，而具體指明支鏈異構(gòu)體例如“異丙基”。
“烷基”是包含伯、仲、叔或環(huán)狀碳原子的C1-C18烴。實(shí)例是甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，n-丙基，-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr，i-丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，n-丁基，-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu，i-丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，s-丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，t-丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(n-戊基，-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-i-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2，3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3，3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3。
“芳基”表示苯基或者具有約9-20個(gè)環(huán)原子的鄰位稠合雙環(huán)碳環(huán)基團(tuán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的。芳基(Ar)可以包括取代的芳基，例如具有1-5個(gè)取代基(例如，烷基，烷氧基等取代基)的苯基，且所述取代基與所述化合物一致并且包括關(guān)于具有通式(I-XIII)的化合物的上述專利或文獻(xiàn)中所公開(kāi)的取代基。
這里的術(shù)語(yǔ)“抗體”使用的是最廣的含義，且具體包括完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩個(gè)完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，以及抗體片段，只要它們表現(xiàn)出所需的生物活性即可?？贵w是能夠識(shí)別和結(jié)合特異性抗原的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。就其結(jié)構(gòu)進(jìn)行描述，抗體是由四個(gè)氨基酸鏈(兩個(gè)重鏈，兩個(gè)輕鏈)組成的Y形蛋白質(zhì)。在足以支持這一表述的簡(jiǎn)化模型中，每個(gè)抗體都主要具有兩個(gè)區(qū)高變區(qū)和恒定區(qū)。位于Y的臂末端的高變區(qū)結(jié)合靶抗原并與其相互作用。高變區(qū)包括互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其識(shí)別和結(jié)合位于特定抗原上的特異性結(jié)合位點(diǎn)。位于Y的尾部的恒定區(qū)被免疫系統(tǒng)識(shí)別并與其相互作用(Janeway，C.，Travers，P.，Walport，M.，Shlomchik(2001)Immuno Biology，5th Ed.，Garland Publishing，NewYork)。靶抗原通常具有許多結(jié)合位點(diǎn)，也稱作表位，其被位于多抗原上的CDR識(shí)別。特異性地結(jié)合不同表位的每個(gè)抗體都具有不同的結(jié)構(gòu)。因此，一個(gè)抗原可以具有一個(gè)以上的相應(yīng)抗體。
這里使用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”是指從基本上同族的抗體群得到的抗體，即，包括所述群的各抗體是相同的，除了可以少量存在的能夠天然發(fā)生的突變。單克隆抗體是高度特異性的，針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。此外，與包括導(dǎo)向不同決定子(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑相對(duì)比，每個(gè)單克隆抗體都針對(duì)所述抗原上的單個(gè)決定子。除了它們的特異性，單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)在于可以在不被其他抗體污染的情況下合成它們。修飾語(yǔ)“單克隆”表示從抗體的特性，如同基本上均質(zhì)的抗體群獲得，不應(yīng)當(dāng)理解為需要通過(guò)任何特定方法制備所述抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可以用Kohler etal(1975)Nature 256495中首次描述的雜交細(xì)胞法制備，或者可以用重組DNA法制備(參見(jiàn)US 4816567)。還可以使用例如Clackson et al(1991)Nature，352624-628和Marks et al(1991)J.Mol.Biol.，222581-597中描述的技術(shù)從噬菌體抗體庫(kù)中分離“單克隆抗體”。
這里的單克隆抗體具體包括“嵌合”抗體以及這些抗體的片段，其中部分重鏈和/或輕鏈與來(lái)自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與來(lái)自其他物種或?qū)儆谄渌贵w類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，只要它們表現(xiàn)出所需生物活性即可(US4816567；和Morrison et al(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，816851-6855)。這里受到關(guān)注的嵌合抗體包括“靈長(zhǎng)源化的(primatized)”抗體，該抗體包括來(lái)自非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物的高變區(qū)抗原結(jié)合序列(e.g.，Old World Monkey，Apeetc)和人的恒定區(qū)序列。
“化學(xué)治療劑”可用于治療癌癥的化合物。化學(xué)治療劑的實(shí)例包括烷基化試劑，例如噻替哌(thiotepa)和CYTOXANTM環(huán)磷酰胺(cyclosphosphamide)；烷基磺酸酯如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶如芐替哌(bezodepa)，卡波醌(carboquone)，美妥替哌(meturedopa)和尿烷亞胺(uredopa)；氮丙啶(ethylenimine)和methylamelamine包括六甲蜜胺(altretamine)，三亞乙基蜜胺(triethylenemelamine)，三亞乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)，三亞乙基硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰(acetogenins)(具體是bullatacin和bullatacinone)；delta9-四氫大麻醇(dronabinol，MARINOL)；β-拉帕醌；拉帕醇；coichicines；白樺脂酸；喜樹(shù)堿(camptothecin)(包括合成類似物托泊替康(topotecan))；CPT-11(伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR)，乙?；矘?shù)堿、scopolectin和9-氨基喜樹(shù)堿)；苔蘚抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多來(lái)新(adozelesin)，卡折來(lái)新(carzelesin)和比折來(lái)新(bizelesin)合成類似物)；podophyilotoxin；鬼臼樹(shù)酸(podophyllinic acid)；替尼泊甙(teniposide)；cryptophycins(具體是cryptophycin 1和cryptophycin 8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CB1-TM1)；eleutherobin；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥，萘氮芥，膽磷酰胺(cholophosphamide)，雌氮芥(estramustine)，異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)，氮芥(mechlorethamine)，鹽酸氧氮芥；美法侖，新氮芥(novembichin)，膽甾醇苯乙酸氮芥(phenesterine)，松龍苯芥(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥；亞硝基脲(nitrosureas)如亞硝基脲氮芥(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，雷莫司汀(ranimustine)；抗生素諸如enediyne抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，具體是刺孢霉素γ1和刺孢霉素ω1(見(jiàn)，例如，Agnew，Chem Intl.Ed.Engl.，33183-186(1994))；蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括蒽環(huán)類抗生素A；esperamicin；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色團(tuán)和相關(guān)色素蛋白enediyne抗生素生色團(tuán))，aclacinomysins，放射菌素(actinomycin)，authramycin，氮絲氨酸(azaserine)，博萊霉素(bleomycin)，放線菌素C(cactinomycin)，carabicin，去甲柔紅霉素(carminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，chromomycinis，更生霉素(dactinomycin)，柔紅霉素，地托比星(detorubicin)，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，ADRIAMYCIN多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代-多柔比星，氰基嗎啉代-多柔比星，2-吡咯啉-多柔比星和去氧多柔比星)，表阿霉素(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊達(dá)比星(idarubicin)，發(fā)波霉素(marcellomycin)，絲裂霉素諸如絲裂霉素C，霉酚酸，諾加霉素(nogalamycin)，橄欖霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，potfiromycin，嘌呤霉素，三鐵阿霉素(quelamycin)，羅多比星(rodorubicin)，鏈黑菌素，鏈脲霉素(streptozocin)，殺結(jié)核菌素，烏苯美司(ubenimex)，凈司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代謝藥如氨甲蝶呤，5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物如二甲葉酸(denopterin)，氨甲蝶呤，丁蝶翼素(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物例如氟達(dá)拉濱(fludarabine)，6-巰基嘌呤，硫咪嘌呤，硫鳥嘌呤；嘧啶類似物如安西他濱(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷，雙脫氧尿苷，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依諾他濱(enocitabine)，氟尿苷；雄激素類如卡普睪酮(calusterone)，丙酸甲雄烷酮(dromostanolong propionate)，環(huán)硫雄醇(epitiostanol)，美雄氨(mepitiostane)，睪內(nèi)酯(testolactone)；抗腎上腺類如氨魯米特(aminoglutethimide)，鄰氯苯對(duì)氯苯二氯乙烷(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)充劑如frolinic acid；醋葡內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲沙(edatraxate)；defofamine；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；elliptinium acetate；epothilone；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼達(dá)明(lonidamine)；美登素類(maytansinoids)諸如美登素(maytansine)和柄型菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達(dá)醇(mopidanmol)；nitraerine；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多糖復(fù)合體(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺(trichlorrotriethylamine)；單端孢霉烯(trichothecene)(具體是T-2毒素，verracurin A，桿孢菌素(roridin)A和anguidine)；烏拉坦(urethan)；長(zhǎng)春花堿酰胺(ELDIS1NE，F(xiàn)ILDESIN)；達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；溴丙哌嗪(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；三胺硫磷(thiotepa)；紫杉烷(taxoid)，如TAXOL紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)，ABRAXANETM無(wú)克列莫佛(Cremophor-free)，紫杉醇的白蛋白改造的納米顆粒配制劑(albumin-engineered nanoparticle formulation ofpaclitaxel)(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Illinois)，和TAXOTEREdoxetaxel(Rhne-Poulenc Rorer，Antony，F(xiàn)rance)；chloranbucil；吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR)；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；氨甲蝶呤；鉑類似物如順鉑和卡鉑；vinbiastine(VELBAN)；鉑；鬼臼乙叉甙(etoposide)(VP-16)；異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌(mitoxantrone)；vincristine(ONCOVIN)；oxaliplatin；leucovovin；長(zhǎng)春瑞賓(vinorelbine)(NAVELBINE)；novantrone；依達(dá)曲沙(edatrexate)；柔紅霉素；氨基蝶呤；伊拜膦酸鹽(ibandronate)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；維甲酸類(retinoids)諸如維甲酸；capecitabine(XELODA)；以及上述任何物質(zhì)的可藥用鹽，酸或衍生物；以及兩種或多種上述物質(zhì)的組合，例如CHOP和FOLFOX，CHOP是環(huán)磷酰胺、多柔比星、長(zhǎng)春新堿和潑尼松龍(prednisolone)的組合治療劑的縮寫，F(xiàn)OLFOX是與5-FU和leucovovin組合的奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATINTM)的治療配方的縮寫。
此定義還包括能調(diào)節(jié)、降低、阻止或抑制激素對(duì)促進(jìn)癌生長(zhǎng)的作用的抗激素制劑，且經(jīng)常以系統(tǒng)或全身治療的形式使用。它們可以是激素本身。其實(shí)例包括抗雌激素制劑和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)物(SERM)，包括，例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬)，EVISTA雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，keoxifene，LY117018，奧那司酮(onapristone)，和FARESTON托瑞米芬(toremifene)；抗孕酮；雌激素受體負(fù)調(diào)節(jié)劑(ERDs)；用于抑制或隔離卵巢的試劑，例如，釋放黃體化激素的激素(LHRH)；激動(dòng)劑例如LUPRON和ELIGARD亮丙瑞林(leuprolide acetate)\醋酸性瑞林(goserelin acetate)\醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和tripterelin；其他抗雄激素，例如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡魯胺(bicalutamide)；抑制芳香酶的芳香酶抑制物，該酶調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素生成，諸如，例如4(5)-咪唑，氨魯米特(aminoglutethimide)，MEGASE醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)，AROMASIN依西美坦(exemestane)，formestanie，法倔唑(fadrozole)，RIVISOR伏氯唑(vorozole)，F(xiàn)EMARA來(lái)曲唑(letrozole)，和ARIMIDEX阿那曲唑(anastrozole)。而且，化學(xué)治療劑的此定義包括二碳磷酸鹽化合物(bisphosphonates)例如氯膦酸鹽(例如，BONEFOS或OSTAC)、DIDROCAL1-羥基-亞乙基-1，1-二膦酸(etidronate)、NE-58095、ZOMETA唑來(lái)膦酸(zoledronic acid)/唑來(lái)膦酸鹽(zoledronate)、FOSAMAX阿倫膦酸鹽(alendronate)、AREDIA氨羥二磷酸二鈉(pamidronate)、SKELID替魯膦酸(tiludronate)或ACTONEL利塞膦酸鹽(risedronate)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1，3-二氧戊烷核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，具體是抑制異常細(xì)胞增生所涉及的信號(hào)途徑中的基因表達(dá)的那些反義寡核苷酸，諸如，例如，PKC-α，Raf，H-Ras和表皮生長(zhǎng)因子抑制劑(EGF-R)；疫苗諸如THERATOPE疫苗和基因治療疫苗，例如，ALLOVECTIN疫苗，LEUVECTIN疫苗，和VAXID疫苗；LURTOTECAN拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制物；ABARELIXrmRH；lapatinib ditosylate(ErbB-2和EGFR雙重酪氨酸激酶小分子抑制劑，也稱作GW572016)；具有抗癌作用的抗體，特別是與VEGF-1、VEGF-2、VEGF-3、EGF-R、HER-2、CD20等結(jié)合的抗體，和上述任何物質(zhì)的可藥用鹽、酸或衍生物。
“Het”是四-(4)、五-(5)、六-(6)或七-(7)元飽和或不飽和雜環(huán)，所述環(huán)具有1、2、3或4個(gè)選自氧、硫代、亞磺?；⒒酋；偷碾s原子，所述環(huán)任選與苯環(huán)稠合。Het包括“雜芳基”，其包含經(jīng)由單環(huán)芳環(huán)的環(huán)碳連接的基團(tuán)，所述芳環(huán)含有五個(gè)或六個(gè)由碳和分別選自非過(guò)氧化物氧、硫代和N(X)的1、2、3或4個(gè)雜原子組成的環(huán)原子，其中X不存在或是H、O、C1-4烷基，苯基或芐基，以及來(lái)自其的具有約8-10個(gè)環(huán)原子的鄰位稠合二環(huán)雜環(huán)的基團(tuán)，特別是苯衍生物或通過(guò)在其上稠合亞丙基、三亞甲基或四亞甲基雙基而衍生的基團(tuán)。
在實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“治療”是指減輕、消除、抑制、改善、改變或預(yù)防疾病或病癥，例如通過(guò)給藥有效量的本公開(kāi)的化合物或者通過(guò)給藥與有效量的其他化學(xué)治療劑(抗血管元抗體)組合的有效量的本公開(kāi)的化合物，且術(shù)語(yǔ)“治療”可以指醫(yī)療治療和預(yù)防治療。
在實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”是指有效量的本公開(kāi)的化合物能夠在相對(duì)低的劑量水平上選擇性地調(diào)節(jié)或改變癌細(xì)胞的多價(jià)離子(例如鈣離子)通透性，所述癌細(xì)胞例如是表達(dá)Trp-p8的細(xì)胞，與其他細(xì)胞(例如健康或非癌變細(xì)胞和不表達(dá)Trp-p8的細(xì)胞)的相對(duì)不敏感性相反。
在實(shí)施方案中，為本公開(kāi)的目的，“癌癥治療”、“治療癌癥”等術(shù)語(yǔ)是指治療癌癥的方法，其包括使癌細(xì)胞接觸本公開(kāi)的化合物，從而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、殺傷癌細(xì)胞、延長(zhǎng)患者的存活時(shí)間或其組合，或者使癌細(xì)胞接觸與抗血管生成抗體組合的本公開(kāi)的化合物，從而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、殺傷癌細(xì)胞、延長(zhǎng)患者的存活時(shí)間或其組合。通過(guò)本公開(kāi)的方法治療癌癥還包括使所述細(xì)胞接觸本公開(kāi)的化合物，以激活癌細(xì)胞(例如腫瘤)中的Trp-p8受體，導(dǎo)致流向所述細(xì)胞的多價(jià)離子的流量增大，從而引起細(xì)胞郁積或細(xì)胞死亡。癌癥可以包括其中異常細(xì)胞不受控制地進(jìn)行分裂的疾病。癌細(xì)胞還可以侵襲鄰近的組織并且經(jīng)血流和淋巴系統(tǒng)分散到機(jī)體的其他部位。癌癥的主要類型是癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。這些主要類型中存在許多亞群，所述亞群通常描述癌癥起源的器官，例如胃腺癌或肺的燕麥細(xì)胞癌。
“腫瘤”是指例如組織的異常良性或惡性物質(zhì)，所述組織可能沒(méi)有發(fā)炎、來(lái)自預(yù)先存在的組織的細(xì)胞且可能不具有生理功能。良性腫瘤包括，例如，囊腫、疣、痣和息肉，通常不分散至機(jī)體的其他部位。惡性腫瘤通常由生長(zhǎng)迅速的細(xì)胞組成，具有區(qū)別于正常細(xì)胞的其他異常性能，且經(jīng)常侵襲其他正常組織。
“血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子”或“VEGF”是指哺乳動(dòng)物生長(zhǎng)因子，例如美國(guó)專利No.5,332,671中所定義的。天然VEGF的生物活性是其任何類似物或其變體共有的，所述類似物或其變體促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞而不是牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞、晶體上皮細(xì)胞、腎上腺皮層細(xì)胞、BHK-21纖維原細(xì)胞或角化細(xì)胞的選擇生長(zhǎng)。
“血管生成性疾病”或“血管生成性缺陷”是指需要使用抑制血管生成的試劑(例如血管張力化合物或組合物，例如本公開(kāi)的化合物和抗血管生成抗體)治療的異常病癥。這些失調(diào)包括，例如，癌癥類型，例如血管腫瘤，如血管瘤(毛細(xì)血管和海綿樣)，血管球瘤(glomus tumor)、毛細(xì)血管擴(kuò)張、芽孢桿菌性血管瘤病(bacillary angiomatosis)、血管內(nèi)皮瘤、血管肉瘤、血管周細(xì)胞瘤(haemangiopericytoma)、卡波奇(Kaposi’s)肉瘤、淋巴管瘤和淋巴管肉瘤，以及腫瘤血管生成。
與一種或多種其他治療劑“組合”給藥包括同時(shí)(并行)給藥和以任何順序連續(xù)給藥。
致冷性化合物適用于哺乳動(dòng)物。如這里所使用的，“哺乳動(dòng)物”是指使用乳腺分泌的乳汁哺育它們的下一代的任何類型的高級(jí)脊椎動(dòng)物，例如，人、馬、牛、豬、羊、狗、兔和猴。
“調(diào)亡性細(xì)胞死亡”、“程序性細(xì)胞死亡”、“細(xì)胞凋亡”等術(shù)語(yǔ)是指由在細(xì)胞分化的特定階段和反應(yīng)特定刺激而產(chǎn)生的細(xì)胞事件的復(fù)雜級(jí)聯(lián)引起的任何細(xì)胞死亡。凋亡細(xì)胞死亡的特征在于，將要死亡的細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的濃縮(condensation)。細(xì)胞凋亡是需要合成新蛋白質(zhì)的活性過(guò)程。通常，該過(guò)程需要ATP，涉及合成新的RNA和蛋白質(zhì)，并在降解細(xì)胞DNA的內(nèi)生內(nèi)切核酸酶的活化過(guò)程中完結(jié)，從而破壞細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡所需的基因模板。在形態(tài)發(fā)生、分化和整體細(xì)胞轉(zhuǎn)變(general cell turnover)中，在細(xì)胞的可控缺失中觀察到細(xì)胞凋亡，且通常受到受體偶聯(lián)事件的調(diào)節(jié)。為此，細(xì)胞凋亡已經(jīng)被稱作“程序性細(xì)胞死亡”或“細(xì)胞自殺”。盡管每個(gè)細(xì)胞都可能有進(jìn)行自殺的基因程序，但是它們通常受到抑制。在正常情況下，只有有機(jī)體不再需要的那些細(xì)胞才能活化該自毀滅程序。
在實(shí)施方案中，“治療有效量”是指本公開(kāi)的化合物的劑量或本公開(kāi)的化合物和其他化性治療劑的組合(有或沒(méi)有賦形劑)的劑量，所述化合物和組合例如通過(guò)活化Trp-p8、刺激細(xì)胞凋亡或通過(guò)兩者在體內(nèi)或體外或同時(shí)在體內(nèi)和體外抑制、減少或消除細(xì)胞生長(zhǎng)。確切劑量取決于治療目的，并且可由本領(lǐng)域中使用已知技術(shù)的普通技術(shù)人員確定。
在本公開(kāi)的一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)的化合物與例如使用其他抗體治療劑的療法組合使用。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)的化合物與已知的癌癥治療抗體組合使用。通常參見(jiàn)例如PCT/US02/19592；PCT/US01/20118；PCT/US01/25464；PCT/US01/26626；PCT/US02/28859；PCT/US02/41798；PCT/US02/12206；PCT/US03/11148；PCT/US02/12619；和PCT/US02/33050。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本公開(kāi)的化合物與包括人、非人、小鼠、雜合子和嵌合形式的抗-VEGF抗體等抗體組合使用。例如參見(jiàn)美國(guó)專利No.6,582,959(VEGF)和美國(guó)專利申請(qǐng)No.2002/0122797A1(人VEGF)。
在本公開(kāi)的實(shí)施方案中，本公開(kāi)的化合物可以與其他治療劑(例如上述抗體)組合使用，以治療免疫疾病或病癥，所述疾病或病癥例如涉及免疫反應(yīng)細(xì)胞例如B-細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)、T-細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)、輔助細(xì)胞(巨噬細(xì)胞和其他抗原提供細(xì)胞)、殺傷細(xì)胞(NK和K細(xì)胞)、肥大細(xì)胞等細(xì)胞。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，可用于本公開(kāi)的化合物包括用于治療非中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞或疾病的非放射標(biāo)記的化合物。在實(shí)施方案中，本公開(kāi)的化合物不含放射標(biāo)記且不是放射活性的。本公開(kāi)的非標(biāo)記化合物可以用于殺傷這里所述的癌細(xì)胞，例如表達(dá)Trp-p8的細(xì)胞，例如前列腺癌細(xì)胞和肝癌細(xì)胞。
本公開(kāi)中的“受試者’包括人和其他動(dòng)物，特別是哺乳動(dòng)物。這樣，所述方法適用于人治療和獸醫(yī)治療。在優(yōu)選實(shí)施方案中，受試者是哺乳動(dòng)物，在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者是人。
“改進(jìn)的治療結(jié)果”或“減少腫瘤細(xì)胞的數(shù)目”或“減小腫瘤大小”是指腫瘤大小或體積減小50％，優(yōu)選減小80％，更優(yōu)選減小90％，進(jìn)一步優(yōu)選減小100％，通過(guò)檢查治療前和/或后患者以及取自患者的樣品所測(cè)定的，血液、感染組織或器官中的可檢測(cè)循環(huán)癌細(xì)胞的數(shù)目減少。
“化合物”、“分子”、“多肽”等術(shù)語(yǔ)包括通過(guò)合成制備的化合物、基因改造的化合物(例如，重組DNA表達(dá)的蛋白質(zhì))、天然存在的化合物以及在給藥不同化合物之后在體內(nèi)產(chǎn)生的化合物。所述化合物可能不能夠?qū)崿F(xiàn)這里描述的給藥的化合物的體內(nèi)作用，但是所述給藥的化合物或分子的一種或多種降解產(chǎn)物例如代謝物、偶聯(lián)物、絡(luò)合物、離子復(fù)合體、螯合物、水合物、溶劑化物等生物轉(zhuǎn)化或組合可以實(shí)現(xiàn)所述作用。除了上述鹽以外，“可藥用鹽”還可以包括體內(nèi)存在或形成的鹽的亞類。
本公開(kāi)提供與TRP(瞬時(shí)感受器電位)離子通道族中的特定受體結(jié)合的化合物。更具體地，本公開(kāi)提供能夠特異性地結(jié)合長(zhǎng)TRP(或TIRPM)通道的亞類的化合物，最具體地，本公開(kāi)提供特異性地結(jié)合稱作“Trp-p8”(或TRP-M8)的TRP通道的化合物。Trp-p8受體通常以高水平存在于癌例如前列腺癌中。本公開(kāi)的化合物被賦予Trp-p8受體活化活性。Trp-p8受體的活化導(dǎo)致流入癌細(xì)胞中的鈣離子流增加且最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。本公開(kāi)的化合物可用于但不限于治療細(xì)胞增殖疾病或病癥，并刺激細(xì)胞凋亡。如這里所描述的，如何例如使用這里描述的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)或使用其他相似試驗(yàn)來(lái)測(cè)定Trp-p8受體活性是本領(lǐng)域所公知的。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，具有手性中心的本公開(kāi)的化合物可以以光學(xué)活性和外消旋形式存在和分離。有些化合物可以表現(xiàn)出多形性。應(yīng)當(dāng)理解，本公開(kāi)涵蓋本公開(kāi)化合物的任何外消旋、光學(xué)活性、多形性、互變異構(gòu)或立體異構(gòu)形式或其混合物，所述混合物具有這里描述的有用性能，如何制備光學(xué)活性形式(例如，通過(guò)使用重結(jié)晶技術(shù)溶解(resolution)外消旋形式，通過(guò)由光學(xué)活性原料進(jìn)行合成，通過(guò)手性合成，或者通過(guò)使用手性固定相進(jìn)行色譜分離)是本領(lǐng)域所公知的。特別地，應(yīng)當(dāng)理解，本公開(kāi)的化合物(例如通式為(I-XIII)的化合物)可以含有手性中心，例如，在通式(I)的R1取代基中，通式(V)的R3取代基中，以及通式(XIII)的R1-R6取代基中含有手性中心。還應(yīng)當(dāng)理解，本公開(kāi)的化合物例如通式為(I)的化合物可以以“烯醇”或相應(yīng)的互變異構(gòu)體“酮”的形式存在，并且所有這些互變異構(gòu)體都包括在本公開(kāi)的化合物范圍內(nèi)。
各種含烴部分的碳原子含量由表示所述部分中的碳原子數(shù)的下限和上限的前綴表示，例如前綴Ci-j表示整數(shù)“i”到整數(shù)“j”個(gè)碳原子(包括端點(diǎn))的部分。因此，例如，C1-6烷基或(C1-C6)烷基表示具有1-6個(gè)碳原子(包括端點(diǎn))的烷基。
通常根據(jù)IUPAC命名系統(tǒng)命名本公開(kāi)的化合物?？梢允褂帽绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的縮寫(例如，“Ph”表示苯基，“Me”表示甲基，“Et”表示乙基，“h”表示小時(shí)，且“rt”表示室溫)。
下面列出的基團(tuán)、取代基和范圍的具體和優(yōu)選值僅僅是為了說(shuō)明目的；這些值不排除對(duì)于基團(tuán)和取代基的限定范圍內(nèi)的其他限定值或其他值。本公開(kāi)的化合物包括具有這里描述的值、具體值、更具體值和優(yōu)選值的任意組合的通式(I-XIII)的化合物。
具體地，芳基可以是苯基、萘基、蒽醌基、菲基、芴基、四氫萘基或茚滿基。
具體地，烷基例如(C1-6)烷基可以是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、3-戊基、己基，或庚基；(C2-C6)烷基可以是乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、3-戊基，或己基；(C3-12)環(huán)烷基可以是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、二環(huán)或多環(huán)取代基，例如具有以下通式的取代基 和 C1-6烷氧基可以是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、3-戊氧基，或己氧基；-C(＝O)烷基或(C2-C7)烷酰基可以是乙?；⒈；?、丁?；⑽祯；?、4-甲基戊?；?、己?；蚋；?；芳基可以是苯基、茚基或萘基；Het可以是吡咯烷基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基或雜芳基；雜芳基可以是呋喃基、咪唑基、三唑基、三嗪基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡唑基、吡咯基、吡嗪基、四唑基、吡啶基(或其N-氧化物)、噻吩基、嘧啶基(或其N-氧化物)、吲哚基、異喹啉基(或其N-氧化物)或喹啉基(或其N-氧化物)。
Het的具體值是五-(5)、六-(6)或七-(7)元飽和或不飽和環(huán)，其含有1、2、3或4個(gè)雜原子，例如非過(guò)氧化物氧、硫代、亞磺?；?、磺?；偷?；以及來(lái)自其的具有約8-12個(gè)環(huán)原子的鄰位稠合二環(huán)雜環(huán)的基團(tuán)，特別是苯衍生物或通過(guò)在其上稠合亞丙基、三亞甲基、四亞甲基或另一個(gè)單環(huán)Het雙基而衍生的基團(tuán)。
通式(I)的具體化合物是通式(A)的化合物
A(Icilin，也稱作AG-3-5)。
通式(II)的具體化合物是通式(B)的化合物 通式(II)的另一個(gè)具體化合物是通式(C)表現(xiàn)優(yōu)選的立體化學(xué)的化合物 通式(II)的另一個(gè)具體化合物是通式(D)的化合物 通式(III)的具體化合物是通式(E)的化合物 通式(IV)的具體化合物是通式(F)的化合物
通式(V)的具體化合物是通式(G)的化合物 G(薄荷醇)。
通式(VI)的具體化合物是通式(H)的化合物 通式(VII)的具體化合物是通式(I’)的化合物 通式(IX)的具體化合物是通式(J)的化合物 通式(X)的具體化合物是通式(K)的化合物
通式(XI)的具體化合物是通式(L)的化合物 通式(XII)的具體化合物是通式(M)的化合物 通式(XIII)的具體化合物是通式(N)的化合物 應(yīng)當(dāng)理解，上述通式(A-N)的具體化合物和本公開(kāi)的所有其他化合物可以是或者包括其可藥用鹽。
具體化合物是3-(2-羥苯基)-6-(3-硝基苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶-2-酮或其可藥用鹽。
另一個(gè)具體化合物是2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-甲氧基-苯基)-酰胺(2-isopropyl-5-methyl-yclohexanecarboxylic acid(4-methoxy-phenyl)-amide)或其可藥用鹽。
另一個(gè)具體化合物是2-異丙基-2，3，-N-三甲基-丁酰胺(2-isopropyl-2，3，N-trimethyl-butyramide)或其可藥用鹽。
另一個(gè)具體化合物是1-(仲丁基-異丁基-膦基(phosphinoyl))-庚烷或其可藥用鹽。
另一個(gè)具體化合物是2-異丙基-5-甲基-環(huán)己醇(2-isopropyl-5-methyl-cyclohexanol)或其可藥用鹽。
通式IIa的具體化合物是通式IIa1的化合物或其可藥用鹽 其中R1、R3、R4、R5、R6和R7定義如上。
通式lIa的其他具體化合物是通式IIa2-IIa12的各化合物或其可藥用鹽，其中R取代基如這里所定義

以及
通式IIa的具體化合物包括2-異丙基(isopropyl)-5-甲基(methyl)-環(huán)己烷羧酸(cyclohexanecarboxylicacid)(4-嗎啉(morpholin)-4-基(yl)-苯基(phenyl))-酰胺(amide)或其可藥用鹽；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(3-氯(chloro)-4-甲氧基(methoxy)-苯基)-酰胺或其可藥用鹽；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-仲丁基(sec-butyl)-苯基)-酰胺或其可藥用鹽，2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸茚(cylclohexanecarboxylic acid indan)-5-基酰胺(ylamide)或其可藥用鹽，2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-叔丁基(tert-butyl)-苯基)-酰胺或其可藥用鹽；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-丙基(propyl)-苯基)-酰胺或其可藥用鹽；以及2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-異丙基-3-甲基-苯基)-酰胺或其可藥用鹽。
通式(I-XIII)的化合物和上述通式A-N的具體化合物的制備步驟、表征、致冷性性能、臭氣(odor)性、結(jié)構(gòu)-致冷性活性關(guān)系、設(shè)計(jì)原則等信息在相應(yīng)的上述文獻(xiàn)或?qū)＠袌?bào)道。
可以如例如以下方案中所描述的，通過(guò)與其類似的方法，通過(guò)上述文獻(xiàn)或?qū)＠械姆椒?，或者通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的或可顯而易見(jiàn)得知的方法制備本公開(kāi)的化合物例如通式B，C，D或N的化合物。本方案中使用的所有變量都在下面或本文的其他部分定義。方案1表示本公開(kāi)的代表性化合物例如酰胺化合物3(IIa4-1)的制備。氯代化合物1經(jīng)過(guò)Grignard中間體被羧化，得到羧酸2，羧酸2轉(zhuǎn)化為酰胺3，如實(shí)施例1所述。
方案1
化合物3(IIa4-1)和相關(guān)酰胺化合物的其他制備方法使用上述羧酸化合物2的相應(yīng)酸性氯化物(acid chloride)。羧酸化合物2的酸性氯化物(容易通過(guò)與SOCl2等試劑反應(yīng)制得)可以與多種伯胺或仲胺化合物反應(yīng)，形成與酰胺3類似的相應(yīng)酰胺?？梢韵嗨频刂苽淦渌c酰胺3或通式II相關(guān)的化合物，如本文所述。
關(guān)于制備甲烷羧酸化合物2(IIa4-1的原料)的合成方法，參見(jiàn)下述列表中的D.G.Rowsell，Wilkinson Sword Ltd.，U.K.Patent(1975)。關(guān)于制備甲烷羧酸的另一合成方法，參見(jiàn)D.Cunningham，et.al.，J.Chem.Soc.，Perkin Trans.I，2002，2692-2698。
對(duì)于制備J.Soc.Cosmet.Chem.，1978，29，185-200中所述的致冷性化合物的其他制備細(xì)節(jié)，參見(jiàn)第199頁(yè)的參考文獻(xiàn)1，列出了17個(gè)英國(guó)專利。
其他適用于由本文描述的多種中間體形成本公開(kāi)的化合物的條件是本領(lǐng)域公知的。例如參見(jiàn)Feiser and Feiser，“Reagents for Organic Synthesis，”Vol.1，1967；March，J.“Advanced Organic Chemistry，”4thed.，John Wiley & Sons，1992；House，H.O.，“Modern Synthetic Reactions”，2nded.，W.A.Benjamin，New York，1972；和Laroek，R.C.，“Comprehensive Organic Transformations，”2nded.，Wiley-VCH Publishers，New York，1999。
本文描述的合成方法中使用的原料可以購(gòu)買到，且已經(jīng)在科學(xué)文獻(xiàn)中報(bào)道，或者可以使用本領(lǐng)域已知的方法由容易獲得的原料制備。在所有或部分上述或其他合成方法中任選使用保護(hù)基是理想的。這些保護(hù)基及其引入和除去方法是本領(lǐng)域公知的。參見(jiàn)Greene，T.W.；Wutz，P.G.M.“ProtectingGroups In Organic Synthesis”2nded.，New York，John Wiley & Sons，Inc.，1991。
在化合物具有足夠的堿性或酸性以形成穩(wěn)定的非毒性酸式鹽或堿式鹽的情況下，以鹽的形式給藥本公開(kāi)的化合物是合適的?？伤幱名}的實(shí)例是由酸形成的有機(jī)酸加成鹽，其形成生理上可接受的陰離子，所述鹽例如是甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、α-酮戊二酸鹽和α-甘油磷酸鹽。也可以形成合適的無(wú)機(jī)鹽，包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。
可以使用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得可藥用鹽，例如通過(guò)使具有足夠堿性的化合物例如胺與提供生理可接受陰離子的合適的酸反應(yīng)。還可以制備羧酸的堿金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽或鋰鹽，或堿土金屬鹽，例如鈣鹽。
可以以含有與合適的賦形劑組合的本公開(kāi)化合物的藥物組合物的形式方便地給藥本發(fā)明的化合物，所述組合物可用于治療腫瘤。通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法制備含有適用于抗腫瘤用途的化合物的藥物組合物，所述組合物含有本領(lǐng)域公知的賦形劑。這些方法和成分的公知概要是E.W.Martin的Remington’s Pharmaceutical Science(Mark PubI.Co.，15thed.，1975)。根據(jù)例如腫瘤細(xì)胞的沉積或傳播，可以通過(guò)腸胃外給藥的方式，例如通過(guò)經(jīng)靜脈注射、經(jīng)腹腔內(nèi)注射或經(jīng)肌肉內(nèi)注射、口服或經(jīng)直腸給藥本公開(kāi)的化合物和組合物。
在實(shí)施方案中，本公開(kāi)范圍所涵蓋的抗體包括雜種抗體和重組抗體(例如，“人源化”和“人”抗體)，而不考慮起源物種或免疫球蛋白類或亞類命名，以及抗體片段(例如，F(xiàn)ab，F(xiàn)(ab’)2，和Fv)。參見(jiàn)美國(guó)專利No.4,816,567；Mageand Lamoyi，in Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，79-97，Marcel Dekker，Inc.，New York，(1987)。
這樣，修飾語(yǔ)“單克隆”表示從這種基本上均質(zhì)的抗體群獲得的抗體的特征，不應(yīng)理解為需要通過(guò)任何特定方法制備抗體。例如，本公開(kāi)的單克隆抗體可以使用在Kohler & Milstein，Nature，256495(1975)中首次描述的雜種細(xì)胞方法制備，或者可以通過(guò)重組DNA方法制備。參見(jiàn)美國(guó)專利No.4,816,567。例如在Goding，Monoclonal AntibodiesPrinciples and Practice，59-103，Academic Press(1986)；Kozbor，J.Immunol.，1333001(1984)，Brodeur，et al.，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，51-63，Marcel Dekker，Inc.，New York(1987)中描述了其他已知的制備抗體的方法。
已經(jīng)使用多種方法制備單克隆抗體(MAb)。雜交瘤技術(shù)(是指產(chǎn)生的單一類型的抗體的克隆的細(xì)胞系)使用各種物種的細(xì)胞，包括小鼠(鼠科動(dòng)物)、倉(cāng)鼠、大鼠和人的細(xì)胞。另一種制備MAb的方法使用基因工程，包括重組DNA技術(shù)。由這些技術(shù)制備的單克隆抗體包括嵌合抗體和人源化抗體。嵌合抗體組合來(lái)自一種以上類型物種的DNA編碼區(qū)。例如，嵌合抗體可以源自來(lái)自小鼠的高變區(qū)和來(lái)自人的恒定區(qū)。人源化抗體主要來(lái)自人，即使其含有非人部分。如同嵌合抗體，人源化抗體可以含有完全的人恒定區(qū)。但是不像嵌合抗體，高變區(qū)可以部分地來(lái)自人。人源化抗體的非人合成部分經(jīng)常來(lái)自小鼠抗體中的CDR。在任何情況下，這些區(qū)對(duì)于使抗體識(shí)別和結(jié)合特定抗原是關(guān)鍵的。
如所指出的，鼠抗體在這些技術(shù)中具有重要作用。盡管鼠抗體可以用于診斷和短期治療，但是不能長(zhǎng)期給藥至人，該給藥過(guò)程會(huì)增加有害免疫原性反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)人免疫系統(tǒng)識(shí)別小鼠抗體為異物并進(jìn)攻它時(shí)，出現(xiàn)該反應(yīng)，稱作人抗小鼠抗體(HAMA)。HAMA反應(yīng)會(huì)引起中毒性休克或甚至死亡。
嵌合和人源化抗體通過(guò)最小化給藥抗體的非人部分而減小HAMA反應(yīng)的可能性。此外，嵌合和人源化抗體具有活化次級(jí)人免疫反應(yīng)的額外優(yōu)點(diǎn)，例如抗體依賴性細(xì)胞毒性。
“抗體片段”包含完整抗體的一部分，優(yōu)選完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)。抗體片段的實(shí)例包括Fab，F(xiàn)ab′，F(xiàn)(ab′)2，和Fv片段；二價(jià)抗體(diabodies)；線性抗體；單鏈抗體分子；和由抗體片段形成的多特異性抗體。
“完整”抗體是包含抗原結(jié)合高變區(qū)以及輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域(CL)和至少重鏈恒定結(jié)構(gòu)域，CH1，CH2和CH3的抗體。所述恒定結(jié)構(gòu)域可為天然序列恒定結(jié)構(gòu)域(例如人天然序列恒定結(jié)構(gòu)域)或其氨基酸序列變體。
所述完整抗體具有一或多種效應(yīng)子功能，所述功能是指歸因于抗體的Fc區(qū)(Fc區(qū)的天然序列或Fc區(qū)的氨基酸序列變體)的生物活性。抗體效應(yīng)子功能的實(shí)例包括Clq結(jié)合；補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性；Fc受體結(jié)合；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細(xì)胞表面受體(例如，B細(xì)胞受體；BCR)的下調(diào)等。
根據(jù)其重鏈恒定結(jié)構(gòu)域(CH)的氨基酸序列，完整抗體可分成不同類型。共有五個(gè)主要類型的完整抗體IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中的幾個(gè)可以進(jìn)一步分為亞類(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。相應(yīng)于不同類型抗體的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別稱作α、δ、ε、γ和μ。不同類免疫球蛋白的亞組結(jié)構(gòu)和三維構(gòu)型是公知的。
當(dāng)在體內(nèi)使用進(jìn)行組合治療時(shí)，可以以治療有效量(即，消除或減輕患者的腫瘤負(fù)荷的量)給藥抗體?？梢酝瑫r(shí)或順序給藥本公開(kāi)的化合物和抗體的組合。它們通常是腸胃外給藥，可能的話，在目標(biāo)細(xì)胞位點(diǎn)給藥或經(jīng)靜脈給藥。劑量和給藥方案取決于，例如，癌癥的類型(原生的或轉(zhuǎn)移的)、其群體、抗體針對(duì)的位點(diǎn)、特定抗毒素的特性(使用時(shí))，例如，治療指數(shù)、患者和患者病史。給藥抗體的量通常為約0.1-約10mg/kg患者體重。與抗體組合給藥的本公開(kāi)的化合物的量通常為例如患者體重的約5-1,000mg/kg或約0.1-300mg/kg，并且可以取決于上述許多因素和考慮本公開(kāi)還設(shè)想在診斷應(yīng)用中使用本公開(kāi)的化合物和抗-TRP-P8抗體的組合。對(duì)于診斷應(yīng)用，通常使用可檢測(cè)部分標(biāo)記本公開(kāi)的抗體?？蓹z測(cè)部分可以是能夠產(chǎn)生直接或間接可檢測(cè)信號(hào)的任何物質(zhì)。例如，可檢測(cè)部分可以是放射性同位素，例如3H、14C、32P、35S或125I；熒光或化學(xué)發(fā)光化合物，例如熒光素異硫氰酸鹽、若丹明或螢光素；或酶，例如堿性磷酸酯酶、β-牛乳糖或辣根過(guò)氧化物酶。
可以使用用于將抗體單獨(dú)偶聯(lián)至可檢測(cè)部分的本領(lǐng)域已知的任何方法，包括Hunter，et al.，Nature，144945(1962)；David，et al.，Biochemistiy，131014(1974)；Pain，et al.，J.Immunol.Meth.，40219(1981)；和Nygren，J.Histochem.And Cytochem，30407(1982)中所述的方法。
對(duì)于治療應(yīng)用，可以以可藥用劑型將抗體給藥至哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人，包括可以以藥丸形式經(jīng)靜脈或長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)輸注、經(jīng)肌肉、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)或吸入途徑給藥至人的劑型?？贵w還適合通過(guò)經(jīng)腫瘤內(nèi)、腫瘤周圍、損傷內(nèi)或損傷周圍的方式給藥，以發(fā)揮局部和全身治療作用。
所述劑型包括已知的本身無(wú)毒性和無(wú)治療作用的可藥用載體或賦形劑。通常以約0.1mg/ml-100mg/ml的濃度將抗體配制在所述賦形劑中。
為了預(yù)防或治療疾病，本公開(kāi)的化合物的組合的合適劑量取決于待治療的疾病的類型(定義如上)、疾病的嚴(yán)重性和過(guò)程、是否為預(yù)防或治療目的給藥所述化合物、以前的治療、患者臨床病史和對(duì)化合物的反應(yīng)，以及主治醫(yī)師的判斷力。所述化合物適于一次性或在系列治療中給藥至患者。
取決于疾病的類型和嚴(yán)重性，約0.015-15mg/kg的化合物是向患者給藥的初始候選劑量，例如通過(guò)一次或多個(gè)單獨(dú)給藥或是連續(xù)輸注。對(duì)于歷時(shí)幾天或更長(zhǎng)時(shí)間反復(fù)給藥，根據(jù)情況，重復(fù)治療直至出現(xiàn)對(duì)疾病癥狀的所需抑制效果。但是，可以使用其他給藥方案。
對(duì)于口服治療給藥，本公開(kāi)的活性化合物可以與一種或多種賦形劑組合并以可消化的片劑、口含片、藥片、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、薄片等形式使用。這種組合物和制劑通常含有至少約0.1％的活性化合物。組合物和制劑的百分率可以變化，且可以方便地是給定單位劑型重量的約2-約60％。這些治療上有用的組合物中的活性化合物的量使得可以獲得有效的劑量水平。
片劑、藥片、藥丸、膠囊等還可以含有以下物質(zhì)粘結(jié)劑，例如西黃蓍膠、阿拉伯樹(shù)膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑，例如磷酸二鈣；崩解劑，例如玉米淀粉、土豆淀粉、海藻酸等；潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂；以及甜味劑，例如蔗糖、果糖、乳糖或阿斯巴甜糖；或調(diào)味劑，例如椒薄荷油、鹿蹄草(wintergreen)油或櫻桃調(diào)味料等。當(dāng)單位劑型是膠囊時(shí)，其除上述類型的物質(zhì)以外還可以含有液體載體，例如植物油或聚乙二醇。其他多種材料可以作為涂層存在或者用于改變固體單位劑型的物理形式。例如，片劑、藥丸、膠囊等可以涂布有明膠、蠟、蟲漆或糖等。糖漿或酏劑可以含有所述活性化合物、作為甜味劑的蔗糖或果糖、作為防腐劑的甲基對(duì)羥基苯甲酸酯類和丙基對(duì)羥基苯甲酸酯類，以及染料和調(diào)味劑，例如櫻桃或橙子調(diào)味劑。當(dāng)然，制備任何單位劑型所使用的任何材料應(yīng)當(dāng)是可藥用的且基本上在所用量水平上是無(wú)毒性的。而且，可以將活性化合物摻入緩釋制劑和裝置中。
本公開(kāi)的化合物或組合物還可以通過(guò)輸注或注射而經(jīng)靜脈給藥或經(jīng)腹腔內(nèi)給藥。可以在水中制備活性化合物或其鹽的溶液，任選與無(wú)毒表面活性劑混合。還可以在甘油、液體聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物以及在油中制備分散液。在常規(guī)的儲(chǔ)存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑，以防止微生物生長(zhǎng)。
適于注射或輸注的藥物劑型可以包括含有活性成分的無(wú)菌水溶液或分散液或無(wú)菌粉末，它們適用于臨時(shí)制備可注射或可輸注的無(wú)菌溶液或分散液，它們?nèi)芜x被包衣在脂質(zhì)體或可植入的種子(seed)或小粒(pellet)中。在所有情況下，最終劑型應(yīng)當(dāng)是無(wú)菌流體并且在生產(chǎn)和儲(chǔ)存條件下是穩(wěn)定的。液體載體或賦性劑可以是包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等)、植物油、無(wú)毒甘油酯及其合適的混合物的溶劑或液體分散介質(zhì)。例如通過(guò)形成脂質(zhì)體、通過(guò)在分散液的情況下保持所需顆粒尺寸或者通過(guò)使用表面活性劑，可以保持合適的流動(dòng)性。借助各種抗菌劑和抗真菌劑例如對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水楊酸鈉等可以防止微生物的作用。在許多情況下，優(yōu)選包括等滲劑例如糖、緩沖物或氯化鈉。通過(guò)在組合物中使用延遲吸收的試劑例如單硬脂酸鋁和明膠，可以延長(zhǎng)可注射組合物的吸收。
可以通過(guò)將所需量的活性化合物與各種上述其他成分一起(根據(jù)需要)引入合適溶劑中然后進(jìn)行過(guò)濾器滅菌而制備無(wú)菌注射液。對(duì)于用于制備無(wú)菌注射液的無(wú)菌粉末，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥技術(shù)，所述方法產(chǎn)生活性成分加上存在于以前經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾的溶液中的任何額外所需成分的粉末。
可用的固體載體包括細(xì)分散固體例如滑石、粘土、微晶纖維素、硅石、礬土等?？捎玫囊后w載體包括水、醇或甘油或水-醇/甘油共混物，其中可以任選在無(wú)毒表面活性劑的幫助下溶解或分散有效量的本公開(kāi)的化合物?？梢约尤胼o助劑例如香精和額外的抗微生物劑以優(yōu)化用于給定用途的性能。本公開(kāi)的化合物的可用劑量可以通過(guò)在動(dòng)物模型中比較它們的體內(nèi)活性和體外活性來(lái)確定。用于在小鼠和其他動(dòng)物例如人中給藥有效劑量的方法是本領(lǐng)域已知的，例如參見(jiàn)美國(guó)專利No.4,938,949。
以單位劑型方便地給藥所述化合物；例如所述劑型含有5-1000mg活性成分/單位劑型，有利地含有10-750mg，最有利地含有50-500mg。所需劑量可以方便地存在于單一劑量中或者作為以合適間隔例如每天兩次、三次、四次或更多次小劑量給藥的分離劑量。所述小劑量本身可以進(jìn)一步分成例如以多次具體離散間隔給藥；例如從吸入器多次吸入。
對(duì)于內(nèi)部給藥，可以以約0.1-300mg/kg動(dòng)物體重，優(yōu)選1.0-30mg/kg動(dòng)物體重的劑量水平(作為自由基準(zhǔn)計(jì)算)口服或經(jīng)腸胃外給藥所述組合物，可以在人體內(nèi)使用具有單位劑型的所述組合物，以1-1000mg/單位劑量的量每天給藥一次至四次。
對(duì)于經(jīng)腸胃外給藥或液滴形式給藥，如用于治療眼睛的情況，所述化合物以約0.1-約10％，更優(yōu)選約0.1-約7％的濃度存在于水溶液中。所述溶液可以含有其他成分，例如乳化劑、抗氧化劑或緩沖物。
通常，通式(I-XIll)的化合物在液體組合物例如IV(靜脈內(nèi))組合物中的濃度通常為約0.1-約25％，優(yōu)選約0.5-約10重量％。在半固體或固體組合物例如凝膠或粉末中的濃度為約0.1-約5重量％，優(yōu)選約0.5-約2.5重量％。
用于給藥這里公開(kāi)的化合物和組合物的確切配方必須取決于被直鏈的患者的需要、治療類型，以及理所當(dāng)然地，參加的醫(yī)生的判斷。
本公開(kāi)的化合物的結(jié)合活性和結(jié)合選擇性是本公開(kāi)的化合物的抗腫瘤活性的優(yōu)異預(yù)測(cè)指標(biāo)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的藥物模型或者使用下述分析法確定結(jié)合活性和結(jié)合選擇性。生物試驗(yàn)的示例性結(jié)果總結(jié)在下表1中。
評(píng)估生物活性用于評(píng)估和測(cè)量鈣離子流量或細(xì)胞吸收并誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡的常用方法和R.Skyryrna，et al.，I Physiology，2000，527.1，71-83中公開(kāi)的方法適用于本公開(kāi)，如這里所述。其他試驗(yàn)方法和例如下述包括細(xì)胞系培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染和體內(nèi)和體外腫瘤生長(zhǎng)抑制的方法對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解本公開(kāi)是顯而易見(jiàn)的。
活性分析為了治療癌癥，多種熟知的動(dòng)物模型可以用于進(jìn)一步理解基因在腫瘤發(fā)展和發(fā)病機(jī)理中的作用并用于檢驗(yàn)候選治療劑的功效，所述治療劑包括本公開(kāi)的化合物和抗血管生成抗體的組合。這些模型的體內(nèi)特性使它們能夠具體預(yù)測(cè)人類患者中的反應(yīng)。腫瘤和癌癥(例如，乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌等)的動(dòng)物模型包括非重組和重組(轉(zhuǎn)基因)動(dòng)物。非重組動(dòng)物模型包括，例如嚙齒動(dòng)物，例如小鼠模型。這些模型可以通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如經(jīng)皮下注射、末端血管注射、脾臟植入、腹膜內(nèi)植入、腎囊下植入或常位(orthopin)植入將腫瘤細(xì)胞引入同基因小鼠內(nèi)而制成，例如植入結(jié)腸組織中的結(jié)腸癌細(xì)胞。例如參見(jiàn)1997年9月18日公開(kāi)的PCT公開(kāi)No.WO97/33551。
可能地，腫瘤學(xué)研究中最常用的動(dòng)物物種是免疫缺陷小鼠，特別是裸小鼠。胸腺功能低下/發(fā)育不全的裸小鼠能夠成功地充當(dāng)人腫瘤異種移植物的宿主，這一觀察結(jié)果導(dǎo)致裸小鼠被廣泛用于該目的。已經(jīng)將常染色體的隱性nu基因引入裸小鼠的大量獨(dú)特異系同基因菌株中，例如ASW、A/He、AKR、BALB/c、B10.LP、C17、C3H、C57BL、C57、CBA、DBA、DDD、I/st、NC、NFR、NFS、NFS/N、NZB、NZC、NZW、P、RIII和SJL。此外，具有不同于裸小鼠的遺傳免疫缺陷的其他多種動(dòng)物已經(jīng)被培養(yǎng)并用作腫瘤異種移植物的受體。對(duì)于更多細(xì)節(jié)，參見(jiàn)例如The Nude Mouse in OncologyResearch，E.Boven and B.Winograd，eds.(CRC Press，Inc.，1991)。
引入這些動(dòng)物中的細(xì)胞可以來(lái)自已知的腫瘤/癌細(xì)胞系，例如任何上述腫瘤細(xì)胞系，以及例如B104-1-1細(xì)胞系(穩(wěn)定的NIH-3T3細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染neu原癌基因)；ras-轉(zhuǎn)染的N1H-3T3細(xì)胞；Caco-2(ATCC HTB-37)；或適度良好區(qū)分的II級(jí)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系，HT29(ATCC HTB-38)；或來(lái)自腫瘤和癌。使用包括在液氮中冷凍和儲(chǔ)存的標(biāo)準(zhǔn)條件，可以從手術(shù)中的患者體內(nèi)獲得腫瘤或癌細(xì)胞的樣品。Karmali et al.，Br.J.Cancer；48689-696(1983)?？梢允褂枚喾N方法將腫瘤細(xì)胞引入動(dòng)物例如裸小鼠體內(nèi)。小鼠中的皮下(s.c.)空間非常適合于腫瘤植入。腫瘤可以皮下移植，作為固體塊、通過(guò)使用套管針作為針吸活組織檢查，或者作為細(xì)胞懸液。對(duì)于固體塊或套管針植入，將合適尺寸的腫瘤組織片段引入皮下空間。由原發(fā)性腫瘤或穩(wěn)定腫瘤細(xì)胞系新鮮制備細(xì)胞懸液并皮下注射。腫瘤細(xì)胞還可以以皮下植入物的形式注射。在該位置，接種體沉積在真皮結(jié)締組織下部和皮下組織之間。
可以例如通過(guò)基本上如Drebin，et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，839129-9133(1986)所述，向裸小鼠體內(nèi)植入大鼠成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞(由其初始分離neu致癌基因)或neu-轉(zhuǎn)化的NIH-3T3細(xì)胞而產(chǎn)生乳腺癌的動(dòng)物模型。
相似地，可以通過(guò)在動(dòng)物例如裸小鼠體內(nèi)傳代結(jié)腸癌細(xì)胞，導(dǎo)致在這些動(dòng)物中出現(xiàn)腫瘤，從而制備結(jié)腸癌的動(dòng)物模型。例如Wang，et al.，CancerResearch，544726-4728(1994)和Too，et al.，Cancer Research，55681-684(1995)已經(jīng)描述了裸小鼠中的人結(jié)腸癌的常位移植模型。該模型基于所謂的“METAMOUSETM”，其由AntiCancer，Inc.(San Diego，Calif.)出售。
可以取出動(dòng)物體內(nèi)的腫瘤并體外培養(yǎng)。來(lái)自體外培養(yǎng)物的細(xì)胞然后可以傳代給動(dòng)物。這種腫瘤可以用作用于進(jìn)一步試驗(yàn)或藥物篩選的靶?；蛘?，可以分離通過(guò)傳代得到的腫瘤，并分析來(lái)自傳代前的細(xì)胞和在一輪或多輪傳代后分離的細(xì)胞的RNA，用于感興趣的基因的差異表達(dá)。可以使用任何已知的腫瘤或癌細(xì)胞系實(shí)施這種傳代技術(shù)。下面的實(shí)施例用于更詳細(xì)地描述使用上述公開(kāi)的方式，并且用于闡述用于實(shí)施本公開(kāi)的各個(gè)方面的最佳方式。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例絕對(duì)不是用于限制本公開(kāi)的真實(shí)范圍，而是為示例目的而給出。
實(shí)施例1由(-)薄荷基氯化物制備化合物IIa4-1。將1.39g鎂金屬(57mmol)放置在100mL燒瓶中并加入4mL干THF以覆蓋鎂金屬。向金屬-THF混合物中加入碘晶體并攪拌幾分鐘，然后加入10g(57mmol)(-)薄荷基氯化物(Aldrich)的約1/3份。加熱該混合物以誘導(dǎo)Grignard形成，并將剩余的薄荷基氯化物(2/3份)加入50mL干THF中并攪拌直至反應(yīng)結(jié)束。在氮?dú)庵袑rignard溶液以插管方式轉(zhuǎn)移到含有過(guò)量干冰的容器中。使干冰淬滅的混合物打旋，將其倒入含有2mL濃HCl的300mL冰中。加入二乙醚并分離混合物。合并分離出的有機(jī)層并水洗，然后用NaOH水溶液萃取。使用HCl酸化水溶液(和油)直至形成固體，加入二乙醚，將酸萃取到有機(jī)相中，用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，濃縮得到4.18g(40％)白色針狀體。
將酸(0.57g，3.1mmol)溶解在1.5mL-二甲基乙酰胺(DMA)中。加入PyBOP(2.1g，4.0mmol)、對(duì)甲氧基苯胺(0.58g，4.7mmol，Aldrich)和DiPEA(2.7mL，15.5mmol)。在2小時(shí)和5小時(shí)后分別另外加入0.25g對(duì)甲氧基苯胺。7小時(shí)后用乙酸乙酯(EtOAc)稀釋反應(yīng)混合物，用1N的HCl洗滌兩次，用碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，然后用鹽水洗滌。合并分離出的有機(jī)層，并用硫酸鈉干燥，濃縮至棕色固體。使該固體穿過(guò)具有30％EtOAc/己烷的硅膠栓塞(plug)以脫色。濃縮時(shí)產(chǎn)物開(kāi)始結(jié)晶，因此允許結(jié)晶進(jìn)行，使用吸液管除去溶劑，使用冷EtOAc洗滌白色針狀體，真空干燥，得到0.365g(1.26mmol，40％的產(chǎn)率)的第一產(chǎn)物。重結(jié)晶母液額外產(chǎn)生0.346g(1.2mmol，39％的產(chǎn)率)的白色針狀體。
LCMS表明產(chǎn)物的分子量為289，符合所需分子量，NMR譜圖表明產(chǎn)物具有所需結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例2證實(shí)反應(yīng)所選致冷性化合物的離子通道活性-評(píng)估鈣離子吸收。如下進(jìn)行鈣離子吸收實(shí)驗(yàn)。對(duì)于表達(dá)Trp-p8腫瘤抗原的細(xì)胞和不表達(dá)Trp-p8腫瘤抗原的細(xì)胞，在每種細(xì)胞系接觸本公開(kāi)的致冷性化合物之后，測(cè)量鈣吸收量。結(jié)果表明隨著致冷性化合物的濃度從約0.0001增加約五個(gè)濃度級(jí)達(dá)到約10mM，表達(dá)Trp-p8腫瘤抗原的細(xì)胞具有逐漸增加的鈣吸收量。在所有致冷性化合物濃度下，化合物(IIa4-1)具有出乎意料地特別高的鈣吸收量。不表達(dá)腫瘤抗原的細(xì)胞在所有致冷性化合物濃度范圍內(nèi)基本上沒(méi)有可觀察到的鈣吸收量。在表達(dá)和不表達(dá)細(xì)胞系中，非致冷性化合物二甲基亞砜(DMSO)用作對(duì)照化合物，DMSO暴露的細(xì)胞在任何濃度下都不表現(xiàn)出明顯的鈣吸收量。細(xì)胞系包括非表達(dá)系293、PC3和PC3/neo以及腫瘤抗原表達(dá)系293、PC3和PC3/neo。
實(shí)施例3使用活化Trp-p8的化合物在體外殺傷人細(xì)胞。參見(jiàn)附圖，在圖1中，評(píng)估了所選致冷性化合物在殺傷人細(xì)胞中的有效性。在兩個(gè)相關(guān)的人細(xì)胞系中，比較致冷性化合物的量級(jí)(order)和效力，一個(gè)細(xì)胞系是表達(dá)Trp-p8的293細(xì)胞，第二個(gè)細(xì)胞系是用作對(duì)照的缺乏(不表達(dá))Trp-p8的匹配293細(xì)胞。在平板接種中，它們是約50000個(gè)細(xì)胞/孔。在平板接種時(shí)加入致冷性化合物。通過(guò)在約0.1-約1000mM的變化濃度下將細(xì)胞暴露在各化合物中達(dá)72小時(shí)來(lái)處理細(xì)胞。X軸表示濃度增量，y軸表示在72小時(shí)結(jié)束時(shí)可存活的細(xì)胞數(shù)(具有任意單位)。圖1A和1C示出表達(dá)Trp-p8且用具有所示編號(hào)或命名的致冷性化合物處理的細(xì)胞的反應(yīng)。圖1B和1D示出沒(méi)有(不表達(dá)型)Trp-p8且也用所示致冷性化合物處理的細(xì)胞的反應(yīng)。圖1A和1C的結(jié)果表明，致冷性化合物對(duì)具有Trp-p8的細(xì)胞具有一定范圍的殺傷反應(yīng)或有效性?；衔颕Ia4-1對(duì)于表達(dá)Trp-p8的細(xì)胞具有最佳的殺傷效果(IC50＜ImM)。圖1B和1D的對(duì)比結(jié)果表明，沒(méi)有Trp-p8的細(xì)胞對(duì)相同致冷性化合物，特別是在低濃度的致冷性化合物(例如，低于100mM)情況下具有較低或基本上沒(méi)有殺傷反應(yīng)。
實(shí)施例4使用活化Trp-p8的化合物在體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法。制備轉(zhuǎn)染的癌細(xì)胞例如表達(dá)Trp-p8的轉(zhuǎn)染的癌細(xì)胞的方法對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的，參見(jiàn)例如J.M.Schallhorn，et al.，Nucleic Acids Res.，1996，F(xiàn)eb 15；24(4)596-601。參見(jiàn)圖2，該圖示出被轉(zhuǎn)染以表達(dá)腫瘤抗原的PC3克隆細(xì)胞(PC3/Trp-p8.c8和.c9)和不表達(dá)腫瘤抗原的PC3克隆細(xì)胞(PC3-Neo)在無(wú)胸腺的裸小鼠(5百萬(wàn)個(gè)細(xì)胞/小鼠)中的生長(zhǎng)。形成人前列腺癌細(xì)胞系的非Trp-p8表達(dá)型腫瘤PC3-Neo 200(-·-)顯示預(yù)期的指數(shù)型腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)速率。相反，形成人前列腺癌細(xì)胞系的Trp-p8表達(dá)型(即“過(guò)度表達(dá)型”)腫瘤PC3/Trp-p8.c8(克隆8)220(-■-)；和.c9(克隆9)230(-▲-)分別表示實(shí)質(zhì)上較慢的生長(zhǎng)速率和靜止生長(zhǎng)速率。
給無(wú)胸腺小鼠(每組8個(gè))在側(cè)腹部接種約5×106的穩(wěn)定表達(dá)Trp-p8的PC3克隆細(xì)胞(cl.8)或載體對(duì)照細(xì)胞系(PC3-Neo)。使每個(gè)腫瘤生長(zhǎng)至約200mg的尺寸，此時(shí)每天給藥一次或兩次致冷性化合物，劑量為約1-30mg/kg體重。使用測(cè)徑器每三天I.V.或P.O.測(cè)量腫瘤體積，并計(jì)算平均體積。
將Trp-p8表達(dá)型癌細(xì)胞例如上述細(xì)胞與具有適度至高效力的本公開(kāi)的特定致冷性化合物進(jìn)行體內(nèi)接觸，如上所述，預(yù)期對(duì)Trp-p8表達(dá)癌細(xì)胞造成強(qiáng)的細(xì)胞殺傷效果，對(duì)健康或非Trp-p8表達(dá)細(xì)胞不造成細(xì)胞殺傷效果或造成低的細(xì)胞殺傷效果。該預(yù)期結(jié)果與實(shí)施例3所示的上述體外人細(xì)胞殺傷的結(jié)果一致。
表1總結(jié)了示例性的離子通道活性和對(duì)上述或下面示出的所選致冷性化合物的細(xì)胞殺傷反應(yīng)，并提供了這些化合物的可比較的或相對(duì)的活性等級(jí)。
表1對(duì)所選致冷性化合物反應(yīng)的離子通道活性和細(xì)胞殺傷


1.峰值(FLIPR)是在10mM下的最大鈣離子流量的量度。FLIPR是指熒光計(jì)成像板讀數(shù)器；可從例如Molecular Devices Corp.購(gòu)得。
C11H20O2C13H25NOC13H24O3C15H27NO3Mol.Wt.184.28 Mol.Wt.211.34 Mol.Wt.228.33Mol.Wt.269.38 C14H27NOC15H29NO2C18H27NO2C15H29NOMol.Wt.225.37 Mol.Wt.255.40 Mol.Wt.289.41 Mol.Wt.239.40 C10H21NOC14H25NO3C15H29NO C15H28O4Mol.Wt.171.28 Mol.Wt.255.35 Mol.Wt.239.40Mol.Wt.272.38 C15H33OPC13H29OP C14H31OPMol.Wt.260.40 Mol.Wt.232.34 Mol.Wt.246.37實(shí)施例5制備具有通式IIa其他所選化合物。對(duì)于下面的每個(gè)化合物制備實(shí)施例，大體上重復(fù)實(shí)施例1，不同之處是使用相應(yīng)的胺代替實(shí)施例1的胺(對(duì)甲氧基苯胺)共反應(yīng)物，以制備具有所示結(jié)構(gòu)的化合物作為純化時(shí)的主要產(chǎn)物。例如通過(guò)質(zhì)譜表征以下每個(gè)實(shí)施例的主要產(chǎn)物，所述產(chǎn)物在約所示分子量處具有母峰。
C18H27NO2C17H25NO C17H25NO2Mol.Wt.289.41Mol.Wt.259.39Mol.Wt.275.39 C20H31NO C17H24ClNO C17H24FNOMol.Wt.301.47Mol.Wt.293.83 Mol.Wt.277.38 C18H27NO C19H29NOMol.Wt.273.41Mol.Wt.287.44
C18H26FNO2C18H27NO2Mol.Wt.307.40Mol.Wt.289.41 C18H27NO2C17H24FNOMol.Wt.289.41 Mol.Wt.277.38 C19H29NO2Mol.Wt.303.44

C21H32N2O2C21H33NOMol.Wt.344.49 Mol.Wt.315.49

C91H33NOC20H31NOMol.Wt.315.49 Mol.Wt.301.47

C18H26ClNO2C20H29NO C21H33NOMol.Wt.323.86 Mol.Wt.299.45 Mol.Wt.315.49表2總結(jié)了對(duì)于293/Trp-p8.克隆18和293/Trp-p8.克隆10，所示薄荷烷甲酰胺化合物對(duì)的IC50結(jié)果。
表2對(duì)于293/Trp-p8.克隆18和293/Trp-p8.克隆10，薄荷烷甲酰胺的IC50數(shù)據(jù)。


實(shí)施例6表3總結(jié)了對(duì)于293/Trp-p8.克隆21，所示薄荷烷甲酰胺化合物的IC50一式雙份的結(jié)果。
表3對(duì)于PC3/Trp-p8.克隆21，薄荷烷甲酰胺的IC50數(shù)據(jù)(一式兩份)。



實(shí)施例7載體制品例如可購(gòu)買的或常規(guī)生產(chǎn)的可植入種子或球粒可以與單獨(dú)的一種或多種本公開(kāi)的化合物或其與其他化學(xué)治療劑或其他藥物或賦形劑的組合配制在一起，或者所述載體制品可包含后面所述的物質(zhì)。優(yōu)選的制劑可以具有例如致冷性化合物或其他成分的可選擇的定時(shí)釋放特性，例如用于治療前列腺癌。對(duì)于在治療性癌癥治療例如前列腺癌中的非放射活性的持續(xù)釋放植入物的實(shí)例，參見(jiàn)美國(guó)專利No.5,633,274，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。
實(shí)施例8下面示例含有本公開(kāi)的化合物(“化合物x”)例如通式I或II的化合物的代表性藥物劑型，其在人體中用于治療或預(yù)防用途。
(i)藥片1mg/片‘化合物x’ 100.0乳糖 77.5聚乙烯吡咯酮 15.0交聯(lián)羧甲纖維素鈉 12.0微晶纖維素 92.5硬脂酸鎂3.0300.0
(ii)藥片2mg/片‘化合物x’ 20.0微晶纖維素 410.0淀粉50.0羥基乙酸淀粉鈉 15.0硬脂酸鎂5.0500.0(iii)膠囊mg/膠囊‘化合物x’ 10.0膠體狀二氧化硅 1.5乳糖465.5預(yù)先凝膠的淀粉 120.0硬脂酸鎂3.0600.0(v)注射液1(mg/ml)mg/ml‘化合物x’ 1.0磷酸氫二鈉 12.0磷酸氫鈉0.7氯化鈉 4.51.0N氫氧化鈉溶液(將pH調(diào)節(jié)至7.0-7.5) 足量注射用水足量ad 1mL(v)注射液2(10mg/ml)mg/ml‘化合物x’10.0磷酸氫鈉0.3磷酸氫二鈉 1.1聚乙二醇400 200.0
01N氫氧化鈉溶液(將pH調(diào)節(jié)至7.0-7.5) 足量注射用水 足量ad 1mL(vi)氣溶膠mg/罐‘化合物x’ 20.0油酸 10.0三氯氟化甲烷 5,000.0二氯二氟甲烷 10,000.0二氯四氟甲烷 5,000.0可以通過(guò)藥物領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法而獲得上述制劑。
實(shí)施例9聯(lián)用治療-共給藥。下面示例含有與抗體直接組合(混合物)的本公開(kāi)化合物的代表性藥物劑型(“組合物y”)，在人體中用于治療或預(yù)防用途。例如，將本公開(kāi)的化合物例如通式I或II的化合物與抗體例如抗-VEGF抗體組合。得到的組合制劑‘組合物y’代替上述實(shí)施例8的注射液制劑中的一種或多種‘化合物x’?？梢酝ㄟ^(guò)藥物領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法而獲得上述制劑。
實(shí)施例10聯(lián)用治療-依次給藥。下面示例含有與抗體(‘抗體z’)順序組合(混合物)的本公開(kāi)化合物(‘化合物x’)的代表性藥物劑型，在人體中用于治療或預(yù)防用途。例如，將本公開(kāi)的化合物例如通式I或II的化合物與抗體例如抗-VEGF抗體依次給藥。例如，依次給藥的組合可以包括本公開(kāi)化合物(‘化合物x’)的第一次給藥是實(shí)施例7或8的上述制劑中的任一種，然后是抗體(‘抗體z’)的第二次注射給藥?；蛘撸紫冉o藥‘抗體z’，然后給藥‘化合物x’?？梢酝ㄟ^(guò)藥物領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法而獲得上述制劑。
實(shí)施例11用于制備抗體和表征抗體(包括抗原特異性、表位繪圖、同種型、結(jié)合親和力)的方法、實(shí)例和其他參考文獻(xiàn)在上述美國(guó)專利No.6,582,959中公開(kāi)。
所有期刊、專利和專利文獻(xiàn)都通過(guò)引入全部并入本文，如同通過(guò)引用分別并入本文。已經(jīng)參考各種具體和優(yōu)選實(shí)施方案和技術(shù)描述了本公開(kāi)。但是，應(yīng)當(dāng)理解，在本公開(kāi)的精神和范圍內(nèi)可以對(duì)其做出許多變化和改進(jìn)。
權(quán)利要求
1.治療癌癥的方法，包括使癌細(xì)胞接觸有效量的致冷性化合物。
2.權(quán)利要求1的方法，其中致冷性化合物選自具有通式(I-XIII)的化合物或者兩種或多種通式(I-XIII)的化合物或其可藥用鹽的組合 其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基、Het或芳基； 其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基； 其中R1、R2和R3各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基； 其中R1、R2和R3各自獨(dú)立地是直鏈或支化的烷基或環(huán)烷基； 其中R3是-OH；-S(O)R1；-P(＝O)R1R2；-CO2H；-C(＝O)NH2；-OC(＝O)-CH(OH)-CH3；-C(＝O)OCnH2n-OH，其中n是1-4；-NR1-C(＝O)NR1R2，-SO2R1，-SO2NR1R2，-SONR1R2，且其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，且R4是H，或R3和R4與相連的碳原子一起是5元縮酮環(huán)，其任選具有通式如下的羥甲基取代基-OCH2-CH(CH2-OH)-O-；選自IV組的(-X)取代的環(huán)狀或支化烴的核 其中X是N-烷基甲酰胺、-C(＝O)NR1R2，其中R1和R2各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，或者R1和R2與相連的氮原子一起是5-元或6-元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)，其任選被氧(-O-)環(huán)雜原子取代； 其中X是N-烷基甲酰胺、-C(＝O)NHR1，其中R1是烷基或取代烷基或烷基砜；通式VIII的烷基取代的脲 通式IX的環(huán)戊烯酮化合物 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或R1和R2與相連的氮原子一起是5元或6元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)，其任選被氧(-O-)環(huán)雜原子取代，諸如嗎啉代-環(huán)，且所述環(huán)可以任選被α-CO2H或α-CO2CH3取代基取代，且R3，R4，和R5各自獨(dú)立地是H或烷基；通式X的環(huán)己烯酮化合物 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或R1和R2與相連的氮原子一起是5元或6元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)，且R3、R4、R5和R6各自獨(dú)立地是H或烷基；通式XI的不飽和內(nèi)酯化合物 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或R1和R2與相連的氮原子一起是5元或6元飽和或不飽和雜環(huán)(Het)，且R3和R4各自獨(dú)立地是H或烷基；通式XII的化合物 其中R1和R2各自獨(dú)立地是烷基，或R1和R2一起形成5元或6元飽和或不飽和環(huán)，且R3和R1各自獨(dú)立地是H或烷基；或通式XIII的化合物 其中R1-R5各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，R6是-OH；-S(O)R8；-P(O)R8R9；-CO2H；-C(＝O)NH2；-OC(＝O)-CH(OH)-CH3；-C(＝O)OCnH2n-OH，其中n是1-4；-NR8-C(＝O)NR8R9；-SO2R8；-SO2NR8R9；或-SONR3R9，且其中R6的R8和R9各自獨(dú)立地是H、烷基或芳基，且R7是H，或R6和R7與相連的碳原子一起是5元縮酮環(huán)，其具有通式-OCH2-CH(CH2-OH)-O-的羥甲基取代基。
3.抑制或殺傷癌細(xì)胞的方法，該方法包括向細(xì)胞給藥治療有效量的通式(I-XII1)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
4.導(dǎo)致癌細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡的方法，該方法包括使所述細(xì)胞接觸有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
5.治療哺乳動(dòng)物中的疾病或病癥的方法，其中涉及Trp-p-8受體且需要調(diào)節(jié)受體功能，該方法包括給藥調(diào)節(jié)有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
6.治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中與Trp-p-8受體相關(guān)的疾病的方法，該方法包括給藥治療有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
7.藥物組合物，包含通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽，以及可藥用賦形劑。
8.通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽，其用于醫(yī)學(xué)診斷或治療。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中醫(yī)學(xué)診斷或治療是治療或預(yù)防Trp-p-8受體相關(guān)的疾病或病癥。
10.通式(I-XIII)的化合物的用途，用于制備可用于治療或預(yù)防疾病或Trp-p-8受體相關(guān)的疾病的藥物。
11.治療癌癥的方法，包括向需要這種治療的哺乳動(dòng)物給藥有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
12.調(diào)節(jié)Trp-p-8受體功能的方法，包括給藥調(diào)節(jié)有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
13.調(diào)節(jié)Trp-p-8受體功能的方法，包括使Trp-p-8受體接觸調(diào)節(jié)有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽。
14.在癌細(xì)胞中引發(fā)細(xì)胞凋亡的方法，包括向患者給藥有效量的通式(I-XIII)的化合物，或其組合，或其可藥用鹽，從而在所述細(xì)胞中引起細(xì)胞凋亡。
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述癌包括表達(dá)腫瘤抗原的、形成腫瘤的人前列腺細(xì)胞。
16.權(quán)利要求2的方法，進(jìn)一步包括給藥與抗體組合的致冷性化合物，所述抗體導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和/或抑制血管生成。
17.通式(I-XIII)的化合物或其可藥用鹽，其與有效量的至少一種額外的化學(xué)治療劑組合，用于治療或預(yù)防疾病或Trp-p8受體相關(guān)的疾病。
18.權(quán)利要求17的化合物，其中所述化學(xué)治療劑是VEGF抗體。
19.權(quán)利要求2的方法，其中通式(I-XIII)的化合物是3-(2-羥苯基)-6-(3-硝基苯基)-3，4-二氫-1H-嘧啶-2-酮；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-甲氧基-苯基)-酰胺；2-異丙基-2，3，N-三甲基-丁酰胺；1-(仲丁基-異丁基-膦基)-庚烷；以及2-異丙基-5-甲基-環(huán)己醇；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-嗎啉-4-基-苯基)-酰胺；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(3-氯-4-甲氧基-苯基)-酰胺；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-仲丁基-苯基)-酰胺；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸茚滿-5-基酰胺；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-叔丁基-苯基)-酰胺；2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-丙基-苯基)-酰胺，以及2-異丙基-5-甲基-環(huán)己烷羧酸(4-異丙基-3-甲基-苯基)-酰胺，或其可藥用鹽。
20.通式IIa的化合物 其中R1是H，或(C1-C6)烷基；R2是苯基或具有通式(-PhR3R4R5R6R7)的取代苯基 其中R3、R4、R6和R7各自獨(dú)立地是-H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基或鹵素；R5是鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C6)烷氧基、-C(＝O)(C1-C6)烷基或(C1-C7)烷酰基；或R5是-NR8R9，其中R8和R9各自獨(dú)立地是-H，(C1-C6)烷基，或R5和R9與相連的氮原子一起形成嗎啉代、吡咯烷酮、哌啶基、哌啶嗪基、吲哚滿基、苯并咪唑啉基、氮雜環(huán)丁烷基、吖丙啶基、吖庚因基、1，4-噁嗪基，或硫代嗎啉代環(huán)；或R4和R5與相連的苯基一起形成具有4-7個(gè)原子的環(huán)，該環(huán)具有1-3個(gè)不飽和度；以及立體異構(gòu)形式，立體異構(gòu)形式的混合物；或其可藥用鹽，條件是當(dāng)-PhR3R4R5R6R7的R3、R4、R6和R7是-H時(shí)，R5不是-CH3、-OCH3、-OH、-F，或-NO2以及條件是R2不是3-羥基-4-甲基-苯基；且另一條件是R2不是2-羥基-萘基，或吡啶基。
全文摘要
本公開(kāi)的化合物提供能夠有效地預(yù)防或治療疾病或病癥，例如細(xì)胞增殖、血管生成或細(xì)胞凋亡介導(dǎo)的疾病。該公開(kāi)包括化合物、類似物、前藥、其可藥用載體、藥物組合物，以及用于預(yù)防和治療疾病和其他與癌癥、腫瘤有關(guān)的疾病等的方法。本公開(kāi)還提供治療方法，其包括給藥有效量的本公開(kāi)的化合物。
文檔編號(hào)C07C233/60GK1845741SQ200480025186
公開(kāi)日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2004年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月2日
發(fā)明者馬克·雷諾茲, 保羅·波拉基斯 申請(qǐng)人:健泰科生物技術(shù)公司