專利名稱：一類具有抗癌活性的特定結(jié)構(gòu)的化合物及其生產(chǎn)方法
本專利揭示一類具有抗癌活性的特定結(jié)構(gòu)的化合物及其生產(chǎn)方法，以及該類化合物對(duì)人和動(dòng)物具有抗癌、防癌和增強(qiáng)免疫的作用。
本發(fā)明是關(guān)于一類具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，以及生產(chǎn)這類化合物的方法。該類化合物的結(jié)構(gòu)必須由末端基團(tuán)、前端基團(tuán)、及與它們相互連接的長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基3個(gè)部分組成1，末端基團(tuán)必須是異丙基、仲丁基、或是叔丁基；2，末端基團(tuán)必須通過(guò)長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基與前端基團(tuán)相接；3，前端基團(tuán)必須是極性基團(tuán)，極性越強(qiáng)，該類化合物的抗癌作用亦越強(qiáng)。此外，該類化合物還有防癌與提高免疫功能的作用，而對(duì)人與動(dòng)物無(wú)毒副作用。
本發(fā)明人已闡述過(guò)一組具有抗癌活性的特異支鏈脂肪酸，(US Patent pending SerialNo．09／173，681)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，這些物質(zhì)對(duì)很多癌細(xì)胞都能通過(guò)誘導(dǎo)凋亡表現(xiàn)抗癌活性，包括但不限于對(duì)白血病、乳腺癌、前列腺癌和肺癌，并且毒性極低。
一組特異的支鏈脂肪酸是指末端甲基支鏈、異與前異、飽和與不飽和的脂肪酸。
研究這一組脂肪酸之衍生物非常重要，因?yàn)橥ㄟ^(guò)研究可發(fā)現(xiàn)抗癌活性更強(qiáng)、化學(xué)性質(zhì)更穩(wěn)定(生物半衰期更長(zhǎng))。水溶性更好、更易于吸收的新物質(zhì)。
本發(fā)明的主要內(nèi)容是揭示一類具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。該類化合物的結(jié)構(gòu)必須由末端基團(tuán)、前端基團(tuán)、及與它們相互連接的長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基三部分組成1，末端基團(tuán)必須是異丙基 或仲丁基 2，末端基團(tuán)必須通過(guò)長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基與前端基團(tuán)相連，長(zhǎng)鏈碳的個(gè)數(shù)是介于5-19的整數(shù)。
3，前端基團(tuán)必須是具有極性的基團(tuán)，該基團(tuán)極性越大，抗癌效果越強(qiáng)。這是本發(fā)明的關(guān)鍵部分，因?yàn)槿绻摶鶊F(tuán)是不帶極性的，那么這類化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物就失去抗癌活性及其他生物活性。
這類化合物可以用人工合成方法獲得，也可以是存在自然界生物體中。
本發(fā)明揭示一類具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。該類化合物的結(jié)構(gòu)必須由末端基團(tuán)、前端基團(tuán)、及與它們相互連接的長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基三部分組成1，末端基團(tuán)必須是異丙基 或仲丁基
2，末端基團(tuán)必須通過(guò)長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基與前端基團(tuán)相連，長(zhǎng)鏈碳的個(gè)數(shù)是介于5-19的整數(shù)。
3，前端基團(tuán)必須是具有極性的基團(tuán)，該基團(tuán)極性越大，抗癌效果越強(qiáng)。這是本發(fā)明的關(guān)鍵部分，因?yàn)槿绻摶鶊F(tuán)是不帶極性的，那么這類化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物就失去抗癌活性及其防癌和提高免疫功能的活性作用。這類化合物可以用以下結(jié)構(gòu)表示 其中n=5～19，m=0～n／2；R為任何具有極性的基團(tuán)，R可以是，但不限于以下幾類結(jié)構(gòu)苯酚胺基 其中酚羥基數(shù)目為1-5，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上，例如 酰基衍生物-CO-R1，其中R1可以為，但不限于以下結(jié)構(gòu)苯酚胺基(其中酚羥基數(shù)目為1-5，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上)、氨基酸、葡萄糖、二乙胺、呱啶、吡咯烷、嗎啉、或羥基-羧基-苯胺基(其中羥基、羧基可在結(jié)構(gòu)允許的任何位置)。 羥基取代苯甲酰氧基衍生物如羥基苯甲酰基
其中酚羥基數(shù)目為1-5個(gè)，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置。羥基苯基 其中酚羥基數(shù)目為1-5個(gè)，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置。α-取代羧酸衍生物，其結(jié)構(gòu)可以用一般式表示如下 R2可以為鹵素、氨基等基團(tuán)。R亦可以是CHCOOH，該結(jié)構(gòu)的化合物是不飽和的支鏈脂肪酸。必須指出不飽和的支鏈脂肪酸比飽和的支鏈脂肪酸抗癌活性強(qiáng)，其不飽和的雙鍵位置越靠近羧基，其抗癌活性越大。這正是本發(fā)明所指出的關(guān)鍵不飽和雙鍵越靠近羧基，就越增強(qiáng)了R基團(tuán)的極性，使其抗癌活性增強(qiáng)。詳見(jiàn)實(shí)驗(yàn)2。
用化學(xué)合成方法可以獲得以上所述的特定結(jié)構(gòu)的化合物，本發(fā)明的化學(xué)合成方法可以、但不限于以下的方法。
1，末端是異丙基和仲丁基的基團(tuán)以及所需的烷基與烯基，可以從相應(yīng)的異脂肪酸和前異脂肪酸獲取。叔丁基基團(tuán)以及所需的烷基和烯基，可以從相應(yīng)的叔脂肪酸合成。叔脂肪酸的一般結(jié)構(gòu)式為 其中n=5～19，m=0～n／2的整數(shù)，該化合物具有抗癌活性。
現(xiàn)以12，12-二甲基十三烷酸為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將十二烷二酸單甲酯、新戊酸、金屬鈉的無(wú)水甲醇溶液進(jìn)行電解反應(yīng)，制得12，12-二甲基十三烷酸甲酯，用NaOH水解，制得12，12-二甲基十三烷酸，(12，12-Dimethyl-tridecanoic acid)。
詳細(xì)操作見(jiàn)實(shí)施例一。
2，前端基團(tuán)R是苯酚胺基類化合物?，F(xiàn)以N-(11-甲基十二烷基)-4-氨基-1，2-苯二酚為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將11-甲基十二烷酸甲酯用金屬鈉和甲醇還原為11-甲基-1-十二醇，將其與氯化亞砜反應(yīng)得到11-甲基-1-氯十二烷，再將其與4-氨基-1，2-苯二酚反應(yīng)制得N-(11-甲基十二烷基)-4-氨基-1，2-苯二酚，(N-(11-Methyldodecyl)-4-amino-1，2-benzerdiol)。
3，前端基團(tuán)R是?；苌?CO-R1(1)R1為苯酚胺基類化合物?，F(xiàn)以N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將13-甲基十四烷酸和氯化亞砜反應(yīng)制得13-甲基十四烷酰氯，將其與4-氨-1，2-苯二酚在NaOH水溶液中反應(yīng)，制得N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，(N-(13-Methyltetracanoyl)-4-amino-1，2-benzendiol)。
詳細(xì)操作見(jiàn)實(shí)施例二。
(2)R1為氨基酸、葡萄糖、二乙胺、呱啶、吡咯烷、嗎琳等物質(zhì)?，F(xiàn)以N-(13-甲基十四烷酸酰)-L-谷氨酸為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將13-甲基十四烷酸與氯化亞砜反應(yīng)，制得13-甲基十四烷酰氯，將其與L-谷氨酸在NaOH水溶液中反應(yīng)，制得N-(13甲基十四烷酸酰)-L-谷氨酸，(N-(13-Methyltetradecanoyl)-L－glulamic acid)。
詳細(xì)操作見(jiàn)實(shí)施例三。
4，前端基團(tuán)R是羥基取代苯甲酰氧基?，F(xiàn)以3，4，5-三羥基苯甲酸-13-甲基十四烷基酯為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
在金屬鈉的甲苯溶液中，滴加13甲基十四烷酸甲酯的無(wú)水甲醇溶液，加畢，加熱回流直到金屬鈉消失。加入少量水，回流，使固體全部溶解，酸化，過(guò)濾，蒸除溶劑，殘液進(jìn)行真空減壓分餾，收集140-142℃／1mmHg餾分，得13-甲基十四烷醇。
將13-甲基十四烷醇，3，4，5-三羥基苯甲酸在濃硫酸存在下，以甲苯回流帶水進(jìn)行酯化反應(yīng)，制得3，4，5-三羥基苯甲酸-13甲基十四烷基酯。
5，前端基團(tuán)R是2，4-二羥基苯甲羰基現(xiàn)以1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基十四酮)的合成為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將13甲基十四烷酸和間苯二酚在無(wú)水氯化鋅存在下進(jìn)行縮合反應(yīng)，制得1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基十四酮)，(1-(2，4-Dihydroxyphenyl)-1-(13methyl)-tetradecanone)。
詳細(xì)操作見(jiàn)實(shí)施例四。
6，前端基團(tuán)R是2，4-二羥基苯基現(xiàn)以4-(13甲基十四烷基)-1，3-苯二酚的合成為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基)十四酮通過(guò)鋅粉、鹽酸進(jìn)行還原反應(yīng)，制得4-(13甲基十四烷基)-1，3-苯二酚，(4-(13-Methyltetradecyl)-1，3-benzenediol)。
7，前端基團(tuán)R是α-取代羧酸衍生物?，F(xiàn)以2-氨基-13甲基十四烷酸為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將13-甲基十四烷酸與溴在少量三氯化磷存在下，制得2-溴-13-甲基十四烷酸。再將其與氨水反應(yīng)，制得2-氨基-13-甲基十四烷酸，(2-Amino-13-methyl-tetradecanoicacid)。
8，前端基團(tuán)R是CHCOOH?，F(xiàn)以15-甲基-2-十六烯酸合成為例，說(shuō)明該類化合物的合成方法。
將13-甲基十四烷酸甲酯，用金屬鈉和甲醇進(jìn)行還原反應(yīng)，制得13-甲基-1-十四烷醇。將其用氯鉻酸吡啶鹽氧化制得13-甲基十四醛。將13-甲基十四醛、丙二酸進(jìn)行縮合反應(yīng)，制得15-甲基-2-十六烯酸，(15-Methyl-2-hexadecenoic acid)。
詳細(xì)操作見(jiàn)實(shí)施例五。實(shí)驗(yàn)一按本發(fā)明所揭示的特定化學(xué)結(jié)構(gòu)，用本發(fā)明所指出的生產(chǎn)方法合成出如下物質(zhì)12，12-二甲基十三烷酸，12，12-二甲基十三烷酰-4-氨基-1，2-苯二酚，N-(12甲基十四烷酸酰)-4-氨基－1，2-苯二酚，1-(2，4-二羥基苯基)-1-(十三甲基十四酮)，4-(13甲基十四烷基)-1，3-苯二酚，2-氨基-13甲基十四烷酸，N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-2-羥基苯甲酸，N-(13-甲基)-十四碳酰基-L-苯丙氨酸，N-(13-甲基)-十四碳酰基-L-丙氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；拾彼?，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-纈氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-亮氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-異亮氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-脯氨酸，N，N-二乙基-13-甲基-十四碳酰胺，N-(13-甲基)-十四碳?；哙?，N-(13-甲基)-十四碳?；量┩?，N-(13-甲基)-十四碳?；鶈徇?，10，10-二甲基十一烷酸，2-氨基-13甲基十四烷酸，N-(13-甲基十四烷酸酰)-2-氨基-2-脫氧葡萄糖。用上述化學(xué)合成的物質(zhì)，以13-甲基十四烷酸為陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行體外抗癌活性實(shí)驗(yàn)。
試劑及配制方法準(zhǔn)確稱取樣品各5mg，加0．5mlDMSO溶解，4℃冰箱保存。臨用時(shí)用無(wú)血清的1640培養(yǎng)液稀釋到所需的濃度。
實(shí)驗(yàn)方法人白血病K562細(xì)胞株，1640培養(yǎng)液含5％血清，37℃ 5％CO2條件下培養(yǎng)，每?jī)商靷鞔淮?。?shí)驗(yàn)時(shí)接種于96孔培養(yǎng)板，每孔4×104個(gè)細(xì)胞。同時(shí)加藥作用48小時(shí)。用臺(tái)盼藍(lán)排染法計(jì)數(shù)活細(xì)胞，Bliss法計(jì)算IC50和IC95。
小鼠黑素瘤B16細(xì)胞株，1640培養(yǎng)液含5％血清，37℃ 5％CO2條件下培養(yǎng)，胰蛋白酶消化，每?jī)商靷鞔淮?。?shí)驗(yàn)時(shí)接種于55孔培養(yǎng)板，每孔2×104個(gè)細(xì)胞。12小時(shí)后細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，加藥作用48小時(shí)。SRB法測(cè)定貼壁細(xì)胞量每孔加50μl 5％TCA固定1小時(shí)，用去離子水洗滌3次，涼干后加50μl 1％SRB染液，作用10分鐘，1％醋酸洗滌3次，加0．2ml Tris緩沖液(pH=9．6)。在510nm處，用酶標(biāo)儀測(cè)光密度。結(jié)果表1，特定化合物與13甲基十四烷酸對(duì)K562和B16細(xì)胞的IC50、IC95(μg／ml)
實(shí)驗(yàn)二將化學(xué)合成獲得的N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-苯酚，N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，3，4，5-三羥基苯甲酸-13甲基-十四烷基酯，作癌細(xì)胞體外抗癌效果對(duì)比實(shí)驗(yàn)，以13甲基十四烷酸為陽(yáng)性對(duì)照藥物。
試劑及配制方法準(zhǔn)確稱取樣品各5mg，加0．5mlDMSO溶解，4℃冰箱保存。臨用時(shí)用無(wú)血清的1640培養(yǎng)液稀釋到所需的濃度。
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)驗(yàn)一結(jié)果表2，三種特定化合物與13甲基十四烷酸對(duì)K562和816細(xì)胞的IC50、IC95(μg／ml)
從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，R基團(tuán)上的羥基數(shù)目增加，其極性增大，相應(yīng)的抗癌活性也增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)三不飽和支鏈脂肪酸與飽和支鏈脂肪酸的抗癌活性對(duì)比用化學(xué)合成的15-甲基-2-十六烯酸、15-甲基-6-十六烯酸、9-甲基-2-癸烯酸、9-甲基-6-癸烯酸，和15-甲基-十六烷酸、9-甲基-癸酸，做癌細(xì)胞體外抗癌效果對(duì)比實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)驗(yàn)一。
結(jié)果表3，飽和與不飽和支鏈脂肪酸的抗癌活性對(duì)比 從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不飽和支鏈脂肪酸比飽和支鏈脂肪酸抗癌活性強(qiáng)，其不飽和雙鍵必須是靠近COOH，這樣會(huì)加強(qiáng)R基團(tuán)的極性，達(dá)到增強(qiáng)抗癌活性的效果。實(shí)驗(yàn)四抗癌活性體內(nèi)藥效對(duì)比實(shí)驗(yàn)(實(shí)體瘤型)用小鼠宮頸癌U14模型做實(shí)驗(yàn)。取TCR系小鼠40只，雄性，體重19-22g，隨機(jī)分成4組，每組10只，按常規(guī)于各鼠的右前肢腋部皮下接種U14小塊(約2mm3／粒)后，取2組分別灌胃(i.q.)N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚與13甲基十四烷酸，用量各為0．4g／kg，每日一次，11日／療程，其余兩組分別i.g.環(huán)磷酰胺(CTX)25mg／kg(d1)和水0．2ml／10g，作為對(duì)照組。療程結(jié)束次日，處死所有小鼠，剖瘤稱重，計(jì)算抑瘤率，并進(jìn)行t檢驗(yàn)。
結(jié)果如表。
表4，抗癌活性體內(nèi)藥效對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果
從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚比13甲基十四烷酸有更好的抗癌效果，其效果與環(huán)磷酰胺相當(dāng)。從小鼠體重變化也看不出有毒性。實(shí)驗(yàn)五抗癌活性體內(nèi)藥效對(duì)比實(shí)驗(yàn)(腹水型)ICR系小鼠40只，雌性，18～219，隨機(jī)分為4組，每組10只，按常規(guī)于每鼠腹腔注射小鼠肝癌(腹水型)HAc懸液(107細(xì)胞／mm3)0．2ml／只。取其中2組分別i.g.N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚與13甲基十四烷酸400g／kg，每日一次，直至死亡。另2組分別i.g.5-Fu 25mg／kg(d1，3，5)和水0．2ml／10g，分別做為陽(yáng)性對(duì)照組和模型對(duì)照組。以荷瘤鼠存活天數(shù)為指標(biāo)計(jì)算給藥組的生命延長(zhǎng)率，結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。結(jié)果詳見(jiàn)表5。
表5，化合物對(duì)腹水型肝癌HAC荷瘤鼠的生命延長(zhǎng)作用
實(shí)驗(yàn)六N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)人乳腺癌MCF7ras移植裸鼠的藥效實(shí)驗(yàn)材料與方法雌性裸鼠Balb／c-nu／nu 30只，6周大，體重18-22g，整個(gè)實(shí)驗(yàn)中喂養(yǎng)在SPF的環(huán)境中。
在無(wú)菌條件下，進(jìn)行人乳腺癌MCF7ras皮下移植手術(shù)。將瘤塊切成小塊(約0．18×0．18×0．20mm)，用套針從皮下注入各只裸鼠的右乳脂墊。移植后隨機(jī)分成3組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組在接種后第二天開(kāi)始灌胃N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，日劑量為400mg／kg。其余兩組分別灌胃環(huán)磷酰胺(CTX)25mg／kg和水0．2ml／10g作為對(duì)照組。23天后處死所有裸鼠，剖瘤稱重，計(jì)算抑瘤率，并進(jìn)行t檢驗(yàn)。
結(jié)果表6，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)人乳腺癌MCF7ras的瘤重抑制率 從上述實(shí)驗(yàn)可以看出，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)人乳腺癌MCF7ras有很強(qiáng)的抑制作用，從體重曲線看出無(wú)毒副作用。
此外，用N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)人前列腺癌細(xì)胞DU145、人胃癌細(xì)胞SNU-1、人肺癌細(xì)胞H1688、人直腸癌細(xì)胞HCT116、人肝癌細(xì)胞SNU-423、人胰腺癌細(xì)胞CRL-1687、人中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)癌細(xì)胞SF-268、人腎癌細(xì)胞Caki-1、人黑素瘤細(xì)胞SK-MEL-5做過(guò)抗癌活性實(shí)驗(yàn)。以臺(tái)盼藍(lán)排染法計(jì)算活細(xì)胞數(shù)，計(jì)算抑制率，按直線回歸法求N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)上述各種人癌細(xì)胞的IC90為8．3μg／ml-23．2μg／ml。
本發(fā)明所合成的有特定結(jié)構(gòu)的新化合物，對(duì)人的各種癌細(xì)胞均有顯著的殺傷作用，而對(duì)人的外周血淋巴細(xì)胞在劑量大于400μg／ml時(shí)仍無(wú)殺傷作用。實(shí)驗(yàn)七N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚(樣品)對(duì)於紫外線B(UVB)引起皮膚癌的藥物預(yù)防作用材料與方法用脂質(zhì)體包裹N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，終濃度為10％。
30只雌性沒(méi)有毛的SKH-1小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組15只，每只老鼠均用5．12μgDMBA溶於200μl丙酮的藥液外敷一次，引發(fā)皮膚癌。一周後(第8天)，實(shí)驗(yàn)組老鼠開(kāi)始每只每天涂200μl的本樣品溶液，對(duì)照組每只每天涂200μl脂質(zhì)體溶劑，并於涂藥30分鐘後用紫外線B(即290～320nm)照射，劑量為(180mJ／cm2／天)以達(dá)到紫外線B輻射促使腫瘤生長(zhǎng)。30周後檢查小鼠的皮膚癌發(fā)展。
結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本樣品在皮膚癌誘發(fā)階段能起預(yù)防作用。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)看到，經(jīng)N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚處理過(guò)的實(shí)驗(yàn)組小鼠皮膚癌發(fā)病率降低53％而且與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組發(fā)病鼠的腫瘤大小亦減小87％。
本發(fā)明揭示的特定結(jié)構(gòu)的化合物，不限于N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，也不限于對(duì)皮膚癌有預(yù)防作用。由于它們是無(wú)毒物質(zhì)，人或動(dòng)物經(jīng)常服用，亦能預(yù)防各種癌癥的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)八N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚(樣品)對(duì)免疫功能的影響1．網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能取ICR系小鼠50只，雌性，19～249，隨機(jī)分為5組，每組10只。其中，正常對(duì)照組(組1)每日i．g．水O．2ml／10g；陽(yáng)性對(duì)照組(組2)于d1，6分別i．g．CTX 25 mg／kg；其余3組小鼠為樣品給藥組，分別觀察單用本樣品0．4g／kg×9d(組3)，以及在CTX抑制免疫的同時(shí)本樣品0．1g／kg(組4)和0．4g／kg(組5)i．g．×9對(duì)免疫功能的影響。末次給藥后30分鐘，各鼠尾靜脈注射一得閣(1∶10)0．15ml／只，并于此后1和5分鐘分別取血清20μl加入0．1％NaCO3中搖勻，測(cè)定OD680，計(jì)算廓清指數(shù)K=(lgOD1-lgOD2)／(t2-t1)，結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，詳見(jiàn)表7。
表7本樣品對(duì)正常及免疫抑制小鼠血清碳粒廓清指數(shù)的影響
表7提示，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)正常小鼠碳廓清率無(wú)明顯影響(P1，3>0．05)，而對(duì)因CTX抑制的小鼠碳廓清有所提高(P2，4以及P2，5均<0．001)。
2．血清溶血素生成取ICR系小鼠50只，雄性，20～23g，隨機(jī)分為5組，每組10只，給藥情況同上法(實(shí)驗(yàn)六之1．)，但在給藥后第6天給各鼠腹腔注射(i．p)35(V/V)綿羊血RBC懸液0．2ml／只，進(jìn)行免疫4天后(d10)，取血分離血清并稀釋600倍。取稀釋后的血清1ml，加入10％綿羊血RBC懸液0．5ml混勻?？瞻坠芤陨睇}水代替血清，37℃溫育30分鐘，離心(2000r／min)5分鐘，取上清液測(cè)OD540，計(jì)算半數(shù)溶血素HC50=(樣品OD／半數(shù)溶血OD)×稀釋倍數(shù)。
結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，詳見(jiàn)表8。
表8本樣品對(duì)正常及免疫抑制小鼠血清溶血素生成的影響
從表8可見(jiàn)，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚無(wú)論對(duì)正?；虮籆TX抑制的小鼠血清溶血素生成均無(wú)明顯影響(P1，3，P2，4及P2，5均高于0．05)。這提示，本樣品對(duì)機(jī)體的體液免疫無(wú)明顯影響。
3．遲發(fā)超敏反應(yīng)取ICR系小鼠50只，雌性，18～21g，隨機(jī)分為5組，每組10只，各組給藥情況同上(實(shí)驗(yàn)六之1．)，但是在療程第5日各鼠經(jīng)尾靜脈注射10％綿羊血RBNC懸液50μl／只，致敏4日(即d8)后，于各鼠左、右后肢足跖皮下注射10％綿羊血RBC懸液和生理鹽水20μl，經(jīng)過(guò)24小時(shí)，測(cè)定各足掌厚度，并以左、右足掌厚度之差值為指標(biāo)進(jìn)行t檢驗(yàn)，詳見(jiàn)表9。
表9本樣品對(duì)正常及CTX抑制小鼠遲發(fā)超敏反應(yīng)的影響
從表9可見(jiàn)，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)正常小鼠以及受CTX抑制的小鼠遲發(fā)超敏反應(yīng)均無(wú)抑制作用，P1，3，P2，4以及P2，5均高于0．05。這說(shuō)明本樣品對(duì)細(xì)胞免疫水平無(wú)明顯影響。
4．免疫器官重量遲發(fā)超敏反應(yīng)試驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)六之3．)結(jié)束的小鼠處死后，分別摘除胸腺和脾臟，計(jì)算相關(guān)的臟器系數(shù)(mg／10g體重)，結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，詳見(jiàn)表10。表10本樣品對(duì)正常及CTX抑制免疫小鼠脾、胸腺系數(shù)的影響
表10提示，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚對(duì)正常小鼠的免疫器官重量無(wú)明顯影響(無(wú)論是胸腺或脾臟P1，3均大于0．05)。對(duì)于受CTX抑制免疫功能的小鼠(單用CTX時(shí)P1，2均小于0．001)，合用本樣品后，脾臟和胸腺重量均有所改善，胸腺系數(shù)提高在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著意義(P2，5及P2，4均小于0．001)。這說(shuō)明，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚與目前臨床常用的抗癌化合物不同，在抗癌劑量下不抑制免疫功能。
本發(fā)明所揭示的特定結(jié)構(gòu)化合物，均能象N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚一樣，不但不抑制生物體的免疫功能，反而有提高免疫功能的作用。當(dāng)它們與其他化療藥物合用時(shí)，能減輕其他化療藥物的毒副作用。實(shí)驗(yàn)九N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚(樣品)的小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)1．灌胃在預(yù)試驗(yàn)證明無(wú)法測(cè)出本樣品灌胃LD50的基礎(chǔ)上，取ICR系小鼠20只，18～20g，雌雄各半，每鼠i．g．本樣品2．5g／kg，2次／日，連續(xù)觀察14日。結(jié)果，所有受試鼠除給藥第1、2日食料消耗量減少外，未見(jiàn)其他異常，全部健在，提示，本樣品口服LD50超過(guò)5g／kg，基本無(wú)毒。
2．皮下注射在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，取ICR系小鼠20只，18～20g，雌雄各半，于背部脊柱左、右側(cè)各皮下注射本樣品1g／kg，連續(xù)觀察14日，結(jié)果，給藥后所有小鼠無(wú)明顯異常表現(xiàn)，全部健在。這提示，本樣品皮下注射LD50大于2g／kg。屬于基本無(wú)毒。實(shí)驗(yàn)十N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚的抗癌機(jī)理研究1，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚(樣品)引起細(xì)胞凋亡本樣品對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用是通過(guò)引起癌細(xì)胞自行死亡(凋亡)，這是由以下兩種實(shí)驗(yàn)所證實(shí)(1)原位細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)白血病細(xì)胞株K562及肝癌細(xì)胞株SNU-423經(jīng)本樣品處理后制片，并用原位細(xì)胞凋亡測(cè)試盒(Boehringer Mannheim)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。檢測(cè)結(jié)果表明，癌細(xì)胞經(jīng)本樣品處理4小時(shí)和8小時(shí)后，顯示大量的染色細(xì)胞，并明顯高于對(duì)照組的水平，證明本樣品引起了細(xì)胞凋亡。
(2)DNA片段化實(shí)驗(yàn)白血病細(xì)胞株K562及肝癌細(xì)胞株SNU-423經(jīng)本樣品處理后，細(xì)胞內(nèi)DNA采用凋亡片段化試劑盒(Apo-alert PCR kit，Clontech，CA)檢驗(yàn)。8小時(shí)及24小時(shí)處理組經(jīng)電泳后，可見(jiàn)DNA片段的條帶，這證明本樣品確實(shí)引起凋亡。
2，N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚(樣品)引起細(xì)胞凋亡與Caspase途徑密切相關(guān)本樣品引起癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理與Caspase途徑關(guān)系密切，這體現(xiàn)在(1)細(xì)胞色素C由線粒體進(jìn)入胞漿癌細(xì)胞經(jīng)本樣品處理后，4小時(shí)起即可在胞漿中通過(guò)蛋白雜交測(cè)到細(xì)胞色素C的存在，證明本樣品的處理促使細(xì)胞色素C由線粒體進(jìn)入胞漿，這個(gè)變化已被許多實(shí)驗(yàn)證實(shí)為Caspase活化的先前步驟。
(2)Caspase的多種底物，包括Lamin-B、Rb及PARP被降解。
通過(guò)蛋白抗體雜交實(shí)驗(yàn)，可以發(fā)現(xiàn)Lamin-B、Rb及PARP從處理4小時(shí)后即有被切斷的小片段出現(xiàn)。與大部分文獻(xiàn)報(bào)道一致，這證明Caspase的活化致使這些底物被降解。Rb的去磷酸化也可觀察到，這與已有文獻(xiàn)中關(guān)于去磷酸化的Rb可引起游離的癌細(xì)胞死亡的報(bào)道一致。
本發(fā)明所指的特定結(jié)構(gòu)化合物，無(wú)論是從化學(xué)合成獲得，或是從自然界生物體內(nèi)提取獲得，或是不經(jīng)提取連同生物體一起使用，均對(duì)人和動(dòng)物有顯著抗癌防癌效果。它們可以制成液體、粉劑、片劑、針劑、膠囊，或經(jīng)脂質(zhì)體包裹，或以乳劑、膏劑或洗液供口服、注射、或外用。
實(shí)施例一12，12-二甲基十三烷酸的合成將十二烷二酸單甲酯139g(0．56mol)，新戊酸56g(0．56mol)，金屬鈉0．65g(0．028mol)，無(wú)水甲醇1390ml在2．0A的直流電源下進(jìn)行電解反應(yīng)，直至反應(yīng)液呈堿性，蒸除甲醇，水洗，真空分餾，收集120℃／0．4mmHg餾分，得12，12-二甲基十三烷酸甲酯21．5g。將上述用10％NaOH 53．5ml，甲醇64．5ml，回流2小時(shí)，蒸除甲醇，用10％HCl調(diào)至pH=2，冷卻，過(guò)濾，水洗至中性，得白色固體，真空分餾，收集170℃／0．4mmHg餾份，乙醇重結(jié)晶，得12，12，二甲基十三烷酸15．8g。實(shí)施例二N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚的合成在1000ml的三口燒瓶中加入69．55g(0．5mol)的對(duì)硝基酚和200ml濃鹽酸，加熱溶解后冷卻，在攪拌下緩慢滴加含61．25g(0．5mol)KClO3的水溶液600ml，滴完后在常溫下攪拌1小時(shí)，放置過(guò)夜，抽濾，蒸餾水洗滌。所得固體用稀乙酸水溶液重結(jié)晶，得淡黃色針狀結(jié)晶，得2-氯-4-硝基苯酚，熔點(diǎn)110-111℃，得率91％。
將64．44g(0．4mol)2-氯-4-硝基苯酚和300ml 4M的NaOH水溶液加熱回流6小時(shí)，冷卻，抽濾，結(jié)晶用少量60℃熱水溶，再用10％HCl液調(diào)PH=2，攪拌下冷卻，過(guò)濾，所得固體用水重結(jié)晶，得4-硝基-1，2-苯二酚，得率84％。
向1000ml的三口燒瓶中加入4-硝基-1，2-苯二酚49．6g(0．32mol)，再加入403ml的水和16ml濃HCl液(0．16mol)，在攪拌下分批加入83．2g(1．28mol)的Zn粉，加畢，加熱回流8小時(shí)，冷卻，抽濾，沉淀物用95％乙醇充分洗滌，洗滌液用活性炭脫色，過(guò)濾，蒸除乙醇至溶液微混濁，冷卻，置冰箱冷凍，抽濾得4-氨基-1，2-苯二酚，得率75％。
將23．2g(0．18mol)的4-氨基-1，2-苯二酚用95％乙醇溶解，在冰鹽浴下，同時(shí)滴加140ml 2M的NaOH液和含23．2g(0．18mol)13-甲基-十四碳酰氯的二氯甲烷溶液150ml，滴畢于室溫?cái)嚢?小時(shí)。用HCl調(diào)PH=3，冷凍，過(guò)濾，水洗至中性，沉淀物用50％乙醇重結(jié)晶，得N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，熔點(diǎn)85-86℃，得率85％。實(shí)施例三N-(13-甲基)-十四碳?；?L-苯丙氨酸的合成在10 ml圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入苯丙氨酸682．6 mg(4．1mmole)和2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．0 g，產(chǎn)率92．8％，mp．105-107℃。1H-NMR(CDCl3)δ7．16-7．34(m，4H，ArH)，5．88(m，1H，NH)，4．88(m，1H，CH)，3．20(m，2H，CH2)，2．19(m，2H，COCH2)，1．52(m，3H，CH，CH2)，1．26(m，18H)，0．88(d，6H，2CH3)；MS(m／e)389(M+，1)，148(40)，91(100)，57(10)，43(20)。
2，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-丙氨酸的合成在10 ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入丙氨酸368．2 mg(4．1mmol)和2M氫氧化鈉水溶液3．1 ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．01 g，產(chǎn)率78．7％，mp．65-67℃。1H-NMR(CDCl3)δ6．03(m，1H，NH)，4．61(m，1H，CH)，2．21-2．41(m，5H，COCH2，CH3)，1．62(m，2H，CH2)，1．50(m，1H，CH)，1．17-1．28(m，18H)，0．88(d，6H，2CH3)；MS(m／e)284(M-29，1)，242(20)，199(20)，129(30)，73(80)，60(75)，43(100)。
3．N-(13-甲基)-十四碳?；拾彼岬暮铣稍?0 ml圓底燒瓶中加入600 mg(2．48 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入甘氨酸186．1 mg(2．48 mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液2．48 ml(4．96mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液2．48ml(4．96 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體0．52 g，產(chǎn)率70．1％，mp．78-81℃。1H-NMR(CDCl3)δ5．98(m，1H，NH)，4．09(m，2H，CH2)，2．27(m，2H，COCH2)，1．62(m，2H，CH2)，1．50(m，1H，CH)，1．15-1．32(m，18H)，0．86(d，6H，2CH3)；MS(m／e)299(M+，2)，130(25)，117(100)，99(60)，76(30)，44(30)。
4．N-(13-甲基)-十四碳酰基-L-纈氨酸的合成在10 ml圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入纈氨酸484mg(4．1 mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液3．1 ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．07 g，產(chǎn)率76．5％，mp．79-81℃。1H-NMR(CDCl3)δ6．00(m，1H，NH)，4．60(m，1H，CH)，2．21-2．44(m，3H，COCH2，CH)，1．64(m，1H，CH)，1．17-1．26(m，20H)，0．99(m，6H，2CH3)，0．88(d，6H，2CH3)；MS(m／e)341(M+，1)，242(15)，159(35)，141(25)，72(100)，43(40)。
5．N-(13-甲基)-十四碳?；?L-亮氨酸的合成在10 ml圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入亮氨酸542 mg(4．1 mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液3．1 ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得0．94g，產(chǎn)率93．4％，mp．84-87℃。1H-NMR(CDCl3)δ5．86(m，1H，NH)，4．62(m，1H，CH)，2．38(m，2H，CH2)，2．29(t，2H，COCH2)，1．74(m，2H，CH2)，1．51(m，1H，CH)，1．17-1．27(m，18H)，0．97(d，6H，2CH3)，0．88(d，6H，2CH3)；MS(m／e)355(M+，2)，299(20)，173(80)，155(35)，132(40)，117(65)，86(100)，44(40)。
6．N-(13-甲基)-十四碳?；?L-異亮氨酸的合成在10 ml圓底燒瓶中加入726mg(3．0 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入異亮氨酸393．5mg(3．0 mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液2．25 ml(4．5mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液2．25ml(4．5 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體0．61 g，產(chǎn)率57．3％，mp．75．5-78．5℃。1H-NMR(CDCl3)δ 6．0(m，1H NH)，4．62(m，1H，CH)，2．28(m，2H，COCH2)，1．96(m，1H，CH)，1．60(m，2H，CH2)，1．09-1．25(m，18H)，0．84-0．97(m，12H，4CH3)；MS(m／e)355(M+，1)，242(20)，173(25)，155(20)，117(15)，86(100)，57(50)，43(70)。
7．N-(13-甲基)-十四碳?；?L-脯氨酸的合成在10 ml圓底燒瓶中加入726 mg(3．0 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入脯氨酸345．4 mg(3．0 mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液2．25 ml(4．5mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液2．25ml(4．5 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體0．81 g，產(chǎn)率79．6％，mp．24-26℃。1H-NMR(CDCl3)δ4．63(m，1H，CH)，3．42-3．61(m，2H，NCH2)，2．55(m，1H，1／2CH2)，2．36(t，2H，COCH2)，1．88-2．06(m，3H，CH2，1／2CH2)，1．69(m，2H，CH2)，1．52(m，1H，CH)，1．13-1．31(m，18H)，0．86(d，6H，2CH3)；MS(m／e)339(M+，1)，157(40)，113(20)，70(100)，43(20)。
8．N，N-二乙基-13-甲基-十四碳酰胺的合成在10 ml底燒瓶中加入726 mg(3．0 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入二乙胺548mg(7．5 mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30 mg和二氯甲烷5 ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10 ml，攪拌30分鐘，加入水20 ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30 ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得淡黃色油狀液體0．73 g，產(chǎn)率81．9％，1H-NMR(CDCl3)δ3．34(m，4H，2NCH2)，2．85(t，2H，COCH2)，1．62(m，2H，CH2)，1．49(m，1H，CH)，1．07-1．26(m，24H)，0．86(d，6H，2CH3)；MS(m／e)297(M+，2)，128(25)，115(100)，100(25)，58(35)，43(20)。
9．N-(13-甲基)-十四碳?；哙さ暮铣稍?0 m1圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入哌啶850．6 mg(10 mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30 mg和二氯甲烷5 ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10 ml，攪拌30分鐘，加入水20 ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30 ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得淡黃色油狀液體1．01 g，產(chǎn)率79．7％，于冰箱中放置固化，mp．＜0℃。1H-NMR(CDCl3)δ3．52(brs，2H，NCH2)，3．38(brs，2H，NCH2)，2．29(t，2H，COCH2)，1．44－1．62(m，9H)，1．12-1．28(m，18H)，0．83(d，6H，2CH3)；MS(m／e)309(M+，2)，294(10)，140(70)，127(100)，112(25)，84(40)，43(35)。
10．N-(13-甲基)-十四碳?；量┩榈暮铣稍?0 ml圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入吡咯烷711．2mg(10 mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30 mg和二氯甲烷5 ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10 ml，攪拌30分鐘，加入水20 ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30 ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得淡黃色油狀液體1．0 g，產(chǎn)率82．7％，mp．＜15℃。1H-NMR(CDCl3)δ3．41(m，4H，2NCH2)，2．22(t，2H，COCH2)，1．77-1．96(m，4H，2CH2)，1．67(m，2H，CH2)，1．48(m，1H，CH)，1．08-1．44(m，18H)，0．83(d，6H，2CH3)；MS(m／e)295(M+，1)，126(20)，113(100)，43(20)。
11．N-(13-甲基)-十四碳?；鶈徇暮铣稍?0 ml圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10 ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
在50 ml三頸瓶中加入嗎啉871．2mg(10 mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30 mg和二氯甲烷5 ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10 ml，攪拌30分鐘，加入水20 ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30 ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得白色固體，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．02 g，產(chǎn)率80％，mp．36．5-37．5℃。1H－NMR(CDCl3)δ3．67(m，4H，OCH2)，3．54(brs，4H，NCH2)，2．32(t，2H，COCH2)，1．64(m，2H，CH2)，1．51(m，1H，CH)，1．15-1．30(m，18H)，0．86(d，6H，2CH3)；MS(m／e)311(M+，3)，142(25)，129(100)，57(25)，43(20)。
12，N-(13-甲基十四烷酸酰)-2-氨基-2-脫氧葡萄糖的合成將13-甲基十四烷酸和二氯亞砜反應(yīng)制得13-甲基十四烷酰氯。將其與鹽酸-D-氨基-2-脫氧葡萄糖在NaOH水溶液中，反應(yīng)制得N-(13-甲基十四烷酸酰)-2-氨基-2-脫氧葡萄糖。實(shí)施例四1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基)十四酮的合成將無(wú)水氯化鋅165g(1．2mol)，13-甲基十四烷酸290g(1．2mol)加熱溶解，攪拌下加入間苯二酚1 32g(1．2mol)，加熱至155℃，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)畢，冷卻，加入10％鹽酸500ml稀釋，過(guò)濾，用10％鹽酸洗，水洗，50％乙醇重結(jié)晶，得1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基)十四酮。實(shí)施例五15-甲基-2-十六烯酸的合成在裝有攪拌裝置、冷凝器、干燥管的三口燒瓶?jī)?nèi)，加入300ml干燥的甲苯和138g(6．0mol)金屬鈉，攪拌下滴加256g(1．0mol)13-甲基十四烷酸甲酯的200ml無(wú)水甲醇溶液，5分鐘內(nèi)加完，繼續(xù)加入800ml甲醇，攪拌加熱回流至金屬鈉完全消失。加水200ml，加熱回流30分鐘，蒸除甲醇和甲苯，分層除去水層，油層進(jìn)行真空分餾，收集140-142℃／1mmHg的餾份，得13-甲基-1-十四烷醇142．6g，收率63％。
在裝有攪拌裝置和冷凝器的三口燒瓶?jī)?nèi)加入氯鉻酸吡啶鹽161．6g(0．75mol)，二氯甲烷450ml，攪拌下緩慢滴加114g(0．50mol)13-甲基-1-十四烷醇的150ml二氯甲烷溶液，室溫下攪拌1．5小時(shí)。靜置，傾取上層液體，并和乙醚100ml洗滌剩余膠狀物。合并液體，分別用飽和NaCl，10％HCl，及含5％NaHCO3的飽和NaCl溶液洗滌，無(wú)水氯化鈣干燥，蒸除溶劑，得13-甲基-十四醛57．6g，收率51％。
在燒瓶?jī)?nèi)加入13-甲基十四醛56．5g(0．25mol)，丙二酸26．5g(0．51mol)，吡啶30．8ml(0．374mol)，加熱回流反應(yīng)3小時(shí)。冷卻下加入30％硫酸至PH=3。用乙醚提取，蒸除乙醚，真空分餾收集170-172℃／1mmHg的餾份，得15-甲基-2-十六烯酸50．9g，收率76％。
9-甲基-2-癸烯酸的合成將己二酸單酯102g(0．42mol)，異戊酸84．4g(0．84mol)，金屬鈉0．5g(0．022mol)，甲醇1020ml，在1．5A的直流電源下進(jìn)行電解合成，至反應(yīng)液呈堿性，蒸除甲醇，水洗，真空分餾，收集108℃／23mmHg的餾分，得7-甲基辛酸甲酯53g，收率52％。
合成方法同(1)。
金屬鈉39．5g(1．72mol)，甲苯100ml，7-甲基辛酸甲酯52g(0．29mol)，無(wú)水甲醇260ml反應(yīng)得7-甲基-1-辛醇44．3g，收率85％。
7-甲基-1-辛醇44．3g(0．31mol)，氯鉻酸吡啶鹽100g(0．465mol)反應(yīng)得7-甲基辛醛31g，收率70％。
7-甲基辛醛20g(0．14mol)，吡啶15ml，丙二酸15g(0．14mol)，反應(yīng)得9-甲基-2-癸烯酸16g，收率80％。
本發(fā)明不限于這些實(shí)施例，因?yàn)樗鼈冎皇怯脕?lái)具體闡明本發(fā)明的，而具有同等功能的物質(zhì)及其生產(chǎn)方法亦應(yīng)落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1，一類具有特定結(jié)構(gòu)的化合物，對(duì)人和動(dòng)物具有顯著的治療癌癥和預(yù)防癌癥的效果，卻沒(méi)有毒副作用。該類化合物的結(jié)構(gòu)必須由末端基團(tuán)、前端基團(tuán)、以及連接它們的長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基三部分組成末端基團(tuán)必須是異丙基 或仲丁基 末端基團(tuán)必須通過(guò)長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基與前端基團(tuán)相連，長(zhǎng)鏈碳的個(gè)數(shù)是介于5-19的整數(shù)。前端基團(tuán)必須是具有極性的基團(tuán)，該基團(tuán)極性越大，抗癌防癌效果越強(qiáng)。該類化合物的分子式可表達(dá)為 其中n=5～19，m=0～n／2的整數(shù)；R為任何具有極性的基團(tuán)。
2，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，其分子式中帶活性的基團(tuán)R可以是、但不限于是以下基團(tuán)之一 其中酚羥基數(shù)目為1-5，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上；(2)?；苌?，-CO-R1，其中R1可以是、但不限于以下結(jié)構(gòu)苯酚胺基(其中酚羥基數(shù)目為1-5，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上)、氨基酸、葡萄糖、二乙胺、呱啶、吡咯烷、嗎啉、或羥基-羧基-苯胺基，其中羥基、羧基可在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上；例如3-羥基-4-羧基-苯胺基。 (3)羥基取代苯甲酰氧基衍生物；(4)羥基苯甲酰基，其中酚羥基數(shù)目為1-5個(gè)，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上；(5)羥基苯基，其中酚羥基數(shù)目為1-5個(gè)，可以在結(jié)構(gòu)允許的任何位置上；(6)α-取代羧酸衍生物，其結(jié)構(gòu)可以用一般式表示如下 其中R2可以為鹵素、氨基等帶極性基團(tuán)。
3，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，它可以是，但不限于是以下物質(zhì)N-(11-甲基十二烷基)-4-氨基-1，2-苯二酚N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚N-(11-甲基十二烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚N-(13-甲基十四烷酸酰)-2-氨基-2-脫氧葡萄糖1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基十四酮)4-(13甲基十四烷基)-1，3-苯二酚2-氨基-13甲基十四烷酸12，12-二甲基十三烷酰-4-氨基-1，2-苯二酚，N-(12甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-2-羥基苯甲酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-苯丙氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-丙氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；拾彼?，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-纈氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-亮氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-異亮氨酸，N-(13-甲基)-十四碳?；?L-脯氨酸，N，N-二乙基-13-甲基-十四碳酰胺，N-(13-甲基)-十四碳酰基哌啶，N-(13-甲基)-十四碳?；量┩?，N-(13-甲基)-十四碳?；鶈徇?，N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-苯酚，3，4，5-三羥基苯甲酸-13甲基-十四烷基酯。
4，具有抗癌、防癌作用的叔脂肪酸，其一般結(jié)構(gòu)式為 其中n=5～19，m=0～n／2的整數(shù)。
5，根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有抗癌、防癌作用的叔脂肪酸，它可以是，但不限于是12，12-二甲基十三烷酸，10，10-二甲基十一烷酸。
6，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，它所治療的癌癥可以是、但不限于是白血病、乳腺癌、前列腺癌、腎癌、肺癌、胃癌、肝癌、直腸癌、皮膚癌、神經(jīng)中樞系統(tǒng)癌、宮頸癌、黑素瘤、皮膚癌。
7，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，當(dāng)用于治療和預(yù)防癌癥時(shí)，這些化合物可制成液體、粉劑、片劑、針劑、膠囊，或經(jīng)脂質(zhì)體包裹，或以乳劑、膏劑或洗液供人和動(dòng)物口服、注射、或外用。
8，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，它可以由化學(xué)合成獲得，或從自然界生物體內(nèi)提取獲得，或不經(jīng)提取連同生物體一起使用。
9，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，它是N-(13甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，能預(yù)防人皮膚癌。
10，根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，在抗癌劑量下不抑制免疫功能，與化療藥合用時(shí)能改善化療藥物誘導(dǎo)的免疫抑制，經(jīng)常服用能提高免疫功能。
11，根據(jù)權(quán)利要求10所述的具有抗癌、防癌作用的化合物，它可以是，但不限于是N-(12甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，當(dāng)它與化療藥物環(huán)磷酰胺合用時(shí)，能提高生物體的免疫功能，降低毒副作用。
12，不飽和支鏈脂肪酸的抗癌防癌作用，它比對(duì)應(yīng)的飽和支鏈脂肪酸抗癌活性強(qiáng)，其不飽和雙鍵位置越靠近羧基，抗癌活性越強(qiáng)。
13，根據(jù)權(quán)利要求12所述的不飽和支鏈脂肪酸可以是，但不限于是15-甲基-2-十六烯酸，9-甲基-2-癸烯酸。
14，獲得權(quán)利要求1所述的具有抗癌、防癌作用的化合物的化學(xué)合成方法，它可以、但不限于以下方法。(1)末端是異丙基或仲丁基或叔丁基的基團(tuán)以及所需的烷基與烯基，可以從相應(yīng)的異脂肪酸或前異脂肪酸或叔脂肪酸合成。(2)叔脂肪酸的合成方法，以12，12-二甲基十三烷酸為例說(shuō)明。將十二烷二酸單甲酯139g(0．56mol)，新戊酸56g(0．56mol)，金屬鈉0．65g(0．028mol)，無(wú)水甲醇1390ml在2．0 A的直流電源下進(jìn)行電解反應(yīng)，直至反應(yīng)液呈堿性，蒸除甲醇，水洗，真空分餾，收集120℃／0．4mmHg餾分，得12，12-二甲基十三烷酸甲酯21．5g。將上述用10％NaOH 53．5ml，甲醇64．5ml，回流2小時(shí)，蒸除甲醇，用10％HCl調(diào)至pH=2，冷卻，過(guò)濾，水洗至中性，得白色固體，真空分餾，收集170℃／0．4mmHg餾份，乙醇重結(jié)晶，得12，12，二甲基十三烷酸15．8g。(3)前端基團(tuán)R是苯酚胺基類化合物的合成方法，以N-(11-甲基十二烷基)-4-氨基-1，2-苯二酚為例說(shuō)明。將11-甲基十二烷酸甲酯用金屬鈉和甲醇還原為11-甲基-1-十二醇，將其與氯化亞砜反應(yīng)得到11-甲基-1-氯十二烷，再將其與4-氨基-1，2-苯二酚反應(yīng)制得N-(11-甲基十二烷基)-4-氨基-1，2-苯二酚，(N-(11-Methyldodecyl)-4-amino-1，2-benzerdiol)。(4)前端基團(tuán)R是酰基衍生物-CO-R1，(a)其中R1為苯酚胺基類化合物的合成方法，以N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚為例說(shuō)明。在1000ml的三口燒瓶中加入69．55g(0．5mol)的對(duì)硝基酚和200ml濃鹽酸，加熱溶解后冷卻，在攪拌下緩慢滴加含61．25g(0．5mol)KClO3的水溶液600ml，滴完后在常溫下攪拌1小時(shí)，放置過(guò)夜，抽濾，蒸餾水洗滌。所得固體用稀乙酸水溶液重結(jié)晶，得淡黃色針狀結(jié)晶，得2-氯-4-硝基苯酚，熔點(diǎn)110-111℃，得率91％。將64．44g(0．4mol)2-氯-4-硝基苯酚和300ml 4M的NaOH水溶液加熱回流6小時(shí)，冷卻，抽濾，結(jié)晶用少量60℃熱水溶，再用10％HCl液調(diào)PH=2，攪拌下冷卻，過(guò)濾，所得固體用水重結(jié)晶，得4-硝基-1，2-苯二酚，得率84％。向1000ml的三口燒瓶中加入4-硝基-1，2-苯二酚49．6g(0．32mol)，再加入403ml的水和16ml濃HCl液(0．16mol)，在攪拌下分批加入83．2g(1．28mol)的Zn粉，加畢，加熱回流8小時(shí)，冷卻，抽濾，沉淀物用95％乙醇充分洗滌，洗滌液用活性炭脫色，過(guò)濾，蒸除乙醇至溶液微混濁，冷卻，置冰箱冷凍，抽濾得4-氨基-1，2-苯二酚，得率75％。將23．2g(0．18mol)的4-氨基-1，2-苯二酚用95％乙醇溶解，在冰鹽浴下，同時(shí)滴加140ml 2M的NaOH液和含23．2g(0．18mol)13-甲基-十四碳酰氯的二氯甲烷溶液150ml，滴畢于室溫?cái)嚢?小時(shí)。用HCl調(diào)PH=3，冷凍，過(guò)濾，水洗至中性，沉淀物用50％乙醇重結(jié)晶，得N-(13-甲基十四烷酸酰)-4-氨基-1，2-苯二酚，熔點(diǎn)85-86℃，得率85％。(b)其中R1為苯丙氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；?L-苯丙氨酸為例說(shuō)明。在10 ml圓底燒瓶中加入1．0 g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2 ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50 ml三頸瓶中加入苯丙氨酸682．6mg(4．1mmole)和2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2 mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1 ml(6．2 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．0g，產(chǎn)率92．8％。(c)其中R1為丙氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；?L-丙氨酸為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入丙氨酸368．2 mg(4．1mmol)和2M氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．01g，產(chǎn)率78．7％。(d)其中R1為甘氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；拾彼釣槔f(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入600 mg(2．48 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入甘氨酸186．1mg(2．48mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液2．48ml(4．96 mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液2．48ml(4．96mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體0．52g，產(chǎn)率70．1％。(e)其中R1為纈氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；?L-纈氨酸為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入纈氨酸484mg(4．1mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2 mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．07g，產(chǎn)率76．5％。(f)其中R1為亮氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；?L-亮氨酸的合成為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1 mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入亮氨酸542mg(4．1mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液3．1ml(6．2mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得0．94g，產(chǎn)率93．4％。(g)其中R1為異亮氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；?L-異亮氨酸為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入726mg(3．0mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入異亮氨酸393．5mg(3．0mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液2．25ml(4．5mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液2．25ml(4．5mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體0．61g，產(chǎn)率57．3％。(h)其中R1為脯氨酸的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；?L-脯氨酸為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入726 mg(3．0mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入脯氨酸345．4mg(3．0mmol)和2M的氫氧化鈉水溶液2．25ml(4．5mmol)，攪拌至溶解。于冰水浴條件下，由兩個(gè)恒壓漏斗同時(shí)滴入2M的氫氧化鈉水溶液2．25ml(4．5mmol)和上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)，在反應(yīng)中有大量白色固體產(chǎn)生。向反應(yīng)液中加入乙醇，使固體溶解，蒸去有機(jī)溶劑，向剩余物中加入少量水，使呈澄明溶液，滴入10％的稀鹽酸，析出白色固體，濾集后，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體0．81g，產(chǎn)率79．6％。(i)其中R1為吡啶的化合物的合成方法，以N，N-二乙基-13-甲基-十四碳酰胺為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入726mg(3．0mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入二乙胺548mg(7．5mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30mg和二氯甲烷5ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10ml，攪拌30分鐘，加入水20ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得淡黃色油狀液體0．73g，產(chǎn)率81．9％。(j)其中R1為呱啶的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳酰基哌啶為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入哌啶850．6mg(10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30mg和二氯甲烷5ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10 ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10ml，攪拌30分鐘，加入水20ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得淡黃色油狀液體1．01g，產(chǎn)率79．7％，于冰箱中放置固化。(k)其中R1為吡咯烷的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳酰基吡咯烷為例說(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入吡咯烷711．2mg(10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30mg和二氯甲烷5ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10ml，攪拌30分鐘，加入水20ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得淡黃色油狀液體1．0g，產(chǎn)率82．7％。(1)其中R1為嗎啉的化合物的合成方法，以N-(13-甲基)-十四碳?；鶈徇鵀槔f(shuō)明。在10ml圓底燒瓶中加入1．0g(4．1mmol)13-甲基-十四碳羧酸和2ml二氯亞砜，加熱回流4小時(shí)，蒸去二氯亞砜，加入10ml石油醚帶除殘余的二氯亞砜，所得酰氯直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。在50ml三頸瓶中加入嗎啉871．2mg(10mmol)、N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)30mg和二氯甲烷5ml，攪拌至溶解，于冰水浴條件下，滴入上述所得酰氯的二氯甲烷溶液10ml，滴畢，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。向反應(yīng)液中加入10％的稀鹽酸10ml，攪拌30分鐘，加入水20ml，用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液(30ml×3)，合并有機(jī)相，水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥，濃縮得白色固體，乙醇-水重結(jié)晶得白色固體1．02g，產(chǎn)率80％。(m)其中R1為葡萄糖的化合物的合成方法，以N-(13-甲基十四烷酸酰)-2-氨基-2-脫氧葡萄糖為例說(shuō)明。將13-甲基十四烷酸和二氯亞砜反應(yīng)制得13-甲基十四烷酰氯。將其與鹽酸-D-氨基-2-脫氧葡萄糖在NaOH水溶液中，反應(yīng)制得N-(13-甲基十四烷酸酰)-2-氨基-2-脫氧葡萄糖。(5)前端基團(tuán)R是羥基取代苯甲酰氧基的化合物的合成方法，以3，4，5-三羥基苯甲酸-13-甲基十四烷基酯為例說(shuō)明。在金屬鈉的甲苯溶液中，滴加13甲基十四烷酸甲酯的無(wú)水甲醇溶液，加畢，加熱回流直到金屬鈉消失。加入少量水，回流，使固體全部溶解，酸化，過(guò)濾，蒸除溶劑，殘液進(jìn)行真空減壓分餾，收集140-142℃／1mmHg餾分，得13-甲基十四烷醇。將13-甲基十四烷醇，3，4，5-三羥基苯甲酸在濃硫酸存在下，以甲苯回流帶水進(jìn)行酯化反應(yīng)，制得3，4，5-三羥基苯甲酸-13甲基十四烷基酯。(6)前端基團(tuán)R是2，4-二羥基苯甲碳基的化合物的合成方法，以1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基十四酮)為例說(shuō)明。將無(wú)水氯化鋅165g(1．2mol)，13-甲基十四烷酸290g(1．2mol)加熱溶解，攪拌下加入間苯二酚132g(1．2mol)，加熱至155℃，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)畢，冷卻，加入10％鹽酸500ml稀釋，過(guò)濾，用10％鹽酸洗，水洗，50％乙醇重結(jié)晶，得1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基)十四酮。(7)前端基團(tuán)R是2，4-二羥基苯基的化合物的合成方法，以4-(13-甲基十四烷基)-1，3-苯二酚為例說(shuō)明。將1-(2，4-二羥基苯基)-1-(13-甲基)十四酮通過(guò)鋅粉、鹽酸進(jìn)行還原反應(yīng)，制得4-(13甲基十四烷基)-1，3-苯二酚，(4-(13-Methyltetradecyl)-1，3-benzenediol)。(8)前端基團(tuán)R是α-取代羧酸衍生物的化合物的合成方法，以2-氨基-13甲基十四烷酸為例說(shuō)明。將13-甲基十四烷酸與溴在少量三氯化磷存在下，制得2-溴-13-甲基十四烷酸。再將其與氨水反應(yīng)，制得2-氨基-13-甲基十四烷酸，(2-Amino-13-methyl-tetradecanoic acid)。(9)前端基團(tuán)R是CHCOOH的不飽和支鏈脂肪酸的合成方法，以15-甲基-2-十六烯酸為例說(shuō)明。在裝有攪拌裝置、冷凝器、干燥管的三口燒瓶?jī)?nèi)，加入300ml干燥的甲苯和138g(6．0mol)金屬鈉，攪拌下滴加256g(1．0mol)13-甲基十四烷酸甲酯的200ml無(wú)水甲醇溶液，5分鐘內(nèi)加完，繼續(xù)加入800ml甲醇，攪拌加熱回流至金屬鈉完全消失。加水200ml，加熱回流30分鐘，蒸除甲醇和甲苯，分層除去水層，油層進(jìn)行真空分餾，收集140-142℃／1mmHg的餾份，得13-甲基-1-十四烷醇142．6g，收率63％。在裝有攪拌裝置和冷凝器的三口燒瓶?jī)?nèi)加入氯鉻酸吡啶鹽161．6g(0．75mol)，二氯甲烷450ml，攪拌下緩慢滴加114g(0．50mol)13-甲基-1-十四烷醇的150ml二氯甲烷溶液，室溫下攪拌1．5小時(shí)。靜置，傾取上層液體，并和乙醚100ml洗滌剩余膠狀物。合并液體，分別用飽和NaCl，10％HCl，及含5％NaHCO3的飽和NaCl溶液洗滌，無(wú)水氯化鈣干燥，蒸除溶劑，得13-甲基-十四醛57．6g，收率51％。在燒瓶?jī)?nèi)加入13-甲基十四醛56．5g(0．25mol)，丙二酸26．5g(0．51mol)，吡啶30．8ml(0．374mol)，加熱回流反應(yīng)3小時(shí)。冷卻下加入30％硫酸至PH=3。用乙醚提取，蒸除乙醚，真空分餾收集170-172℃／1mmHg的餾份，得15-甲基-2-十六烯酸50．9g，收率76％。(10)前端基團(tuán)R是CHCOOH的不飽和支鏈脂肪酸的合成方法，再以9-甲基-2-癸烯酸為例說(shuō)明。將已二酸單酯102g(0．42mol)，異戊酸84．4g(0．84mol)，金屬鈉0．5g(0．022mol)，甲醇1020ml，在1．5A的直流電源下進(jìn)行電解合成，至反應(yīng)液呈堿性，蒸除甲醇，水洗，真空分餾，收集108℃／23mmHg的餾分，得7-甲基辛酸甲酯53g，收率52％。合成方法同(9)。金屬鈉39．5g(1．72mol)，甲苯100ml，7-甲基辛酸甲酯52g(0．29mol)，無(wú)水甲醇260ml反應(yīng)得7-甲基-1-辛醇44．3g，收率85％。7-甲基-1-辛醇44．3g(0．31mol)，氯鉻酸吡啶鹽100g(0．465mol)反應(yīng)得7-甲基辛醛31g，收率70％。7-甲基辛醛20g(0．14mol)，吡啶15ml，丙二酸15g(0．14mol)，反應(yīng)得9-甲基-2-癸烯酸16g，收率80％。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于一類具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物,以及生產(chǎn)這類化合物的方法。該類化合物的結(jié)構(gòu)必須由3個(gè)部分組成:1,末端基團(tuán)必須是異丙基、仲丁基、或是叔丁基;2,末端基團(tuán)必須通過(guò)長(zhǎng)鏈烷基或長(zhǎng)鏈烯基與前端基團(tuán)相接;3,前端基團(tuán)必須是極性基團(tuán),極性越強(qiáng),該類化合物的抗癌作用亦越強(qiáng)。此外,該類化合物還有防癌與提高免疫功能的作用,而對(duì)人與動(dòng)物無(wú)毒副作用。
文檔編號(hào)C07B41/08GK1282730SQ00121319
公開(kāi)日2001年2月7日 申請(qǐng)日期2000年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月19日
發(fā)明者楊振華 申請(qǐng)人:楊振華