專利名稱：：含有egcg和番茄紅素的口服組合物的制作方法含有EGCG和番茄紅素的口服組合物本發(fā)明涉及一種含有特定比例的(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和番茄紅素(lycopene)的口服組合物，其用于防止皮膚由于曰光造成的老化(光老化)。如果使皮膚長期暴露于UV輻射下，那么這會(huì)導(dǎo)致表皮以及真皮的損傷，諸如在受影響皮膚區(qū)域出現(xiàn)角化過度、角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)育不良和真皮彈性組織變性，臨床上表現(xiàn)為具有光化或日光化角化癥的光老化皮膚。對皮膚光損傷以及光老化的分子機(jī)理的研究是目前令人關(guān)注的課題。UV輻射活化全部范圍的細(xì)胞表面生長因子及細(xì)胞因子受體(RittieandFisher2002)。這種不依賴配體的受體活化誘導(dǎo)多重下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，所述途徑集中刺激轉(zhuǎn)錄因子AP-1。被Ap-l上調(diào)的基因中有若干基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)家族成員。因此，MMP及其它物質(zhì)負(fù)責(zé)陽光UV輻射-誘導(dǎo)的皮膚損傷，影響皮膚緊張性和回彈能力，導(dǎo)致過早老化。MMP降解皮膚細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原和彈性蛋白。提高的MMP表達(dá)和活性引起增強(qiáng)的膠原蛋白水解，其與降低的膠原表達(dá)一起導(dǎo)致皮膚彈性組織變性和皺紋生產(chǎn)(Bemeburg2003)。其癥狀包括皮革狀肌理(leatherytexture)、皺紋、斑狀色素沉著、松弛和暗黃(sallowness)。MMP是最重要和充分確定的光老化相關(guān)基因之一。因此為了確立膳食成分對光老化的防護(hù)能力，主要感興趣的是研究其對UV-A誘導(dǎo)的MMP阻抑的影響。(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是抑制多種皮膚膠原酶的膳食化合物之一(Leeetal.,2005)。也發(fā)現(xiàn)一種維生素原A類胡蘿卜素——^-胡蘿卜素阻抑UVA-誘導(dǎo)的膠原酶(Wertzeta1.,2004)。另一方面，一種非維生素原A膳食類胡蘿卜素——番茄紅素被描述為進(jìn)一步提高UVA-誘導(dǎo)的MMPl(Offordetal.,2002)。該提高只有與維生素E組合才能被阻止。因此，提供防止陽光誘導(dǎo)的皮膚老化(光老化)的活性成分是本發(fā)明的一個(gè)目的。驚人地發(fā)現(xiàn)，通過EGCG與番茄紅素的協(xié)同組合，特別是通過含比例在100:1到1:1的范圍內(nèi)的EGCG和番茄紅素組合的口服組合物，達(dá)成了本發(fā)明的目的。本領(lǐng)域技術(shù)人員不會(huì)預(yù)見到EGCG與番茄紅素的組合在阻抑UVA-誘導(dǎo)的MMP1中會(huì)顯示優(yōu)良的協(xié)同活性，并進(jìn)而提供抗衰老/抗皺效應(yīng)。在實(shí)際的陽光/UV-光暴露之前數(shù)天到數(shù)周給予番茄紅素和EGCG的協(xié)同組合時(shí)，也可防止光老化。在密集的陽光暴露(即日光浴)之前、期間和之后立即使用時(shí)，其也具有防護(hù)作用。本文使用的術(shù)語"EGCG"表示(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯禾B/或其一種或多種衍生物(例如酯化形式、糖苷、硫酸酯)。特別優(yōu)選的是(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯自身。在本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用的EGCG具有至少80y。，優(yōu)選地至少85%，更優(yōu)選地至少90%，進(jìn)一步更優(yōu)選地至少92%，最優(yōu)選地至少94%的純度。還特別優(yōu)選的是下述水性綠茶提取物，其以提取物的總量為基礎(chǔ)以至少80%(優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%，進(jìn)一步更優(yōu)選至少92%，最優(yōu)選至少94%)的含量含有EGCG，例如優(yōu)選地通過US6,383,392、EP1103550、US10/246112和EP1077211中所述任何方法獲得的綠茶提取物。優(yōu)選地，其它多酚和兒茶素如沒食子兒茶素沒食子酸酯、兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素和表兒茶素的總量以綠茶提取物的總重為基礎(chǔ)按重量計(jì)少于或等于5%。更優(yōu)選地，沒食子兒茶素沒食子酸酯的含量少于或等于按重量計(jì)2.5%，和/或表兒茶素沒食子酸酯的含量少于或等于按重量計(jì)5%(優(yōu)選地少于或等于按重量計(jì)3%)。根據(jù)本發(fā)明，較好的是綠茶提取物中兒茶素的量少于或等于按重量計(jì)2.5%,優(yōu)選地少于或等于按重量計(jì)O.l%，和/或沒食子酸的量少于或等于按重量計(jì)0.1%，各含量以綠茶提取物的總重為基礎(chǔ)。本文使用的術(shù)語"番茄紅素"包括所有E-和Z-立體異構(gòu)體。或者也可使用含有高番茄紅素含量的番茄提取物。根據(jù)本發(fā)明，較好的是EGCG與番茄紅素的比例在100:1到1:1的范圍內(nèi)，優(yōu)選在50:1到3:1的范圍內(nèi)，最優(yōu)選在25:1到5:1的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，以在下文給出的范圍內(nèi)的有效的每日量("每曰劑量")施用活性成分是有利的。每日劑量是(通過單一劑量)一次使用或是在多個(gè)劑量中使用是沒有關(guān)系的。EGCG:體重約70kg的人的每日劑量50到600mg，體重約70kg的人優(yōu)選的每日劑量150到300mg。番茄紅素:體重約70kg的人的每日劑量不應(yīng)超過40mg，優(yōu)選地不超過25mg;體重約70kg的人的每日劑量有利地在0.1到40mg之間，更優(yōu)選地在0.5到25mg之間。如果以用于口服施用的片劑、膠囊、顆?；蚍勰┬问街苽浣M合物，則可使用賦形劑如乳糖、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、糊精和/或麥芽糖糊精、碳酸鈣、磷酸鈣和/或磷酸氫鈣、高嶺土、晶體和/或微晶纖維素和/或硅酸作為運(yùn)載體；粘合劑如水、乙醇、丙醇、單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉和/或經(jīng)水解的淀粉溶液、明膠溶液、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基淀粉、紫膠、甲基纖維素、乙基纖維素、磷酸鈣和/或聚乙烯吡咯垸酮；崩解劑如干淀粉、交聯(lián)羧甲纖維素、交聚維酮、海藻酸鈉、瓊脂粉、海帶多糖粉、碳酸氫鈉、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、月桂硫酸鈉、硬脂酸甘油單酯、淀粉和/或乳糖；崩解預(yù)防劑，如硬脂酸、可可脂和/或氫化油；吸收促進(jìn)劑，如季銨堿和/或月桂硫酸鈉；致濕劑如甘油和/或淀粉；吸附劑如淀粉、乳糖、高嶺土、膨潤土和/或膠體硅；潤滑劑如經(jīng)純化的滑石、硬脂酸鹽、硼酸粉和/或聚乙二醇；口味校正劑如蔗糖、陳皮、檸檬酸和/或琥珀酸；等等。如果以片劑的形式制備組合物，則這些組合物可以被提供為被常用包衣包裹的片劑，例如糖包裹的片劑、明膠包裹的片劑、腸溶衣包裹的片劑、薄膜包裹的片劑、雙重包裹的片劑、多層包裹的片劑等等。如下制備膠囊將根據(jù)本發(fā)明的化合物與上文舉例或本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)中己知的多種5運(yùn)載體混合，并將混合物裝入硬明膠膠囊、軟明膠膠囊等等中?？上蚋鶕?jù)本發(fā)明的組合物中添加多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)劑，例如用于維持充分平衡的營養(yǎng)，或獲得一些膳食中缺乏的足量必需營養(yǎng)物。多維生素和礦物質(zhì)補(bǔ)劑也可以用于疾病預(yù)防和營養(yǎng)損失和缺乏的防護(hù)，所述營養(yǎng)損失和缺乏由糖尿病人中有時(shí)觀察到的常見不當(dāng)膳食模式和生活模式引起。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是食物或飲料組合物。飲料可以是例如運(yùn)動(dòng)飲品、能量飲品或其它軟飲，或任何其它合適的飲料制劑。運(yùn)動(dòng)飲品是一種飲料，其旨在為運(yùn)動(dòng)員再補(bǔ)水以及恢復(fù)電解質(zhì)、糖和其它營養(yǎng)物。運(yùn)動(dòng)飲品通常是等張的，這表示它們含有與人體中相同的營養(yǎng)物比例。能量飲品是含有(合法)興奮劑、維生素(特別是維生素B)和/或礦物質(zhì)的飲料，其目的是給予使用者能量的爆發(fā)。常見的成分包括咖啡因、瓜拉那(來自瓜拉那植物的咖啡因)和/或?；撬?，多種形式的人參、麥芽糖糊精、肌醇、肉毒堿、肌酸、葡糖醛酸內(nèi)酯、輔酶Q10和/或白果。一些可含有高水平的糖或葡萄糖，而其它則全部或部分地用糖醇和/或人工甜味劑(如環(huán)己烷氨基磺酸鈣或阿司巴甜)增甜。許多這類飲料被調(diào)味和/或著色。軟飲是不含醇的飲品。通常，該術(shù)語僅用于冷飲料。熱巧克力、茶和咖啡不被認(rèn)為是軟飲。該術(shù)語最初僅表示碳酸飲品，并且通常仍然以該方式使用。如果以以下食品項(xiàng)目之一的形式制備組合物，則根據(jù)本發(fā)明，組合物中EGCG量和番茄紅素量選自下表給出的范圍時(shí)是有利的食品類別典型的每份大小每L飲料或每kg食品中的mgEGCG每L飲料或每kg食品中的mg番茄紅素比例(EGCG:番茄紅素)飲料(終產(chǎn)物)(例如軟飲、果汁、茶、湯)250mL100到600，優(yōu)選200到4004至l」2010:1到50:1乳制品(例如奶昔、酸乳、冰激凌)150g170到10004到2010:1到50:1甜品(例如巧克力、糖果、薄荷糖、果凍)每天1至U5塊，每塊5g，即每天5到25g500到10000，優(yōu)選500到100050到20010:1到100:1其它食品(例如曲奇、什錦谷物棒)25g400到4000，優(yōu)選400到140040至lj20010:1至lj50:1如果組合物以片劑或膠囊的形式存在，則根據(jù)本發(fā)明，組合物中EGCG和量和番茄紅素量選自下表中給定的范圍時(shí)是有利的類別典型的每粒片劑/膠囊的mgEGCG每粒片劑/膠囊的mg番茄紅素比例(EGCG:番茄紅素)片劑每天1-2x50到1501到105:1到100:1膠每天1-2x50到1501到105:1到100:17實(shí)施例實(shí)施例1對UV-A誘導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-1表達(dá)抑制的協(xié)同作用在37°C/5%C02中，于不含谷氨酰胺的EMEM(Earie's最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基)中培養(yǎng)原代人皮成纖維細(xì)胞至100%匯合，所述EMEM培養(yǎng)基補(bǔ)充有抗生素/抗真菌藥、2mML-谷氨酰胺和7.5%胎牛血清。輻照前48小時(shí)將細(xì)胞與EMEM(含抗生素/抗真菌藥，L-谷氨酰胺和2%胎牛血清)中期望的物質(zhì)一起預(yù)孵育。24小時(shí)后，用(新鮮制備的)含所述物質(zhì)的新鮮培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基。為了輻照，培養(yǎng)基被去除，并在6個(gè)使用磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)洗滌的步驟后被替換為磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)。然后將平板暴露于30J/cm2UVA1。UVA1輸出約為150mW/cm2。輻照后，將細(xì)胞微量培養(yǎng)板中經(jīng)磷酸鹽緩沖的鹽水與(新鮮制備的)含所述物質(zhì)的培養(yǎng)基(+7.5%胎牛血清)交換，并將細(xì)胞在C02-培養(yǎng)箱中再孵育24小時(shí)(MMP-1測定)。去除培養(yǎng)基，用經(jīng)磷酸鹽緩沖的鹽水沖洗細(xì)胞，并將整個(gè)平板冷凍在液氮中。使用RNeasy總RNA試劑盒(Qiagen，Hilden;德國)分離總RNA。通過260/280下的光度計(jì)測量來測定RNA濃度。使用用于RT-PCR的Superscriptm第一鏈合成體系對總RNA的小份試樣(75ng)進(jìn)行cDNA-合成。針對每種化合物分析兩個(gè)樣品。使用SYBRGreenPCRMasterMix(AppliedBiosystems,Darmstadt,德國)在Opticon1(MJResearch,Waltham,MA，USA)上完成PCR反應(yīng)。為了在實(shí)時(shí)PCR中比較對照細(xì)胞和經(jīng)處理的細(xì)胞的相對表達(dá)，使用2^t』^^方法。結(jié)果概括于表l中。與未經(jīng)輻照的細(xì)胞(未顯示)中檢測到的水平相比，UV-A處理誘導(dǎo)了約10倍的MMP-1RNA提高。EGCG和番茄紅素分別將該表達(dá)降低了13%和65%。相反，合并所述物質(zhì)時(shí)，UV-A誘導(dǎo)的MMP-1表達(dá)被完全廢止。這表示EGCG和番茄紅素對MMP-1調(diào)控的協(xié)同效應(yīng)，因?yàn)樵谟^察到的抑制和期望的抑制(每個(gè)單一化合物數(shù)值的總和)之間獲得了正值(即22%)。表l:皮膚成纖維細(xì)胞中MMP-1的表達(dá)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例2用于長期抗衰老預(yù)防的片劑組成<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>制備:向合適的管中添加Redivivo(番茄紅素)10%CWS/S-TG、TEAVIGOtmTG、成團(tuán)塊的乳糖、微晶纖維素、二氧化硅和交聚維酮，并通過轉(zhuǎn)鼓混合儀混合20分鐘。將硬脂酸鎂篩過lmm的篩子，添加到組合物并將組合物再次混合2分鐘。用KorschXPl壓片機(jī)將粉末壓成片劑，沖孔尺寸為17x7.87mm的長橢圓形。應(yīng)當(dāng)在春天(即提高的陽光暴露前至少兩個(gè)月)開始每天服用一片，并持續(xù)整個(gè)季節(jié)。實(shí)施例3用于加強(qiáng)抗衰老保護(hù)的即食飲品<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>制備將所有成分篩過500/mi的篩子。將粉末置于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，并在轉(zhuǎn)鼓混合儀上至少混合20分鐘。使用35g粉末通過添加水制成一升飲料。即食飲品的每份240ml制成飲品含有50mgEGCG和5mg番茄紅素。推薦在密集日曬或日光浴期間和之后每天至多服用3份。實(shí)施例4用于連續(xù)基礎(chǔ)抗衰老保護(hù)的薄荷糖(mint)組成<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>制備將TEAVIGOTG、redivivo10%CWS/S-TG、抗壞血酸精細(xì)顆粒、山梨醇、香料、甜味劑和PEG6000混合進(jìn)鼓中，并用轉(zhuǎn)鼓混合儀混合10分鐘。將山梨醇和二氧化硅篩過1mm的篩子，并將其在分離的鼓中混合10分鐘。合并兩種粉末混合物，并再次混合10分鐘。篩過1mm篩子后添加硬脂酸鎂并混合2分鐘。用KorschXPl壓片機(jī)將粉末壓成片劑，沖孔大小為8mm的圓形。推薦每天至多5粒薄荷糖(mint)。TEAVIGO、TEAVIGOTG禾Qredivivo10%CWS/S-TG:DSMNutritionalProducts的商品；Tablettose80:BrenntagN.V.的商品；AerosilTM200:Degussa的商品；PolyplasdoneTMXL10:ISP的商品。權(quán)利要求1.包含(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和番茄紅素的組合的組合物，其特征是EGCG與番茄紅素的比例在100∶1到1∶1的范圍內(nèi)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其特征是EGCG與番茄紅素的比例在50:1到3:1的范圍內(nèi)。3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其特征是EGCG與番茄紅素的比例在25:1到5:1的范圍內(nèi)。4.根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項(xiàng)的組合物，其特征是所述組合物適合口服消耗。5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其特征是所述組合物是飲料。6.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其特征是所述組合物是乳制品。7.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其特征是所述組合物是甜品。8.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的組合物用于抑制陽光誘導(dǎo)的膠原酶的用途。9.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的組合物用于降低陽光誘導(dǎo)的膠原和彈性蛋白降解的用途。10.根據(jù)權(quán)利要求1到7中任一項(xiàng)的組合物用于預(yù)防和/或降低陽光誘導(dǎo)的皺紋生成和皮膚老化的用途。全文摘要本發(fā)明提供了包含(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)和番茄紅素的組合的組合物，其特征是EGCG與番茄紅素的比例在100∶1到1∶1的范圍內(nèi)。文檔編號A61Q19/08GK101568322SQ200780047848公開日2009年10月28日申請日期2007年12月13日優(yōu)先權(quán)日2006年12月20日發(fā)明者卡林·威茲,瑞吉納·古拉爾奇克,約瑟夫·斯楚瓦格爾申請人:帝斯曼知識產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司