穩(wěn)定水平。
[0083] 圖13是顯示針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未 處理對(duì)照的膠原酶消化測(cè)定結(jié)果的線形圖。該數(shù)據(jù)顯示對(duì)于更低濃度的堿性蛋白酶與對(duì)照 (非酶處理的基質(zhì))類似的消化曲線，而對(duì)于暴露于更高濃度堿性蛋白酶的基質(zhì)，降解速率 遞增。
[0084] 圖14展示DSC結(jié)果，即根據(jù)實(shí)例3未處理組織和使用堿性蛋白酶處理的組織的變性 起始。類似于使用膠原酶易感性測(cè)試（圖13)測(cè)量的膠原穩(wěn)定性，隨著遞增的堿性蛋白濃度 而更低的變性起始指示隨堿性蛋白酶處理濃度而變的遞減的膠原穩(wěn)定性。
[0085] 圖15是針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未處理 對(duì)照的最大負(fù)載/單位寬度的區(qū)間圖。運(yùn)個(gè)數(shù)據(jù)通過(guò)拉伸測(cè)試約Icm寬條的材料至損壞同時(shí) 測(cè)量力來(lái)產(chǎn)生。使用和英斯特朗（INSTRON)機(jī)械測(cè)試系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)試。數(shù)據(jù)顯示針對(duì)所有處理 類似的強(qiáng)度。
[0086] 圖16是針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未處理 對(duì)照的彈性的區(qū)間圖。彈性是材料在位移-力曲線的線性部分中在更高負(fù)載下的剛度的量 度。彈性與懸垂性測(cè)量相反，其反映在非常低的負(fù)載(重力在組織上的力)下的剛度。在處理 組之間看到彈性無(wú)顯著變化。
[0087] 該測(cè)試顯示堿性蛋白酶處理有效地增加了使用初始處理的pADM的柔軟性，柔軟性 伴隨著繼續(xù)處理隨后增加。此外，低水平的堿性蛋白酶暴露不會(huì)不利地影響最大負(fù)載、膠原 酶生物易感性、和彈性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于處理組織基質(zhì)的方法，包括： 選擇一種組織基質(zhì);并且 使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在包括一個(gè)孵育時(shí)間的條件下于具有堿性蛋白酶活性的 一種溶液中相接觸，這些條件經(jīng)選擇以產(chǎn)生所希望的柔軟性增加而不產(chǎn)生顯著的膠原降 解，該柔軟性是通過(guò)該組織基質(zhì)的懸垂性試驗(yàn)來(lái)測(cè)量。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與該蛋白水解酶在不產(chǎn)生拉伸強(qiáng)度、撕 裂強(qiáng)度、縫合強(qiáng)度、抗蠕變性、爆裂強(qiáng)度、熱轉(zhuǎn)變溫度、膠原酶易感性或其組合中至少一者的 不希望的變化的條件下相接觸。3. 如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的方法，其中這些條件經(jīng)選擇以提供組織柔軟性的實(shí) 質(zhì)最大增加。4. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)是一種非靈長(zhǎng)類組織基質(zhì)。5. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)是一種豬組織基質(zhì)。6. 如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與該蛋白水解酶在不產(chǎn)生 彈性的不希望的變化的條件下相接觸。7. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括處理該組織基質(zhì)以從該組織基質(zhì) 中去除至少一些細(xì)胞和細(xì)胞組分。8. 如權(quán)利要求7所述的方法，包括從該組織基質(zhì)中去除所有細(xì)胞和細(xì)胞組分。9. 如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)是一種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)。10. 如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)包括一種真皮組織基質(zhì)。11. 如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶相接觸包 括使該組織基質(zhì)與一種具有活性為lxl(T6單位至〇. 015安森(Anson)單位/mL的堿性蛋白酶 的溶液相接觸。12. 如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶相接觸包 括使該組織基質(zhì)與一種具有活性為lxl(T6單位至1.5xl(T3安森單位/mL的堿性蛋白酶的溶 液相接觸。13. 如權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶相接觸包 括使該組織基質(zhì)與一種具有活性為約2xl(T5單位至約4xl(T5安森單位/mL的堿性蛋白酶的 溶液相接觸。14. 如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括包裝該組織基質(zhì)。15. 如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括將該組織基質(zhì)滅菌。16. 如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生 懸垂值減少為30 %或至少30 %的條件下相接觸。17. 如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生 懸垂值減少為40 %或至少40 %的條件下相接觸。18. 如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生 懸垂值減少為50 %或至少50 %的條件下相接觸。19. 如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生 懸垂值減少為60 %或至少60 %的條件下相接觸。20. 如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生 懸垂值為0.2-0.4的條件下相接觸。21. 如權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)所述的方法，其中該懸垂性試驗(yàn)包括將一種具有已知圓 面積的組織基質(zhì)放置在一個(gè)具有已知直徑的圓形基座的頂部上，并且在它懸垂于該基座上 方之后，將該組織基質(zhì)的投影面積除以該組織基質(zhì)圓的原面積來(lái)確定懸垂值。22. -種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)，由權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的方法制成。23. -種組織基質(zhì)，包括： 一種具有小于〇. 4的懸垂值的豬無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)。24. 如權(quán)利要求23所述的組織基質(zhì)，其中該懸垂值小于0.35。25. 如權(quán)利要求23-24中任一項(xiàng)所述的組織基質(zhì)，其中該懸垂性試驗(yàn)包括將一種具有已 知圓面積的組織基質(zhì)放置在一個(gè)具有已知直徑的圓形基座的頂部上，并且在它懸垂于該基 座上方之后，將該組織基質(zhì)的投影面積除以該組織基質(zhì)圓的原面積來(lái)確定懸垂值。26. -種用于處理組織基質(zhì)的方法，包括： 選擇一種真皮組織基質(zhì);并且 使該真皮組織基質(zhì)與堿性蛋白酶相接觸;并且 用輻射處理該組織基質(zhì)，其中該堿性蛋白酶是在經(jīng)選擇以在用輻射處理后產(chǎn)生所希望 的組織基質(zhì)柔軟性的條件下提供的。27. 如權(quán)利要求26所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與該蛋白水解酶在不產(chǎn)生拉伸強(qiáng)度、 撕裂強(qiáng)度、縫合強(qiáng)度、抗蠕變性、爆裂強(qiáng)度、熱轉(zhuǎn)變溫度、膠原酶易感性或其組合中至少一者 的不希望的變化的條件下相接觸。28. 如權(quán)利要求26-27中任一項(xiàng)所述的方法，其中這些條件經(jīng)選擇以提供組織柔軟性的 實(shí)質(zhì)最大增加。29. 如權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)是一種非靈長(zhǎng)類基質(zhì)。30. 如權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)是一種豬組織基質(zhì)。31. 如權(quán)利要求26-30中任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括處理該組織基質(zhì)以從該組織基 質(zhì)中去除至少一些細(xì)胞和細(xì)胞組分。32. 如權(quán)利要求31所述的方法，包括從該組織基質(zhì)中去除所有細(xì)胞和細(xì)胞組分。33. 如權(quán)利要求26-32中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)是一種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)。34. 如權(quán)利要求26-33中任一項(xiàng)所述的方法，其中使用一種懸垂性試驗(yàn)來(lái)測(cè)量該組織柔 軟性，該懸垂性試驗(yàn)包括將一種具有已知圓面積的組織基質(zhì)放置在一個(gè)具有已知直徑的圓 形基座的頂部上，并且在它懸垂于該基座上方之后，將該組織基質(zhì)的投影面積除以該組織 基質(zhì)圓的原面積來(lái)確定懸垂值。35. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生懸垂值減少 為30 %或至少30 %的條件下相接觸。36. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生懸垂值減少 為40 %或至少40 %的條件下相接觸。37. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生懸垂值減少 為50 %或至少50 %的條件下相接觸。38. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生懸垂值減少 為60 %或至少60 %的條件下相接觸。39. 如權(quán)利要求34所述的方法，其中使該組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在以產(chǎn)生懸垂值為 0.2-0.4的條件下相接觸。40. 如權(quán)利要求26-39中任一項(xiàng)所述的方法，其中該組織基質(zhì)包括一種真皮組織基質(zhì)。41. 如權(quán)利要求26-39中任一項(xiàng)所述的方法，其中該福射包括電子光束福射。42. 如權(quán)利要求26-39中任一項(xiàng)所述的方法，其中該輻射包括γ輻射。
【專利摘要】提供了用于處理組織基質(zhì)的方法和根據(jù)這些方法所生產(chǎn)的組織基質(zhì)。這些方法可以包括用一種蛋白水解酶處理一種組織基質(zhì)以產(chǎn)生組織基質(zhì)的所希望的柔軟性和/或控制該組織基質(zhì)的免疫原性。這些方法還可以包括進(jìn)行一種測(cè)定來(lái)確定使至少一種含膠原的組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶相接觸是否已經(jīng)改變了該至少一種含膠原的組織基質(zhì)，從而減少人對(duì)該組織基質(zhì)的免疫應(yīng)答。這些方法可以包括在經(jīng)控制以產(chǎn)生所希望的柔軟性而無(wú)膠原結(jié)構(gòu)的不可接受的改變的條件下用堿性蛋白酶進(jìn)行處理。
【IPC分類】A61L27/36
【公開號(hào)】CN105492034
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480048332
【發(fā)明人】怡·陳, 尼美什·卡巴里亞, 凱-羅伊·王, 輝·許, 帕特里克·利米, 華·萬(wàn), 黃勵(lì)婷, 孫文全
【申請(qǐng)人】生命細(xì)胞公司
【公開日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2014年9月5日
【公告號(hào)】CA2919257A1, EP3030272A1, WO2015035115A1