專利名稱：：一種動(dòng)物藥的仿生酶解產(chǎn)物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種動(dòng)物藥的仿生酶解產(chǎn)物及其在抗肝炎病毒、降血壓和抗癌方面的應(yīng)用。屬中藥領(lǐng)域。技術(shù)背景動(dòng)物類中藥在我國的應(yīng)用有著十分悠久的歷史。早在3000多年前，中國就開始了對蜜蜂的利用。而珍珠、牡蝠的養(yǎng)殖最早也見于中國，己有2000多年的歷史。我國最早的本草書籍《神農(nóng)本草經(jīng)》收載藥物365種，其中動(dòng)物藥就有65種；據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，在《詩經(jīng)》一書中共收載了各類動(dòng)物約160種，有許多動(dòng)物既可食用，也可供藥用；此外，春秋戰(zhàn)國時(shí)期的《山海經(jīng)》，也收載了藥用動(dòng)物67種；秦漢時(shí)期的《神農(nóng)本草經(jīng)》收載動(dòng)物藥65味；唐代的《新修本草》收載動(dòng)物藥128味；明代《本草綱目》收載動(dòng)物藥461味，并將其分為蟲、鱗、介、禽、獸、人各部；清代趙學(xué)敏《本草綱目拾遺》收載動(dòng)物藥128味；近代的《中藥大辭典》收載動(dòng)物藥多達(dá)740味；據(jù)現(xiàn)代本草記載，陸地和海洋的動(dòng)物藥近達(dá)1600余種。中醫(yī)臨床常用的中藥材約300余味，其中動(dòng)物藥約占10%。以2000版藥典為例，共收載中藥534味，動(dòng)物藥47味，占8.8%;復(fù)方或單方458方，含動(dòng)物藥方劑共153方，占33.4%，由此可見，在床常用藥材中，動(dòng)物藥所占比例雖然較少，但應(yīng)用頻度卻極高，表明動(dòng)物藥在臨床應(yīng)用中占有重要的位置；且動(dòng)物藥的臨床應(yīng)用療效確切，如臨床應(yīng)用的有效方劑有安宮牛黃丸、再造丸、梅花點(diǎn)舌丸、紫雪、烏雞白鳳丸、七厘散、萬應(yīng)錠、至寶丹、牛黃降壓丸、牛黃清心丸、牛黃解毒丸、龜齡集、局方至寶散、蛇膽川貝液、清開靈等。然而很多常用的動(dòng)物藥在入藥的方式上通常采用原藥材粉碎后直接服用或水提后服用，使用方法比較傳統(tǒng)，藥材利用率較低，有效成分沒有獲得充分利用。經(jīng)現(xiàn)代較為系統(tǒng)的與臨床功效相關(guān)的生物活性和物質(zhì)基礎(chǔ)評價(jià)研究，動(dòng)物藥中的水溶性蛋白及肽類、游離的氨基酸成分的療效越來越受到關(guān)注。人體經(jīng)口服動(dòng)物藥后，經(jīng)胃蛋白酶及胰酶的酶解、消化，以小分子肽類成分吸收入血發(fā)揮療效，小分子的寡肽類物質(zhì)和氨基酸很容易被小腸吸收，而大分子的蛋白類在小腸里也很難被吸收。傳統(tǒng)的原粉直接服用，原藥粉中大分子蛋白，只有少量在體內(nèi)經(jīng)過胃腸道的分解，變成小分子的寡肽而被吸收，由于藥材粉碎的細(xì)度、胃腸道pH的變化及口服其他食物的干擾造成水解的不完全，有效成分被吸收利用的少，造成大量藥材的浪費(fèi)療效大大降低。水提的提取工藝使得有大部分不溶入水的蛋白被濾過除去，造成大量的藥材浪費(fèi)，療效同樣大大降低。應(yīng)用酶解法水解動(dòng)物藥中的蛋白，獲得具有一定生理活性的生物活性肽越來越受到人們3的關(guān)注。由于不同的酶作用的部位不一樣，酶解法得到的產(chǎn)物也不一樣，用單一的胃蛋白酶或胰酶來酶解，只能使藥材中的蛋白部分酶解，藥材中的蛋白得不到最大程度的利用，這樣就迫切的需要一種仿生的酶解方法——在動(dòng)物或人體生物進(jìn)化過程中已被證實(shí)、療效確切、模擬人體的消化過程的仿生酶解方法，將動(dòng)物藥酶解后得到的有效成分更容易吸收，更加安全的利用，同時(shí)更加充分利用原藥材。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的第一目的在于提供一種更有效的，安全的動(dòng)物藥仿生酶解產(chǎn)物；本發(fā)明的第二目的是提供該產(chǎn)物在用于制備抗肝炎病毒、降血壓以及抗癌的藥物中的應(yīng)用。發(fā)明人提供一種動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物，該產(chǎn)物采用仿生酶解的方法制備-取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水，調(diào)節(jié)pH至1.03.0，加入胃蛋白酶于3545'C保溫酶解0.54.0小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH至7.58.5，加入胰酶或胰蛋白酶于405(TC保溫酶解28小時(shí)，即得。進(jìn)一步優(yōu)化為-取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水勻漿，調(diào)節(jié)pH至1.52.5，加入動(dòng)物藥量的0.5%5%的胃蛋白酶于3545。C保溫酶解13小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH至7.58.5，加入動(dòng)物藥量的O.5%5%的胰酶或胰蛋白酶于405(TC保溫酶解36小時(shí)，即得。較優(yōu)的制備方法為取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0,加入動(dòng)物藥量的1%2%的胃蛋白酶于40'C保溫酶解13小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH至8.0，加入動(dòng)物藥量的1%2%的胰酶或胰蛋白酶于50。C保溫酶解36小時(shí)，即得。發(fā)明人經(jīng)過試驗(yàn)篩選，動(dòng)物藥細(xì)粉加水勻漿后，可預(yù)先加熱至8010(TC，保溫153C)分鐘，再降溫至酶解所需溫度，按以上操作酶解，其效果更佳。按本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行酶解，當(dāng)胃蛋白酶的酶活力不低于1200U/g，胰蛋白酶的酶活力不低于2500U/mg，胰酶的酪蛋白轉(zhuǎn)化力不低于25.0時(shí)，效果較為充分；酶活力越高，酶解速度越快、效果越好。經(jīng)現(xiàn)代研究證明，動(dòng)物藥中的肽類成分也是有效部位。人體經(jīng)口服動(dòng)物藥后，經(jīng)胃蛋白酶及胰酶或胰蛋白酶的酶解、消化，以小分子肽類成分吸收而發(fā)揮療效。發(fā)明人根據(jù)人體口服動(dòng)物藥的過程，創(chuàng)造性的在體外采用人體仿生酶解的方法，先后對原料進(jìn)行胃蛋白酶、胰蛋白酶或胰酶酶解，和人體直接口服藥材原粉比較，所得被小腸吸收消化的有效物質(zhì)群相同，但體外酶解選擇較優(yōu)的試驗(yàn)條件，酶解的更充分，再口服所得的藥效更強(qiáng)，酶解成寡肽或小分子的活性部位群經(jīng)注射或粘膜、皮膚等途徑給藥時(shí)更容易被吸收，免疫原性更低，更有效。4經(jīng)過試驗(yàn)篩選，單獨(dú)以胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解動(dòng)物藥，效果均優(yōu)于直接口服，但都低于本發(fā)明的仿生酶解方法，本發(fā)明方法在很大程度上增強(qiáng)了動(dòng)物藥等動(dòng)物藥的療效，而且由于以小分子寡肽的形式入藥，口服給藥是吸收更充分，發(fā)揮療效迅速，增強(qiáng)療效，值得推廣應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以方便地將本發(fā)明酶解產(chǎn)物配合適當(dāng)?shù)妮o料，制備成各種常規(guī)制劑，如a、將酶解液直接噴霧干燥，加入適量的常規(guī)輔料如淀粉、乳糖、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉等制成膠囊劑或片劑。b、將酶解液濾過濃縮成稠膏，加入適量的糖粉和糊精制成顆粒劑。c、將酶解液加熱至85'C殺酶后，濾過，濾液以超濾膜超濾，分取截留分子量5kD以下的溶液，可加入等滲調(diào)節(jié)劑、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑等制成小針或輸液；也可加入甘露醇、乳糖等凍干制成凍干粉針劑。d、將酶解液濾過，濾液以超濾膜超濾，截留分子量10kD以下的溶液，或?yàn)V液直接加卡波姆、殼聚糖等常規(guī)藥用輔料，制成凝膠劑或噴霧劑。本發(fā)明提供的動(dòng)物藥酶解產(chǎn)物可以單獨(dú)使用，也可以與其他藥物成分聯(lián)合使用，S卩在藥物活性成分中，可以只有該產(chǎn)物，還可以是其與其他藥物的混合物，達(dá)到配合治療、輔助治療的目的。本發(fā)明動(dòng)物藥酶解產(chǎn)物可以在抗肝炎病毒、降血壓、抗癌的藥物中廣泛應(yīng)用；也可用于活血化瘀、祛風(fēng)止癢、祛風(fēng)通絡(luò)止痛、清熱解毒、涼血止血、抗炎、抗感染、抗病毒、定驚、鎮(zhèn)痛等方面的治療，可用于溫病高熱，神昏譫語，發(fā)斑發(fā)疹，吐血衄血，驚風(fēng)，癲狂、鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜,抗病毒等，如感冒引起的發(fā)熱，血熱引起的衄血、紫癜，癲癇、急驚風(fēng)。有益效果為進(jìn)一步驗(yàn)證本發(fā)明產(chǎn)物的治療作用，發(fā)明人進(jìn)行了動(dòng)物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中的"仿生酶解組"即為按本發(fā)明技術(shù)方案制得的相應(yīng)的動(dòng)物藥酶解產(chǎn)物一、抗病毒作用的藥效比較試驗(yàn)1、藥品與試劑供試樣品的制備未酶解組取水牛角藥材細(xì)粉(80目)50g，加入10倍量生理鹽水，勻漿30分鐘，攪勻，取l/5量，微孔濾膜(0.45nm)濾過，即得胃蛋白酶酶解組取l/5勻漿液，加入水牛角藥材量的1%胃蛋白酶，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至2.0，溫度為4(TC土2。C，保溫同時(shí)攪拌酶解4h，85。C保溫20min，放冷，微孔濾膜(0.45jim)濾過，5即得；胰蛋白酶酶解組取l/5勻漿液，加入水牛角藥材量的W胰蛋白酶，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至8.0,溫度為5(TC士2。C，保溫同時(shí)攪拌酶解4h，85'C保溫20min，放冷，微孔濾膜(0.45jAm)濾過，即得；胰酶酶解組取l/5勻漿液，加入水牛角藥材量的1%胰酶，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至8.0，溫度為50°C±2°C，保溫同時(shí)攪拌酶解4h，85。C保溫20min，放冷，微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；仿生酶解組取l/5勻漿液，加入水牛角藥材量的1%胃蛋白酶，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至2.0，溫度為4(TC土2。C，保溫同時(shí)攪拌酶解4h，然后調(diào)pH至8.0，加入水牛角藥材量的1%胰蛋白酶，溫度為5(TC士2。C，保溫同時(shí)攪拌酶解4h，85。C保溫20min，放冷，微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；另取螞蟻藥材細(xì)粉(80目)50g，按上述水牛角供試樣品制備方法制備供試樣品。胎牛血清；DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司產(chǎn)品)；HBeAg檢測試劑盒；HBV-DNA克隆轉(zhuǎn)染的人肝癌細(xì)胞細(xì)胞株H印G廠2.2.15。2、試驗(yàn)方法HBV-DNA克隆轉(zhuǎn)染的人肝癌細(xì)胞H印G廠2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清及雙抗(100U/mL青霉素和100叫/mL鏈霉素)的DMEM培養(yǎng)液中，于37'C、5%0)2條件下培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的癌細(xì)胞，用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋成5X107mL單細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔10(VL，貼壁培養(yǎng)24h后棄去上清液，加入不同體積藥物，樣品用3%二甲亞砜溶解配制成lmg/mL的母液，補(bǔ)加DMEM培養(yǎng)液至終體積為200pL。每個(gè)濃度平行6孔，對照組加入等體積的DMEM培養(yǎng)液。吸取培養(yǎng)板上清液5pL，按HBeAg檢測試劑盒方法檢測e抗原的吸光度(A)值，按下式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。細(xì)胞抑制率=(1-加藥細(xì)胞的,A值/對照細(xì)胞的A值)X100%3、試驗(yàn)結(jié)果具體試驗(yàn)結(jié)果見下表。表l水牛角供試樣品對H印G2-2.2.15細(xì)胞的抑制率結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。表2螞蟻供試樣品對H印G2-2.2.15細(xì)胞的抑制率結(jié)果表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與對照組比較，*P<0.05,**P<0.01。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，以上兩種動(dòng)物藥的仿生酶解產(chǎn)物均具有較強(qiáng)的抗HBV作用，與不加藥物僅加等體積DMEM培養(yǎng)液的對照組比較，在10叫/mL的藥物濃度顯示出顯著差異，較其他單酶酶解產(chǎn)物的作用強(qiáng)，提示本發(fā)明仿生酶解產(chǎn)物具有較好的抗病毒作用。二、對高血壓大鼠的降壓作用1材料1.1動(dòng)物SD大鼠，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2藥品酶解母液的制備取地龍藥材細(xì)粉(100目)100g，加入10倍量生理鹽水，勻漿20分鐘，攪勻，即得；未酶解液取l/4量酶解母液，微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；仿生酶解液取l/4量酶解母液，加入1%胃蛋白酶(酶活力為1200U/g)，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至2.0，40'C保溫?cái)嚢杳附?h,然后調(diào)pH至8.0，加入1%胰蛋白酶(酶活力為2500U/mg)，5CTC保溫?cái)嚢杳附?h，85。C保溫20min，放冷，微孔濾膜(0.45pm)濾過，即得；另取僵蠶藥材細(xì)粉(80目)100g，按上述地龍供試樣品的制備方法制備供試品?？瞻讓φ丈睇}水。陽性對照組取卡托普利10g，以水混懸至200ml。1.3試劑胃蛋白酶，購自國藥基團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20070914;胰蛋白酶，購自國藥基團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20071228;注射用生理鹽水規(guī)格250ml,批號:02110504，沈陽志鷹制藥廠生產(chǎn)。2、方法與結(jié)果2.l造模方法取健康雄性大鼠70只，體重180220g，隨機(jī)分為7組，每組10只仿生酶解樣品組、未酶解樣品組、正常對照組、陽性藥組、空白對照組，除正常對照組外，其余各組采用電擊足底作為單一應(yīng)激源對大鼠進(jìn)行應(yīng)激刺激，刺激強(qiáng)度為3048.5V，頻率0.5Hz，將大鼠放于自制分格式電擊鼠箱，并連接應(yīng)激源，除正常對照組外，其余實(shí)驗(yàn)組大鼠每天上午8:0010:00、下午2:004:OO各接受l次應(yīng)激刺激，共4周，最后一次施以應(yīng)激刺激后25h內(nèi)用尾套法測量尾動(dòng)脈收縮壓(即將大鼠置于軟棉墊上后，尾部加熱，將壓脈套套至大鼠尾部近心端，換能器置于鼠尾中上部1/3處，打開記錄系統(tǒng)，等有規(guī)律脈搏出現(xiàn)以后，利用充氣球使套內(nèi)壓力升高到搏動(dòng)完全消失，然后緩慢放氣，仔細(xì)觀察并讀取脈搏波從無到開始出現(xiàn)時(shí)所對應(yīng)的壓力值，此即大鼠收縮壓(mmHg)，重復(fù)3次，取平均值)。2.2實(shí)驗(yàn)方法將造模成后的各組高血壓大鼠及正常對照組按表2每天灌胃給藥1次，給藥劑量分別為10ml/kg，空白對照組和正常對照組給生理鹽水，連續(xù)給藥3天后，以1%戊巴比妥腹腔麻醉(5mg/kg)，頸動(dòng)脈插管取血，測定收縮壓。2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表下表。表3對高血壓大鼠收縮壓的影響(X士s)組另IJ動(dòng)物數(shù)(只)劑量(ral/kg)給藥前收縮壓給藥后收縮壓地龍仿生酶解樣品組1010105.36±4.6385.68±5.45"地龍未酶解樣品組1010104.52±2.9898.29±4.37僵蠶仿生酶解樣品組1010102.11±3.6187.52±4.42**僵蠶未酶解樣品組1010106.46±2.3499.07±3.87陽性藥組1010105.17±6.4683.86±6.05"空白對照組1010107.47±5.28104.53±5.65正常對照組101078.85±4.9680.32±5.28注與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。以上試驗(yàn)結(jié)果表明，空白對照組與正常對照組比較，收縮壓增高有顯著性差異，顯示造模成功。仿生酶解樣品組、陽性藥組組可明顯降低高血壓大鼠的收縮壓，與正常對照組比較具有極顯著性差異，未酶解樣品組與空白對照組比較具有明顯差異但效果明顯不如仿生酶解組效果好。三、對荷瘤小鼠的影響1材料1.1動(dòng)物Sw。腫瘤腹水傳代小鼠，購自吉林省腫瘤研究所；昆明種小鼠，SPF級，安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2藥品未酶解組取蜈蚣藥材細(xì)粉(80目)40g，加入10倍量生理鹽水，勻漿30分鐘，攪勻，取l/2量，微孔濾膜(0.45nm)濾過，即得；'8仿生酶解組取l/2勻漿液，加入1%胃蛋白酶，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至2.0，溫度為40。C士2'C,保溫同時(shí)攪拌酶解4h，然后調(diào)pH至8.0，加入W胰蛋白酶，溫度為50'C土2'C，保溫同時(shí)攪拌酶解5h，85。C保溫20min，放冷，微孔濾膜(0.45nm)濾過，即得；另取全蝎藥材細(xì)粉(80目)40g，按上述蜈蚣供試樣品的制備方法制備供試樣品?？瞻讓φ丈睇}水。環(huán)磷酰胺組取環(huán)磷酰胺2g，以水混懸至100ml。1.3試劑胃蛋白酶，購自國藥基團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20070914;胰蛋白酶，購自國藥基團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號F20071228;注射用生理鹽水規(guī)格250ml，批號02110504,沈陽志鷹制藥廠生產(chǎn)。2方法與結(jié)果2.1試驗(yàn)方法取昆明種小鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對照組、環(huán)磷酰胺組、仿生酶解樣品組、未酶解樣品組。選取移植腫瘤7天，腫瘤生長良好，腹部膨隆明顯的腹水傳代小鼠，腹部皮膚消毒，用一次性無菌采血器經(jīng)腹壁刺入腹腔，抽取腹水放入無菌燒杯中以生理鹽水稀釋成1:3的癌細(xì)胞混懸液，于各組每只試驗(yàn)昆明種小鼠的右腋下接種0.2ml。各組小鼠于接種腫瘤次日開始每天灌胃給予相應(yīng)供試品0.25ml/10g，空白對照組灌胃給予等體積生理鹽水，連續(xù)給藥30天。給藥結(jié)束次日，將各組試驗(yàn)小鼠稱重后處死，剝離出皮下腫塊稱重，比較各組腫瘤生長情況。2.2試驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見下表。表4對小鼠(接種S哪)腫瘤生長的影響(又士S，n=10)組別劑量(ml/10g)動(dòng)物體重(g)腫瘤重(g)抑瘤率(%)給藥前給藥后空白對照組0.2520.4±1.2934.8±1.651.69±0.72—'環(huán)磷酰胺組0,2520.2±1.4132.6±1.470.72±0.51"57.4蜈蚣仿生酶解組0.2519.3±1.2635.4±1.720.73±0.89"56.8蜈蚣未酶解組0.2520.7±1.3134.6±1.521.28±0.73*24.3全蝎仿生酶解組0.2520.7±1.5836.4±1.220.78±0.67"54.6全蝎未酶解組0,2521.1±1.1237.6±1.761.42±0.93*22.8注與對照組比較，卞<0.05，，<0.01。試驗(yàn)結(jié)果表明仿生酶解樣品組具有明顯的抗腫瘤作用，對Sw。小鼠移植性腫瘤的抑瘤率較高；而未酶解樣品組與對照組相比仍具有一定的顯著性差異(P<0.05)，可見本發(fā)明制得的仿生酶解樣品具有明顯的抗腫瘤作用。9具體實(shí)施例方式下面列舉實(shí)施例，進(jìn)一步說明本發(fā)明，各實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，并不限制本發(fā)明實(shí)施例1取水蛭500g，粉碎成細(xì)粉，加10倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0,加入水蛭量的1%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.0，加入水蛭量的1X的胰酶于5(TC保溫酶解4小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的淀粉，制粒，干燥，整粒，填裝膠囊。實(shí)施例2取螞蟻500g，粉碎成細(xì)粉，加10倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0，加入螞蟻量的2%的胃蛋白酵于4(TC保溫酶解2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.5，加入螞蟻量的1.5^的胰酶于5(TC保溫酶解5小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的淀粉，制粒，干燥，整粒，填裝膠囊。實(shí)施例3取土鱉蟲500g，粉碎成細(xì)粉，力卩8倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.6，加入土鱉蟲量的2%的胃蛋白酶于37'C保溫酶解3小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至7.5，加入土鱉蟲量的2^的胰蛋白酶于4(TC保溫酶解6小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的微晶纖維素，制粒，干燥，整粒，壓制成片。實(shí)施例4取水牛角500g，粉碎成細(xì)粉，加15倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至3.0，加入水牛角量的5%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.5，加入水牛角量的5X的胰蛋白酶于45。C保溫酶解5小時(shí)，加熱至85'C保溫15分鐘，濾過，濾液以超濾膜超濾，分取截留分子量5kD以下的溶液，制成注射液。實(shí)施例5取地龍500g，粉碎成細(xì)粉，加15倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至1.5，加入地龍量的0.5%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解1小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.0，加入地龍量的1.5X的胰蛋白酶于50'C保溫酶解3小時(shí)，加熱至95'C保溫30分鐘，濾過，濾液以超濾膜超濾，分取截留分子量5kD以下的溶液，加入甘露醇，冷凍干燥，制成凍干粉針劑。實(shí)施例6取僵蠶500g，粉碎成細(xì)粉，加15倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.5，加入僵蠶量的4%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.5，加入僵蠶量的5X的胰蛋白酶于45。C保溫酶解6小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的淀粉，制粒，干燥，整粒，填裝膠囊。實(shí)施例7取蟬蛻500g，粉碎成細(xì)粉，加10倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0，加入蟬蛻量的2%的胃蛋白節(jié)pH至8.0，加入蟬蛻量的2X的胰酶于5(TC保溫酶解5小時(shí)，加熱至85。C保溫15分鐘，濾過，濾液以超濾膜超濾，分取截留分子量5kD以下的溶液，制成噴霧劑。實(shí)施例8取全蝎500g，粉碎成細(xì)粉，加12倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.5，加入全蝎量的2.5%的胃蛋白酶于39'C保溫酶解2.5小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.0，加入全蝎量的3%的胰蛋白酶于4(TC保溫酶解6小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的微晶纖維素，制粒，干燥，整粒，壓制成片。實(shí)施例9取蜈蚣500g，粉碎成細(xì)粉，加15倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0，加入蜈蛇量的2.5%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解3小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.5，加入蜈蚣量的2.5%的胰酶于50'C保溫酶解6小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的糖粉和糊精，制粒，干燥，整粒，制成顆粒劑。實(shí)施例IO取地龍500g，粉碎成細(xì)粉，加15倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0，加入地龍量的2.5%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解3小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.5，加入地龍量的2.5%的胰酶于50。C保溫酶解6小時(shí)，噴霧干燥，加入適量的糖粉和糊精，制粒，干燥，整粒，制成顆粒劑。實(shí)施例ll取全蝎250g、僵蠶100g,加15倍量水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0，加入總藥量的1%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解2小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至8.0，加入總藥量的1%的胰酶于50匸保溫酶解4小時(shí)，加熱至85。C保溫15分鐘，濾過，濾液以超濾膜超濾，分取截留分子量10kD以下的溶液，加卡波姆，潤脹12小時(shí)，調(diào)PH增加粘度，加入150g天麻提取濃縮液，混勻，制成凝膠劑。實(shí)施例12取實(shí)施例6所制膠囊治療高血壓病的療效觀察。本組60例，其中男32例，女28例；平均年齡(56.5土7.9)歲；病程:病程(9.20士5.90)年;高血壓病1級18例，2級34例，3級8例。診斷標(biāo)準(zhǔn)高血壓是指未服用抗高血壓藥物的情況下，收縮壓》18.62kPa(140mmHg)和(或)舒張壓》11.79kPa(90mniHg);EH的診斷，應(yīng)至少2次在非同日靜息狀態(tài)下測得血壓達(dá)到高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除繼發(fā)性高血壓后，即可確診。治療方法口服給藥，每天服用量相當(dāng)于15g原藥材量；連服4周觀察療效。降壓療效評定標(biāo)準(zhǔn)①顯效:舒張壓下降不小于1.33kPa(10mmHg)，并達(dá)到正常范圍；舒張壓雖未降至正常但已下降不小于2.66kPa(20mmHg);②有效舒張壓下降小于1.33kPa(10mmHg)，但已達(dá)到正常范圍；舒張壓較治療前下降1.332.53kPa(1019mmHg)，但未達(dá)到正常范圍；收縮壓較治療前下降不小于4.0kPa(30mmHg);③無效:未達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)。治療結(jié)果本組60例中，臨床顯效24例(40%)，有效33例(55%)，無效3例(5%)，總有效率為95%。權(quán)利要求1、一種動(dòng)物藥的仿生酶解產(chǎn)物，其特征在于該產(chǎn)物是按以下方法制備的取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水，調(diào)節(jié)pH至1.0～3.0，加入胃蛋白酶于35～45℃保溫酶解0.5～4.0小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH至7.5～8.5，加入胰酶或胰蛋白酶于40～50℃保溫酶解2.0～8.0小時(shí)，即得。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物藥的仿生酶解產(chǎn)物，其特征在于該產(chǎn)物是按以下方法制備的取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水勻漿，調(diào)節(jié)pH至1.52.5，加入動(dòng)物藥量的0.5%5.0%的胃蛋白酶于3545。C保溫酶解1.03.0小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH至7.58.5，加入動(dòng)物藥量的0.5%5.0%的胰酶或胰蛋白酶于4050'C保溫酶解3.06.0小時(shí)，即得。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物，其特征在于該產(chǎn)物是按以下方法制備的取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水勻漿，調(diào)節(jié)pH至2.0，加入動(dòng)物藥量的1.0%2.0%的胃蛋白酶于4(TC保溫酶解1.03.0小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH至8.0，加入動(dòng)物藥量的1.0%2.0%的胰酶或胰蛋白酶于5(TC保溫酶解3.06.0小時(shí)，即得。"4、根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物，其特征在于將動(dòng)物藥粉碎成細(xì)粉加水勻漿后先加熱至8010(TC并保溫1530分鐘，再降溫至所需溫度進(jìn)行酶解。5、根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物，其特征在于所用的胃蛋白酶的酶活力不低于1200U/g，胰蛋白酶的酶活力不低于2500U/g，胰酶的酪蛋白轉(zhuǎn)化力不低于25.0。6、權(quán)利要求1至5中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物中的動(dòng)物藥可以是水牛角、水蛭、虻蟲、螞蟻、土鱉蟲、蜈蚣、全蝎、僵蠶、蟬蛻、地龍。7、根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物，其特征在于加入常規(guī)藥用輔料制成注射劑、口服制劑或外用制劑。8、權(quán)利要求1至5中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物在制備用于抗肝炎病毒的藥物中的應(yīng)用。9、權(quán)利要求1至5中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物在制備用于降血壓的藥物中的應(yīng)用。10、權(quán)利要求1至5中任一所述的動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種動(dòng)物藥的酶解產(chǎn)物及其應(yīng)用，屬中藥領(lǐng)域，其特征是采用仿生酶解的方法，取動(dòng)物藥，粉碎成細(xì)粉，加水勻漿后，在適當(dāng)?shù)臈l件下，先以胃蛋白酶保溫酶解，再以胰酶或胰蛋白酶保溫酶解，所得的酶解物按不同的制劑要求制成制劑。本發(fā)明產(chǎn)物在抗肝炎病毒、降血壓和抗癌方面具有良好效果。文檔編號A61K35/00GK101647811SQ200810118160公開日2010年2月17日申請日期2008年8月13日優(yōu)先權(quán)日2008年8月13日發(fā)明者劉國飛,周小明申請人:北京凱瑞創(chuàng)新醫(yī)藥科技有限公司