組織產(chǎn)物的感覺的方法。本 披露還提供了使用運(yùn)些處理方法而生產(chǎn)的組織產(chǎn)物。此外，本披露提供了處理組織W控制 從運(yùn)些組織產(chǎn)生的組織產(chǎn)物的多孔性的方法。在一些情況下，控制多孔性可W改善細(xì)胞浸 潤和組織再生和/或修復(fù)。
[0036] 此外，本披露提供了當(dāng)被植入體內(nèi)時控制或者減少對組織基質(zhì)的免疫應(yīng)答的方 法。該免疫應(yīng)答可W使用多種免疫測定來測量，包括單核細(xì)胞活化測定、吞隧作用測定、和/ 或氧化爆發(fā)測定。該免疫原性還可W在處理組織時被控制，W改善組織的感覺、控制組織的 機(jī)械特性(包括在此列出的任何機(jī)械特性）、和/或控制組織的多孔性。在處理組織基質(zhì)后， 運(yùn)些基質(zhì)可W經(jīng)受一個測定W確定該組織的免疫原性是否已經(jīng)W所希望的方式被改變。
[0037] 根據(jù)某些實(shí)施例，提供了一種用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇一 種真皮組織基質(zhì);并且使該真皮組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在包括一個解育時間的條件下于具 有堿性蛋白酶活性的一種溶液中相接觸，運(yùn)些條件經(jīng)選擇W產(chǎn)生如通過懸垂性試驗(yàn)測量的 該組織基質(zhì)柔軟性的所希望的增加而不產(chǎn)生顯著的膠原降解。
[0038] 在某些實(shí)施例中，酶處理?xiàng)l件經(jīng)選擇W提供所希望的懸垂值的減少。如在此使用 的，"懸垂性試驗(yàn)"設(shè)及將一種具有已知圓面積的組織基質(zhì)樣品放置(懸垂)在一個具有已知 直徑的圓形基座的頂部上。在其懸垂于該基座上后，真皮基質(zhì)的投影面積除W該組織基質(zhì) 圓的原面積W確定懸垂值。注意在運(yùn)兩個面積相除之前，將基座的面積從圓盤的原面積和 覆蓋面積減去W確定懸垂性。較低的懸垂值意指更柔軟(更有懸垂性)的材料。
[0039] 在某些實(shí)施例中，該酶是堿性蛋白酶，并且處理?xiàng)l件被選擇為使用60mm直徑組織 基質(zhì)樣品和19mm基座產(chǎn)生懸垂值的減少為在10%-90%之間、在20%-80%之間、在30%-70%之間、在40%-60%之間、或約50% (例如，45%-55%)、或至少30%、至少40%、至少 50 %、至少60 %或至少70 %。此外，在一些實(shí)施例中，運(yùn)些條件被選擇為對于真皮無細(xì)胞組 織產(chǎn)生的懸垂值為在0.2-0.4之間、或在0.25-0.35之間、或小于0.4、小于0.35、小于0.3、或 小于0.2。
[0040] 多種因素可W影響最終懸垂值。例如，可W被改變來控制對組織柔軟性的影響的 因素可W包括，例如，溫度、pH、使用的溶液或緩沖液、酶濃度、使用的特定類型的堿性蛋白 酶、與組織量相比的溶液量、和/或溶液中酶抑制劑的存在。
[0041] 如下文更詳細(xì)地討論，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)堿性蛋白酶在真皮組織基質(zhì)的處理中具有許多益 處。例如，在相對低的解育時間和酶活性下，已經(jīng)顯示堿性蛋白酶在組織基質(zhì)懸垂性試驗(yàn)中 提供組織柔軟性和改善的實(shí)質(zhì)性增加（即，提供更多懸垂能力），而不引起不可接受的膠原 結(jié)構(gòu)的改變或者其他組織特性例如拉伸強(qiáng)度、彈性、撕裂強(qiáng)度、縫合強(qiáng)度、抗蠕變性、爆裂強(qiáng) 度、熱轉(zhuǎn)變溫度、膠原酶易感性或其組合的退化。
[0042] 如在實(shí)例3中所詳細(xì)討論的，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)基于酶處理?xiàng)l件的變化，用堿性蛋白酶處 理、接著進(jìn)行福射(例如，作為終端滅菌步驟)對組織機(jī)械特性具有可變的影響。例如，用相 對低的酶濃度和處理時間，接著進(jìn)行福射，組織柔軟性初始增加的所得組織，其在某個點(diǎn)處 達(dá)峰值，如例如在圖11中所示。在進(jìn)一步的堿性蛋白酶處理(例如，持續(xù)更長治療時間或者 具有更高酶活性)的情況下，隨后的福射引起柔軟性損失。因此，在一些實(shí)施例中，運(yùn)些方法 可W包括選擇一種真皮組織基質(zhì)；并且使該真皮組織基質(zhì)與堿性蛋白酶相接觸;并且用福 射處理該組織基質(zhì)，其中該堿性蛋白酶是在經(jīng)選擇W在用福射處理后產(chǎn)生所希望的組織基 質(zhì)柔軟性的條件下提供的。
[0043] 為了維持植入的細(xì)胞外基質(zhì)在體內(nèi)的穩(wěn)定性，令人希望的是維持膠原在處理過程 中的穩(wěn)定性。通過DSC得到的膠原變性起始溫度和用膠原酶處理期間的重量損失是膠原穩(wěn) 定性的指示物。如在此使用的，"組織膠原結(jié)構(gòu)的不可接受的降解"意指DSC膠原變性起始溫 度的變化大于1°C、大于2°C、大于3°C、或大于4°C、或大于5°C。
[0044] 可W使用不同的堿性蛋白酶活性和處理時間。例如，堿性蛋白酶可W被提供于一 種溶液中，該溶液具有Ix 1〇-6安森(Anson)單位/mL至0.015安森單位/mL的活性、Ix 1〇-6單 位至1.5x 1〇-3安森單位/mL的活性、或約2x IQ-S安森單位/mL至約4x IQ-S安森單位/血的活 性。此外，處理時間可W在約4小時與5天之間變化。
[0045] 在一個實(shí)施例中，提供了用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇一種含 膠原的組織基質(zhì)，并且使該組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶在足W使該組織基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生所希望 的柔軟性水平的條件下相接觸。在另一個實(shí)施例中，提供了用于處理組織基質(zhì)的方法。該方 法可W包括選擇一種含膠原的無細(xì)胞組織基質(zhì)，并且使該組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶在足 W使該組織基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生所希望的柔軟性水平并且增加該組織基質(zhì)的多孔性的條件下相接 觸。圖1A-1D顯示使用本披露的方法用酶處理之后的無細(xì)胞組織基質(zhì)（STRATTICE?)，W及未 處理的對照。如圖所示，經(jīng)處理的樣品比未處理的樣品顯著更柔軟。
[0046] 根據(jù)某些實(shí)施例，提供了一種用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇至 少一種含膠原的組織基質(zhì)；使該至少一種含膠原的組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶相接觸;并 且進(jìn)行一種測定來確定使該至少一種含膠原的組織基質(zhì)與至少一種蛋白水解酶相接觸是 否已經(jīng)改變了該至少一種含膠原的組織基質(zhì)，從而當(dāng)該組織基質(zhì)植入人體中時減少人對該 組織基質(zhì)的免疫應(yīng)答。
[0047] 在不同的實(shí)施例中，用蛋白水解酶處理組織基質(zhì)提供了改善的機(jī)械特性，而不引 起一種或多種生物學(xué)特性的退化。例如，對組織基質(zhì)的處理可W產(chǎn)生所希望的剛度、感覺、 觸覺特性、和/或所希望的多孔性，而不引起增加的炎癥或癒痕形成和/或不引起組織基質(zhì) 促進(jìn)細(xì)胞向內(nèi)生長和再生能力的降低。
[0048] 可W選擇運(yùn)些組織基質(zhì)W提供多種不同生物和機(jī)械特性。例如，可W選擇無細(xì)胞 組織基質(zhì)或其他組織產(chǎn)物，W允許組織向內(nèi)生長和重塑，用來協(xié)助通常發(fā)生在該基質(zhì)被植 入的部位處的組織再生。例如，當(dāng)該無細(xì)胞組織基質(zhì)被植入到筋膜上或筋膜中時，該基質(zhì)可 W被選擇為允許筋膜再生而無過度纖維化或癒痕形成。在某些實(shí)施例中，該組織產(chǎn)物可W 形成自ALLODE民M飯或STRATTICE?，它們分別為人和豬的無細(xì)胞真皮基質(zhì)?？商娲?， 可W使用其他適合的無細(xì)胞組織基質(zhì)，如下進(jìn)一步所述。運(yùn)些組織可W選自多個組織來源， 包括皮膚(真皮或全皮）、筋膜、屯、包組織、硬膜、廝帶組織、胎盤組織、屯、臟瓣膜組織、初帶組 織、脂肪組織、腫組織、動脈組織、靜脈組織、神經(jīng)結(jié)締組織、膀脫組織、輸尿管組織、W及腸 組織。在此描述的方法可W用于加工任何白纖維組織類型并且用于任何組織基質(zhì)產(chǎn)物。例 如，己迪拉克(Badylak)等人描述了多種生物支架材料，并且本披露的方法可W用于處理那 些組織產(chǎn)物或本領(lǐng)域已知的其他組織產(chǎn)物。己迪拉克(Badylak)等人，"作為生物支架材料 的細(xì)胞外基質(zhì)：結(jié)構(gòu)和功能化Xtracellular Matrix as a Biological Scaffold Material :St;ruc1:ure and F^mction)"，生物材料學(xué)報(bào)（Acta Biomaterialia) (2008)，doi: 10.1016/j.actbio.2008.09.013〇
[0049] 在一些情況下，可W提供該組織產(chǎn)物為脫細(xì)胞組織基質(zhì)。W下將進(jìn)一步描述適合 的無細(xì)胞組織基質(zhì)。在其他情況下，該方法可W進(jìn)一步包括加工完整組織W去除細(xì)胞或其 他材料。可W將該組織完全地或部分地脫細(xì)胞，用來生成待用于患者的無細(xì)胞組織基質(zhì)或 細(xì)胞外組織材料。例如，不同組織，例如皮膚、腸、骨骼、軟骨、脂肪組織、神經(jīng)組織(例如神經(jīng) 纖維或者硬膜）、腫、初帶、或其他組織，可W被完全地或部分地脫細(xì)胞化來產(chǎn)生對患者有用 的組織產(chǎn)物。在一些情況下，可W使用運(yùn)些脫細(xì)胞產(chǎn)物而不添加外源細(xì)胞材料（例如干細(xì) 胞）。在某些情況下，可W用來自自體來源的或其他來源的細(xì)胞接種運(yùn)些脫細(xì)胞產(chǎn)物，用來 協(xié)助治療。W下將描述用于生產(chǎn)無細(xì)胞組織基質(zhì)的適合的工藝。
[0050] 可W使用多種不同酶來處理組織基質(zhì)。例如，適合的酶可W包括琉基蛋白酶，如渡 蘿酶。此外，它們可W包括渡蘿酶、木瓜酶、無花果蛋白酶、雜猴桃素、堿性蛋白酶、膜蛋白酶 或其組合。運(yùn)些酶可W商購或從水果來源中提取。例如，渡蘿酶的一個來源是味可美肉松粉 (MCCORMICK MEAT TEN DERIZER飯），但是運(yùn)些酶還可W提取自渡蘿，和/或W醫(yī)藥級配 制品的形式購買。
[0051]運(yùn)些酶可W與組織接觸，用來增加組織的柔軟性，而不引起其他機(jī)械和/或生物學(xué) 特性方面的不希望的退化。例如，當(dāng)用或不用在此討論的酶處理來生產(chǎn)一批材料時，酶處理 將不產(chǎn)生拉伸強(qiáng)度、撕裂強(qiáng)度、縫合強(qiáng)度、抗蠕變性