用于組織產(chǎn)物的酶處理的方法
【專利說(shuō)明】用于組織產(chǎn)物的酶處理的方法
[0001] 本申請(qǐng)是在35U.S.C.§120下于2013年9月5日提交并且通過(guò)引用W其全文結(jié)合在 此的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?4/019,274的一個(gè)部分繼續(xù)申請(qǐng)。
[0002] 本披露設(shè)及組織基質(zhì)，并且更具體地，設(shè)及通過(guò)用蛋白水解酶處理基質(zhì)來(lái)控制組 織基質(zhì)的機(jī)械和/或生物學(xué)特性的方法。
[0003] 不同組織衍生的產(chǎn)物被用于再生、修復(fù)、或另外治療患病的或受損的組織和器官。 此類產(chǎn)品可W包括完整組織移植物和/或無(wú)細(xì)胞的或重建的無(wú)細(xì)胞組織（例如來(lái)自皮膚、 腸、或其他組織的無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)，用或不用細(xì)胞接種）。此類產(chǎn)品一般具有由組織來(lái)源（即 組織型及它所來(lái)源的動(dòng)物)和用于生產(chǎn)該組織產(chǎn)物的加工參數(shù)所決定的機(jī)械特性。因?yàn)榻M 織產(chǎn)物通常用于外科應(yīng)用和/或組織置換或增強(qiáng)，所W組織產(chǎn)物的機(jī)械特性是重要的。例 如，外科醫(yī)生通常優(yōu)選感覺(jué)像天然組織和/或在手術(shù)程序期間容易操作的組織。然而，一些 組織產(chǎn)品不令人希望地是僵硬的和/或具有不自然的感覺(jué)。因此，提供了用于處理組織產(chǎn)物 W產(chǎn)生更加令人希望的機(jī)械特性的方法。
[0004] 此外，當(dāng)被植入體內(nèi)時(shí)，衍生自外源性材料(例如，來(lái)自其他動(dòng)物或者患者的組織、 連同任何類型的經(jīng)處理的組織）的組織產(chǎn)物可W在受者內(nèi)引發(fā)一種炎癥或免疫應(yīng)答。在一 些情況下，過(guò)度免疫應(yīng)答可能是有害的，引起該植入體形成不希望的癒痕組織，或預(yù)防組織 于植入部位的適合的再生。因此，提供了用于處理組織產(chǎn)物W減少或控制組織產(chǎn)物在植入 時(shí)的免疫應(yīng)答的方法。 概述
[0005] 根據(jù)某些實(shí)施例，提供了一種用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇一 種含膠原的組織基質(zhì)，并且使該組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶在足W使該組織基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生所 希望的柔軟性水平的條件下相接觸。
[0006] 在另一個(gè)實(shí)施例中，提供了用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇一種 含膠原的無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)，并且使該組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶在足W使該組織基質(zhì)內(nèi)產(chǎn) 生所希望的柔軟性水平并且增加該組織基質(zhì)的多孔性的條件下相接觸。
[0007] 在一些實(shí)施例中，提供了一種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)。該基質(zhì)可W通過(guò)一種工藝來(lái)制備， 該工藝包括選擇一種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)，并且使該組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶在足W使該組 織基質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生所希望的柔軟性水平的條件下相接觸。
[000引根據(jù)某些實(shí)施例，提供了一種用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇至 少一種含有膠原的組織基質(zhì)；使該至少一種含有膠原的組織基質(zhì)與一種蛋白水解酶相接 觸;并且進(jìn)行一種測(cè)定來(lái)確定使該至少一種含有膠原的組織基質(zhì)與至少一種蛋白水解酶相 接觸是否已經(jīng)改變了該至少一種含有膠原的組織基質(zhì)，從而當(dāng)該組織基質(zhì)植入人體中時(shí)減 少人對(duì)該組織基質(zhì)的免疫應(yīng)答。
[0009]根據(jù)某些實(shí)施例，提供了一種用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇一 種真皮組織基質(zhì);并且使該真皮組織基質(zhì)與堿性蛋白酶在包括一個(gè)解育時(shí)間的條件下于具 有堿性蛋白酶活性的一種溶液中相接觸，運(yùn)些條件經(jīng)選擇W產(chǎn)生如通過(guò)懸垂性試驗(yàn)測(cè)量的 該組織基質(zhì)柔軟性的所希望的增加而不產(chǎn)生顯著的膠原降解。
[0010] 根據(jù)某些實(shí)施例，提供了一種用于處理組織基質(zhì)的方法。該方法可W包括選擇一 種真皮組織基質(zhì)；并且使該真皮組織基質(zhì)與堿性蛋白酶相接觸;并且用福射處理該組織基 質(zhì)，其中該堿性蛋白酶是在經(jīng)選擇W在用福射處理后產(chǎn)生所希望的組織基質(zhì)柔軟性的條件 下提供的。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1A-1D顯示使用實(shí)例1所描述的方法用酶處理之后的無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)，W及未處 理的對(duì)照。
[0012] 圖視根據(jù)實(shí)例1的方法，處理過(guò)的和對(duì)照樣品拉伸強(qiáng)度現(xiàn)聯(lián)數(shù)據(jù)的盒形圖。
[0013] 圖3是根據(jù)實(shí)例1的方法，處理過(guò)的和對(duì)照樣品縫合強(qiáng)度測(cè)試數(shù)據(jù)的盒形圖。
[0014] 圖4是根據(jù)實(shí)例1的方法，處理過(guò)的和對(duì)照樣品撕裂強(qiáng)度測(cè)試數(shù)據(jù)的盒形圖。
[001引圖5是根據(jù)實(shí)例1的方法，處理過(guò)的和對(duì)照樣品彈性現(xiàn)聯(lián)數(shù)據(jù)的盒形圖。
[0016] 圖6是根據(jù)實(shí)例1的方法，處理過(guò)的和對(duì)照樣品抗蠕變性測(cè)試數(shù)據(jù)的盒形圖。
[0017] 圖7展示根據(jù)實(shí)例2.2,未處理的組織及使用渡蘿蛋白酶和堿性蛋白酶處理的組織 的DSC熱譜圖。
[0018] 圖8A-8B展示使用實(shí)例2.4中描述的單核細(xì)胞活化測(cè)定，活化標(biāo)記CDH(A)和CD163 (B)在與不同組織共培養(yǎng)的單核細(xì)胞中的表達(dá)模式。
[0019] 圖9A-F是未處理的pADM(9A-9C)和酶處理的pADM(9D-9F)在移植后的蘇木精和曙 紅化&E)切片，如實(shí)例2.5中描述。
[0020] 圖IOA-D是未處理的pADM(9A-9B)和酶處理pADM(9C-9D)外植體的H&E切片，如實(shí)例 2.5中描述。
[0021] 圖11是顯示針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未 處理對(duì)照的懸垂性試驗(yàn)結(jié)果的條形圖。
[0022] 圖12是顯示針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未 處理對(duì)照的膠原酶消化測(cè)定結(jié)果的線形圖。
[0023] 圖13展示DSC結(jié)果，包括根據(jù)實(shí)例3未處理組織和使用堿性蛋白酶處理的組織的變 性起始溫度。
[0024] 圖14是針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未處理 對(duì)照的最大負(fù)載/單位寬度的區(qū)間圖。
[0025] 圖15是針對(duì)使用實(shí)例3中描述的方法用堿性蛋白酶處理后的組織基質(zhì)連同未處理 對(duì)照的彈性的區(qū)間圖。 某些示例性實(shí)施方式的說(shuō)明
[0026] 現(xiàn)在將詳細(xì)地參考根據(jù)本披露的某些示例性實(shí)施例，運(yùn)些實(shí)施例的某些實(shí)例展示 于附圖中。在可能的情況下，將貫穿運(yùn)些附圖使用相同的參考號(hào)來(lái)指示相同或相似的部分。
[0027] 在本申請(qǐng)中，單數(shù)的使用包括了復(fù)數(shù)，除非另外明確說(shuō)明。在本申請(qǐng)中，"或者"的 使用是指"和/或"，除非另外說(shuō)明。此外，術(shù)語(yǔ)"包括"W及其他形式的使用（例如，"包含"和 "含有"）不是限制性的。在此所述的任何范圍應(yīng)當(dāng)被理解為包括端點(diǎn)W及在端點(diǎn)之間的所 有值。
[0028] 在此使用的小節(jié)標(biāo)題僅是為了編排的目的并且不應(yīng)該被解釋為對(duì)所述主題進(jìn)行 限制。在本申請(qǐng)中所引用的所有文件或文件的部分，包括但不局限于專利、專利申請(qǐng)、論文、 書(shū)籍、和專著，都特此出于任何目的通過(guò)引用將其全部?jī)?nèi)容清楚地結(jié)合在此。
[0029] 如在此使用的，"組織產(chǎn)物"應(yīng)指包含細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的任何人類的或動(dòng)物的組 織。"組織產(chǎn)物"可W包括無(wú)細(xì)胞的或者部分地脫細(xì)胞的組織基質(zhì)、已經(jīng)用外源細(xì)胞再生的 脫細(xì)胞組織基質(zhì)、和/或細(xì)胞組織。
[0030] 如在此使用的，"組織基質(zhì)"是指細(xì)胞外基質(zhì)，包括給定組織的膠原，其中該基質(zhì)保 留了來(lái)自其所源于的組織的天然細(xì)胞外基質(zhì)的互連結(jié)構(gòu)膠原基質(zhì)特征。"無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)" 是指已經(jīng)從中去除了天然組織細(xì)胞的"組織基質(zhì)"。
[0031] 可W使用不同的人和動(dòng)物的組織生產(chǎn)用于治療患者的產(chǎn)物。例如，已經(jīng)生產(chǎn)了用 于再生、修復(fù)、增強(qiáng)、加強(qiáng)、和/或治療由于不同疾病和/或結(jié)構(gòu)性損傷(例如來(lái)自創(chuàng)傷、外科 手術(shù)、萎縮、和/或長(zhǎng)期磨損和退化）而已經(jīng)受損或者損失的人類組織的不同組織產(chǎn)物。例 如，此類產(chǎn)物可W包括無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)、組織同種異體移植物或異種移植物、和/或重建的 組織（即已經(jīng)用細(xì)胞接種的至少部分地脫細(xì)胞的組織，W生產(chǎn)活材料）。
[0032] 對(duì)于外科應(yīng)用，通常希望生產(chǎn)具有某些機(jī)械特性的組織產(chǎn)物。例如，可W包括材料 片的組織產(chǎn)物應(yīng)擁有足夠的強(qiáng)度來(lái)承受預(yù)期用途的需求。某些組織產(chǎn)物可W被用于修復(fù)缺 陷(例如痛氣），用來(lái)支持周圍組織或植入物(例如用于乳房增大和/或重建），或用來(lái)置換受 損或損失的組織(例如在創(chuàng)傷或外科切除后）。無(wú)論具體的用途，組織產(chǎn)物應(yīng)具有足夠的強(qiáng) 度、彈性和/或其他機(jī)械特性，用來(lái)發(fā)揮功能，直至發(fā)生組織再生和/或修復(fù)。
[0033] 此外，組織產(chǎn)品應(yīng)該具有所希望的感覺(jué)。例如，外科醫(yī)生通常優(yōu)選具有天然組織樣 感覺(jué)(例如足夠柔軟、柔初、和/或有彈性的）的材料。此外，移植后希望組織產(chǎn)物感覺(jué)是天然 的。例如，用于乳房增大的組織不應(yīng)該過(guò)分僵硬W便其在植入時(shí)產(chǎn)生自然感覺(jué)的胸部。
[0034] 然而，一些組織產(chǎn)物對(duì)于一些應(yīng)用可能過(guò)分堅(jiān)硬了。例如，一些外科醫(yī)生注意到衍 生自豬的真皮材料例如STRATTICE?不比人類真皮產(chǎn)物例如ALLODE民Mi殺柔軟。然而，改 善此類產(chǎn)物感覺(jué)的工藝不應(yīng)不利地影響運(yùn)些產(chǎn)物的生物和/或機(jī)械特性。確切地說(shuō)，對(duì)運(yùn)些 產(chǎn)物進(jìn)行的用來(lái)改善運(yùn)些產(chǎn)物感覺(jué)的處理不應(yīng)產(chǎn)生不希望的其他機(jī)械特性例如拉伸強(qiáng)度 上的降低，并且不應(yīng)W此類方式改變蛋白質(zhì)基質(zhì)W至于該材料不支持組織再生和/或修復(fù)。
[0035] 本披露提供了用于處理組織W控制從運(yùn)些組織產(chǎn)生的