、彈性、膠原酶易感性、爆裂強(qiáng)度、熱轉(zhuǎn)變 溫度、或者其組合中的至少一者的不希望的變化。在一些情況下，不希望的變化是拉伸強(qiáng) 度、撕裂強(qiáng)度、縫合強(qiáng)度、抗蠕變性、糖胺聚糖含量、外源凝集素含量、爆裂強(qiáng)度中任一項(xiàng)的 統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的降低;膠原酶易感性的增加或者熱轉(zhuǎn)變溫度(如使用差示掃描量熱法測(cè)量） 的變化（向上或向下）。
[0化2] 如W上所指出，在一些實(shí)施例中，將運(yùn)些組織用一種酶進(jìn)行處理W增加組織的多 孔性。在不同的實(shí)施例中，進(jìn)行增加組織的多孔性W增加通道的數(shù)目和/或大小，運(yùn)可W改 善細(xì)胞浸潤(rùn)和組織再生的比率。
[0053]在一些情況下，選擇運(yùn)些酶，使得它們引起組織內(nèi)蛋白的位點(diǎn)特異性裂解。例如， 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，用渡蘿酶處理豬真皮材料并未在某一量的處理后，引起基質(zhì)結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步改變。 因此，在具有長(zhǎng)時(shí)間的暴露或在延長(zhǎng)的時(shí)段后，用渡蘿酶處理真皮并未引起基質(zhì)方面的進(jìn) 一步變化。
[0化4] 此外，可W在多種適合的溶液中，將酶施用至組織。例如，當(dāng)在生理鹽水中施用至 組織時(shí)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)渡蘿酶是有效的，但是也可W使用其他適合的緩沖液(例如PBS)。
[0055]如W上所指出，用一種酶處理后，可W進(jìn)行一種測(cè)定來(lái)確定使至少一種含膠原的 組織基質(zhì)與至少一種蛋白水解酶相接觸是否已經(jīng)改變了該至少一種含膠原的組織基質(zhì)，從 而當(dāng)該組織基質(zhì)植入人體中時(shí)減少人對(duì)該組織基質(zhì)的免疫應(yīng)答?？蛇M(jìn)行許多適合的測(cè)定。 例如，適合的測(cè)定可W包括單核細(xì)胞活化測(cè)定、吞隧作用測(cè)定、W及氧化爆發(fā)測(cè)定。
[0化6] 在一些實(shí)施例中，該測(cè)定可W在經(jīng)處理的組織的一個(gè)區(qū)段或部分上進(jìn)行，并且該 組織的其他部分可W用于隨后的醫(yī)學(xué)或外科手術(shù)。在其他實(shí)施例中，該測(cè)定可W在來(lái)自一 個(gè)批次的多份樣品中的一個(gè)或多個(gè)樣品上進(jìn)行，并且未經(jīng)受該測(cè)定的樣品可W隨后被選擇 用于在治療患者中使用。
[0057]在某些實(shí)施例中，選擇酶處理W去除材料中的膠原或其他蛋白質(zhì)，運(yùn)些蛋白質(zhì)具 有允許在體溫下變性的熱轉(zhuǎn)變溫度。例如，在一些實(shí)施例中，選擇真皮物細(xì)胞組織，并且選 擇酶處理W去除（如使用DSC測(cè)量)在約30攝氏度與40攝氏度之間的一個(gè)熱峰。預(yù)期運(yùn)個(gè)小 ECM峰值在人體溫度下自發(fā)變性并且可W有助于植入后發(fā)生的不同炎性反應(yīng)。 無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)
[005引術(shù)語(yǔ)"無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)"，如在此使用，通常是指基本上沒(méi)有細(xì)胞和/或細(xì)胞組分的 任何組織基質(zhì)。皮膚、皮膚部分(例如，真皮)和其他組織例如血管、屯、臟瓣膜、筋膜、軟骨、月旨 肪組織、骨、和神經(jīng)結(jié)締組織可W用來(lái)產(chǎn)生處于本披露范圍內(nèi)的無(wú)細(xì)胞基質(zhì)?？蒞按多個(gè)方 式測(cè)試或評(píng)估無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)W確定它們是否基本上不含細(xì)胞和/或細(xì)胞組分。例如，可W 使用光學(xué)顯微鏡檢查處理的組織W確定是否殘留有細(xì)胞(活的或死的）和/或細(xì)胞組分。另 夕h可W使用某些測(cè)定法來(lái)鑒定細(xì)胞或細(xì)胞組分的存在。例如，DNA或其他核酸測(cè)定法可W 用來(lái)定量組織基質(zhì)內(nèi)的剩余細(xì)胞核材料。通常，剩余DNA或其他核酸的缺失將指示完全脫細(xì) 胞化（即，細(xì)胞和/或細(xì)胞組分的去除）。最后，可W使用鑒定細(xì)胞特異性組分(例如，表面抗 原）的其他測(cè)定法來(lái)確定組織基質(zhì)是否為無(wú)細(xì)胞的。皮膚、皮膚部分(例如，真皮)和其他組 織例如血管、屯、臟瓣膜、筋膜、軟骨、骨、和神經(jīng)結(jié)締組織可W用來(lái)產(chǎn)生處于本披露范圍內(nèi)的 無(wú)細(xì)胞基質(zhì)。
[0059] 通常，在一種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)的產(chǎn)生中所設(shè)及的步驟包括從供者(例如，人尸體或 動(dòng)物來(lái)源)收獲組織W及在保存生物和結(jié)構(gòu)功能的條件下去除細(xì)胞。在某些實(shí)施例中，該工 藝包括化學(xué)處理W穩(wěn)定化組織并避免與除去細(xì)胞一起或在除去細(xì)胞之前的生物化學(xué)和結(jié) 構(gòu)降解。在不同實(shí)施例中，穩(wěn)定化溶液阻止并且防止?jié)B透性、低氧性、自溶性和蛋白水解降 解、保護(hù)免遭微生物污染、W及減少會(huì)伴隨含有例如平滑肌組分(例如，血管）的組織而發(fā)生 的機(jī)械損傷。穩(wěn)定化溶液可W含有一種適當(dāng)?shù)木彌_劑、一種或多種抗氧化劑、一種或多種腫 脹劑(oncotic agent)、一種或多種抗生素、一種或多種蛋白酶抑制劑、和/或一種或多種平 滑肌松弛劑。
[0060] 然后將該組織置于一種脫細(xì)胞溶液中W從結(jié)構(gòu)基質(zhì)中去除活細(xì)胞(如上皮細(xì)胞、 內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、W及成纖維細(xì)胞），而不損壞膠原基質(zhì)的生物學(xué)和結(jié)構(gòu)完整性。該脫 細(xì)胞化溶液可W含有適當(dāng)?shù)木彌_劑、鹽、抗生素、一種或多種去垢劑、一種或多種防止交聯(lián) 的試劑、一種或多種蛋白酶抑制劑、和/或一種或多種酶。在一些實(shí)施例中，將組織在37°C下 在該脫細(xì)胞溶液中解育過(guò)夜，同時(shí)在90rpm下輕輕振搖。在某些實(shí)施例中，可W使用另外的 洗涂劑從該組織樣品中去除脂肪。
[0061] 在脫細(xì)胞化過(guò)程后，將組織樣品徹底洗涂。在一些示例性實(shí)施例中，例如，當(dāng)使用 異種材料時(shí)，然后將脫細(xì)胞化組織用脫氧核糖核酸酶(DNA酶)溶液處理?？蒞使用任何適合 的緩沖劑，只要運(yùn)種緩沖劑提供適合的DNA酶活性即可。
[0062] 雖然可W從與該無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)移植物的受者相同的物種的一個(gè)或多個(gè)個(gè)體制 造一種無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)，但情況不必一定如此。因此，例如，可W從豬的組織制造一種無(wú)細(xì) 胞組織基質(zhì)并且將其移植到人類患者中?？蒞作為無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)的受者W及用于生產(chǎn)該 無(wú)細(xì)胞組織基質(zhì)的組織或器官的供者的種類包括但不限于:哺乳動(dòng)物，例如人類、非人靈長(zhǎng) 類(例如，猴子、拂拂、或黑猩猩）、豬、奶牛、馬、山羊、綿羊、狗、貓、兔、豚鼠、沙鼠、倉(cāng)鼠、大 鼠、或小鼠。
[0063] 從含膠原材料消除a-gal表位會(huì)減弱針對(duì)含膠原材料的免疫反應(yīng)。a-gal表位表達(dá) 在非靈長(zhǎng)類哺乳動(dòng)物中和新世界猴(南美的猴）中，連同在大分子，例如細(xì)胞外組分的蛋白 多糖上。加利利化.Galili)等人，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem. )263:17755( 1988)。然而，在 舊世界靈長(zhǎng)類(亞洲和非洲的猴W及猿）W及人類中該表位缺失。同上，作為對(duì)胃腸細(xì)菌上 的曰-gal表位碳水化合物結(jié)構(gòu)的免疫反應(yīng)的結(jié)果，在人類和靈長(zhǎng)類中產(chǎn)生抗gal抗體。加利 利化.Galili)等人，傳染與免疫（Infect. Immun. )，56:1730( 1988);哈馬德（R.M.化madeh) 等人，臨床研究雜志(J.Clin. Invest. ),89:1223( 1992)。
[0064] 因?yàn)榉庆`長(zhǎng)類哺乳動(dòng)物(例如豬)產(chǎn)生a-gal表位，所W來(lái)自運(yùn)些哺乳動(dòng)物的含膠 原材料異種移植進(jìn)靈長(zhǎng)類通常導(dǎo)致排異作用，運(yùn)是由于靈長(zhǎng)類抗Gal抗體結(jié)合至含膠原材 料上的運(yùn)些表位。加利利（U.Galili)等人，今日免疫學(xué)（ImmunoIogy Today)，14:480 (1993);山寧（M. Sandrin)等人，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc.化 tl. Acad. Sci. USA)，90: 11391 (1993);古德化.Good)等人，移植學(xué)進(jìn)展（Transplant.Proc. ),24:559( 1992);柯林斯 (B.H. Collins)等人，免疫學(xué)雜志(J. Immunol. )，154:5500(1995)。此夕h異種移植導(dǎo)致免疫 系統(tǒng)的主要激活W產(chǎn)生增加量的高親和力抗-gal抗體。因此，在一些實(shí)施例中，當(dāng)使用產(chǎn)生 a-gal表位的動(dòng)物作為組織來(lái)源時(shí)，來(lái)自細(xì)胞和來(lái)自含膠原材料的細(xì)胞外組分的a-gal表位 的實(shí)質(zhì)性消除、W及細(xì)胞a-gal表位的再表達(dá)的預(yù)防可W減少針對(duì)與結(jié)合在a-gal表位上的 抗gal抗體相關(guān)聯(lián)的含膠原材料的免疫應(yīng)答。
[0065] 為了去除a-gal表位，可W使組織樣品經(jīng)受一次或多次酶處理，W去除某些免疫抗 原，如果存在于樣品中的話。在一些實(shí)施例中，如果存在于組織中，可W用Q-半乳糖巧酶處 理組織樣品W消除a-gal表位。在一些實(shí)施例中，用制備在抑6.0的IOOmM憐酸鹽緩沖液中 的、300U/L濃度的a-半乳糖巧酶處理組織樣品。在其他實(shí)施例中，為了從收獲的組織充分去 除曰-gal表位，將a-半乳糖巧酶的濃度增加至400U/L?？蒞使用任何適合的酶濃度和緩沖 劑，只要達(dá)到充分的抗原消除。
[0066] 可替代地，可W選擇已經(jīng)基因修飾為缺乏一種或多種抗原表位的動(dòng)物作為組織來(lái) 源，而不是用酶處理組織。例如，可W選擇已經(jīng)被基因修飾而缺乏末端Q-半乳糖部分的動(dòng)物 (例如，豬)作為組織來(lái)源。對(duì)于適當(dāng)?shù)膭?dòng)物的說(shuō)明參見(jiàn)共同未決的美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)10/896， 594和美國(guó)專利號(hào)6，166,288，其披露內(nèi)容通過(guò)引用^其全文結(jié)合在此。此外，加工組織^產(chǎn) 生具有或不具有減少量的或者缺乏a-1,3-半乳糖部分的無(wú)細(xì)胞基質(zhì)的某些示例性方法描 述于徐慧(Xu，化i .)等人，"支持軟組織再生的豬源無(wú)細(xì)胞真皮支架:末端半乳糖-a-(1，3)-半乳糖的去除和基質(zhì)結(jié)構(gòu)的保留（A化rcine-Derived Acellular Dermal Scaffold that Supports Soft Tissue Regeneration : Removal of Terminal Galactose-口-（1,3)-Galactose an