環(huán)黃芪醇在制備保肝及促進(jìn)肝損傷修復(fù)藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種=祗皂巧類化合物環(huán)黃巧醇的醫(yī)藥新用 途，環(huán)黃巧醇有較強(qiáng)的促進(jìn)肝細(xì)胞增殖活性，抑制調(diào)亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，降低肝損傷時血清 或組織中ALT、AST、MDA活性和升高SOD活性（p<0. 05)，對化學(xué)性肝損傷有較好的保護(hù)和治 療作用，因此可用于制備保肝護(hù)肝W及治療化學(xué)性肝損傷的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃巧甲巧（AstragalosideIV)為黃巧的主要皂巧類成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明， 黃巧及其皂巧類成分具有顯著的免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、抗缺血性腦損傷、和抗衰老等廣 泛作用（Clement-KruzelS,etal.Immunemodulationofmacrophagepro-inflammatory responsebygoldensealandAstragalusextracts.JMedFood2008, 11:493-498;Mao XQ,etal.HypoglycemiceffectofpolysaccharideenrichedextractofAstragalus membranaceusindietinducedinsulinresistantC57BL/6Jmiceanditspotential mechanism.Phytomedicine2009, 16:416-425;ShenP,etal.Differentialeffects ofisoflavones,fromAstragalusmembranaceusandPuerariathomsonii,onthe activationofPPA民alpha,PPA民gamma,andadipocytedifferentiationinvitro. JNutr.2006, 136:899-905;XuXL,etal.Modificationofalterationsincardiac functionandsarcoplasmicreticulumbyastragalosideIVinmyocardialinjury invivo.EurJPharmacol2007 :568:203-212),相關(guān)研究在分子水平上闡明了黃博 及其相關(guān)成分對衰老基因調(diào)控、細(xì)胞稠亡、DNA損傷修復(fù)及端粒長度影響方面有明顯作 用。環(huán)黃博醇（cycloastragenol，CAG)為黃博甲骨的骨元，是黃博甲骨在腸道內(nèi)的主 要水解代謝產(chǎn)物（加Yongchuan,etal.^ansportandbioavailabilityS化diesof astragalosodeIV，anactiveingredientinRadixAstragali.BasicClinPhamacol Toxicol，2004,95(6) :297;JingZhu，etal.Invitrointestinalabsorptionand first-passintestinalandhepaticmetabolismofcyeloastragenol，apotentsmall moleculetelomeraseactivator.DrugMetaPharmacokinet, 2010, 25(5) :479) 〇 石開究 表明，由于黃博甲骨的相對分子質(zhì)量較大、親水性較強(qiáng)等原因使其在體內(nèi)的相對生物利用 度很化，不足3%，而骨元環(huán)黃博醇具有相對較小的分子質(zhì)量和較強(qiáng)的親脂性，其在生物膜 滲透和胃腸道吸收方面具有優(yōu)勢。進(jìn)一步的研究表明，環(huán)黃博醇是現(xiàn)今唯一發(fā)現(xiàn)的端粒 酶激活劑，通過增加端粒酶從而延緩端粒變短化runoBernardesdeJesus,etal.The telomeraseactivatorTA-65eIongatesshorttelomeresandincreaseshealth spanofadult/oldmicewithoutincreasingcancerincidence.AgingCell2011; 10(4) :604-621),卻沒有引發(fā)腫瘤的危險。
[0003] 肝損傷是臨床上的常見病，各種物理和化學(xué)因素均可導(dǎo)致急、慢性肝損傷，嚴(yán)重或 持續(xù)的肝損傷最終可導(dǎo)致急性肝功能衰竭，危及患者生命。因此，急、慢性肝損傷及其修復(fù) 一直是肝臟疾病研究的前沿?zé)狳c(diǎn)問題。不同程度的肝損傷其修復(fù)方式有所不同。有研究認(rèn) 為，在修復(fù)損傷的肝組織過程中設(shè)及不同來源的細(xì)胞，如：輕度肝損傷，肝細(xì)胞的缺失由成 熟肝細(xì)胞的增殖來代替；而更嚴(yán)重的肝損傷，可誘導(dǎo)肝內(nèi)膽道樹分支終端的卵圓細(xì)胞的激 活，從而分化為肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞；更深層次的替代細(xì)胞可能來源于骨髓。此外還有肝 非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的參與。肝損傷的修復(fù)過程是多種因素的綜合作用，整體性的組織恢復(fù)要求肝 內(nèi)不同細(xì)胞（如肝細(xì)胞、星狀細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨隧細(xì)胞和淋己細(xì)胞）平衡的 重建和肝臟基質(zhì)提供框架W及多種細(xì)胞因子的共同參與。
[0004] 肝損傷發(fā)生之后，肝臟經(jīng)歷創(chuàng)傷修復(fù)的過程，恢復(fù)組織構(gòu)架和維護(hù)體內(nèi)平衡。其 中，肝細(xì)胞的再生與增殖起到了至關(guān)重要的作用?；瘜W(xué)性或藥物性導(dǎo)致的急性肝損傷發(fā) 生后，對肝細(xì)胞的保護(hù)也體現(xiàn)在抑制細(xì)胞調(diào)亡相關(guān)蛋白的表達(dá)和激活。半脫天冬蛋白酶即 Caspase酶家族在調(diào)亡過程中起著必不可少的作用，它們切斷細(xì)胞與周圍的聯(lián)系，拆散細(xì)胞 骨架，阻斷細(xì)胞DNA復(fù)制和修復(fù)，干擾mRNA剪切，損傷DNA與核結(jié)構(gòu)，誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)可被其 他的細(xì)胞吞隧的信號，并進(jìn)一步使之降解為調(diào)亡小體。其中，較常用作對調(diào)亡相關(guān)蛋白進(jìn)行 檢測的指標(biāo)為caspase-3/9。caspase-3是細(xì)胞調(diào)亡過程中最主要的終末剪切酶，也是CTL 細(xì)胞殺傷機(jī)制的重要組成部分。Caspase-9是調(diào)亡的引發(fā)劑，即開始調(diào)亡過程。運(yùn)些調(diào)亡相 關(guān)蛋白在細(xì)胞調(diào)亡過程中有非常重要的作用。
[0005] 化學(xué)性或藥物性導(dǎo)致的急性肝損傷發(fā)生后，肝功能受到很大影響，谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)酶活性升高，超氧化物歧化酶（SOD)含量降低，丙二醒（MDA)含量 增多，嚴(yán)重的可導(dǎo)致急性肝功能衰竭。有促進(jìn)肝損傷修復(fù)作用的藥物可改善肝功能，對化學(xué) 性或藥物性導(dǎo)致的急性肝損傷有較好的防護(hù)和治療作用。
[0006]目前，在臨床上使用最多的黃巧注射液或者黃巧甲巧注射液，主要用于治療屯、腦 血管疾病，市場上尚沒有從單味黃巧藥材中制得的保肝護(hù)肝新藥，黃巧藥材在我國使用多 年，具有保肝之功效，但是目前的研究并不能明確黃巧作為保肝藥物的主要具有藥理活性 的物質(zhì)基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是為了解決W上現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種=祗皂巧類 化合物環(huán)黃巧醇用于制備促進(jìn)肝損傷修復(fù)藥物的新用途
[0008] 技術(shù)方案：本發(fā)明所述的環(huán)黃巧醇用于制備保肝藥物或護(hù)肝藥物或促進(jìn)肝損傷修 復(fù)藥物的應(yīng)用。
[0009] 為了進(jìn)一步解決上述問題，環(huán)黃巧醇用于制備藥物性肝損傷修復(fù)藥物的應(yīng)用。
[0010] 為了進(jìn)一步解決上述問題，環(huán)黃巧醇用于制備促進(jìn)酒精性肝損傷修復(fù)藥物的應(yīng) 用。
[0011] 為了進(jìn)一步解決上述問題，環(huán)黃巧醇用于制備促進(jìn)缺血再灌注肝損傷修復(fù)藥物的 應(yīng)用。
[0012] 為了進(jìn)一步解決上述問題，環(huán)黃巧醇用于制備促進(jìn)膽汁渺積性肝損傷修復(fù)藥物的 應(yīng)用。
[0013] 為了進(jìn)一步解決上述問題，環(huán)黃巧醇用于制備治療各種化學(xué)性肝損傷藥物的應(yīng) 用。
[0014] 為了進(jìn)一步解決上述問題，環(huán)黃巧醇用于制備治療慢性肝纖維化的藥物的應(yīng)用。
[0015] 為了進(jìn)一步解決上述問題，所述環(huán)黃巧醇用于為了進(jìn)一步解決上述問題，制備治 療四氯化碳所致急性肝損傷藥物的應(yīng)用。
[0016] 為了進(jìn)一步解決上述問題，所述藥物為固體制劑或溶液劑。
[0017] 為了進(jìn)一步解決上述問題，所述固體制劑為膠囊劑、片劑或顆粒劑。
[0018] 有益效果：本發(fā)明提供了一種已知化合物環(huán)黃巧醇用于制備保肝藥物或護(hù)肝藥物 或治療急慢性肝損傷藥物的新應(yīng)用，環(huán)黃巧醇能顯著促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，抑制調(diào)亡相關(guān)蛋白 的表達(dá)，降低肝損傷時血清或組織中ALT、AST、MDA活性和升高SOD活性（p<0. 05)，對急性 肝損傷有較好的保護(hù)和治療作用，可用于制備治療急慢性肝損傷藥物。
【附圖說明】
[0019] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中正常大鼠肝細(xì)胞株B化-3A在環(huán)黃巧醇的作用下增值結(jié) 果；
[0020] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中正常人肝細(xì)胞株L02細(xì)胞在環(huán)黃巧醇的作用下增值結(jié) 果；
[0021] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例2中環(huán)黃巧醇對憐酸化P53蛋白和化spase家族的3、9蛋白 活性分子抑制作用；
[0022] 圖4是本發(fā)明中實(shí)施例3中環(huán)黃巧醇（CAG)對化學(xué)性急性肝損傷的保護(hù)作用，其 中A是正常組，B是模型組，C是CAG低劑量組，D是CAG高劑量組。
[0023] 圖5是本實(shí)施例5中環(huán)黃巧醇（CAG)對慢性肝纖維化的治療作用。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 為了加深對本發(fā)明的理解，下面將結(jié)合實(shí)施例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，該 實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[00巧]實(shí)施例1 :環(huán)黃巧醇對正常肝細(xì)胞的促進(jìn)增殖作用
[0026] 將大鼠肝細(xì)胞株B化-3A細(xì)胞和人肝細(xì)胞株L02細(xì)胞W每孔3X103鋪于96孔板 中，每組3復(fù)孔，細(xì)胞貼壁后，加入環(huán)黃巧醇至終濃度分別為5、10、20yM，等量DMSO為對照 組，7化后，加入CCK8,解育1小時，酶標(biāo)儀450nm檢測，并通過OD值計算細(xì)胞的增殖效率。
[0027] 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，環(huán)黃巧醇對正常肝細(xì)胞有促進(jìn)增殖的作用，其效應(yīng)在一定濃度范圍內(nèi) 呈劑量依賴性。
[0028] 實(shí)施例2:環(huán)黃巧醇抑制肝細(xì)胞調(diào)亡相關(guān)蛋白表達(dá)
[0029] 人肝細(xì)胞株L02細(xì)胞W每孔5X105鋪于6孔板中，在37°C，5%C〇2條件下培養(yǎng)過 夜，分組加入環(huán)黃巧醇至終濃度分別為5、10、20yM，等量DMSO為對照組，24h后提取細(xì)胞總 蛋白，用Western-blot檢測環(huán)黃巧醇對相關(guān)調(diào)亡蛋白表達(dá)的影響。
[0030] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，環(huán)黃巧醇對憐酸化P53蛋白和化spase家族的3、9蛋白活 性分子的含量有明顯抑制作用，并在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性，表明環(huán)黃巧醇對正常肝細(xì) 胞有抑制調(diào)亡的作用。
[0031] 實(shí)施例3:環(huán)黃巧醇對化學(xué)性急性肝損傷的保護(hù)作用
[003引40只C57雄性小鼠隨機(jī)分為4組，即空白對照組、(XL4急性肝損傷模型組、環(huán)黃巧 醇（CAG)低劑量巧Omg/Kg)組、高劑量（lOOmg/Kg)組。實(shí)驗(yàn)過程如下：CAG低、高劑量組連 續(xù)灌胃12天，空白組和模型組給予相同體積的生理鹽水。第12天給藥化后，除空白組W外其余各組均腹腔