胃給藥急性毒性試驗(yàn)LD5。的計(jì)算如下表10所示。
[0186] 表10硫酸羥基氯喹對KM小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)LD5。的計(jì)算
[0187] 計(jì)算結(jié)果（本底死亡率為：0%)
[0188]
[0189] 中間結(jié)果第3輪
[0190]
[0192] 注：g值=0· 214 g>0. 1，不可忽略應(yīng)作Feiller校正
[0193] 異質(zhì)性的全面校正
[0194]
[0195] 注：X2值=3. 676P值=0. 299不必作異質(zhì)性校正
[0196] 根據(jù)表9和表10結(jié)果計(jì)算LD5。：硫酸羥基氯喹半數(shù)致死量LD5。= 2156. 178mg/kg, 95%可信限=(1895. 476 ~2452. 736)mg/kg。
[0197] 4.結(jié)果討論
[0198] 給藥組小鼠中毒癥狀一般表現(xiàn)在藥后6小時(shí)內(nèi)，在此期間，給藥組小鼠不進(jìn)食或 少進(jìn)食，而溶媒對照組小鼠在此期間則正常進(jìn)食，故給藥組小鼠在Di與溶媒對照組比較體 重降低，2434mg/kg組雄鼠體重在D7天仍降低，其它劑量組小鼠體重D7、D14未見異常。由于 動物數(shù)較少，且只有個(gè)別給藥組表現(xiàn)出體重與溶媒對照組比較有顯著性差異，故不能認(rèn)為 對硫酸羥基氯喹KM小鼠體重有明顯影響。
[0199] 5.結(jié)論
[0200] 在本實(shí)驗(yàn)條件下，硫酸羥基氯喹對KM小鼠24小時(shí)內(nèi)1次灌胃給藥，給藥后出現(xiàn)少 動、抽搐、呼吸困難等毒性癥狀，病理學(xué)檢查結(jié)果顯示未見異常。硫酸羥基氯喹半數(shù)致死量 LD50 = 2156. 178mg/kg，95%可信限=(1895. 476 ~2452. 736)mg/kg〇
[0201] 實(shí)驗(yàn)例4青蒿素硫酸羥基氯喹（AH復(fù)方1 : 1)小鼠急性毒性試驗(yàn)
[0202] 觀察研究KM小鼠1次灌胃給予青蒿素硫酸羥基氯喹（AH復(fù)方1 : 1)，在一定時(shí)間 內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，了解其急性毒性作用劑量。
[0203] 1.材料
[0204] 同實(shí)驗(yàn)例2。
[0205] 2.實(shí)驗(yàn)方法
[0206] 按預(yù)試驗(yàn)的DJIOO%死亡的最大劑量）和0"(0%死亡的最小劑量）結(jié)果，取 8000mg/kg，Dn取4000mg/kg，組間距為1 : 0· 84,將KM小鼠隨機(jī)分為5個(gè)給藥組[8000mg/kg、6720mg/kg、5645mg/kg、4742mg/kg、3983mg/kg]和 1 個(gè)溶媒對照組（純凈水），每組 10 只，早?各5只。各組均按20mL/kg體重灌胃給藥1次；藥后連續(xù)6小時(shí)觀察小鼠出現(xiàn)的 癥狀、癥狀起始的時(shí)間、持續(xù)時(shí)間、死亡時(shí)間、瀕死前反應(yīng)等情況。藥后連續(xù)觀察14天，每天 上下午各1次，觀察小鼠外觀、行為、精神、對刺激的反應(yīng)、分泌物、排泄物等。所有小鼠均進(jìn) 行大體解剖，肉眼觀察其器官體積、顏色、質(zhì)地的改變（若任何器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等 改變時(shí)，均進(jìn)行組織病理學(xué)檢查）。在〇。、0 1、07、014測量體重。用犯^8法計(jì)算半數(shù)致死量 (LD5。）及其95 %可信限。
[0207] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0208] -般臨床觀察：給藥組小鼠灌胃給予各劑量青蒿素硫酸羥基氯喹，給藥后出現(xiàn)活 動減少、抽搐、呼吸困難等毒性癥狀。64%小鼠死亡發(fā)生在藥后1小時(shí)內(nèi)，存活小鼠大部分 出現(xiàn)毒性癥狀后逐漸恢復(fù)正常。給藥劑量越大，中毒癥狀出現(xiàn)的時(shí)間越早，小鼠死亡數(shù)越 多。溶媒對照組（純凈水）：1〇只小鼠（早?各5只）由試驗(yàn)開始至給藥后6h未見明顯異 常癥狀；至試驗(yàn)結(jié)束未見小鼠死亡。連續(xù)觀察14天，每天上下午各1次；在此期間，存活小 鼠精神狀態(tài)較好，外觀未見異常表現(xiàn)，行為活動正常，未見異常分泌物及排泄物。
[0209] 體重：各劑量組雌性、雄性小鼠在D。、DpD7、D14與溶媒對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué) 意義（P> 0. 05)。
[0210] 病理學(xué)檢查：對觀察期內(nèi)死亡小鼠及觀察期結(jié)束時(shí)按計(jì)劃處死的小鼠進(jìn)行大體剖 檢，肉眼觀察其體表完整、被毛柔順，無外傷及破潰等；皮下無出血點(diǎn)及色素沉著等；腹腔 胸腔無積水、臟器位置正常；各器官的體積、顏色及質(zhì)地等均未發(fā)現(xiàn)明顯病變及異常。
[0211] 青蒿素硫酸羥基氯喹（AH復(fù)方1 : 1)對KM小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)死亡時(shí)間 和死亡情況見表11。
[0212] 表11硫酸羥基氯喹對小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)死亡時(shí)間和死亡情況
[0213]
[0214] 青蒿素硫酸羥基氯喹（AH復(fù)方1 : 1)對小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)LD5。的計(jì)算 如表12所示。
[0215] 表12AH對小鼠灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)LD5。的計(jì)算
[0216] 計(jì)算結(jié)果（本底死亡率為：0%)
[0217]
[0218] 中間結(jié)果第4輪
[0219]
[0221] 注：X2值=2. 695P值=0. 441不必作異質(zhì)性校正
[0222] 由表11、表12結(jié)果計(jì)算LD5。：青蒿素硫酸羥基氯喹半數(shù)致死量LD5。= 5022. 517mg/ 1^，95%可信限=(4633.736 ~5443.917)11^/1^。
[0223] 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0224] 在本實(shí)驗(yàn)條件下，青蒿素硫酸羥基氯喹對KM小鼠24h內(nèi)1次灌胃給藥，給藥后出 現(xiàn)活動減少、抽搐、呼吸困難等毒性癥狀，病理學(xué)檢查結(jié)果顯示未見異常。青蒿素硫酸羥基 氯喹半數(shù)致死量LD5。= 5022. 517mg/kg，95%可信限=(4633. 736 ~5443. 917)mg/kg。
[0225] 實(shí)驗(yàn)例5.AH復(fù)方配伍減毒作用研究
[0226] 通過測定1:1配伍的AH復(fù)方及其各組分單藥A和Η的小鼠LD5。（參見實(shí)施例2-4)， 計(jì)算復(fù)方配伍的毒性聯(lián)合作用系數(shù)Q，為評價(jià)AH復(fù)方配伍減毒作用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[0227] 以Bliss法計(jì)算各藥的LD5。，用Finney公式計(jì)算復(fù)方配伍（混合毒物）的聯(lián)合作 用系數(shù)：Q=復(fù)方LD5。理論值/復(fù)方LD5。實(shí)測值，若小于1則為減毒；大于1為增毒；等于1 為相加。聯(lián)合作用系數(shù)計(jì)算結(jié)果見表13。
[02281
[0229] (a、h分別為A藥和Η藥在復(fù)方中比例，即各占50% )
[0230] 表13ΑΗ復(fù)方及其組分LD5。和聯(lián)合作用系數(shù)結(jié)果
[0231]
[0232]由表 13 結(jié)果可知，AH復(fù)方的LD5。為 5022. 5mg/kg，組分Η的LD5。為 2156. 2mg/kg，A 測得最大耐受量為18000mg/kg，因此可以認(rèn)為A藥的LD5。為>18000mg/kg。通過Finney公 式計(jì)算AH復(fù)方LD5。的理論值為3852. 1~4314. 1，藥物毒性聯(lián)合作用系數(shù)Q值為0. 767~ 0. 859〈1，說明AH復(fù)方配伍具有減毒作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種聯(lián)合用藥物，含有第一活性成分青蒿素，和第二活性成分硫酸羥基氯喹，以及任 選的藥學(xué)可接受的輔料。2. 權(quán)利要求1或2的聯(lián)合用藥物，其中第一活性成分與第二活性成分的重量比為1 : 3 ~3 : 1〇3. 權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的聯(lián)合用藥物，其中第一活性成分和第二活性成分在同一種制 劑單元中，或者第一活性成分和第二活性成分分別在不同的規(guī)格制劑單元中。4. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的聯(lián)合用藥物，其中第一活性成分和第二活性成分同時(shí)、分別 或者依次給藥。5. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的聯(lián)合用藥物在制備作為免疫調(diào)節(jié)劑的藥物中的用途，或 在制備用于治療自身免疫性疾病的藥物中的用途。6. 第一活性成分青蒿素和第二活性成分硫酸羥基氯喹聯(lián)合用于制備作為免疫調(diào)節(jié)劑 的藥物中的用途，或在制備用于治療自身免疫性疾病的藥物中的用途。7. 權(quán)利要求5或6的用途，其中所述的自身免疫性疾病為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎、痛風(fēng)關(guān)節(jié)炎、皮肌炎、腎病綜合征或干燥綜合征。8. -種用于治療自身免疫性疾的方法，該方法是將第一活性成分青蒿素和第二活性成 分硫酸羥基氯喹聯(lián)合施用到需要治療的個(gè)體中，或者是將權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的聯(lián)合 用藥物施用到需要治療的個(gè)體中。9. 權(quán)利要求8的方法，其中第一活性成分和第二活性成分同時(shí)、分別或者依次施用到 需要治療的個(gè)體中。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種聯(lián)合用藥物，含有第一活性成分青蒿素，和第二活性成分硫酸羥基氯喹，以及任選的藥學(xué)可接受的輔料。該聯(lián)合用藥物可以更有效地用于治療自身免疫性疾病，且能夠在保證藥效作用不變甚至提高的前提下減少硫酸羥基氯喹的使用量，從而降低硫酸羥基氯喹其毒副作用。
【IPC分類】A61P37/02, A61K31/366, A61K31/4706, A61P19/02, A61P17/00, A61P21/00, A61P13/12, A61P29/00
【公開號】CN105250295
【申請?zhí)枴緾N201410321311
【發(fā)明人】宋健平, 徐勤, 周玖瑤, 鄧長生, 鄭紹琴, 賴潔梅, 王振華, 關(guān)業(yè)枝, 張紅英, 王琪, 袁捷
【申請人】廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技產(chǎn)業(yè)園有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2014年7月7日