專利名稱：治療牙周疾病的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牙周病癥的治療或預(yù)防方法。特別的，本發(fā)明包括免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物治療和預(yù)防牙周疾病的新用途。優(yōu)選的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑選自包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
背景技術(shù)：
牙周疾病或牙周炎是可導(dǎo)致支撐牙齒的硬組織和軟組織都被破壞的炎性疾病，近來還被推定為心血管疾病的危險(xiǎn)因子。Beck等＂DentalInfections and atherosclerosis＂，American Heart Journal，13S528-533(1999)。據(jù)估計(jì)，在美國(guó)目前正接受更嚴(yán)重形式的這類疾病治療的人在一千萬人以上，每年的治療費(fèi)用大約80億美元。
臨床上，牙周炎是牙周組織的炎癥，將導(dǎo)致牙齦的發(fā)炎并可能導(dǎo)致牙槽骨的吸收以及牙齦的退化。牙齦的退化將導(dǎo)致牙周韌帶暴露，從而允許微生物侵犯和破壞韌帶。
一些基本種類的細(xì)菌感染對(duì)引發(fā)宿主炎癥反應(yīng)起重要作用，宿主炎癥反應(yīng)是造成組織破壞并最終導(dǎo)致牙損失的原因。Zambon，J.J.，＂Periodontal Disease，Microbial Factors＂，Ann.Periodontol.，1879-825(1996)。和該疾病相關(guān)的主要病原體已被確定，它們包括牙齦卟啉菌(Porphyromonas gingivalis)、福賽類桿菌(Bacteroides forsythus)和放線共生放線桿菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans)。盡管就發(fā)病機(jī)理的本質(zhì)而言，細(xì)菌單獨(dú)不足以致病。宿主因素如遺傳的易患病的體質(zhì)和環(huán)境因素如吸煙被認(rèn)為平等地影響疾病的發(fā)作和惡化。
牙周炎的形式包括早期發(fā)作性牙周炎(EOP)，慢性成人性牙周炎(AP)和難控制的牙周炎(RP)。局部青少年牙周炎是EOP的一種，它發(fā)生于另外看起來健康的青少年，并且與放線共生放線桿菌感染相關(guān)?！奥猿扇诵匝乐苎住蓖ǔ：透Ｙ愵悧U菌、牙齦卟啉菌、許多革蘭氏陰性非糖解(asaccharolytic)桿菌及口腔螺旋菌相關(guān)。它通常發(fā)生于35歲以上的患者。臨床上，它類似伴隨于快速進(jìn)行性牙周炎的急性壞死性潰瘍齦炎。在短短六個(gè)月內(nèi)患者將丟失9～12毫米牙齦附著。
當(dāng)前治療牙周疾病的方法不外乎機(jī)械的方法和本質(zhì)上是外科的方法，通常包括剝刮和牙根整平以移去結(jié)石沉積物。然而機(jī)械的治療方法并不能影響潛在的病因。抗生素也被用作輔助治療手段，Loesche等，＂Treatment paradigms in periodontal disease＂，Compend.Contin.EducDental，18(3)221-6，228-30(1997)。不幸的是結(jié)果總是令人沮喪的，因?yàn)榭股夭⒉荒芟麥缭斐裳装Y因素的細(xì)菌，患者將遭受再感染。
相應(yīng)的，不斷地需要針對(duì)牙周疾病的新的、有效的治療和預(yù)防措施。本發(fā)明正是針對(duì)這個(gè)需要。
發(fā)明概述本發(fā)明提供牙周病癥的治療或預(yù)防方法，包括將治療有效量的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(IRM)化合物直接施用于患牙周病癥的患者的牙周組織。優(yōu)選的IRM化合物選自咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺。
附圖簡(jiǎn)述

圖1是牙周的剖析示意圖；圖2是顯示被感染小鼠的菌斑內(nèi)牙齦卟啉菌比例的圖；圖3是顯示被感染小鼠的骨損失的圖4a是治療前狗的出血指數(shù)、牙齦指數(shù)和探診深度的示意圖；圖4b是治療兩周后狗的出血指數(shù)、牙齦指數(shù)和探診深度的示意圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明公開提供了使用免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(IRM)化合物治療或預(yù)防口腔病癥如牙周疾病的方法。如這里所用的“免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物”是指促使從造血細(xì)胞包括樹突細(xì)胞和/或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞因子如干擾素(α)、腫瘤壞死因子和白細(xì)胞間素-12的化合物。這樣的化合物的例子包括CpG低聚核苷酸、脂多糖、聚肌苷酸多聚胞苷酸絡(luò)合物以及多肽、蛋白質(zhì)，已知它們將促使從樹突細(xì)胞和/或單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中產(chǎn)生細(xì)胞因子。
優(yōu)選實(shí)例中，IRM化合物選自咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺。制備這些IRM化合物的方法和包含它們的藥物組合物在下列文獻(xiàn)中已被公開美國(guó)專利4,689,338；5,389,640；5,268,376；4,929,624；5,266,575；5,352,784；5,494,916；5,482,936；5,346,905；5,395,937；5,238,944；5,525,612；5,175,296；5,693,811；5,741,908；5,939,090；6,110,929；4,988,815；5,376,076；6,194,425；6,245,776和6,331,539以及PCT出版物WO 00/76505 and WO00/76518。這些公開的專利和專利申請(qǐng)?jiān)诖艘鲄⒖肌?br> 這里所用的“牙周炎”是指牙齒的牙周組織、牙槽骨、牙骨質(zhì)和鄰近的牙齦組織的炎癥和/或變性。參照?qǐng)D1作為回顧，每個(gè)牙齒由三個(gè)部分組成牙冠1，牙頸2和牙根3。牙冠1是牙齒中凸出在牙齦4上的部分，并與對(duì)顎內(nèi)一個(gè)或多個(gè)其它的牙齒咬合。牙頸2是牙齒中位于牙冠1和牙根3之間的部分。牙骨質(zhì)-牙釉質(zhì)匯合處(CEJ)5是牙根3的牙骨質(zhì)6和牙冠1的牙釉質(zhì)7相遇的位置。牙根3被固定在牙槽8或“齒槽”中。牙齒絕大部分由牙質(zhì)10組成，它在牙冠1上被牙釉質(zhì)7覆蓋，在牙根3上被牙骨質(zhì)6覆蓋。牙根3上的牙骨質(zhì)6通過牙周韌帶13與牙槽骨11相連，從而在牙齒和牙槽8之間形成纖維性的結(jié)合點(diǎn)。
因此，這里所用的“牙周組織”是圍繞和支撐牙齒的組織并包括牙周韌帶、牙槽骨以及牙齦。“牙周袋”是病理誘導(dǎo)的延伸到牙骨質(zhì)-牙釉質(zhì)匯合處(CEJ)之下的空間，并由于牙槽骨和/或牙周韌帶的斷裂而產(chǎn)生。
盡管已提出了大量的模型，牙周炎的炎性本質(zhì)還是沒有被完全的理解，Page等，＂Advances in the pathogenesis of periodontitissummaryof developments，clinical implications and future directions＂，Periodontology 2000，14216-248(1997)。一種假設(shè)是，預(yù)防細(xì)菌致病的對(duì)于起始細(xì)菌的正常免疫反應(yīng)發(fā)生了變化，變得不完全無效從而有助于疾病的形成，Mathur等，＂Cell-mediated immune system regulationin periodontal disease＂，Critical Rev.Oral.Bio.Med.，876-89(1997)。依據(jù)這個(gè)假設(shè)，在最小限度的患有或沒有牙周疾病的人中，免疫反應(yīng)傾向于TH1免疫反應(yīng)，該反應(yīng)一般與控制病毒和腫瘤相關(guān)。而在進(jìn)行性牙周疾病的患者中，免疫反應(yīng)途徑傾向于TH2反應(yīng)，其特征在于激活B細(xì)胞從而分泌抗體。據(jù)認(rèn)為抗體反應(yīng)對(duì)細(xì)菌是無效的，而且通常是短期的，并不能導(dǎo)致免疫“記憶”。另外，TH2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可激活不適當(dāng)?shù)乃拗鹘M織重塑酶，這些酶有助于破壞使牙齒和顎緊連的結(jié)締組織，而且這些酶還導(dǎo)致牙齒周圍的牙槽骨的再吸收。
另一個(gè)報(bào)告提出一個(gè)基于T-細(xì)胞二分法的牙周疾病模型，其特征在于牙周炎組織中IL-4生產(chǎn)細(xì)胞的高比例，并推斷TH2細(xì)胞在疾病進(jìn)行性損害過程中的角色。Seymour G.J.等，＂Cellular immunity andhypersensitivity as components of periodontal destruction＂，Oral Dis，2(1)96-101(1996)。這個(gè)報(bào)告近來被Bartova等人的工作所支持。Bartova等，＂TH1 and TH2 cytokine profile in patients with early onset periodontitisand their healthy siblings＂，Mediators Inflamm.，9(2)115-20(2000)。
已獲進(jìn)展的一個(gè)不同的假設(shè)是激活一些典型細(xì)胞因子的TH1反應(yīng)將因破骨細(xì)胞激活而導(dǎo)致骨再吸收。Assuma等，＂IL-1 and TNFantagonists inhibit the inflammatory response and bone loss inexperimental periodontitis＂，J.ofImmunology，160403-409(1998)。
另一個(gè)報(bào)告稱在牙周炎中觀察到累積的細(xì)胞因子情況，這與病理組織中TH1型細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)相符，也與TH2型細(xì)胞(若存在)在適當(dāng)?shù)拇碳は聲?huì)被上調(diào)相符。Takeichi等，＂Cytokine profiles of T-lymphocytes from gingival tissues with pathological pocketing＂，J.Dent.Res.，79(8)1548-55(2000年8月)。CD4和CD8+淋巴細(xì)胞都表現(xiàn)出能表達(dá)TH1-和TH2-型細(xì)胞因子信使。
總而言之，前面的報(bào)道強(qiáng)調(diào)了在導(dǎo)致牙周疾病發(fā)病機(jī)理方面還缺乏一致的機(jī)理，而且在疾病的醫(yī)學(xué)處理方法上也缺少一致意見。
很多咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺化合物顯示出在免疫調(diào)節(jié)、抗病毒和抗腫瘤(包括抗癌)方面是很有效的，并且還顯示出在增強(qiáng)對(duì)疫苗的保護(hù)性免疫系統(tǒng)反應(yīng)方面可作為有用的疫苗輔助物。最近發(fā)現(xiàn)很多這樣的IRM化合物能抑制TH2免疫反應(yīng)，而又增強(qiáng)TH2免疫反應(yīng)?？蓞⒁娒绹?guó)專利US 6,039,969；該公開在此以全文一并引作參考。
盡管牙周疾病的免疫學(xué)方面仍存在爭(zhēng)議，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)用免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)化合物進(jìn)行治療有利于牙周炎患者，并可治療潛在的感染。特別的，用IRM化合物治療能減少牙槽骨或牙周韌帶的破壞。如果是在牙周組織開始被破壞之前的合適時(shí)間施加治療，本發(fā)明還可被用來調(diào)節(jié)患者的免疫反應(yīng)以有效地防止出現(xiàn)牙周疾病的臨床征兆。因此IRM組合物兼有治療和預(yù)防的價(jià)值。
“患者”包括人類和動(dòng)物。
本發(fā)明方法中有用的藥物組合物包括免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(IRM)化合物。優(yōu)選的組合物包括選自包含咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺等免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的化合物。
優(yōu)選的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物包括由下文中的式I-V之一定義的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺 其中R11選自含1到10個(gè)碳原子的烷基；含1到6個(gè)碳原子的羥烷基；酰氧基烷基，其中的酰氧基是2到4個(gè)碳原子的鏈烷酰氧基或苯甲酰氧基，而其中的烷基含有1到6個(gè)碳原子；芐基；苯基乙基；和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素的基團(tuán)取代，前提是如果所說的苯環(huán)被兩個(gè)所說的基團(tuán)取代，那么所說的兩個(gè)基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；R21選自氫；含1-8個(gè)碳原子的烷基；芐基；苯基乙基；和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基、鹵素的基團(tuán)取代，前提是如果所說的苯環(huán)被兩個(gè)所說的基團(tuán)取代，那么所說的兩個(gè)基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；和每個(gè)R1獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的烷氧基、鹵素和含1到4個(gè)碳原子的烷基，并且n是0到2的整數(shù)，前提是如果n是2，那么所說的兩個(gè)R1基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)； 其中R12選自含有2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基和取代的含有2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基，其中所說的取代基選自含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基以及含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基；以及被含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基取代的含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基；和R22選自氫；含1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；芐基；苯基乙基和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基和鹵素的基團(tuán)取代，前提是如果所說的苯環(huán)被兩個(gè)所說的基團(tuán)取代，那么所說的兩個(gè)基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；和每個(gè)R2獨(dú)立地選自含有1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基；鹵素；和含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；n是0到2的整數(shù)，前提是如果n是2，那么所說的兩個(gè)R2基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；
其中R23選自氫，含1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；芐基；苯基乙基和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基、含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基和鹵素的基團(tuán)取代，前提是如果所說的苯環(huán)被兩個(gè)所說的基團(tuán)取代，那么所說的兩個(gè)基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；和每個(gè)R3獨(dú)立地選自含有1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基；鹵素；和含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；n是0到2的整數(shù)，前提是如果n是2，那么所說的兩個(gè)R3基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)； 其中R14是-CHRxRy，其中Ry是氫和碳-碳鍵，前提是當(dāng)Ry是氫時(shí)，Rx是含1到4個(gè)碳原子的烷氧基；含1到4個(gè)碳原子的羥基烷氧基；含2到10個(gè)碳原子的1-炔基；四氫吡喃基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到4個(gè)碳原子；2-，3-或4-吡啶基；進(jìn)一步的前提是當(dāng)Ry是碳-碳鍵時(shí)，Ry和Rx一起形成四氫呋喃基，它可被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自羥基和含有1到4個(gè)碳原子的羥烷基的基團(tuán)任選取代；R24選自氫；含1到4個(gè)碳原子的烷基；苯基；和取代的苯基，其中的取代基選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素；和R4選自氫；含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基；鹵素；和含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；
其中R15選自氫；含1到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基和被取代的含1到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其中的取代基選自含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基和被含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基取代的含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基；含2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基或被取代的含2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基，其中的取代基選自含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基和被含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基取代的含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基；含1到6個(gè)碳原子的羥烷基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到6個(gè)碳原子；酰氧基烷基，其中的酰氧基是2到4個(gè)碳原子的鏈烷酰氧基或苯甲酰氧基，烷基部分含1到6個(gè)碳原子；芐基；苯基乙基和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素的基團(tuán)取代，前提是如果所說的苯環(huán)被兩個(gè)所說的基團(tuán)取代，那么所說的兩個(gè)基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；R25是 其中Rs和RT獨(dú)立地選自氫；含1到4個(gè)碳原子的烷基；苯基；和被取代的苯基，其中的取代基選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素；X選自含1到4個(gè)碳原子的烷氧基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到4個(gè)碳原子；含1到4個(gè)碳原子的羥烷基；含1到4個(gè)碳原子的鹵代烷基；烷基酰氨基，其中的烷基含有1到4個(gè)碳原子；氨基；取代的氨基，其中的取代基是含有1到4個(gè)碳原子的烷基或羥烷基；疊氮基；氯；羥基；1-嗎啉代；1-吡咯烷代(pyrrolidino)；含有1到4個(gè)碳原子的烷硫基；和R5選自氫；含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷氧基；鹵素；和含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；和前述的任何物質(zhì)的藥學(xué)上可接受的鹽。
優(yōu)選用下式VI定義的6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺IRM化合物 其中m是1，2或3；R16選自氫；含3，4或5個(gè)碳原子的環(huán)烷基；含1到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基和被取代的含1到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，其中的取代基選自含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基和被含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基取代的含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基；含1到10個(gè)碳原子和1個(gè)或多個(gè)氟原子或氯原子的氟代或氯代烷基；含2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基和被取代的含2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基，其中的取代基選自含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基和被含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基取代的含3到6個(gè)碳原子的環(huán)烷基；含1到6個(gè)碳原子的羥烷基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到6個(gè)碳原子；酰氧基烷基，其中的酰氧基是2到4個(gè)碳原子的鏈烷酰氧基或苯甲酰氧基，烷基部分含1到6個(gè)碳原子，前提是任何這樣的烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、羥烷基、烷氧基烷基或酰氧基烷基沒有直接和氮原子鍵連的、全碳取代的碳原子；芐基；苯基乙基；和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素的基團(tuán)取代，前提是如果所說的苯環(huán)被兩個(gè)所說的基團(tuán)取代，那么所說的兩個(gè)基團(tuán)含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)；和-CHRxRy其中Ry是氫或碳-碳鍵，前提是當(dāng)Ry是氫時(shí)，Rx是含1到4個(gè)碳原子的烷氧基；含1到4個(gè)碳原子的羥基烷氧基；含2到10個(gè)碳原子的1-炔基；四氫吡喃基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到4個(gè)碳原子；2-，3-或4-吡啶基；進(jìn)一步的條件是當(dāng)Ry是碳-碳鍵時(shí)，Ry和Rx一起形成四氫呋喃基，它可被一個(gè)或兩個(gè)獨(dú)立地選自羥基和含有1到4個(gè)碳原子羥烷基的基團(tuán)任選取代；R26選自氫；含1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；含1-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈羥烷基；嗎啉代烷基；芐基；苯基乙基；和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被選自甲基、甲氧基和鹵素的基團(tuán)取代；和-C(RS)(RT)(X)，其中Rs和RT獨(dú)立地選自氫；含1-4個(gè)碳原子的烷基；苯基；取代的苯基，其取代基選自含1-4個(gè)碳原子的烷基、含1-4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素；X選自含1-4個(gè)碳原子的烷氧基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到4個(gè)碳原子；含1到4個(gè)碳原子的鹵代烷基；烷基酰氨基，其中的烷基含有1到4個(gè)碳原子；氨基；取代的氨基，其中的取代基是含有1到4個(gè)碳原子的烷基或羥烷基；疊氮基；含1到4個(gè)碳原子的烷硫基；和嗎啉代烷基，其中烷基含有1到4個(gè)碳原子；和R6選自氫；氟；氯；含1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；和含1到4個(gè)碳原子并至少含一個(gè)氟原子或氯原子的直鏈或支鏈氟代烷基或氯代烷基；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
優(yōu)選被下式VII定義的咪唑并吡啶胺IRM化合物 其中R17選自氫；-CH2Rw，其中Rw選自含1到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基；含2到10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基；含1到6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈羥烷基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到6個(gè)碳原子；和苯基乙基；以及-CH＝CRzRz，其中每個(gè)Rz獨(dú)立地選自含1到6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基；R27選自氫；含1到8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基；含1到6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈羥烷基；烷氧基烷基，其中的烷氧基含有1到4個(gè)碳原子，烷基含有1到6個(gè)碳原子；芐基；苯基乙基；和苯基；所說的芐基、苯基乙基或苯基取代基其苯環(huán)可任選地被選自甲基、甲氧基和鹵素的基團(tuán)取代；和嗎啉代烷基，其中的烷基含有1到4個(gè)碳原子；R67和R77獨(dú)立地選自氫；和含1到5個(gè)碳原子的烷基，前提是R67和R77含有的碳原子數(shù)目合在一起不超過6個(gè)，進(jìn)一步的前提是當(dāng)R77是氫時(shí)，R67不是氫并且R27不是氫或嗎啉代烷基，進(jìn)一步的前提是當(dāng)R67是氫時(shí)，R77和R27都不是氫；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
優(yōu)選被下式VIII定義的1，2-橋連咪唑并喹啉胺IRM化合物
其中Z選自下列基團(tuán)-(CH2)p-，其中p是1-4；-(CH2)a-C(RDRE)(CH2)b-，其中a和b是整數(shù)并且a+b是0-3；RD是氫或含1-4個(gè)碳原子的烷基；RE選自含1到4個(gè)碳原子的烷基，羥基，-ORF，其中RF是含1到4個(gè)碳原子的烷基，和-NRGR′G，其中RG和R′G獨(dú)立地是氫或含1到4個(gè)碳原子的烷基；和-(CH2)a-(Y)-(CH2)b-，其中a和b是整數(shù)并且a+b是0-3，Y是O，S，或-NRJ-，其中RJ是氫或含1到4個(gè)碳原子的烷基；和其中q是0或1和R8選自含1到4個(gè)碳原子的烷基、含1到4個(gè)碳原子的烷氧基和鹵素；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
合適的噻唑并-和噁唑并喹啉胺和吡啶胺化合物包括式IX化合物 其中R19選自氧、硫和硒；R29選自下列基團(tuán)-氫；-烷基；
-烷基-OH；-鹵代烷基；-烯基；-烷基-X-烷基；-烷基-X-烯基；-烯基-X-烷基；-烯基-X-烯基；-烷基-N(R59)2；-烷基-N3；-烷基-O-C(O)-N(R59)2；-雜環(huán)基；-烷基-X-雜環(huán)基；-烯基-X-雜環(huán)基；-芳基；-烷基-X-芳基；-烯基-X-芳基；-雜芳基；-烷基-X-雜芳基；和-烯基-X-雜芳基；R39和R49獨(dú)立地是-氫；-X-烷基；-鹵素；-鹵代烷基；-N(R59)2；或當(dāng)合在一起時(shí)，R39和R49形成一個(gè)稠合的芳環(huán)、雜芳環(huán)、環(huán)烷基或雜環(huán)；X選自-O-，-S-，-NR59-，-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-和鍵；和每個(gè)R59獨(dú)立地是氫或C1-8烷基；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
如下式X和式XI是合適的咪唑并二氮雜萘和四氫咪唑并二氮雜萘IRM化合物 其中A是＝N-CR＝CR-CR＝；＝CR-N＝CR-CR＝；＝CR-CR＝N-CR＝；或＝CR-CR＝CR-N＝；R110選自下列基團(tuán)-氫；-未取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自以下的取代基取代的C1-20烷基或C2-20烯基-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-O-C1-20烷基；-O-(C1-20烷基)0-1-芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-C1-20烷氧基羰基；-S(O)0-2-C1-20烷基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-N(R310)2；-N3；氧代；
-鹵素；-硝基；-羥基；和-SH；和-C1-20烷基-NR310-Q-X-R410或-C2-20烯基-NR310-Q-X-R410，其中Q是-CO-或-SO2-；X是鍵，-O-或-NR310-；和R410是芳基；雜芳基；雜環(huán)基；或者未取代的或被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的-C1-20烷基或-C2-20烯基-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-O-C1-20烷基；-O-(C1-20烷基)0-1-芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-C1-20烷氧基羰基；-S(O)0-2-C1-20烷基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-N(R310)2；-NR310-CO-O-C1-20烷基；-N3；氧代；-鹵素；-硝基；-羥基；和-SH；或R410是
其中Y是-N-或-CR-；R210選自下列基團(tuán)-氫；-C1-10烷基；-C2-10烯基；-芳基；-C1-10烷基-O-C1-10烷基；-C1-10烷基-O-C2-10烯基；和-被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的C1-10烷基或C2-10烯基-羥基；-鹵素；-N(R310)2；-CO-N(R310)2；-CO-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；每個(gè)R310獨(dú)立地選自氫和C1-10烷基；和每個(gè)R獨(dú)立地選自氫，C1-10烷基，C1-10烷氧基，鹵素和三氟甲基，和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
其中B是-NR-C(R)2-C(R)2-C(R)2-；-C(R)2-NR-C(R)2-C(R)2-；-C(R)2-C(R)2-NR-C(R)2-；或-C(R)2-C(R)2-C(R)2-NR-；R111選自下列基團(tuán)-氫；-未取代的或被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的C1-20烷基或C2-20烯基-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-O-C1-20烷基；-O-(C1-20烷基)0-1-芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-C1-20烷氧基羰基；-S(O)0-2-C1-20烷基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-N(R311)2；-N3；氧代；-鹵素；-硝基；-羥基；和
-SH；和-C1-20烷基-NR311-Q-X-R411或-C2-20烯基-NR311-Q-X-R411，其中Q是-CO-或-SO2-；X是鍵，-O-或-NR311-；和R411是芳基；雜芳基；雜環(huán)基；或者未取代的或被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的-C1-20烷基或-C2-20烯基-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-O-C1-20烷基；-O-(C1-20烷基)0-1-芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-O-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-C1-20烷氧基羰基；-S(O)0-2-C1-20烷基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(C1-20烷基)0-1-雜環(huán)基；-N(R311)2；-NR311-CO-O-C1-20烷基；-N3；氧代；-鹵素；-硝基；-羥基；和-SH；或R411是
其中Y是-N-或-CR-；R211選自下列基團(tuán)-氫；-C1-10烷基；-C2-10烯基；-芳基；-C1-10烷基-O-C1-10烷基；-C1-10烷基-O-C2-10烯基；和-被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的C1-10烷基或C2-10烯基-羥基；-鹵素；-N(R311)2；-CO-N(R311)2；-CO-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；每個(gè)R311獨(dú)立地選自氫和C1-10烷基；和每個(gè)R獨(dú)立地選自氫，C1-10烷基，C1-10烷氧基，鹵素和三氟甲基，和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
還優(yōu)選的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺和四氫-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺包括下式XII、XIII和XIV定義的化合物
其中R112是-烷基-NR312-CO-R412或-烯基-NR312-CO-R412，其中R412是芳基，雜芳基，烷基或烯基，其各自可以是未取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代-烷基；-烯基；-炔基；-(烷基)0-1-芳基；-(烷基)0-1-(取代的芳基)；-(烷基)0-1-雜芳基；-(烷基)0-1-(取代的雜芳基)；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-(取代的芳基)；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-(取代的雜芳基)；-CO-芳基；-CO-取代的芳基；-CO-雜芳基；-CO-取代的雜芳基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；
-S(O)0-2-(烷基)0-1-(取代的芳基)；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-(取代的雜芳基)；-P(O)(OR312)2；-NR312-CO-O-烷基；-N3；-鹵素；-硝基；-氰基；-鹵代烷基；-O-鹵代烷基；-CO-鹵代烷基；-OH；-SH；以及在烷基、烯基或雜環(huán)基的情況下為氧代；或R412是 其中R512是芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基；R212選自下面的基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代的芳基；-雜芳基；-取代的雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的雜環(huán)基；
-烷基-O-烷基；-烷基-O-烯基；和-被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R312)2；-CO-N(R312)2；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-取代的芳基；-雜芳基；-取代的雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；每個(gè)R312獨(dú)立地選自氫；C1-10烷基-雜芳基；C1-10烷基-(取代的雜芳基)；C1-10烷基-芳基；C1-10烷基-(取代的芳基)和C1-10烷基；v是0-4；和存在的每個(gè)R12獨(dú)立地選自C1-10烷基，C1-10烷氧基，鹵素和三氟甲基； 其中R113是-烷基-NR313-SO2-X-R413或-烯基-NR313-SO2-X-R413；
X是鍵或-NR513-；R413是芳基，雜芳基，雜環(huán)基，烷基或烯基，其各自可以是未取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-取代的芳基；-取代的雜芳基；-取代的雜環(huán)基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-取代的芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-取代的雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-O-(烷基)0-1-取代的雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代的芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代的雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代的雜環(huán)基；-(烷基)0-1-NR313R313；
-(烷基)0-1-NR313-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR313-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR313-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR313-CO-取代的芳基；-(烷基)0-1-NR313-CO-雜芳基；-(烷基)0-1-NR313-CO-取代的雜芳基；-N3；-鹵素；-鹵代烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-硝基；-氰基；-OH；-SH；以及在烷基、烯基或雜環(huán)基的情況下為氧代；R213選自下列基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代的芳基；-雜芳基；-取代的雜芳基；-烷基-O-烷基；-烷基-O-烯基；和-被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R313)2；
-CO-N(R313)2；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-(取代的芳基)；-雜芳基；-(取代的雜芳基)；-雜環(huán)基；-取代的雜環(huán)基；-CO-芳基；-CO-取代的芳基；-CO-雜芳基；和-CO-取代的雜芳基；每個(gè)R313獨(dú)立地選自氫和C1-10烷基；R513選自氫和C1-10烷基，或R413和R513合在一起形成3-7元雜環(huán)或取代的雜環(huán)；v是0-4并且存在的每個(gè)R13獨(dú)立地選自C1-10烷基，C1-10烷氧基，鹵素和三氟甲基； 其中R114是-烷基-NR314-CY-NR514-X-R414或-烯基-NR314-CY-NR514-X-R414其中Y是＝O或＝S；X是鍵，-CO-或-SO2-；
R414是芳基，雜芳基，雜環(huán)基，烷基或烯基，其各自可以是未取代的或被一個(gè)或多個(gè)選自下列的取代基取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的芳基；-取代的雜芳基；-取代的雜環(huán)基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-取代的芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-取代的雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-O-(烷基)0-1-取代的雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代的芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代的雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代的雜環(huán)基；-(烷基)0-1-NR314R314；-(烷基)0-1-NR314-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR314-CO-烷基；
-(烷基)0-1-NR314-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR314-CO-取代的芳基；-(烷基)0-1-NR314-CO-雜芳基；-(烷基)0-1-NR314-CO-取代的雜芳基；-N3；-鹵素；-鹵代烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷氧基；-硝基；-氰基；-OH；-SH；以及在烷基、烯基或雜環(huán)基的情況下為氧代；條件是當(dāng)X是鍵時(shí)，R414另外可以是氫；R214選自下列基團(tuán)-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代的芳基；-雜芳基；-取代的雜芳基；-烷基-O-烷基；-烷基-O-烯基；和-被選自下列的一個(gè)或多個(gè)取代基取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R314)2；-CO-N(R314)2；-CO-C1-10烷基；
-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-取代的芳基；-雜芳基；-取代的雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的雜環(huán)基；-CO-芳基；-CO-(取代的芳基)；-CO-雜芳基；和-CO-(取代的雜芳基)；每個(gè)R314獨(dú)立地選自氫和C1-10烷基；R514選自氫和C1-10烷基，或者R414和R514合在一起形成3-7元雜環(huán)或取代的雜環(huán)；v是0-4并且存在的每個(gè)R14獨(dú)立地選自C1-10烷基，C1-10烷氧基，鹵素和三氟甲基；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。
特別優(yōu)選的化合物包括1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺(咪喹莫特)，4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇(瑞喹莫德)，2-丙基[1，3]噻唑并[4，5-c]喹啉-4-胺，N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-1-基)丁基]-N′-環(huán)己基脲；2-甲基-1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-4-胺和1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-4-胺。
提供的藥物組合物形式有適合于全身使用的，或適合于針對(duì)被感染點(diǎn)的局部給藥形式。當(dāng)前優(yōu)選后一種形式。藥物組合物可制成用于如下目的的制劑用于以預(yù)定的速率、預(yù)定的持續(xù)作用時(shí)間將IRM化合物輸送到治療位點(diǎn)，其單獨(dú)或與其他治療劑或預(yù)防藥如抗生素、氟化物來源等結(jié)合給藥。通常用于將藥配制到合適的媒介物中的賦形劑可在需要時(shí)引入，前提是該賦形劑并不實(shí)質(zhì)上妨礙組合物的功能或穩(wěn)定性。藥物組合物的合適劑型的非限制性例子包括粘度增強(qiáng)的制劑如美國(guó)專利US 5,939,047和US 6,123,957中公開的；透粘膜貼片如US5,780,045和US 5,750,134以及PCT公開WO 00/19987等公開的；微膠囊如US 5,500,228中公開的；可生物降解的交聯(lián)水解的凝膠基質(zhì)如以PerioChipTM(得自Perio Products Ltd.，Jerusalem，Israel)使用的；牙齒沖洗劑和潔牙劑。賦形劑如調(diào)味品、著色劑、表面活性劑和粘合劑可按需使用。
“治療位點(diǎn)”是指藥物組合物將被送達(dá)患者的位點(diǎn)。治療位點(diǎn)典型地是接近損害處的局部位點(diǎn)，通常包括牙齦的表面，牙周袋，或藥物能被送達(dá)到的上頜骨或下頜骨組織的任何其它位置。組合物一般是局部輸送或通過將組合物放在齦下空間(牙周袋)進(jìn)行輸送。
這里所用的術(shù)語“治療有效量”是指IRM化合物足以預(yù)防、減輕或逆轉(zhuǎn)牙周疾病的量。針對(duì)牙周炎的IRM化合物的治療有效量因情況而異，這取決于特定化合物的活性、施用的特定組合物、輸送的持續(xù)時(shí)間、施用的頻率、治療位點(diǎn)以及同時(shí)施用的其它任何治療劑等因素。
一般的，本發(fā)明的方法中使用的有用的藥物組合物可含有基于藥物組合物總重量的大約0.001％到5.0％的IRM化合物。典型地，組合物含有大約0.01％到1％的IRM化合物。
IRM化合物在藥物組合物中可以是唯一的治療活性成份，也可以與其它治療劑如抗生素如青霉素、四環(huán)素；防腐劑如洗必太；皮質(zhì)類固醇如氫化可的松、倍他米松；非類固醇消炎藥如氟比洛芬、布洛芬、萘普生等合用。
給藥的頻率和持續(xù)期根據(jù)疾病預(yù)防或治療的需要而定。治療方案可包括每周給藥至少一次，典型地每周兩到三次，或者甚至在至少一周、通常是兩周、有時(shí)三到四周內(nèi)天天給藥。根據(jù)通常的護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者核查。可以每月、每?jī)稍?、通常是每三月進(jìn)行一次核查。根據(jù)需要重復(fù)施用。
典型的，IRM化合物可以幾類持續(xù)釋放制劑施加于治療位點(diǎn)，這些持續(xù)釋放制劑例如有凝膠，膠囊，貼片，可生物降解的基質(zhì)等等，用于在大約是1-24小時(shí)，通常大約是1-8小時(shí)，有時(shí)是大約1-3小時(shí)內(nèi)將IRM化合物輸送到治療位點(diǎn)。也可預(yù)見到在某些情況下，可通過直接給藥來提供突增的IRM化合物，如在臨床醫(yī)生的指導(dǎo)下齦下放置、使用潔牙劑或漱口劑。
通過具體描述本發(fā)明的一些實(shí)施方案，提供了如下實(shí)施例，以進(jìn)一步闡明本發(fā)明。但它們并不意味著限定本發(fā)明。
實(shí)施例1用IRM處理小鼠小鼠被已知導(dǎo)致牙周炎的細(xì)菌感染，對(duì)這些小鼠進(jìn)行研究以確定IRM化合物在該疾病方面的潛在效用。
細(xì)菌培養(yǎng)物的制備和保存使用從成人性牙周炎和非胰島素依賴型糖尿病患者的齦下袋得到的牙齦卟啉菌分離物。該分離物在American Type Culture Collection，10801 University Blvd.，Manassas，VA 20110-2209 USA保藏，保藏號(hào)53977(菌株A7A1-28)。在5％CO2、10％H2和85％N2的氣氛下，在37℃，在PRAS(預(yù)還原無氧滅菌的)布魯氏瓊脂板(Anaerobe Systems，Morgan Hill，CA)上，在厭氧罐(Becton Dickinson Microbiology Systems，Cockeysville，MD)中繁殖生物體。肉湯培養(yǎng)物在BHTS培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，BHTS培養(yǎng)基為Tripticase大豆和Brain Heart Infusion肉湯的50％混合物，其中加有5％酵母提取物(全部得自Becton Dickinson MicrobiologySystems)、10μg/升氯高鐵血紅素、1μg/升metadione和5％馬血清(SigmaChemical，St.Louis.MO)。通過在板上每周轉(zhuǎn)移來維持生物種。通過在15％的甘油/BHTS中重懸浮對(duì)數(shù)期培養(yǎng)物并在-70℃下保存數(shù)月，制得冷凍的原料。
小鼠的牙齦卟啉菌口部感染90只普通的BALB/c無特定病原體的小鼠(Charles River Labs，Wilmington，MA)被分成三組，每組大約30只小鼠。如表1所示，組II和III如下所述被牙齦卟啉菌感染，而組I不被感染。如下所述，向組I和II給予IRM化合物。
表1.實(shí)驗(yàn)方案
所有的小鼠保持為一個(gè)動(dòng)物群體，在其中它們被籠子關(guān)著并與其他動(dòng)物隔開。所有的小鼠保持12-小時(shí)光照/黑暗周期并自由汲取蒸餾水。實(shí)驗(yàn)中小鼠的性別和年齡相匹配(在各種實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，是12-18周齡)。
實(shí)驗(yàn)前在十天內(nèi)自由給予組I-III小鼠磺胺甲噁唑/甲氧芐啶，10毫升每品脫于去離子水中，緊接著四天不給抗生素。然后使組II-III小鼠被感染，方式是通過強(qiáng)飼109菌落形成單位的活牙齦卟啉菌，其位于100微升含2％羧基甲基纖維素的磷酸鹽緩沖鹽溶液(PBS)中，以2-4天的間隔給予三次?？蓞⒄誎lausen等在＂Two complementarymethods of assessing periodontal bone level in rats＂，Scandinavian Journalof Dental Research，97，494-9(1989)中所描述的方式。
如圖2所示，在被感染前兩周，任何試驗(yàn)動(dòng)物都沒有牙齦卟啉菌跡象，這一狀態(tài)一直保持到被感染時(shí)。感染后一周收集的樣品中牙齦卟啉菌的比例達(dá)到大約2％。參見下文。在實(shí)驗(yàn)的剩余時(shí)間內(nèi)該比例保持在2％-5％。在實(shí)驗(yàn)中的任一時(shí)間點(diǎn)上，在經(jīng)IRM處理或未處理動(dòng)物之間不存在顯著的牙齦卟啉菌水平差異。
從被感染小鼠的菌斑中分離細(xì)菌使用消過毒的細(xì)紙尖(Johnson and Johnson Dental Products Co.EastWindsor，NJ)從全部三組小鼠的臼齒上獲得齦下菌斑樣品。這些紙尖被放入1毫升水中，并作測(cè)試全部的細(xì)菌，用類似于Shelburne等在＂Quantitation of Bacteroides forsythus in subgingival plaquecomparisonof immunoassay and quantitative polymerase chain reaction＂，J.Microbial.Methods，3997-107(2000)中描述的用于福賽類桿菌的定量PCR法測(cè)定牙齦卟啉菌的水平。
用瑞喹莫德治療用口腔強(qiáng)飼法每周兩次共七周對(duì)組I和II小鼠給予1毫克/千克或0.1毫克/千克的瑞喹莫德(4-氨基-2-乙氧甲基-(α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇)于100微升PBS中的溶液。在治療開始后43天殺死動(dòng)物。
牙槽骨損失的測(cè)量通過已開發(fā)用于研究小鼠骨損失的形態(tài)測(cè)量學(xué)方法評(píng)估上頜骨臼齒周圍的骨損失。Baker P.J.等＂Oral infection with Porphyromonasgingivalis and induced alveolar bone loss in immunocompetent and severecombined immunodeficient mice，”Arch.Oral Biol.，39(12)1035-40(1994年12月)。在15p.s.i(1.05千克/平方厘米)的壓力下，在沸水中處理5分鐘后，除去顎中的肉，在3％的過氧化氫中浸泡過夜，空氣晾干，用1％亞甲基藍(lán)著色。骨水平，也就是從牙骨質(zhì)-牙釉質(zhì)匯合處(CEJ)到在上頜骨臼齒上牙槽骨頂部的距離，在解剖顯微鏡(x30)下測(cè)量。對(duì)每只小鼠，進(jìn)行14個(gè)骨水平測(cè)量。所有對(duì)骨水平的測(cè)量隨機(jī)進(jìn)行三次。通過攝影機(jī)獲得校準(zhǔn)線從CEJ到牙槽骨頂部的圖像，利用計(jì)算機(jī)分析得到每個(gè)位點(diǎn)以微米表示的水平的骨水平的值。
結(jié)果用瑞喹莫德治療過的動(dòng)物其骨損失明顯少于未接受治療的動(dòng)物(圖3)，以適合這個(gè)模型的水平存在顯著性差別(p＜0.01)。而接受1毫克/千克瑞喹莫德劑量治療的動(dòng)物與那些接受0.1毫克/千克瑞喹莫德劑量治療的動(dòng)物相比，沒有差別。
有趣的是，與骨損失或者治療(或沒被治療)差異相關(guān)的目標(biāo)動(dòng)物菌斑牙齦卟啉菌水平?jīng)]有降低。這顯示出骨損失的降低是由于某些宿主反應(yīng)的調(diào)節(jié)，而不是細(xì)菌的消滅，盡管它們對(duì)發(fā)病無疑是必需的。
實(shí)施例2用IRM凝膠組合物治療狗的自然發(fā)生牙周疾病一只患自然發(fā)生牙周疾病的狗通過包括牙齦指數(shù)(觀測(cè)評(píng)分0-3分)，出血指數(shù)(觀測(cè)評(píng)分0-3分)、探診深度(使用North Carolina探針測(cè)量至最近的毫米)等臨床指標(biāo)被確定。除了剝刮和牙根整平的標(biāo)準(zhǔn)處理除外，該動(dòng)物還用含有瑞喹莫德的凝膠組合物治療，該凝膠組合物依據(jù)下面的描述制備得到。訓(xùn)練有素的檢查員根據(jù)被侵襲牙齒周圍的上述各指數(shù)的測(cè)量結(jié)果確定療效。
含IRM瑞喹莫德的IRM凝膠組合物的制備往1000毫升玻璃燒杯中加入丙二醇(700克)和IRM瑞喹莫德(4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇，7.0g)。將得到的混合物在攪拌下加熱(大約56℃)直到所有的瑞喹莫德都被溶解。所得的溶液被加到ROSS LDM-4攪拌器的混合碗中。往混合碗中加入三醋精(11,963.0克)，并將所得的混合物在36轉(zhuǎn)數(shù)/分的轉(zhuǎn)速下混合10分鐘。膠狀二氧化硅(1,330.0克，AEROSIL200，來自Degussa，F(xiàn)rankfurt，Germany)被分成五份加入。每加入一份，將所得的混合物在大氣壓下在36轉(zhuǎn)數(shù)/分的轉(zhuǎn)速下混合1-2分鐘，然后在真空下(大約18 in Hg；4.0×104pa)在36轉(zhuǎn)數(shù)/分的轉(zhuǎn)速下混合大約9分鐘。刮擦混合碗的側(cè)邊與混合葉片。最后在真空下(大約17 in Hg；4.3×104Pa)在36轉(zhuǎn)數(shù)/分的轉(zhuǎn)速下混合大約10分鐘。這樣所得的凝膠含有0.05％的瑞喹莫德、5.0％的丙二醇、9.5％的膠狀二氧化硅和85.45％的三醋精。
用IRM凝膠組合物治療以大約1毫克/千克的劑量給動(dòng)物喂甲苯噻嗪鎮(zhèn)靜劑，并清除齦上的和齦下的斑。被牙周炎感染的牙齒被剝刮和牙根整平以除去齦上的(牙釉質(zhì))和齦下的(牙根)牙齒表面的斑和結(jié)石，使用的工具是超聲波Cavitron(Dentsply，York，PA)和刮匙。使用該Cavitron除去純粹的碎片，并用刮匙使牙根表面變得光滑。牙根整平后獲得的干凈的、光滑的牙根表面使得上皮組織和結(jié)締組織在治愈過程中附著于牙根表面。
在剝刮操作過程中，沒有刻意嘗試著除去沿著結(jié)石的牙齒本體。實(shí)行牙根整平除去殘留的嵌固結(jié)石和牙齒牙根的部分牙骨質(zhì)，以產(chǎn)生一個(gè)光滑的、堅(jiān)固的干凈的表面。剝刮和牙根整平的主要目的是通過從牙齒表面完全移去引起牙齦發(fā)炎的物質(zhì)，從而恢復(fù)牙齦的健康；所述物質(zhì)也就是，菌斑，牙石和改變了的牙骨質(zhì)。本實(shí)施例中剝刮和牙根整平不是作為兩個(gè)單獨(dú)的操作來完成。剝刮和牙根整平的區(qū)別僅僅在于程度的不同。牙齒表面的性質(zhì)決定了牙根表面進(jìn)行剝刮或牙根整平的程度。
依據(jù)牙周炎損害的尺寸，使用按照上述步驟制備的大約10-50微升的瑞喹莫德凝膠組合物施加于被牙周炎感染的位點(diǎn)。使用一根鈍的27ga.針和填滿該組合物的注射器，將該組合物放在鄰近每個(gè)位點(diǎn)的牙周袋中。在這個(gè)實(shí)施例中凝膠是一次施用。
在治療后，對(duì)動(dòng)物施用大約0.1毫克/千克的育亨賓來逆轉(zhuǎn)鎮(zhèn)靜，并將動(dòng)物送回籠子。
臨床測(cè)量每隔一周對(duì)牙周袋檢查治療時(shí)所測(cè)量的各個(gè)指數(shù)。使用每隔1毫米作記號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)North Carolina牙周探針測(cè)量附著喪失。該探針直徑大約1毫米，將該探針插入牙周袋中直到底部。記錄牙周袋深度(PD)，探針回撤。這時(shí)記錄探針的深度。同時(shí)記錄牙齦指數(shù)(GI)——牙齦組織發(fā)紅的量度(0＝不發(fā)紅，到3＝非常紅，擴(kuò)張)，一并記錄出血指數(shù)(BI)——牙周袋在探診時(shí)出血的傾向性量度(0＝不出血，到3＝大量出血)。這都是牙科實(shí)踐中評(píng)估人類牙周疾病時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量指標(biāo)。
結(jié)果參照?qǐng)D4a和4b，機(jī)械清洗牙齒后，PD，BI和GI普遍改善(將基線圖(圖4a)的左手板塊和治療后兩周的圖進(jìn)行比較(圖4b))。相對(duì)于未治療的位點(diǎn)，經(jīng)過治療的位點(diǎn)其BI和GI改善，并具有統(tǒng)計(jì)意義(p＜0.01)。(將治療2周后圖的左板塊和右板塊進(jìn)行比較，圖4b)。這歸功于IRM治療。
未治療與經(jīng)過治療的位點(diǎn)其PD值沒有明顯的差別(對(duì)比治療2周后圖的左右板塊，圖4b)。發(fā)明人認(rèn)為這是由于治療后兩周的時(shí)間不足以重建牙齒附著細(xì)胞機(jī)構(gòu)。
本研究不是最終的研究，因此沒有測(cè)定骨損失。
實(shí)施例3用含有IRM的透粘膜貼片治療患有慢性成人牙周疾病的人類患者對(duì)于感染了慢性成人牙周疾病的患者，其可通過典型的包括出血指數(shù)BI、牙齦指數(shù)GI、探診深度等臨床指標(biāo)來確定。除剝刮和牙根整平的標(biāo)準(zhǔn)治療除外，還用含有IRM的透粘膜貼片(依下面實(shí)施例4中描述的步驟制得)治療該患者。
可清除洗該患者牙齒齦上的菌斑。被牙周炎感染的牙齒可被剝刮和牙根整平以移去齦上的和齦下的牙齒表面的斑和牙石，可用已知的器械如超聲波Cavitron和刮匙進(jìn)行操作。Cavitron被用來除去純粹的碎片，而刮匙被用來使牙根表面光滑。
取決于牙周炎損害的大小，含有大約0.05-1.0％IRM每貼片的透粘膜貼片依例如下面的實(shí)施例4所描述的步驟制備得到，將其粘附于最接近該患者被牙周炎感染的位點(diǎn)處的牙齦。讓透粘膜貼片粘附于牙齦大約1-24小時(shí)。在一個(gè)典型的情形里該片保持粘附大約1-3小時(shí)。這些貼片可一周使用兩次共計(jì)三周。在完成治療后一個(gè)月時(shí)對(duì)該患者復(fù)查，以后每三個(gè)月復(fù)查一次。若必需可重復(fù)治療。
實(shí)施例4制備含有IRM 4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇的透粘膜貼片適合于牙齦使用的、含有IRM化合物4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇(瑞喹莫德)的透粘膜貼片被制備得到。
丙烯酸異辛酯(20.03克)，丙烯酸(19.98克)，甲氧基聚乙二醇550單甲基丙烯酸酯(19.07克)，聚乙二醇400二丙烯酸酯(0.72克)，聚丙烯酸(含17.5重量％聚丙烯酸的5.73克水溶液)，聚氧乙烯10油基醚(21.78克Brij97)，丙二醇(10.00)，水(2.89克)，瑞喹莫德(0.10g)和2-羥基-1-(4-(2-羥基乙氧基)苯基)-2-甲基-1-丙酮(0.55克Irgacure2959)在一個(gè)玻璃廣口瓶中組合，然后在一個(gè)平板混合器上混合直到獲得清澈的液體組合物。該組合物含有0.10重量％的瑞喹莫德。
將該液體刮刀涂布在三層襯背的非紡織的聚丙烯面上，濕厚達(dá)25mil(635μM)，并且暴露的表面用一透明聚酯(1.5mil，38μM)硅氧烷涂布的防粘襯墊覆蓋。涂布的組合物隨后在紫外線A下照射8分鐘，以便該組合物暴露在總能量達(dá)到2677mJ/平方厘米的照射下。移去防粘襯墊并且將固化組合物暴露面層壓到硅氧烷涂布的聚酯防粘襯墊(5mil，127μM)上。從該層狀物中切片(2.05平方厘米)。
通過前面詳細(xì)的描述和舉例說明，很顯然可在不偏離本發(fā)明的精神或本發(fā)明的范圍的情況下對(duì)本發(fā)明的方法改進(jìn)和變化。因此，不偏離本發(fā)明精神的所有改進(jìn)和變化仍然落入權(quán)利要求書及其等同物的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物在制備用來治療或預(yù)防牙周疾病的藥物制劑中的用途，其中的制劑被直接施加于患牙周病癥的患者的牙周組織上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物選自包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物選自1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺；4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇；2-丙基[1，3]噻唑并[4，5-c]喹啉-4-胺；N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-1-基)丁基]-N′-環(huán)己基脲；2-甲基-1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-4-胺和1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-4-胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其中的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物是4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的藥物制劑是可生物降解的基質(zhì)、凝膠、液體、微膠囊、漱口液、膏劑、半固體、透粘膜貼片的形式或這些形式的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的藥物制劑是凝膠制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的藥物制劑是透粘膜貼片制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中的藥物制劑是通過將凝膠制劑施加于牙周袋上來給藥的。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中的藥物制劑是通過將凝膠制劑施加于患者的牙齦上來給藥的。
10.根據(jù)權(quán)利要求7的用途，其中的藥物制劑是通過將透粘膜貼片制劑施加于患者的牙齦上來給藥的。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中的透粘膜貼片含有基于貼片總重量0.05-0.1％的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中的透粘膜貼片施加于患者的牙齦大約1-3小時(shí)。
13.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中多于一片透粘膜貼片施加于患者的牙齦上。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的牙周組織是牙齦。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的牙周疾病是牙周炎。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中的牙周炎是慢性成人性牙周炎。
17.根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中的牙周炎是早期發(fā)作性牙周炎。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中的藥物制劑和選自抗生素、防腐劑、皮質(zhì)類固醇以及非類固醇消炎藥的治療劑一起給藥。
19.免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物在制備用來治療牙周疾病的藥物制劑中的用途，其中的制劑被直接施加于患牙周病癥的患者的牙周組織上，并且其中的制劑調(diào)節(jié)患者的免疫反應(yīng)。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的制劑調(diào)節(jié)患者的TH2免疫反應(yīng)。
21.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的制劑調(diào)節(jié)患者的TH1免疫反應(yīng)。
22.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的藥物制劑包括免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物，這些免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物選自包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2-橋連咪唑并喹啉胺的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物選自1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺；4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇；2-丙基-[1，3]噻唑并[4，5-c]喹啉-4-胺；N-[4-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-1-基)丁基]-N′-環(huán)己基脲；2-甲基-1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-4-胺和1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c][1，5]二氮雜萘-4-胺。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑化合物是4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇。
25.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的牙周組織是患者的牙周袋。
26.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的牙周組織是患者的牙齦。
27.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的牙周疾病是慢性成人性牙周炎。
28.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的藥物制劑是凝膠的形式。
29.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中的藥物制劑是透粘膜貼片的形式。
全文摘要
本發(fā)明提供治療和預(yù)防牙周疾病的方法。在優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明提供藥物組合物用于對(duì)牙周組織作局部治療，該藥物組合物包括免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(IRM)，所述免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑選自包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7－稠合的環(huán)烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并二氮雜萘胺、噁唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺和1，2－橋連咪唑并喹啉胺的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。
文檔編號(hào)C07D513/00GK1523987SQ02811871
公開日2004年8月25日 申請(qǐng)日期2002年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月15日
發(fā)明者蘇米塔·B·米特拉, 查爾斯·E·塞爾伯恩, 馬克·A·托邁, E 塞爾伯恩, A 托邁, 蘇米塔 B 米特拉 申請(qǐng)人:3M創(chuàng)新有限公司