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酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣蓼總黃酮的工藝的制作方法

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酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣蓼總黃酮的工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中草藥辣寥總黃酮的提取技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種酶解-超聲偶聯(lián)法 提取辣寥總黃酮的工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 辣寥(PolygonumhydropiperLinn.)為寥科寥屬一年生草本植物。其味辛,溫, 歸肺、肝、大腸經(jīng),具有祛風(fēng)利濕,散瘀止痛,解毒消腫等功效。獸醫(yī)臨床上將其用于治療仔 豬白痢、牛子宮出血、牛腹瀉、豬腸炎泄瀉、雞白痢雞蛔蟲(chóng)病,豬蛔蟲(chóng)病、雞絳蟲(chóng)和狗絳蟲(chóng)?。?除此之外,辣寥水煎液對(duì)病毒性角膜炎有很好的療效。
[0003] 辣寥在我國(guó)分布廣泛,資源豐富,在醫(yī)藥、食品等方面有著良好的開(kāi)發(fā)前景。辣寥 的主要化學(xué)成分有黃酮、鞣質(zhì)、揮發(fā)油、糖類(lèi)等。現(xiàn)代藥理研究表明,辣寥具有抗氧化、抗炎、 抗腫瘤等多種生物活性,其中黃酮類(lèi)化合物是抗氧化作用的基礎(chǔ)物質(zhì),也是控制藥材質(zhì)量 的考察指標(biāo)成分。
[0004] 目前,傳統(tǒng)方式提取辣寥總黃酮,其提取條件劇烈以致不利于保存其提取物的生 物活性,并且需消耗大量乙醇,生產(chǎn)成本較高,有效成分損失大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種提取條件溫和、速度快、效率高、成本低的酶 解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總黃酮的工藝。
[0006] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總 黃酮的工藝,包括以下步驟:
[0007] (1)將辣寥藥材干燥、粉碎,分別加入重量為辣寥藥材重量0. 2~0. 4%的果膠酶 和纖維素酶,混合均勻,加入pH值為4. 8的HAc-NaAc緩沖液,進(jìn)行超聲-酶解;
[0008] (2)用Na2C03溶液調(diào)節(jié)超聲-酶解后的溶液pH值為9. 0,80~90 °C水浴10~ 20min使酶失活;
[0009] (3)加入乙醇浸提24h,過(guò)濾收集浸提液,濾渣再加入乙醇溶液重復(fù)浸提一次,過(guò) 濾,合并兩次浸提液,蒸餾濃縮即得。
[0010] 超聲-酶解溫度為30~60°C,時(shí)間為1. 0~2.Oh。
[0011] HAc-NaAc緩沖液與辣寥藥材的體積質(zhì)量比為5~50mL:lg。
[0012] 步驟(3)中加入乙醇后提取液中乙醇的最終體積濃度為60~80%。
[0013] 針對(duì)目前辣寥總黃酮提取存在的問(wèn)題,發(fā)明人結(jié)合酶解-超聲提取技術(shù),建立了 一種酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總黃酮的工藝,該法利用復(fù)合酶(果膠酶和纖維素酶)使 植物細(xì)胞壁輸送、破裂,配合超聲加速中藥有效成分的釋放;同時(shí)調(diào)節(jié)其提取溫度、pH值使 得辣寥有效成分快速浸出。與傳統(tǒng)方法相比,本發(fā)明工藝提取條件相對(duì)溫和,有利于保持其 生物活性,能顯著提高辣寥總黃酮的提取效率,而且速度快,能耗低,節(jié)省溶劑,成本較低; 與乙醇浸提法、水煎醇沉法、超聲提取法、超聲+果膠酶解法、超聲+纖維素酶解法相比,本 發(fā)明所得總黃酮含量也有所提高。因此,本發(fā)明是一種理想的辣寥總黃酮提取工藝。具體 實(shí)施方式
[0014] 實(shí)施例1辣寥總黃酮的提取工藝
[0015] 方法1.酶解-超聲偶聯(lián)法
[0016] (1)將辣寥藥材干燥、粉碎,稱(chēng)取辣寥粉10. 00g放入200mL燒瓶中,分別加入 0. 025g果膠酶和0. 025g纖維素酶,混合均勻,加入50mLpH值為4.8的HAc-NaAc緩沖液, 進(jìn)行超聲-酶解(超聲溫度為45°C,時(shí)間為1.5h);
[0017] (2)用Na2C03溶液調(diào)節(jié)超聲-酶解后的溶液pH值為9. 0,85°C水浴15min使酶失 活;
[0018] (3)加入純乙醇使提取液中乙醇最終濃度為60%,浸提24h,過(guò)濾收集浸提液,濾 渣再用60 %乙醇溶液100mL重復(fù)浸提一次,過(guò)濾,合并兩次浸提液,蒸餾濃縮至20mL。
[0019] 方法2.乙醇浸提法
[0020] 稱(chēng)取辣寥粉10. 00g放入200mL燒瓶中,加入100mL60%乙醇溶液浸提24h,過(guò)濾, 過(guò)濾并收集浸提液,濾渣再加入60 %乙醇溶液100mL重復(fù)浸提一次,過(guò)濾,合并兩次的浸提 液,蒸餾濃縮至20mL。
[0021] 方法3?水煎醇沉法
[0022] 稱(chēng)取辣寥粉10. 00g放入200mL燒瓶中,加入100mL蒸餾水100°C下煎煮1. 5h,過(guò) 濾并收集浸提液,濾渣再加入60 %乙醇溶液100mL浸提24h,過(guò)濾,合并兩次的浸提液,蒸餾 濃縮至20mL。
[0023] 方法4?超聲提取法
[0024] 稱(chēng)取辣寥粉10. 00g,放入200mL燒瓶中,加入50mLpH4. 8的HAc-NaAc緩沖液, 45°C下超聲1. 5h;用似20)3溶液調(diào)pH至9. 0,85°C水浴15min;加入純乙醇直至乙醇濃度為 60 %,浸提24h,過(guò)濾并收集浸提液,濾渣再加入60 %乙醇溶液100mL重復(fù)浸提一次,過(guò)濾, 合并兩次的浸提液,蒸餾濃縮至20mL。
[0025] 方法5?超聲+果膠酶解法
[0026] 稱(chēng)取辣寥粉10. 00g,放入200mL燒瓶中,加入0? 05g果膠酶與50mLpH4.8的 HAc-NaAc緩沖液,45°C下超聲1. 5h;用Na2C03溶液調(diào)pH至9. 0,85°C水浴15min;加入純乙 醇直至乙醇濃度為60 %,浸提24h,過(guò)濾并收集浸提液,濾渣再加入60 %乙醇溶液100mL重 復(fù)浸提一次,過(guò)濾,合并兩次的浸提液,蒸餾濃縮至20mL。
[0027] 方法6.超聲+纖維素酶解法
[0028] 稱(chēng)取辣寥粉10. 00g,放入200mL燒瓶中,加入0? 05g纖維素酶與50mLpH4.8的 HAc-NaAc緩沖液,45°C下超聲1. 5h;用Na2C03溶液調(diào)pH至9. 0,85°C水浴15min;加入純乙 醇直至乙醇濃度為60 %,浸提24h,過(guò)濾并收集浸提液,濾渣再加入60 %乙醇溶液100mL重 復(fù)浸提一次,過(guò)濾,合并兩次的浸提液,蒸餾濃縮至20mL。
[0029] 實(shí)施例2辣寥總黃酮含量測(cè)定
[0030]將顯色完全后的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品置于1cm比色皿中,在波長(zhǎng)400~700nm區(qū)間內(nèi)用紫 外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描,確定最大吸收波長(zhǎng)為510nm。在此波長(zhǎng)下對(duì)系列濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 進(jìn)行測(cè)定,記錄吸光度,以總黃酮濃度為縱坐標(biāo),吸光度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。濃度-吸 光度直線回歸方程:Y= 0. 0011X+0. 0125R2 = 0. 9990。測(cè)定上述各提取工藝中的辣寥總黃 酮含量,結(jié)果見(jiàn)表1。
[0031] 表1不同提取方法提取所得辣寥總黃酮含量
[0032]
[0033] 實(shí)施例3辣寥總黃酮的母體結(jié)構(gòu)的檢識(shí)
[0034] 對(duì)上述各提取液中總黃酮的母體結(jié)構(gòu)進(jìn)行檢識(shí),其結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明,由 于提取方法不同,提取液中所得到的黃酮類(lèi)物質(zhì)也不盡相同,浸提法和水煎醇沉法所得到 的黃酮類(lèi)物質(zhì)的種類(lèi)比超聲酶解法所得的黃酮類(lèi)物質(zhì)少。
[0035] 表2不同提取方法所得總黃酮母體結(jié)構(gòu)的檢識(shí)結(jié)果
[0036] (+ :有此結(jié)構(gòu);_ :無(wú)此結(jié)構(gòu))
[0037]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總黃酮的工藝,其特征在于包括以下步驟: (1) 將辣寥藥材干燥、粉碎,分別加入重量為辣寥藥材重量0. 2~0. 4%的果膠酶和纖 維素酶,混合均勻,加入pH值為4. 8的HAc-NaAc緩沖液,進(jìn)行超聲-酶解; (2) 用Na2CO3溶液調(diào)節(jié)超聲-酶解后的溶液pH值為9. 0,80~90°C水浴10~20min 使酶失活;(3)加入乙醇浸提24h,過(guò)濾收集浸提液,濾渣再加入乙醇溶液重復(fù)浸提一次,過(guò) 濾,合并兩次浸提液,蒸餾濃縮即得。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總黃酮的工藝,其特征在于:所 述超聲-酶解溫度為30~60°C,時(shí)間為I. 0~2. Oh。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總黃酮的工藝,其特征在于:所 述HAc-NaAc緩沖液與辣寥藥材的體積質(zhì)量比為5~50mL : lg。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣寥總黃酮的工藝,其特征在于步驟 (3)中加入乙醇后提取液中乙醇的最終體積濃度為60~80%。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種酶解-超聲偶聯(lián)法提取辣蓼總黃酮的工藝,該法利用復(fù)合酶使植物細(xì)胞壁輸送、破裂,配合超聲加速中藥有效成分的釋放;同時(shí)調(diào)節(jié)其提取溫度、pH值使得辣蓼有效成分快速浸出。與傳統(tǒng)方法相比,本發(fā)明工藝提取條件相對(duì)溫和,有利于保持其生物活性,能顯著提高辣蓼總黃酮的提取效率,而且速度快,能耗低,節(jié)省溶劑,成本較低;與乙醇浸提法、水煎醇沉法、超聲提取法、超聲+果膠酶解法、超聲+纖維素酶解法相比,本發(fā)明所得總黃酮含量也有所提高。因此,本發(fā)明是一種理想的辣蓼總黃酮提取工藝。
【IPC分類(lèi)】A61K36/704
【公開(kāi)號(hào)】CN105106327
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510574506
【發(fā)明人】胡庭俊, 陶俊宇, 譚紅連, 李璐, 韋英益, 陳海蘭
【申請(qǐng)人】廣西大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年12月2日
【申請(qǐng)日】2015年9月10日
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