用于血腦屏障運輸?shù)亩嚯牡闹谱鞣椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是關(guān)于試劑至腦的遞送。更具體而言，本發(fā)明是關(guān)于可穿過血腦屏障（BBB) 的多肽及其在穿過BBB運輸試劑中、通常在治療和/或診斷神經(jīng)疾病中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] BBB通過限制諸如細菌及大分子或親水性分子等微觀物體進入大腦組織中來起極 有效保護腦的作用。此在研發(fā)靶向中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物時是所需考慮的主要問題。為到達 大腦組織中的靶細胞，經(jīng)外周施用的藥物必須能夠藉助自身或通過使用載體作為運輸系統(tǒng) 穿過BBB。BBB阻礙許多潛在的重要診斷及治療劑遞送至腦，且因此呈現(xiàn)診斷和/或治療腦 病癥的主要障礙。
[0003] 已采用眾多種不同策略來幫助克服BBB所施加的限制，且這些策略大致分為三 類：1)侵入性程序（例如藉助手術(shù)直接心室內(nèi)施用藥物）；2)藥理學方式（例如通過提高 多肽的脂溶性）；及3)基于載體的方式（即通過利用或改變穿過BBB運輸藥物的已知載體 機制來提供高特異性且有效的藥物遞送）。
[0004] 2007年，Demeule及同事設(shè)計出一系列能夠穿過BBB的19聚體多肽[1]。顯示這 些多肽中的最佳者（稱為"血管肽（angiop印)-2"）經(jīng)由涉及LDL受體相關(guān)蛋白（LRP1)的 結(jié)合機制[2]在腦細胞中展現(xiàn)轉(zhuǎn)胞吞作用（分子穿過細胞內(nèi)部進行運輸），該LDL受體相關(guān) 蛋白是低密度脂蛋白受體（"LDLR"）家族的成員。
[0005] LDLR主要負責經(jīng)由胞吞作用將攜載膽固醇的粒子攝取至細胞中[3]。其一級配體 是5個能夠運輸包含膽固醇在內(nèi)的不同脂肪分子的主要脂蛋白群中之一者的低密度脂蛋 白（LDL)。在人類中約65% -70%的血漿膽固醇是以LDL形式進行循環(huán)。每一 LDL粒子皆 含有單一載脂蛋白B100分子（ap〇B-100)，這些分子負責脂肪酸的循環(huán)，從而保持其在水性 血流環(huán)境中可溶。LDLR亦緊密結(jié)合至極低密度脂蛋白的含有多拷貝載脂蛋白E(apoE)的 0 _迀移形式（b-VLDL)。
[0006] LDLR是具有約840個氨基酸的模塊化跨膜蛋白，其代表一整類通常表示為LDLR家 族的受體。每一 LDLR家族成員皆含有一或若干個以相似模式排列的以下結(jié)構(gòu)域:A型LDL 受體（亦表示為"LA"、"CR"或"配體結(jié)合重復序列"）；表皮生長因子樣（EGF樣）及YWTD(或 0 _螺旋槳）模塊（圖1，[4])。LDLR的胞外結(jié)構(gòu)域（圖2, [4])在功能上分為2個區(qū)域： 由位于N末端的7個鄰接LDL-A模塊（LA1-LA7)組成的配體結(jié)合區(qū)域及與EGF前體同源的 隨后區(qū)域。模塊LA3至LA7為結(jié)合LDL所必需[5]。包含2個EGF樣模塊、一個0 -螺旋槳 結(jié)構(gòu)域及第三EGF樣模塊的EGF區(qū)域負責LDL粒子在較低胞內(nèi)pH下的釋放及受體至細胞 表面的再循環(huán)二者。
[0007] 迄今為止，盡管已知此知識，但在尋找穿過BBB的運輸劑時選擇仍有限。業(yè)內(nèi)仍需 要穿過BBB遞送治療及診斷劑的其他經(jīng)改良試劑及方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明提供穿過BBB的多肽。因此，這些多肽是BBB運輸劑。這些多肽在單獨或 與治療劑或診斷劑偶合時通常能夠以治療或診斷上有用或生理上顯著的有效量穿過BBB。
[0009] 盡管本發(fā)明不受限于理論，但本發(fā)明多肽已經(jīng)設(shè)計以結(jié)合LDLR中使本發(fā)明多肽 通過胞吞作用納入腦中的LA結(jié)構(gòu)域。鑒于能夠穿過BBB，故本發(fā)明多肽尤其可用作穿過BBB 運輸其他試劑并將試劑（通常為藥物或診斷劑）遞送至腦的載體。
[0010] 本發(fā)明提供穿過血腦屏障（BBB)的多肽，其中該多肽為以下各項、包括其、基本上 由其組成或由其組成：
[0011] (a)長度小于59個氨基酸的調(diào)節(jié)子多肽，其包括SEQ ID N0:2的7個或更多個連 續(xù)氨基酸，且包括K48及R49(相對于SEQ ID N0:1編號），任選地包括：（i)T43、V44、I45、 H46、G47 和 / 或（ii)E50、V51、T52、L53 及 H54(相對于 SEQ ID N0:1 編號）；任選地包括 P43及L55(相對于SEQ ID N0:1編號）；且任選地包括⑴？37、]\〇8、八39、1?40、￡41和/或
[11] H56、P57、D58 及 H59(相對于 SEQ ID N0:1 編號）；
[0012] (b)長度小于100個氨基酸的RAP多肽，其包括來自SEQ ID NO:4的至少20個連 續(xù)氨基酸；
[0013] (C)長度小于100個氨基酸的撓性多肽，其包括撓性環(huán)且其中該多肽包括以下序 列X 2 E X3 X4 X5 X6 R G K R X7 X8 X9 K D E X1(l 父^或尺 G K R X7 X8 X9 K D E，其中 Xi =A、F、S 或 T ;X2= G、K、R 或 S ;X 3= S 或 T ;X 4= N 或 S ;X 5= A、I 或 T ;X 6= I、T 或 V ;X 7 =D、E 或 G ;X8= S、T 或 Y ;X 9= F、T 或 Y ;X 1(l= G 或 N ;X n= K 或 R ;或
[0014] (d)長度小于100個氨基酸的剛性多肽，其包括a螺旋且包括以下共有序列：(K/ R) A (A/E/Q) K A (A/E/Q) A (K/R)，任選地包括 G D (A/E) a (K/R) A (A/E/Q) K A (A/E/Q) A (K/R) A XPG Y，其中任選地，。為1-10,且^為1-25。
[0015] 優(yōu)選地，調(diào)節(jié)子多肽包括以下序列或由其組成：SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3。
[0016] 優(yōu)選地，RAP多肽包括以下序列或由其組成：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5或SEQ ID N0:6〇
[0017] 優(yōu)選地，撓性多肽包括以下序列或由其組成：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10 或 SEQ ID NO:11。
[0018] 優(yōu)選地，剛性多肽包括以下序列或由其組成：SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15 或 SEQ ID NO:16。
[0019] 亦提供包括與SEQ ID No. 2至16中的每一個具有至少85%、90 %或95 %序列同 一性的序列或由其組成的多肽。
[0020] 在一些實施方案中，多肽是以重組方式產(chǎn)生。在其他實施方案中，多肽是以化學方 式合成。
[0021] 本發(fā)明亦提供用于穿過血腦屏障（BBB)運輸試劑的偶聯(lián)物，其包括：(a)如上文所 闡述的多肽；及（b)試劑；其中該偶聯(lián)物能夠穿過BBB。
[0022] 在一些實施方案中，試劑為診斷劑或治療劑。在一些實施方案中，多肽是經(jīng)由連接 體偶聯(lián)至試劑。在一些實施方案中，多肽直接偶聯(lián)至試劑。在一些實施方案中，偶聯(lián)物包括 納米顆粒。在一些實施方案中，試劑可在運輸穿過BBB后自多肽釋放。
[0023] 本發(fā)明亦提供包括如前述實施方案中任一個的多肽或偶聯(lián)物及藥學上可接受的 載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。
[0024] 本發(fā)明亦提供如上文所定義的多肽、偶聯(lián)物或藥物組合物，其用于療法中。在 一個實施方案中，治療用途在于治療神經(jīng)疾病，任選地腦瘤、腦轉(zhuǎn)移、精神分裂癥、癲癇、 阿爾茨海默?。ˋlzheimer' s disease)、帕金森?。≒arkinson' s disease)、亨廷頓病 (Huntington' s disease)、卒中和/或與BBB的功能障礙相關(guān)的疾病。
[0025] 本發(fā)明亦提供如上文所闡述的多肽、偶聯(lián)物或藥物組合物，其用于診斷方法中。在 一個實施方案中，診斷用途在于診斷神經(jīng)疾病。
[0026] 本發(fā)明亦提供編碼如上文所闡述的多肽的經(jīng)分離的多核苷酸。
[0027] 附圖簡述
[0028] 參照下列圖式來闡述本發(fā)明。
[0029] 圖1:LDLR家族成員。
[0030] 圖2 :LDLR的胞外結(jié)構(gòu)域，其由7個配體結(jié)合重復序列（LA/CR)、3個EGF樣模塊及 一個螺旋槳單元構(gòu)成。
[0031] 圖3 :LDLR中的LA結(jié)構(gòu)域折疊（PDB: 2FCW)
[0032] 圖4 : LA-RAP (D3)界面（A-D)與其他LA模塊界面的比較。
[0033] 圖5 :血管肽的階層式分群，其是基于一組針對每一構(gòu)成AA定義的113種物理化 學性質(zhì)。
[0034] 圖6 :經(jīng)由同源建模獲得的血管肽-2的一般折疊。
[0035] 圖7 :AP2結(jié)構(gòu)的從頭預(yù)測。
[0036] 圖8 :AP2 (作為單一結(jié)構(gòu)域結(jié)合劑）與LA模塊之間可能的相互作用。
[0037] 圖9 :AP2 (作為雙結(jié)構(gòu)域結(jié)合劑）與LA模塊之間可能的相互作用。
[0038] 圖10 :調(diào)節(jié)子根據(jù)其同源模型（PDB代碼：3N40)的一般折疊。圓圈突出顯示折疊 的結(jié)構(gòu)化部分。
[0039] 圖11 :調(diào)節(jié)子（作為單一結(jié)構(gòu)域結(jié)合劑）與LA模塊之間可能的相互作用。
[0040] 圖12 :調(diào)節(jié)子（作為雙結(jié)構(gòu)域結(jié)合劑）與LA模塊之間可能的相互作用。僅顯示 第二結(jié)合區(qū)域。
[0041] 圖13 :如在調(diào)節(jié)子整體模型中所觀察到的調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1的預(yù)測結(jié)構(gòu)。
[0042] 圖14 :藉助從頭方法計算的調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1的預(yù)測結(jié)構(gòu)。
[0043] 圖15 :調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4在基于同源性的調(diào)節(jié)子模型上的預(yù)測結(jié)構(gòu)。
[0044] 圖16 :調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4在藉助從頭方法計算的模型上的預(yù)測結(jié)構(gòu)。
[0045] 圖17 :RAP D3結(jié)構(gòu)域與LDLR之間的相互作用。
[0046] 圖18 :RH_構(gòu)建體1基于RAP-LDLR復合物晶體結(jié)構(gòu)（2FCW)的模型。
[0047] 圖19 :藉助從頭方法計算的RH_構(gòu)建體1的預(yù)測結(jié)構(gòu)。
[0048] 圖20 :RH_構(gòu)建體2基于RAP-LDLR復合物晶體結(jié)構(gòu)（2FCW)的模型。
[0049] 圖21 :RH_構(gòu)建體3基于RAP-LDLR復合物晶體結(jié)構(gòu)（2FCW)的模型。
[0050] 圖22 :活體外BBB模型的示意圖，該模型涉及牛腦內(nèi)皮細胞與星狀細胞的共培養(yǎng)。
[0051] 圖23 :條形圖，其顯示未經(jīng)修飾的納米顆粒不會穿過BBB，而經(jīng)調(diào)節(jié)子（SEQ ID No. 1)修飾的納米顆粒確實穿過BBB (NP =納米顆粒）。
[0052] 圖24 :條形圖，其顯示根據(jù)熒光標記肽活體外BBB模型穿過測試的穿過百分比。
[0053] 發(fā)明詳述
[0054] 本發(fā)明是基于可穿過BBB的多肽的令人驚奇的鑒別。在鑒別可穿過BBB的新多肽 的嘗試中，發(fā)明人選擇低密度脂蛋白受體（LDLR)作為靶標且編譯已知與LDLR的配體結(jié)合 ("LA"）結(jié)構(gòu)域相互作用的所有多肽的數(shù)據(jù)庫。發(fā)明人評價了所有這些多肽的結(jié)構(gòu)及活性。 許多多肽-LDLR相互作用是使用不同實驗條件來鑒別，但發(fā)明人能夠鑒別出對能夠與LDLR 的LA結(jié)構(gòu)域相互作用且因此能夠穿過BBB的多肽至關(guān)重要的結(jié)構(gòu)及藥效特征。
[0055] 為研發(fā)并完善結(jié)構(gòu)及藥效模型，發(fā)明人研宄了若干已知穿過BBB的肽（即血管肽， Demeule等人，參見上文）及調(diào)節(jié)子。已知這些血管肽通過與LDLR相互作用穿過BBB，但尚 未獲得這些多肽的結(jié)構(gòu)信息且因此發(fā)明人對血管肽建模以進行結(jié)構(gòu)比較。亦已知調(diào)節(jié)子穿 過BBB且已知其結(jié)構(gòu)，但未知調(diào)節(jié)子穿過BBB的機制。鑒于已鑒別出通過BBB所需要的關(guān)鍵 結(jié)構(gòu)及藥效特征，發(fā)明人研發(fā)出含有這些關(guān)鍵特征且因此亦能夠穿過BBB的本發(fā)明多肽。
[0056] 本發(fā)明多肽共享共同特征。其皆能夠穿過BBB，其皆是通過相同方法鑒別，且其皆 經(jīng)設(shè)計以結(jié)合至LDLR的LA結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明多肽可分為四個亞群："調(diào)節(jié)子多肽"、"RAP多 肽"、"撓性多肽"及"剛性多肽"。本發(fā)明多肽通常包括下文所闡述的序列或由其組成。
[0057] 調(diào)節(jié)子多肽
[0058] HKKWQFNSPFVPRADEPARKGKVHIPFPLDNITCRVPMAREPTVIHGKREVTLHLHPDH(SEQ ID N0:1):調(diào)節(jié)子
[0059] 調(diào)節(jié)子能夠穿過BBB。至今未知其結(jié)構(gòu)及作用機制。
[0060] 通過使用P62包膜糖蛋白（論述于下文實例中）同源建模調(diào)節(jié)子序列，發(fā)明人發(fā) 現(xiàn)，調(diào)節(jié)子包括剛性發(fā)夾結(jié)構(gòu)及非結(jié)構(gòu)化撓性長鏈。發(fā)明人鑒別出發(fā)夾結(jié)構(gòu)與 LDLR相互作用且發(fā)現(xiàn)此相互作用需要2種關(guān)鍵殘基，即位于0 -發(fā)夾結(jié)構(gòu)的U-小彎處的 K48及R49(相對于SEQ ID N0:1編號）。因此，本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽包括K48及R49(相對 于SEQ ID NO: 1編號）。本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽能夠穿過BBB。此通過例如圖23來顯示，該 圖展示使用如圖22中所繪示且如Cecchelli等人，Adv Drug Deliv Rev. 1999年4月5日； 36(2-3) : 165-178.(參考文獻6)所闡述的BBEC/大鼠星狀細胞共培養(yǎng)活體外模型，經(jīng)調(diào)節(jié) 子（SEQ ID No. 1)修飾的納米顆粒能夠穿過BBB。圖23亦證實未經(jīng)修飾的納米顆粒不會穿 過 BBB。
[0061] 全長調(diào)節(jié)子多肽長度為59個AA(SEQ ID N0:1)。本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽是全長調(diào) 節(jié)子的片段，且因此其產(chǎn)生更容易且更廉價。而且，使用較短多肽來達成穿過BBB的相同或 較佳通過允許向患者施用更小重量的多肽。因此，本發(fā)明調(diào)節(jié)子多肽的長度小于59個氨基 酸，且因此可包括SEQ ID N0:1的以下數(shù)量的連續(xù)氨基酸：7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、 17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、 42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57 或 58 個。
[0062] 除K48及R49的外，本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽優(yōu)選包括（a)T43、V44、I45、H46及G47和 /或〇3)￡50、￥51、了52、153及冊4(相對于3￡〇10勵 ：1編號），此乃因這些氨基酸殘基參與 0 -發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成。除K48及R49的外，本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽優(yōu)選包括（a)P42、T43、V44、 145、財6及647和/或〇3)￡50、￥51、了52、153、冊4及1^55(相對于5￡〇10勵：1編號），此 乃因這些氨基酸殘基幫助形成與LDLR的LA結(jié)構(gòu)域相互作用的較大發(fā)夾結(jié)構(gòu)基序。盡 管不受限于理論，但發(fā)明人認為此較大0 _發(fā)夾結(jié)構(gòu)進一步改良與LDLR的相互作用。
[0063] 調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1
[0064] PTVIHGKREVTLHL(SEQ ID N0:2):調(diào)節(jié)子 _ 構(gòu)建體 1
[0065] 本發(fā)明的優(yōu)選調(diào)節(jié)子多肽是"調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1"（SEQ ID N0:2)。調(diào)節(jié)子_構(gòu)建 體1是SEQ ID NO: 1中形成0 -發(fā)夾結(jié)構(gòu)的14個氨基酸殘基的片段。
[0066] 本發(fā)明亦提供調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1的片段，其包括SEQ ID N0:2的7個或更多個連 續(xù)氨基酸，例如7、8、9、10、11、12或13個氨基酸殘基，其中該片段包括K48及R49(相對于 SEQ ID N0:1編號），且保留穿過BBB的能力。
[0067] 其他優(yōu)選片段缺少一或多個來自SEQ ID N0:2C端的氨基酸（例如1、2、3、4、5或 6個氨基酸）和/或一或多個來自SEQ ID N0:2N端的氨基酸（例如1、2、3、4、5或6個氨 基酸），同時保留穿過BBB的能力；且其中該片段包括SEQ ID N0:2的7個或更多個連續(xù)氨 基酸并包括K48及R49 (相對于SEQ ID NO: 1編號）。因此，調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1的氨基酸片 段可包括具有SEQ ID N0:2以下數(shù)量的連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列：7、8、9、10、11、12或 13個。
[0068] 本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽亦包含SEQ ID N0:2的變體。調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體1的變體通 常是由與SEQ ID N0:2具有以下同一性的氨基酸序列組成：85%或更大，例如85%、86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%〇
[0069] 調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4
[0070] PMAREPTVIHGKREVTLHLHPDH(SEQ ID N0:3):調(diào)節(jié)子 _ 構(gòu)建體 4
[0071] 本發(fā)明的另一優(yōu)選調(diào)節(jié)子多肽是"調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4"（SEQ ID N0:3)。調(diào)節(jié)子_ 構(gòu)建體4是包括SEQ ID NO: 2的SEQ ID NO: 1的23個氨基酸殘基的片段。由于額外殘基 (相對于SEQ ID N0:2)形成平行鏈，且這些平行鏈形成可與LDLR相互作用的0 -折疊，故 確定SEQ ID N0:4尤其適宜。
[0072] 本發(fā)明亦提供調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4的片段，其包括SEQ ID N0:3的7個或更多個連 續(xù)氨基酸，通常為7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22個氨基酸殘基，其 中該片段包括K48及R49(相對于SEQ ID N0:1編號），且保留穿過BBB的能力。
[0073] 優(yōu)選地，除K48及R49的外，本發(fā)明的調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4多肽包括（a)P37、M38、 A39、R40、E41、P42、T43、V44、I45、H46 及 G47 和 / 或（b)E50、V51、T52、L53、H54、L55、H56、 P57、D58 及 H59 (相對于 SEQ ID NO: 1 編號）。
[0074] 其他優(yōu)選片段缺少一或多個來自SEQ ID N0:3C端的氨基酸（例如1、2、3、4、5、6、 7、 8、9、10或11個氨基酸）和/或一或多個來自SEQ ID N0:3N端的氨基酸（例如1、2、3、 4、5、6、7、8、9或10個氨基酸），同時保留穿過BBB的能力，且其中該片段包括SEQ ID N0:3 的7個或更多個連續(xù)氨基酸并包括K48及R49 (相對于SEQ ID NO: 1編號）。因此，調(diào)節(jié)子 _構(gòu)建體4的片段可包括具有SEQ ID N0:3以下數(shù)量的連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列：7、 8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22 或 23 個。
[0075] 本發(fā)明的調(diào)節(jié)子多肽亦包含SEQ ID N0:3的變體。調(diào)節(jié)子_構(gòu)建體4的變體通 常是由與SEQ ID N0:3具有以下同一性的氨基酸序列組成：85%或更大，例如85%、86%、 87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%〇
[0076] RAP 多肽
[0077] MAPRRVRSFLRGLPALLLLLLFLGPWPAASHGGKYSREKNQPKPSPKRESGEEFRMEKLNQLWEKAQRL HLPPVRLAELHADLKIQERDELAWKKLKLDGLDEDGEKEARLIRNLNVILAKYGLDGKKDARQVTSNSLSGTQEDGL DDPRLEKLWHKAKTSGKFSGEELDKLWREFLHHKEKVHEYNVLLETLSRTEEIHENVISPSDLSDIKGSVLHSRHTE LKEKLRSINQGLDRLRRVSHQGYSTEAEFEEPRVIDLWDLAQSANLTDKELEAFREELKHFEAKIEKHNHYQKQLEI AHEKLRHAESVGDGERVSRSREKHALLEGRTKELGYTVKKHLQDLSGRISRARHNEL(SEQ ID N0:48):受體 相關(guān)蛋白
[0078] 已知受體相關(guān)蛋白（在本文中稱為RAP、SEQ ID NO:48)能夠藉助其D3結(jié)構(gòu)域結(jié) 合至LDLR且已對RAP蛋白實施一些結(jié)構(gòu)研宄。已知RAP與LDLR之間的相互作用是經(jīng)由與 2個A型LDL受體（LA)模塊相互作用的2個RAP a -螺旋來發(fā)生。單一 a -螺旋含有相互 作用的必需殘基（包含K256)，而認為另一螺旋穩(wěn)定復合物。發(fā)明人研發(fā)出3種新RAP多 肽，其稱為"冊_構(gòu)建體1"（3￡〇10勵 :4)、"冊_構(gòu)建體2"（3￡〇10勵:5)及"冊_構(gòu)建體 3"（SEQ ID N0:6)。發(fā)明人將RH_構(gòu)建體1鑒別為穿過BBB的核心片段。因此，"RH_構(gòu)建 體2 "及"RH_構(gòu)建體3 "包括"RH_構(gòu)建體1"的序列。"RH_構(gòu)建體3 "亦包括"RH_構(gòu)建體 2"。
[0079] 本發(fā)明的RAP多肽是全長RAP的片段，且因此產(chǎn)生容易且廉價。而且，使用較短多 肽來達成穿過BBB的相同或較佳通過允許向患者施用更小重量的多肽。本發(fā)明RAP多肽 的長度小于 100 個氨基酸，其長度通常為 99、98、97、96、95、90、89、88、87、86、85、84、83、82、 81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、 56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、 31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16 或 15 個氨基酸。
[0080] 本發(fā)明的RAP多肽形成a -螺旋，且能夠穿過BBB。
[0081] RH_ 構(gòu)建體 1
[0082] ELKHFEAKIEKHNHYQKQLE(SEQ ID N0:4) :RH_ 構(gòu)建體 1
[0083] RH_構(gòu)建體1 (SEQ ID NO:4)是RAP的20個氨基酸殘基的片段，其鑒別為RAP-D3 與LDLR相互作用的最小單元。
[0084] 本發(fā)明的RAP多肽亦包含SEQ ID N0:4的變體。SEQ ID N0:4的變體優(yōu)選是由與 SEQ ID N0:4具有以下同一性的氨基酸序列組成：85%或更大，例如85%、86%、87%、88%、 89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%〇
[0085] RH_ 構(gòu)建體 2
[0086] DKELEAFREELKHFEAKIEKHNHYQKQLEIAHEKLRHAESV(SEQ ID N0:5) :RH_ 構(gòu)建體 2
[0087] 本發(fā)明的另一優(yōu)選RAP多肽是RH_構(gòu)建體2。RH_構(gòu)建體2 (SEQ ID NO: 5)是RAP 的41個氨基酸殘基的片段，其包括SEQ ID NO: 4且進一步利于形成a-螺旋。
[0088] 本發(fā)明的RH_構(gòu)建體2多肽包括SEQ ID N0:4的20個或更多個連續(xù)氨基酸，通常 為 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39 或 40 個氨基酸殘 基。
[0089] 其他優(yōu)選片段缺少一或多個來自SEQ ID N0:5C端的氨基酸（例如1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13或14個氨基酸）和/或一或多個來自SEQ ID N0:5N端的氨基酸（例 如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、