一種脂質(zhì)體的制備方法及其制備的產(chǎn)品的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體和脂質(zhì)體藥物傳輸體系的制備方法及其所制備的產(chǎn)品，特 別涉及極微小脂質(zhì)體。
【背景技術(shù)】
[0002] 脂質(zhì)體（liposome)是一種由成膜脂類分子自組裝形成的具有類似生物膜雙分 子層的超分子結(jié)構(gòu)（微囊），具有外層親水和內(nèi)層疏水的雙層結(jié)構(gòu)。其大小通常在幾十納 米到幾十微米。脂質(zhì)體作為藥物傳輸載體已得到廣泛應(yīng)用（例如專利CN 1237957C、CN 101371828B、CN 101579312B)。與非載藥脂質(zhì)體藥物制劑相比，載藥脂質(zhì)體可以提高藥物的 治療效果并且降低藥物在體內(nèi)傳輸過(guò)程中的毒性。它把藥物分子嵌入、吸附或包裹在脂質(zhì) 體內(nèi)，通過(guò)強(qiáng)化的滲透和保持效應(yīng)（Enhanced Permeation and Retention，EPR效應(yīng)）將藥 物輸送到病灶組織，使病灶區(qū)藥物濃度增高，在提高治療效果的同時(shí)明顯降低毒副作用。
[0003] 載藥脂質(zhì)體的突出優(yōu)點(diǎn)在于：其一，它是以磷脂分子為基礎(chǔ)載體材料。因而生理相 容性好，可以在體內(nèi)生物降解且沒有免疫反應(yīng)。其二，脂質(zhì)體載藥增強(qiáng)了負(fù)載藥物在體內(nèi)的 穩(wěn)定性，實(shí)現(xiàn)對(duì)負(fù)載藥物的緩控釋放。由于藥物受到類脂雙分子層膜的保護(hù)，在進(jìn)入體內(nèi)之 后，藥物可以免受機(jī)體酶系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的降解。其三，在脂質(zhì)體表面修飾配體識(shí)別分子可 實(shí)現(xiàn)主動(dòng)地、特異性靶向給藥，從而改善藥物的治療指數(shù)。常見的配體有：糖、植物凝血素、 肽類激素、半抗原、抗體等。
[0004] 決定脂質(zhì)體藥物的幾個(gè)主要物化特征是：脂質(zhì)體在體內(nèi)生理?xiàng)l件下的穩(wěn)定性、對(duì) 藥物分子的包封率和藥物釋放率、以及脂質(zhì)體粒徑大小及尺寸分布。脂質(zhì)體的粒徑大小及 尺寸分布影響著脂質(zhì)體在體內(nèi)毛細(xì)血管、細(xì)胞外基質(zhì)的滲透率和在組織內(nèi)的保持效應(yīng)，從 而影響脂質(zhì)體藥物在體內(nèi)的傳輸和藥物釋放性能。在腫瘤病變組織內(nèi)普遍存在著細(xì)胞增 生、毛細(xì)血管增生、毛細(xì)血管和淋巴微管異化等情況，小的粒徑和窄的粒徑分布有利于提高 脂質(zhì)體藥物在體內(nèi)和腫瘤組織中的滲透性，有助于藥物快速滲透到達(dá)病灶部位給藥而增強(qiáng) 療效?？焖俳o藥不但能使藥物迅速到達(dá)治療靶標(biāo)，而且能夠縮短脂質(zhì)體藥物在體內(nèi)的輸運(yùn) 時(shí)間，可進(jìn)一步降低藥物被機(jī)體酶系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的降解損耗，并且降低毒副作用。
[0005] 通常的脂質(zhì)體制備方法有脂膜水化法，超聲分散法，兩相注入法，超臨界法等。目 前廣泛使用的方法為脂膜水化法和超聲分散法。脂膜水化法是將磷脂和膽固醇等類脂溶于 有機(jī)溶劑，然后將溶液置于圓底燒瓶中，旋轉(zhuǎn)減壓蒸干有機(jī)溶劑，從而在燒瓶?jī)?nèi)壁上掛上一 層類脂分子膜。隨后加入緩沖溶液，充分振蕩燒瓶使脂質(zhì)膜水化脫落得到脂質(zhì)體。如此制得 的脂質(zhì)體粒徑在0. 2-5 ym之間，需要在后續(xù)步驟中將其在壓力下多次通過(guò)具有100-200nm 孔徑的濾膜，從而制備成為平均粒徑為100_200nm的均勻的脂質(zhì)體。如果在旋轉(zhuǎn)減壓蒸干 有機(jī)溶劑獲得類脂分子膜后，加入緩沖液，將該溶液經(jīng)超聲波處理也能制備脂質(zhì)體。超聲分 散法是制備小脂質(zhì)體的常用方法，但是所制備的脂質(zhì)體粒徑分布不均勻，相當(dāng)部分的脂質(zhì) 體粒徑超過(guò)l〇〇nm。而且，強(qiáng)烈的超聲波易引起藥物的降解，制得的溶液中還會(huì)混有超聲探 頭產(chǎn)生的微小金屬殘?jiān)Ｒ虼?，在載藥脂質(zhì)體的制備和應(yīng)用領(lǐng)域，需要一種高效制備小粒徑 (小于IOOnm)脂質(zhì)體的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為克服上述缺陷，本發(fā)明提供一種制備微小脂質(zhì)體的方法及其由該方法制備的微 小脂質(zhì)體。所制得的脂質(zhì)體粒徑小而且分布窄。
[0007] 本發(fā)明另一目的在于提供上述微小脂質(zhì)體用于脂質(zhì)體藥物傳輸?shù)挠猛尽?br>[0008] 本發(fā)明又一目的在于提供一種制備微小載藥脂質(zhì)體的方法及其由該方法制備的 藥物傳輸體系。
[0009] 本發(fā)明又一目的在于提供一種微小脂質(zhì)體和微小載藥脂質(zhì)體，其粒徑小而且分布 窄。
[0010] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的：
[0011] -種制備脂質(zhì)體的方法，包括如下步驟：
[0012] (1)制備類脂分子與客體分子的混合溶液；
[0013] (2)將步驟（1)中得到的混合溶液與主體分子溶液混合，制備得到脂質(zhì)體。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種由上述制備方法制備得到的脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體為單室脂質(zhì) 體，所述單室脂質(zhì)體粒徑分布在15-100nm范圍之內(nèi)，特別地，在20-80nm范圍之內(nèi)，更進(jìn)一 步地，在20-50nm范圍之內(nèi)。
[0015] 本發(fā)明還提供了一種由上述制備方法制備的脂質(zhì)體的用途，其用于藥物傳輸。所 述藥物包括脂溶性藥物、水溶性藥物和兩親性藥物。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種原位制備載藥脂質(zhì)體的方法（被動(dòng)載藥，方法一），其特征在 于，所述方法包括如下步驟：
[0017] (1)制備類脂分子、客體分子、藥物分子相混合的溶液；
[0018] (2)將所得混合溶液與主體分子溶液混合制備得到載藥脂質(zhì)體。
[0019] 本發(fā)明還提供一種原位制備載藥脂質(zhì)體的方法（被動(dòng)載藥，方法二），其特征在 于，所述方法包括如下步驟：
[0020] (1)制備類脂分子與客體分子的混合溶液；
[0021] (2)制備藥物分子與客體分子的混合溶液；
[0022] (3)將上述兩種混合溶液與主體分子溶液混合制備載藥脂質(zhì)體。
[0023] 本發(fā)明還提供了一種由上述兩種原位制備載藥脂質(zhì)體的方法制備得到的載藥脂 質(zhì)體。所述脂質(zhì)體為單室脂質(zhì)體，所述單室脂質(zhì)體粒徑分布在15-100nm范圍之內(nèi)，特別地， 在20-80nm范圍之內(nèi)，更進(jìn)一步地，在20-50nm范圍之內(nèi)。其中所述藥物可為脂溶性藥物、 水溶性藥物或兩親性藥物及其鹽，優(yōu)選的所述藥物為脂溶性藥物。所述藥物被嵌入脂質(zhì)體 雙層膜中、結(jié)合在雙層膜上或者包裹在脂質(zhì)體內(nèi)囊。
[0024] 本發(fā)明還提供一種通過(guò)主動(dòng)載藥法制備載藥脂質(zhì)體的方法（方法三），其特征在 于，所述方法包括如下步驟：
[0025] (1)制備脂質(zhì)體：
[0026] a)制備類脂分子與客體分子的混合溶液；
[0027] b)將步驟a)中得到的類脂分子與客體分子的混合溶液與主體分子溶液混合，制 備得到脂質(zhì)體；
[0028] (2)采用pH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法等使藥物分子或其鹽包裹進(jìn)脂 質(zhì)體內(nèi)囊。
[0029] 上述主動(dòng)載藥法中的藥物為脂溶性藥物、水溶性藥物、或兩親性藥物及其鹽，優(yōu)選 的所述藥物為水溶性藥物或兩親性藥物。所述PH梯度法、硫酸銨梯度法適用于弱堿性的藥 物，所述醋酸鈣梯度法適用于弱酸性的藥物。
[0030] 上述pH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法等主動(dòng)載藥法均采用現(xiàn)有技術(shù)中已 知的方法。例如所述PH梯度法具體為：將藥物分子或其鹽溶解于與步驟（1)得到的脂質(zhì)體 PH值相同的緩沖液中，然后與脂質(zhì)體混合，通過(guò)調(diào)節(jié)混合溶液的pH值使其高于或低于所制 備的脂質(zhì)體緩沖液的PH值，從而使藥物分子經(jīng)過(guò)pH值梯度進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)囊。
[0031] 本發(fā)明還提供了一種由上述主動(dòng)載藥法制備得到的載藥脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體為單 室脂質(zhì)體，所述單室脂質(zhì)體的粒徑分布在15-100nm范圍之內(nèi)，特別地，在20-80nm范圍之 內(nèi)，更進(jìn)一步地，在20-50nm范圍之內(nèi)。其中所述藥物為脂溶性藥物、水溶性藥物、或兩親性 藥物及其鹽，其被包裹在脂質(zhì)體內(nèi)囊中。
[0032] 本發(fā)明所述的類脂分子（lipid)為形成脂質(zhì)體（Liposome)的所有類脂。其可為 單一物質(zhì)也可以為混合物。所述類脂分子包括：能夠形成雙分子層膜材的類脂（例如磷脂 等），以及任選的附加劑。
[0033] 根據(jù)本發(fā)明，所述的類脂分子可為：中性類脂、負(fù)電性類脂、正電性類脂或其混合 物。所述混合物可為中性類脂和負(fù)電性類脂的混合物、中性類脂和正電性類脂的混合物；或 者中性類脂、負(fù)電性類脂和正電性類脂的混合物。進(jìn)一步優(yōu)選的，所述中性類脂和負(fù)電性類 脂的混合物中，所述中性類脂所占比例為50-99. 99%，優(yōu)選70-99. 9%，更優(yōu)選90-99%;所 述負(fù)電性類脂所占比例為〇. 01-50 %，優(yōu)選0. 1 % -30 %，更優(yōu)選1 % -10 %。所述中性類脂 和正電性類脂的混合物中，所述中性類脂所占比例為50-99. 99%，優(yōu)選70-99. 9%，更優(yōu)選 90-99 %;所述正電性類脂所占比例為0. 01-50 %，優(yōu)選0. 1 % -30 %，更優(yōu)選1 % -10 %。所述 中性類脂、負(fù)電性類脂和正電性類脂的混合物中，所述中性類脂所占比例為40-99. 98%，優(yōu) 選60-99. 8 %，更優(yōu)選80-98 %，所述負(fù)電性類脂所占比例為0. 01-30 %，優(yōu)選0. 1 % -20 %， 更優(yōu)選1% -10%，所述正電性類脂的比例為0.01-30 %，優(yōu)選0. 1% -20%，更優(yōu)選 1%-10%。所述比例為摩爾比。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明，所述中性類脂包括中性磷脂，如磷脂酰膽堿（卵磷脂）、磷脂酰乙 醇胺、磷脂酰肌醇、中性合成磷脂等。具體分子包括：大豆卵磷脂（SPC)、氫化大豆卵磷脂 (HSPC)、二癸?；蚜字―DPC)、二月桂酰基卵磷脂（DLPC)、二肉豆蔻?；蚜字―MPC)、 二棕櫚酰基卵磷脂（DPPC)、二硬脂?；蚜字―SPC)、二油?；蚜字―OPC)、二油?；?卵磷脂（DOPC)、二芥?；蚜字―EPC)、1_肉豆蔻?；?2-棕櫚酰基卵磷脂（MPPC)、1_肉 豆蔻?；?2-硬脂?；蚜字∕SPC)U-棕櫚?；?2-肉豆蔻?；蚜字≒MPC)U-棕 櫚?；?2-硬脂酰基卵磷脂（PSPC)、1_硬脂?；?2