0076](I)稱取0.6g玉米直鏈淀粉溶解于20mL 二甲基亞砜中，在氮氣保護下，加入1.2gCDI，在20°C溫度下攪拌反應5h，然后往體系中滴加10倍于CDI摩爾量的乙二胺，繼續(xù)攪拌反應19h后轉(zhuǎn)入截留分子量為5000的透析袋中用水透析4天，冷凍干燥后得到含伯氨基團的直鏈淀粉衍生物；
[0077](2)將步驟(I)的直鏈淀粉衍生物溶于水配制成2mg/mL的溶液，加入1.5倍于直鏈淀粉衍生物質(zhì)量的單壁碳納米管(長度1-2 μ m，直徑l-2nm)，然后在冰水浴中使用60kHz的超聲波進行處理，具體周期為每隔5min超聲40min，共進行I個周期的處理，將得到的混合體系在3000rpm下離心lmin，所得分散液以500nm的微孔濾膜過濾，濾澄經(jīng)水洗后冷凍干燥，得到直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物；
[0078](3)將步驟(2)的直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物分散在雙蒸水中分別配制成 0.01mg/mL、0.lmg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、0.7mg/mL 和 lmg/mL 的分散液，加入 siRNA(MMP-9_siRNA, lmg/mL 于 DEPC 水，購于 GenePharma 公司)至 siRNA 的終濃度為0.lmg/mL，充分振蕩后置于35°C水浴中孵育30min，得到復合比值分別為0.1、1、2、4、7和10的螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物。
[0079]實施例7
[0080](I)稱取Ig玉米直鏈淀粉溶解于50mL二甲基亞砜中，在氬氣保護下，加入5g⑶I，在40°C溫度下攪拌反應3h，然后往體系中滴加15倍于CDI摩爾量的乙二胺，繼續(xù)攪拌反應IIh后轉(zhuǎn)入截留分子量為20000的透析袋中用水透析3天，冷凍干燥后得到含伯氨基團的直鏈淀粉衍生物；
[0081](2)將步驟(I)的直鏈淀粉衍生物溶于水配制成5mg/mL的溶液，加入0.1倍于直鏈淀粉衍生物質(zhì)量的單壁碳納米管(長度7-10 μ m，直徑3-5nm)，然后在冰水浴中使用50kHz的超聲波進行處理，具體周期為每隔30min超聲60min，共進行2個周期的處理，將得到的混合體系在500rpm下離心5min，所得分散液以10nm的微孔濾膜過濾，濾澄經(jīng)水洗后冷凍干燥，得到直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物；
[0082](3)將步驟(2)的直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物分散在雙蒸水中分別配制成 0.01mg/mL、0.lmg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.7mg/mL 和 lmg/mL 的分散液，加入 siRNA(MMP_9_siRNA，lmg/mL 于 DEPC 水，購于 GenePharma 公司)至 siRNA 的終濃度為0.lmg/mL，充分振蕩后置于38V水浴中孵育40min，得到復合比值分別為0.1、1、2、4、7和10的螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物。
[0083]本實施例中所述二甲基亞砜經(jīng)過下述方法處理得到:在市售二甲基亞砜中加入氫化鈣，室溫攪拌5天去除水分，減壓蒸餾，收集的餾出液為干燥的二甲基亞砜。
[0084]上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其它的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于包括以下制備步驟: (1)將直鏈淀粉溶解于二甲基亞砜中，在惰性氣體保護下，加入N，N’-羰基二咪唑，在20?40°C溫度下攪拌反應I?6小時，然后往體系中滴加乙二胺，繼續(xù)攪拌反應11?66小時后用水透析，冷凍干燥后得到含伯氨基團的水溶性直鏈淀粉衍生物； (2)將步驟⑴制備的含伯氨基團的水溶性直鏈淀粉衍生物溶于水配制成0.1?5mg/mL的溶液，加入單壁碳納米管，然后在冰水浴中進行超聲處理，將得到的混合體系進行離心、微孔濾膜過濾，濾渣經(jīng)水洗后冷凍干燥，得到直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物； (3)將步驟(2)得到的直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物分散在雙蒸水中，配制成0.01?lmg/mL的分散液；接著加入核酸，充分振蕩后置于水浴中孵育，得到螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述的直鏈淀粉是指經(jīng)過純化處理的馬鈴薯、玉米或者小麥直鏈淀粉；所述純化處理步驟為:將直鏈淀粉溶于二甲基亞砜中，所得溶液抽濾除去不溶雜質(zhì)，將濾液逐滴加入到攪拌中的甲醇或乙醇進行沉淀，沉淀物重復溶解、抽濾和沉淀操作2?4次后將沉淀物真空干燥，得到純化的直鏈淀粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:所述的二甲基亞砜在使用前通過以下方法純化:在二甲基亞砜中加入氫化鈣，室溫攪拌2?7天去除水分，減壓蒸餾，收集的餾出液備用；所述惰性氣體是指氮氣或氬氣。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:所述的用水透析是指用截流分子量為1000?30000的透析袋，在去離子水或蒸餾水中透析I?7天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:所述的N，N’ -羰基二咪唑與直鏈淀粉的質(zhì)量比為(0.1?6):1 ;乙二胺與N，N’ -羰基二咪唑的摩爾比為(2?20):1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的單壁碳納米管是指長度為0.5?10 μ m，直徑為I?5nm的單壁碳納米管；單壁碳納米管與直鏈淀粉衍生物的質(zhì)量比為(0.1?2):1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:所述的超聲處理是指在頻率為20?65kHz條件下超聲處理I?6個周期；所述的周期是指每隔I?30min超聲處理5?60min ;所述的離心是指在轉(zhuǎn)速為500?3000rpm的條件下離心I?5min ;所述的微孔濾膜是指孔徑為100?500nm的水系或有機系微孔濾膜。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物的制備方法，其特征在于:步驟(3)中所述的核酸是指pDNA或siRNA;所述的置于水浴中孵育是指置于35?40°C水浴中孵育10?60min。
9.一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物，其特征在于:通過權(quán)利要求I?8任一項所述的方法制備得到。
10.權(quán)利要求9所述的螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物在制備光熱-基因聯(lián)合治療藥物領(lǐng)域中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物及其制備與應用。所述復合物的制備方法為：將螺旋鏈多糖直鏈淀粉于二甲基亞砜中與N,N’-羰基二咪唑和乙二胺反應，得到含伯氨基團的水溶性直鏈淀粉衍生物，然后在水溶液中加入單壁碳納米管，經(jīng)超聲處理、離心、過濾和冷凍干燥得到直鏈淀粉衍生物-單壁碳納米管包合物；然后將包合物分散在雙蒸水中，加入核酸，充分振蕩后孵育，得到螺旋鏈多糖衍生物共負載單壁碳納米管和核酸的復合物。所述復合物結(jié)合了包合物的光熱轉(zhuǎn)換效應和核酸的特殊功能，可用于光熱-基因聯(lián)合治療藥物的制備。
【IPC分類】A61K48-00, A61K41-00, A61K47-48, A61P35-00
【公開號】CN104548126
【申請?zhí)枴緾N201510024450
【發(fā)明人】張黎明, 麥開錦, 李小軍, 何楊華
【申請人】中山大學
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月16日