[0194] 另有說明，聯(lián)合治療使用順序施用時(shí)間表，其中在5FU以劑量限制性毒性（DLT)的 水平（50mg/kg/天）的9天周期后施用人源化抗體，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)黑素瘤模型中的小鼠的生存 增強(qiáng)。結(jié)果清楚地表明聯(lián)合治療提高了對5-FU的DLT水平的耐受性。
[0195] 實(shí)施例4.與依立替康聯(lián)合治療（1)
[0196] 結(jié)腸直腸癌腫瘤（CT26腫瘤）是由CT26細(xì)胞S.C.注射誘導(dǎo)，IO6細(xì)胞/鼠 （n = 6)。 注射日是指第0天。在第7和15天I. P.施用100mg/kg的依立替康。在第10天I. V.施 用 IOmg/ 鼠的 hBAT-Ι (圖 12)。
[0197] 單一治療周期后對腫瘤尺寸的隨訪研宄中，在第4到8天每天測量腫瘤體積。結(jié)果 表明hBAT-Ι抗體與依立替康聯(lián)合治療與用依立替康單一療法同樣有效，但是不如hBAT-1 單一療法有效（圖12)。
[0198] 實(shí)施例5.與依立替康聯(lián)合治療（2)
[0199] 結(jié)腸直腸癌腫瘤（CT26腫瘤）是由CT26細(xì)胞S.C.注射誘導(dǎo)，IO6細(xì)胞/鼠 （n = 6)。 注射日是指第0天。在第7和15天I. P.施用100mg/kg的依立替康。在第10天I. V.施 用 IOmg/ 鼠的 hBAT-Ι (圖 13)。
[0200] 第16天開始監(jiān)測存活百分比。結(jié)果表明聯(lián)合療法治療的小鼠中存活百分比與伊 立替康單一療法治療的小鼠相當(dāng)，但低于hBAT-Ι單一療法治療的小鼠（圖13)。
[0201] 實(shí)施例6.與奧沙利鉑聯(lián)合治療
[0202] 結(jié)腸直腸癌腫瘤（CT26腫瘤）是由CT26細(xì)胞S. C.注射誘導(dǎo)，IO6細(xì)胞/鼠 （η = 6)。注射日是指第0天。在第4、7-10、14-17、22-24和29-31天1上施用111^/1^的奧沙 利鉑。在第 11、18、25 和 32 天 I.V.施用 IOmg/鼠的 hBAT-Ι (圖 14-15)。
[0203] 在腫瘤尺寸的隨訪研宄中，在腫瘤接種后第4到23天隔天測量腫瘤體積。結(jié)果表 明與奧沙利鉑聯(lián)合治療優(yōu)于奧沙利鉑單獨(dú)治療（圖14)。
[0204] 在總存活的隨訪中，第15天開始監(jiān)測存活百分比。結(jié)果清楚地表明用聯(lián)合療法治 療的小鼠中存活百分比顯著高于用奧沙利鉑單一療法治療的小鼠，導(dǎo)致約20%小鼠持久完 全緩解（圖15)。
[0205] 在已經(jīng)由hBAT-Ι和奧沙利鉑聯(lián)合治療治愈2或5個(gè)月的小鼠 （η = 3)中，結(jié)腸直 腸癌腫瘤（CT26腫瘤）由CT26細(xì)胞S. C.注射（IO6細(xì)胞/鼠）再誘導(dǎo)。在同齡的首次實(shí) 驗(yàn)的對照小鼠 （η = 6)中結(jié)腸直腸癌腫瘤被新誘導(dǎo)。本文注射日是指第0天（圖16)。在 CRC再誘導(dǎo)（再攻擊）之前，通過特異ELISA法評估經(jīng)歷治療的小鼠 hBAT-Ι的血清水平完 全清除。
[0206] 在腫瘤尺寸的隨訪研宄中，腫瘤接種后從第4天到第23天隔天測量腫瘤體積和提 交作為隨訪。結(jié)果表明先前由hBAT-Ι和奧沙利鉑聯(lián)合療法治愈的小鼠中，2個(gè)月隨訪過程 中未觀察到腫瘤，而在對照組中，所有小鼠在幾天內(nèi)發(fā)生腫瘤（圖16A)。
[0207] 在總存活的隨訪研宄中，腫瘤再接種后第21天開始監(jiān)測存活百分比。結(jié)果清楚地 表明新引入腫瘤（CRC)的小鼠死于35天內(nèi)，而先前由hBAT-Ι和奧沙利鉑聯(lián)合治療治愈的 小鼠則防止腫瘤生長、腫瘤復(fù)發(fā)和死亡，超過72天的隨訪研宄（圖16B)。
[0208] 先前由hBAT和奧沙利鉑治愈和防止CRC再攻擊達(dá)約3個(gè)月（小鼠描述于圖16, η =2)的小鼠 S. C注射4Τ1細(xì)胞（IO6細(xì)胞/鼠）再誘導(dǎo)乳腺癌腫瘤（4Τ1腫瘤）。在這些小 鼠中，腫瘤在不同位置而不是第一次CRC和第二次CRC的注射位置進(jìn)行S.C.注射（再攻擊 CRC腫瘤）。乳腺癌腫瘤還引入到同齡的首次實(shí)驗(yàn)的小鼠 （η = 6)中。注射日是指第0天 (圖 17)。
[0209] 在腫瘤尺寸的隨訪研宄中，腫瘤接種后第3到21天隔天測量腫瘤體積和提交。結(jié) 果表明兩個(gè)小鼠組中乳腺癌腫瘤都有所發(fā)展（圖17Α)。這些結(jié)果清楚地表明，hBAT-Ι和奧 沙利鉑聯(lián)合治療后小鼠獲得了對結(jié)腸直腸癌的全面防止（圖16Α)，而不是防止乳腺癌腫瘤 (圖 17Α)。
[0210] 在總存活的隨訪研宄中，腫瘤再接種后第21天開始監(jiān)測存活百分比。結(jié)果清楚地 表明兩組中的小鼠在第28至35天內(nèi)死于乳腺癌，表明顯示出對CRC復(fù)發(fā)（再攻擊）長期 防止的小鼠對不同類型的腫瘤例如乳腺癌沒有完全防止。由于所有先前治療的小鼠測試本 發(fā)明抗體完全清除的循環(huán)血清水平，似乎對結(jié)腸直腸癌獲得特異性保護(hù)不是活性治療的結(jié) 果，而是在用本發(fā)明抗體和奧沙利鉑的先前治療后誘導(dǎo)的免疫記憶反應(yīng)。
[0211] 總之，本發(fā)明的抗體和特定化療劑如5FU或奧沙利鉑的聯(lián)合治療，當(dāng)根據(jù)交替時(shí) 間表施用時(shí)，導(dǎo)致抗腫瘤活性增強(qiáng)，如通過具有腫瘤的小鼠的腫瘤生長減小和存活增強(qiáng)所 評價(jià)的。意外的是，聯(lián)合治療組中的小鼠已達(dá)到持久完全緩解和奧沙利鉑的情況下甚至獲 得防止腫瘤復(fù)發(fā)的記憶，通過用特定腫瘤（CRC)再攻擊進(jìn)行評估。
[0212] 實(shí)施例7. CT-Oll對人效應(yīng)/記憶T細(xì)朐的作用
[0213] 基于人淋巴細(xì)胞的活性測定評估hBAT-Ι (CT-Oll)的活性。以lug/ml的hBAT處 理效應(yīng)/記憶⑶4+⑶45RO+和首次實(shí)驗(yàn)的⑶4+⑶45RO-淋巴細(xì)胞，然后孵育72和96小時(shí)。 結(jié)果表示為％細(xì)胞存活差異（圖18)。
[0214] 結(jié)果清楚地顯示CT-Oll具有提高人效應(yīng)/記憶⑶4+⑶45RO+淋巴細(xì)胞的存活的 顯著作用，但對首次實(shí)驗(yàn)的⑶4+⑶45RO-淋巴細(xì)胞無顯著作用。CT-Ol 1表現(xiàn)出的提高記憶 前體細(xì)胞的生存力的活性與證明CT-Oll具有誘導(dǎo)抗腫瘤復(fù)發(fā)的免疫記憶的活性的體內(nèi)結(jié) 果是一致的。
[0215] 實(shí)施例8.人源化單克降抗體CT-Oll的I期臨床試駘
[0216]
[0217] 本研宄的目的是評估劑量限制性毒性（DLT)，以確定最大耐受劑量（MTD)和研宄 一旦給晚期血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者施用CT-Oll的藥代動(dòng)力學(xué)。Berger等人，Clin. Cancer Res. 2008; 14 (10) 2008年5月15日提供了本研宄的完整的描述。
[0218] 患者和方法
[0219] 本研宄的入選標(biāo)準(zhǔn)要求招募的患者必須具有以下血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一：處于 其疾病晚期的急性髓細(xì)胞樣白血?。ˋML)、慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL)、非霍奇金淋巴瘤 (NHL)、霍奇金淋巴瘤（HL)、或多發(fā)性骨髓瘤（MM)和隨后的化療和/或干細(xì)胞移植（SCT)。 只要患者符合Berger等人指定的標(biāo)準(zhǔn)，則他們具有進(jìn)行本研宄的資格。
[0220] 重要的是，所述標(biāo)準(zhǔn)包括：從干細(xì)胞移植（SCT)至少4周或從供者淋巴細(xì)胞輸注 (DLI)I周；預(yù)期壽命>3個(gè)月；接受具有免疫抑制效果的治療作用或沒有從具有免疫抑制效 果的治療作用恢復(fù)的患者，或遭受自身免疫性疾病的患者被排除在外。例外情況是羥基脲 治療的AML患者，其被允許繼續(xù)進(jìn)行。禁止使用伴隨的抗癌治療（化療及免疫療法），因此 施用CT-Oll前至少4周停止。
[0221] 本研究共計(jì)招暴了 17例患者。以最低劑量水平（0. 2mg/kg)招暴的1例患者弟一 次施用后5個(gè)月后以更高劑量水平（3. Omg/kg)重新招募作為總計(jì)18施用治療的體恤治 療。施用CT-Oll的總量基于計(jì)劃劑量（mg/kg基礎(chǔ)）和體重。以增加速率從50mL/hr到 lOOmL/hr的逐步的方式實(shí)施輸注，所有患者輸注前接受預(yù)先藥物治療，由止痛藥（撲熱息 痛）、皮質(zhì)激素（氫化可的松l〇〇mg)和抗組織胺（非那根）組成。起始劑量為0· 2mg/kg， 其基于人等效劑量（HED)比在非-人靈長類和小鼠中實(shí)施的毒理學(xué)研宄中測試的最高劑量 低數(shù)十倍。進(jìn)一步劑量水平為〇. 6mg/kg、I. 5mg/kg、3mg/kg和6mg/kg。在先前水平所有患 者在劑量施用后評估至少7天后允許從一個(gè)劑量水平升級到下一個(gè)劑量水平。
[0222] 根據(jù)國家癌癥研宄所（NCI)通用毒性標(biāo)準(zhǔn)（CTCAE V2)和由其強(qiáng)度（例如輕度、中 度、重度）進(jìn)行毒性評價(jià)。DLT被定義為在一例或多例患者中誘導(dǎo)任何3或4級毒性，或在 至少2/3或3/6例患者中誘導(dǎo)任何2級毒性的劑量。根據(jù)這些劑量升級和和MTD規(guī)則經(jīng)判 定與CT-Oll無關(guān)的不良事件不視為是毒性。
[0223] 施用藥物后，患者安全監(jiān)測，包括24小時(shí)、48小時(shí)和第7、14和21天的不良事件和 臨床反應(yīng)和實(shí)驗(yàn)室反應(yīng)。
[0224] 樣品采集、用于評估臨床反應(yīng)的參數(shù)、藥代動(dòng)力學(xué)分析、免疫系統(tǒng)激活和統(tǒng)計(jì)分析 如Berger等人，2008年描述。
[0225] 結(jié)果
[0226] 招募的患者（η = 17)的主要特征在表1中列出。初始以0. 2mg/kg治療的患者 003要求重復(fù)體恤治療，再次以3mg/kg治療。由于第一次治療和第二次治療之間間隔5個(gè) 月，作為單獨(dú)的個(gè)體分析不同治療。因此，用于分析的CT 011施用次數(shù)為18。
[0227] 表1.患者特征
[0228]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 人源化單克隆抗體或其片段以及（ii)至少一種化療劑用于制備治療選自由結(jié)腸直 腸癌、黑素瘤、急性髓細(xì)胞樣白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤 和多發(fā)性骨髓瘤組成的組的腫瘤的藥物的用途，其中所述抗體包括選自由BATRK A(SEQ ID NO: 15)、BATR κ B(SEQ ID NO :16)、BATR kc (SEQ ID NO :17)和 BATR kd (SEQ ID NO :18)組成 的組的輕鏈可變區(qū)，和選自由 BATRHa(SEQ ID N0:20)、BATRHb(SEQ ID N0:21)、BATRHC(SEQ ID NO: 22)、BATRHD (SEQ ID NO: 23)和 BATRHe (SEQ ID NO: 24)組成的組的重鏈可變區(qū)；其中 所述化療劑選自由5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑、順鉑、紫杉醇、阿糖胞苷、達(dá)卡巴嗪、多柔比星及 其組合組成的組。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述人源化抗體包括選自由BATRH a/BATR κ a(SEQ ID N0:20/SEQ ID N0:15)、BATRHb/BATRka(SEQ ID N0:21/SEQ ID N0:15)、BATRHb/ BATR kb (SEQ ID N0:21/SEQ ID NO: 16), BATRHC/BATR κ B (SEQ ID N0:22/SEQ ID NO: 16), BATRHb/BATRkd(SEQIDN0:21/SEQIDN0:18)*BATRH c/BATRkd(SEQIDN0:22/SEQID NO: 18)組成的組的可變區(qū)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述人源化單克隆具有對應(yīng)于BATRHc/ BATRkd(SEQ ID N0:22/SEQ ID N0:18)的可變區(qū)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述人源化抗體的片段選自由Fv、 Fab'、F(ab'）2和a單鏈抗體組成的組。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中所述人源化抗體或其所述片段保留 mBAT-1的抗腫瘤活性。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述至少一種化療劑是紫杉醇。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述至少一種化療劑是5-氟尿嘧啶。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述至少一種化療劑是奧沙利鉑。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述至少一種化療劑選自由5-氟尿嘧啶、奧沙利 鉑、順鉑、紫杉醇及其組合組成的組。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述人源化抗體和所述至少一種化療劑基本同 步或并行施用。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述人源化抗體和所述至少一種化療劑根據(jù)重 疊的時(shí)間表施用。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述人源化抗體的施用在所述至少一種化療劑 開始施用之前進(jìn)行。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述人源化抗體和所述至少一種化療劑之一或 兩者的施用通過選自由靜脈內(nèi)、口服、腹膜內(nèi)、皮下、隔離肢體灌注、器官輸注及其組合組成 的組的途徑進(jìn)行。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述受治療者進(jìn)一步用放射治療。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，還包括評估至少一種選自由腫瘤生長速率、腫瘤體 積、轉(zhuǎn)移數(shù)目、腫瘤復(fù)發(fā)及其組合組成的組的參數(shù)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及抑制腫瘤生長、增強(qiáng)患有腫瘤的受治療者的存活和誘導(dǎo)防止哺乳動(dòng)物中腫瘤復(fù)發(fā)的方法。該方法包括與至少一種化療劑聯(lián)合施用包含來源于命名為mBAT-1的鼠單克隆抗體CDR區(qū)的人源化單克隆抗體。
【IPC分類】A61P35-00, A61K39-395
【公開號】CN104548091
【申請?zhí)枴緾N201410715096
【發(fā)明人】R·羅泰姆-耶胡達(dá), G·羅迪諾
【申請人】治療科技公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2009年2月11日
【公告號】CA2715166A1, CN101970499A, CN101970499B, EP2242773A1, US8747847, US20110117085, US20140302032, WO2009101611A1