用于腫瘤治療的單克隆抗體的制作方法
【專利說(shuō)明】用于腫瘤治療的單克隆抗體
[0001] 本申請(qǐng)為申請(qǐng)日是2009年2月11日、申請(qǐng)?zhí)柺?0098010745L 2(PCT/ IL2009/000153)、發(fā)明名稱為"用于腫瘤治療的單克隆抗體"的中國(guó)申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及抑制腫瘤生長(zhǎng)、提高患有腫瘤的受治療者的存活和誘導(dǎo)防止哺乳動(dòng)物 中腫瘤復(fù)發(fā)的方法。該方法包括聯(lián)合至少一種化療劑施用包含來(lái)源于定名為HiBAT-I的鼠 單克隆抗體的CDR區(qū)的人源化單克隆抗體。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 近年來(lái)關(guān)于特別是在T細(xì)胞應(yīng)答水平的免疫調(diào)節(jié)的分子和細(xì)胞基礎(chǔ)知識(shí)迅速增 長(zhǎng)，為免疫治療方法包括腫瘤疫苗的開發(fā)提供了新武器庫(kù)。顯示某些單克隆抗體具有免疫 調(diào)節(jié)活性，包括結(jié)合T細(xì)胞表面決定簇的能力和誘導(dǎo)這些細(xì)胞的增殖、活化、成熟或分化的 能力。
[0005] BAT (也稱為mBAT-Ι或BAT-1)是針對(duì)伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma)細(xì)胞系 (Daudi)膜制品產(chǎn)生的鼠單克隆抗體，已顯示其對(duì)各種類型的腫瘤表現(xiàn)出抗腫瘤和免疫刺 激作用（Hardy等人，2001，Int. J. Oncol. 19:897)。此單克隆抗體最初公開于Hardy等人的 美國(guó)專利號(hào)5, 897, 862。BAT-I由具有CNCM登錄號(hào)1-1397的雜交瘤細(xì)胞系分泌。
[0006] 鼠 BAT的多核苷酸和氨基酸序列在Hardy等人WO 00/58363,和美國(guó)專利公布號(hào) 2003/0026800中公開。美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)2008/0025980中公開了許多基于鼠 BAT的人 源化單克隆抗體。根據(jù)該公開，人源化單克隆BAT抗體似乎誘導(dǎo)比親代鼠 BAT抗體更強(qiáng)的 抗腫瘤作用。在各種測(cè)試的模型系統(tǒng)中，在SCID(嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷?。┬∈?、NK細(xì)胞缺 陷的米色鼠和T細(xì)胞缺陷的裸鼠中研宄BAT抗腫瘤活性（Hardy，B.，1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:5756)。對(duì)所有的小鼠靜脈內(nèi)注射隨后在肺部形成腫瘤的鼠 B16黑素瘤。BAT 只對(duì)植入了鼠或人淋巴細(xì)胞的SCID小鼠發(fā)揮抗腫瘤作用。BAT在無(wú)胸腺裸鼠和米色鼠中發(fā) 揮抗腫瘤活性，但該活性與BAT在野生型小鼠中的抗腫瘤活性相比功效降低。
[0007] 還在體外研宄了鼠 BAT的免疫調(diào)節(jié)作用。鼠 BAT激活⑶4+T細(xì)胞和誘導(dǎo)IFN- γ 從這些細(xì)胞中分泌（分別為Hardy等人，2000, Int. Immunol. 12:1623和Quaglino Ε·等 人，2005, Vaccine 9:23(25) :3280-7)。此外，發(fā)現(xiàn)BAT觸發(fā)T細(xì)胞增殖和增強(qiáng)其溶細(xì)胞活 性（Hardy, B.等人，1997, Hum. Antibodies, 8:95)。
[0008] Berger等人（2008)公開了給晚期血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者施用基于mBAT-1的 人源化單克隆抗體CT-011，和相關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)（Berger等人Clin. Cancer Res. 2008; 14 (10) ,2008 年 5月 15 日）。
[0009] 應(yīng)該牢記的是，BAT抗體預(yù)計(jì)不會(huì)祀向腫瘤細(xì)胞自身而是革El向受治療者或患者的 免疫功能細(xì)胞，以便以有利的方式調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。
[0010] 化療是最廣泛使用的治療癌癥的治療方法之一。將化療藥物分為若干組，基于其 對(duì)癌細(xì)胞內(nèi)特定化學(xué)物質(zhì)的作用，藥物干擾的細(xì)胞活動(dòng)或過(guò)程，或藥物影響的細(xì)胞周期的 特定階段。化療組包括：烷化劑、亞硝基脲、抗代謝物、蒽環(huán)類、拓?fù)洚悩?gòu)酶I和拓?fù)洚悩?gòu)酶 II抑制劑、有絲分裂抑制劑和類固醇抑制劑。
[0011] 化療藥物可被提供作為單獨(dú)的療法但其經(jīng)常與一種或多種其他的活性劑聯(lián)合使 用。在某些情況下，將具體聯(lián)合調(diào)整以提供顯著提高的臨床效果。例如，抗代謝物氟尿嘧啶 (5FU)和烷化劑奧沙利鉑共同用于治療結(jié)腸直腸癌的組合方案中。也適用于結(jié)腸直腸癌的 氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸（亞葉酸）和奧沙利鉑的聯(lián)合療法縮寫為FOLFOX的。環(huán)磷酰胺、 多柔比星、長(zhǎng)春新堿和強(qiáng)的松的聯(lián)合療法（縮寫為CHOP)用于治療非霍奇金淋巴瘤，而CHOP 和嵌合型單克隆抗體利妥昔單抗的聯(lián)合療法（縮寫為R-CH0P)用于治療彌漫性大B細(xì)胞淋 巴瘤和其他侵襲性B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤。
[0012] 美國(guó)專利號(hào)6, 811，779公開了尿嘧啶、5FU或尿嘧啶氮芥與放射和與特異性結(jié)合 到VEGF接受者胞外域的單克隆抗體的聯(lián)合療法。此聯(lián)合療法針對(duì)于抑制血管生成。美國(guó)專 利號(hào)6, 217, 866公開了抑制表達(dá)人EGF接受者的人腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，包括給具有所述 腫瘤細(xì)胞的人癌癥患者施用有效量的抗腫瘤劑和有效量的單克隆抗體；（i)其中所述抗體 結(jié)合到所述腫瘤細(xì)胞的人EGF接受者的胞外域，（ii)其中抗體不偶聯(lián)到抗腫瘤劑，和（iii) 其中抗體抑制EGF與EGF接受者結(jié)合。
[0013] 在【背景技術(shù)】中無(wú)任何地方教導(dǎo)或建議人源化HiBAT-I單克隆抗體與化療聯(lián)合使用 是有利的。實(shí)際上，由于已知BAT和基于它的抗體具有免疫刺激性質(zhì)，此抗體與通過(guò)殺死增 殖細(xì)胞群體而發(fā)揮作用的細(xì)胞毒藥物或其他化療藥物聯(lián)合可用于實(shí)現(xiàn)比每種藥劑本身更 強(qiáng)的臨床療效是非常令人吃驚和意外的。
[0014] 發(fā)明概述
[0015] 本發(fā)明提供了抑制腫瘤生長(zhǎng)、減小腫瘤體積、提高受治療者存活和誘導(dǎo)防止長(zhǎng)有 實(shí)體腫瘤和非實(shí)體腫瘤的受治療者中腫瘤復(fù)發(fā)的方法。所述方法包括使用具有至少一個(gè)鼠 單克隆抗體BAT-1 (mBAT-1)的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)和來(lái)源于接受者人免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū) (FR)的人源化單克隆抗體。此抗體的一個(gè)實(shí)例是hBAT-Ι (本文也稱為CT-011)。本文公開 的一些方法優(yōu)選包括使用人源化單克隆抗體與至少一種化療劑的聯(lián)合方案，然而本文公開 的其他方法涉及使用人源化單克隆抗體自身，但是其可任選地與一種或多種化療劑組合使 用。
[0016] 本文說(shuō)明本發(fā)明的原則，在淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物和動(dòng)物腫瘤模型中使用mBAT-Ι和 CT-011，而在具有不同類型血液腫瘤的人類患者中使用CT-011。
[0017] 本發(fā)明部分基于意外發(fā)現(xiàn)：與施用任一單獨(dú)治療的單一療法相比，將CT-Oll摻入 到用各種化療劑的治療方案中導(dǎo)致一些有益于抗腫瘤和抗癌的作用，包括例如降低腫瘤的 生長(zhǎng)速率、抑制腫瘤生長(zhǎng)和延長(zhǎng)存活時(shí)間。還發(fā)現(xiàn)將人源化抗體如CT-Oll摻入到化療方案 可提供對(duì)化療劑的劑量限制性毒性（DLT)水平的耐受性提高的額外益處。
[0018] 本發(fā)明還部分基于觀察：?jiǎn)为?dú)或與化療劑聯(lián)合使用受治療者的抗體治療動(dòng)物模型 中誘導(dǎo)的腫瘤，導(dǎo)致都"治愈"及長(zhǎng)期防止相同腫瘤細(xì)胞后續(xù)攻擊時(shí)腫瘤復(fù)發(fā)的記憶效應(yīng)。 從而給予用人源化抗體CT-Oll治療治愈的動(dòng)物對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)或再暴露于腫瘤的抗性。此外， 現(xiàn)在公開了在某些情況下經(jīng)歷CT-Oll早期臨床試驗(yàn)的人類受治療者在施用單一劑量此抗 體和它從血液消除后也表現(xiàn)出長(zhǎng)期腫瘤控制和防護(hù)作用。
[0019] 不希望局限于任何理論或作用機(jī)制，人源化BAT單克隆抗體在防止腫瘤復(fù)發(fā)或復(fù) 活中的活性可能與此抗體在防止效應(yīng)/記憶T細(xì)胞凋亡中的活性有關(guān)，如在本文公開和使 用抗體CT-011示例說(shuō)明的。
[0020] 因此，在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了迄今未知其發(fā)揮累積或甚至加性效應(yīng)的抗癌劑 的組合。根據(jù)發(fā)明的某些原則，所述組合包括施用至少一種化療劑的一種治療和施用基于 mBAT-Ι的免疫刺激的人源化單克隆抗體的另一種不同治療。意外的是，與分開使用或每一 種自身使用時(shí)相比，當(dāng)聯(lián)合使用時(shí)這兩種治療實(shí)現(xiàn)了更有益的抗癌作用。本文和權(quán)力要求 中使用的聯(lián)合治療可以是指許多不同的聯(lián)合治療的任一種，包括例如，兩種或多種治療的 施用期基本重疊，兩種或多種治療是同步、順序或連續(xù)的，或兩種或多種治療在預(yù)定的交替 時(shí)間段施用。
[0021] 根據(jù)第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療腫瘤的方法，所述方法包括（i)給需要其的 受治療者施用有效量的人源化單克隆抗體或其片段，其中抗體或其片段具有至少一個(gè)鼠 單克隆抗體BAT(mBAT-l)的互補(bǔ)決定區(qū)和來(lái)自接受者人免疫球蛋白或由此修飾的構(gòu)架區(qū) (FR)，和（ii)給受治療者施用有效量的至少一種化療劑，從而治療腫瘤。
[0022] 根據(jù)另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了提高對(duì)至少一種化療劑耐受性的方法，所述方法 包括給需要其的受治療者施用有效量的人源化單克隆抗體或其片段，其中抗體或其片段具 有至少一個(gè)鼠單克隆抗體BAT (mBAT-1)的互補(bǔ)決定區(qū)和來(lái)自接受者人免疫球蛋白或由此 修飾的構(gòu)架區(qū)（FR)，其中受治療者正在經(jīng)歷至少一種化療劑的化療，從而提高對(duì)所述化療 劑的耐受性。
[0023] 根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了在患有腫瘤的受治療者中增強(qiáng)存活或抑制疾病發(fā)展 的方法，其中受治療者用至少一種化療劑治療，所述方法包括施用有效量的人源化單克隆 抗體或其片段，其中抗體或其片段具有至少一個(gè)鼠單克隆抗體BAT (mBAT-1)的互補(bǔ)決定區(qū) 和來(lái)自接受者人免疫球蛋白或由此修飾的構(gòu)架區(qū)（FR)，從而增強(qiáng)受治療者的存活。
[0024] 根據(jù)另一方面，本發(fā)明的提供了減少或防止腫瘤復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括給需 要其的受治療者施用有效量的人源化單克隆抗體或其片段，其中抗體或其片段具有至少一 個(gè)鼠單克隆抗體BAT(mBAT-l)的互補(bǔ)決定區(qū)和來(lái)自接受者人免疫球蛋白或由此修飾的構(gòu) 架區(qū)（FR)，從而減少或防止腫瘤復(fù)發(fā)。
[0025] 根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，減少或防止腫瘤復(fù)發(fā)的方法還包括給受治療者施用至少一種 化療劑。
[0026] 根據(jù)特定實(shí)施方案，受治療者正在經(jīng)歷或已經(jīng)完成用至少一種化療劑的化療的過(guò) 程。
[0027] 根據(jù)各種實(shí)施方案，人源化單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的特征為下式：
[0028] FRU-CDRL1-FRL2-CDRL2-FR L3-CDRL3_FRL4
[0029] 其中每個(gè)FR獨(dú)立為人抗體的構(gòu)架區(qū)且每個(gè)⑶R獨(dú)立為單克隆mBAT-1抗體的互補(bǔ) 決定區(qū)。
[0030] 根據(jù)各種實(shí)施方案，人源化單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的特征為下式：
[0031 ] FRH1_CDRH1_FRH2 _CDRH2_FRH3_CDR H3_FRH4
[0032] 其中每個(gè)FR獨(dú)立為人抗體的構(gòu)架區(qū)且每個(gè)⑶R獨(dú)立為單克隆mBAT-1抗體的互補(bǔ) 決定區(qū)。
[0033] 根據(jù)各種實(shí)施方案，F(xiàn)R來(lái)源于人TEL9抗體（SEQ ID NO: 130)的輕鏈可變區(qū)或由 此修飾。
[0034] 根據(jù)各種實(shí)施方案，來(lái)源于或修飾于人TEL9抗體的輕鏈可變區(qū)的FR的氨基酸 序列選自由FR L1，[EIVLTQSPSSLSASV⑶RVTITC;SEQIDNO:l];FR L2，[W(F或Y)QQKPG KAPKL(W或LHY;SEQ ID NO:2] ;FRL3, [GVPSR FSGSG SGT(D或S) (Y或F) (C或T)LTINS LQPED FATYY C;SEQ ID NO:3];和 FRm, [FGGGT KLEIK;SEQ ID N0:4]組成的組。
[0035] 根據(jù)各種實(shí)施方案，F(xiàn)R來(lái)源于人hsighvl295抗體的重鏈可變區(qū)（SEQ ID N0:146) 或由此修飾。
[0036] 根據(jù)各種實(shí)施方案，來(lái)源于或修飾于hsighvl295抗體的重鏈可變區(qū)的FR氨基酸 序列選自由 FRhi, [Q(I 或 V) QLV QSGSE LKKPG ASVKI SCKAS GY (T 或 S) F (T 或 S) ;SEQ ID NO:5] ；FRH2, [WV(RggK)QAPGQ GL(Q gg K)WMG ；SEQ ID NO:6] ；FRH3, [RF(VggA)FSLDT SV(N 或 S)TAYLQ ITSL(T或N)AEDTG MYFC(V或A) (R或K) ;SEQ ID NO:7];和 FRh4, [WGQGT LVTVS S ;SEQ ID NO:8]組成的組。
[0037] 根據(jù)各種實(shí)施方案，輕鏈可變區(qū)包含選自由CDRu [SARSS VSYMH ; SEQ ID NO :9]; CDRL2[RTSNL AS;SEQ ID N0:10] ;CDRU[QQRSS FPLT;和 SEQ ID N0:11]組成的組的至少一 種氨基酸序列，其中CDR來(lái)源于鼠BAT-I抗體和下標(biāo)"L"和"Η"分別是指輕鏈區(qū)和重鏈區(qū)。
[0038] 根據(jù)各種實(shí)施方案，重鏈可變區(qū)包含選自由⑶Rhi [NYGMN ;SEQ ID NO: 12]; CDRH2[WINTDSGESTYAEEFKG;SEQIDN0:13];和CDR H3[VGYDALDY;SEQIDN0:14]組成的 組的至少一種氨基酸序列。
[0039] 根據(jù)各種實(shí)施方案，人源化抗體包含：選自由BATRk A(SEQ ID N0:15)，BATRkb(SEQ ID N0:16)，BATRkc(SEQ ID N0:17),和 BATRkd(SEQ ID N0:18)組 成的組的輕鏈可變區(qū)；和選自由 A(SEQ ID N0:20),BATRHb(SEQ ID N0:21),BATRHC(SEQ ID N0:22),BATRHD(SEQ ID N0:23)和 BATRHe(SEQ ID N0:24)組成的組的重鏈可變區(qū)。
[0040] 根據(jù)其他實(shí)施方案中，人源化抗體包含選自由BATRHa/BATR K A (SEQ ID NO: 20/SEQ ID N0:15),BATRHb/BATRka(SEQ ID N0:21/