專利名稱：腺苷a的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及某些吡唑并-三唑并-嘧啶，三唑并-三唑并-嘧啶和咪唑并-三唑并-嘧啶衍生物，以及它們?cè)卺t(yī)藥上作為腺苷A3受體調(diào)節(jié)劑的應(yīng)用。
A3受體的發(fā)現(xiàn)在毗鄰嘌呤領(lǐng)域開(kāi)創(chuàng)了治療的前景。具體地說(shuō)，A3受體介導(dǎo)炎癥、低血壓和巨細(xì)胞脫粒。顯然，此受體還具有對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。A3選擇性激動(dòng)劑IB-MECA誘導(dǎo)行為壓抑，以及慢性給藥可保護(hù)大腦不會(huì)局部缺血?，F(xiàn)還發(fā)現(xiàn)，A3選擇性激動(dòng)劑在高濃度時(shí)可誘導(dǎo)HL-60人體白細(xì)胞中的細(xì)胞程序死亡。上述的和其它的發(fā)現(xiàn)都使A3受體成為治療靶。A3受體的選擇性拮抗劑被認(rèn)為可能用于抗感染或可能作為抗大腦局部缺血的藥劑。最近，研究表明A3拮抗劑使其用作抗哮喘、抗抑郁、抗心律不齊、腎保護(hù)、抗帕金森癥和提高認(rèn)知的藥物。
因此，本發(fā)明的目的是提供了數(shù)種化合物，其制備方法，以及它們作為激動(dòng)劑、部分激動(dòng)劑和/或腺苷A3受體的拮抗劑的應(yīng)用。
發(fā)明概述本發(fā)明公開(kāi)的化合物有可能用作選擇性的腺苷A3受體調(diào)節(jié)劑，其活性是該受體的拮抗劑，本發(fā)明還公開(kāi)了該化合物的制備方法和應(yīng)用。
下述通式化合物，其放射性標(biāo)記類似物，熒光標(biāo)記類似物和其藥用鹽 或 其中A是咪唑基、吡唑基或三唑基；R是-C(X)R1、-C(X)-N(R1)2、-C(X)OR1、-C(X)SR1、-SOnR1、-SOnOR1、-SOnSR1或-SOn-N(R1)2；R1是氫、烷基、取代的烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)烷?；?，或者，如果該基團(tuán)連接于氮原子時(shí)，與氮原子一起形成氮雜環(huán)丁烷，或形成5-6元雜環(huán)基所述雜環(huán)基含有一個(gè)或多個(gè)諸如N、O、S的雜原子；R2是氫、烷基、鏈烯基、炔基、取代的烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、芳烷基、取代的芳烷基、雜芳基、取代的雜芳基或芳基；R3是呋喃基、吡咯基、噻吩基、苯并呋喃基、苯并吡咯基、苯并噻吩基，它們由一個(gè)或多個(gè)本文所述取代的雜芳環(huán)的取代基選擇取代；X是O、S或NR1；n是1或2。
優(yōu)選的，R1是氫；C1-C8烷基；C2-C7鏈烯基；C2-C7炔基；C3-C7環(huán)烷基；由一個(gè)或多個(gè)鹵原子、羥基、C1-C4烷氧基、C3-C7環(huán)烷基或式-NR12、-C(O)NR12的基團(tuán)取代的C1-C5烷基；芳基；取代的芳基，所述的取代基選自下述基團(tuán)C1-C4烷氧基、C1-C4烷基、硝基、氨基、氰基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4鹵代烷氧基、羧基、酰胺基；C7-C10的芳烷基，其中芳基部分可被一個(gè)或多個(gè)上述芳基基團(tuán)的取代基所取代；式-(CH2)m-Het基團(tuán)，其中Het是5-6元芳族或非芳族雜環(huán)，其中含有選自N、O和S的雜原子，以及m是1-5的整數(shù)。
優(yōu)選C1-C8烷基是甲基、乙基、丙基、丁基和異戊基。C3-C7環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。C3-C7環(huán)烷基取代的C1-C5烷基的實(shí)例包括環(huán)己基甲基、環(huán)戊基甲基和2-環(huán)戊基乙基。取代的C1-C5烷基的實(shí)例包括2-羥基乙基、2-甲氧基乙基、三氟甲基、2-氟乙基、2-氯乙基、3-氨基丙基、2-(4甲基-1-哌嗪基)乙基、2-(4-嗎啉基)乙基、2-氨基羰基乙基、2-二甲氨基乙基、3-二甲氨基丙基。優(yōu)選的芳基是苯基，所述的苯基被Cl、F、甲氧基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基、二氟甲氧基基團(tuán)選擇取代。含有N、O和/或S的5-6元雜環(huán)基包括哌嗪基、嗎啉基、噻唑基、吡唑基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、三唑基、四唑基。C7-C10芳烷基的實(shí)例包括被Cl、F、甲氧基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基和二氟甲氧基基團(tuán)選擇取代的芐基或苯乙基。優(yōu)選的，R1是氫、C1-C8烷基、芳基或C7-C10芳烷基，可被選擇取代，優(yōu)選被鹵原子取代。優(yōu)選的X是O，R2是C2-C3烷基或取代的烷基，和R3是呋喃基。
特別優(yōu)選的化合物是其中為下述定義的化合物R是苯乙基基團(tuán)，其中的苯環(huán)被一個(gè)或多個(gè)選自下述的基團(tuán)選擇取代氯、氟原子、甲氧基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基、二氟甲氧基基團(tuán)。
下述結(jié)構(gòu)式表示了A可能的意義 本發(fā)明化合物可被用于調(diào)節(jié)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的腺苷A3受體的方法。該方法包括給哺乳動(dòng)物施用足以能夠調(diào)節(jié)腺苷A3受體的有效量的式Ⅰ化合物，該化合物的用途包括●治療高血壓；●治療炎性疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和牛皮癬；●治療變應(yīng)性疾病如枯草熱和過(guò)敏性鼻炎；●巨細(xì)胞脫粒；●抗腫瘤藥劑；●治療心臟低氧；●避免大腦缺血；●診斷應(yīng)用，例如，測(cè)定是否存在一種或多種上述的醫(yī)學(xué)癥狀，或在篩選試驗(yàn)中測(cè)定其它化合物與A3Ado受體結(jié)合的有效性(即通過(guò)如在各種結(jié)合試驗(yàn)中測(cè)定的競(jìng)爭(zhēng)性抑制)，如下述文獻(xiàn)所述Jacobson和Van Rhee,Purinergic approaches to experimental therapy,Jacobson和Jarvis,Wiley等人，New York,1997,pp.101-128；Mathot等人，Brit.J.Pharmacol.,116:1957-1964(1995)；van der Wenden等人，J.Med.Chem,38:4000-4006(1995)；和van Calenbergh,J.Med.Chem.,40:3765-3772(1997)，上述內(nèi)容被引用作為參考。
本發(fā)明化合物還可用于完全或部分抑制包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的腺苷酸環(huán)化酶(A3)的方法。該方法包括給哺乳動(dòng)物施用足以能完全或部分抑制哺乳動(dòng)物的腺苷酸環(huán)化酶的有效量的式Ⅰ化合物。該化合物可以被標(biāo)記，用標(biāo)記的化合物檢測(cè)是否存在含有腺苷A3配體的腫瘤細(xì)胞，使該化合物與A3受體結(jié)合，并測(cè)定存在的標(biāo)記物。
本發(fā)明化合物可用于藥物制劑，該制劑包括式Ⅰ化合物和一種或多種輔劑。多種化學(xué)中間體可用于制備本發(fā)明化合物。
圖2說(shuō)明了[125I]AB-MECA(fmol/mg蛋白質(zhì))與人體A3受體結(jié)合的飽和度，以JURKAT細(xì)胞系對(duì)[125I]AB-MECA的摩爾濃度表示。如圖所示，用[125I]AB-MECA檢測(cè)出的A3受體在Jurkat細(xì)胞膜中的密度接近于300fmol/mg蛋白質(zhì)。
圖3和4說(shuō)明了氚標(biāo)記的類似化合物47-5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-丙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物102)(fmol/mg蛋白質(zhì))與A3受體結(jié)合的飽和度，以JURKAT細(xì)胞系對(duì)化合物102的摩爾濃度表示。由所述圖中的數(shù)據(jù)表明人體的腫瘤細(xì)胞中存在著高密度的腺苷A3受體。例如，在Jurkat細(xì)胞中檢測(cè)出大約1300fmol/mg蛋白質(zhì)，在HL 60細(xì)胞中檢測(cè)出大約650fmol/mg蛋白質(zhì)。因此，對(duì)于檢測(cè)腺苷A3受體來(lái)說(shuō)，化合物102是比[125I]AB-MECA更靈敏的工具。這些發(fā)明有助于測(cè)定許多人體腫瘤細(xì)胞中的A3受體。
發(fā)明的詳細(xì)描述本申請(qǐng)公開(kāi)了有可能用作腺苷受體的選擇性調(diào)節(jié)劑的化合物，其活性是A3的激動(dòng)劑，在某些情況下，是A3的拮抗劑，以及該化合物的制備方法和和應(yīng)用。
本發(fā)明化合物還可用于調(diào)節(jié)包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的腺苷A3受體的方法，該方法包括給哺乳動(dòng)物施用足以能調(diào)節(jié)腺苷A3受體有效量的式Ⅰ化合物。
本發(fā)明化合物可用于藥物制劑，該制劑包括式Ⅰ化合物和一種或多種輔劑。多種化學(xué)中間體可用于制備本發(fā)明化合物。定義如本文所用的，如果本發(fā)明化合物能夠完全抑制腺苷酸環(huán)化酶(A3)，并且在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)中能夠代替[125I]AB-MECA，該化合物是腺苷A1受體激動(dòng)劑。
如本文所用的，如果本發(fā)明化合物能夠部分抑制腺苷酸環(huán)化酶(A3)，并且在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)中能夠代替[125I]AB-MECA，該化合物是腺苷A3受體的部分激動(dòng)劑。
如本文所用的，如果本發(fā)明化合物能夠防止刺激引起的抑制，并且在競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)中能夠代替[125I]AB-MECA，該化合物是腺苷A3受體的拮抗劑。
如本文所用的，如果A1/A3和A2/A3的活性之比大于約50，優(yōu)選為50-100，更優(yōu)選大于大約100，本發(fā)明化合物會(huì)選擇A3受體。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“烷基”是指一價(jià)直鏈或支鏈或環(huán)狀烷基基團(tuán)，優(yōu)選含有1-20個(gè)碳原子，更優(yōu)選含有1-10個(gè)碳原子(“低級(jí)烷基”)，最優(yōu)選1-6個(gè)碳原子。此術(shù)語(yǔ)的實(shí)例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、正丁基等。術(shù)語(yǔ)“亞烷基”和“低級(jí)亞烷基”是指相應(yīng)烷基的二價(jià)基團(tuán)。進(jìn)一步地，如本文所用的，其它部分是從烷基衍生的基團(tuán)，如烷氧基、烷?；?、鏈烯基、環(huán)烯基等，當(dāng)加上“低級(jí)”的修飾時(shí)，低級(jí)是指10個(gè)或更少的碳鏈。在下面的情況下，碳的最少數(shù)目大于1，例如鏈烯基(最少兩個(gè)碳原子)，環(huán)烷基(最少三個(gè)碳原子)，可以理解的是，“低級(jí)”是指至少是最小的數(shù)目的碳原子。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“取代的烷基”是指具有1-5個(gè)取代基，優(yōu)選1-3個(gè)取代基，并且優(yōu)選1-10個(gè)碳原子(“取代的低級(jí)烷基”)的烷基，所述的取代基選自下述基團(tuán)烷氧基、取代的烷氧基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、酰基、酰胺基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基?；?、氨基酰氧基、氧代酰胺基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代酮基、羧基、羧基烷基、硫醇、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、羥胺基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基、一或二-芳基氨基、一或二-(取代烷基)氨基、一或二-雜芳基氨基、一或二-雜環(huán)基氨基，和具有選白烷基、芳基、雜芳基、和雜環(huán)基的不同取代基的不對(duì)稱的二取代的胺。如本文所用的，其它部分具有的字頭“取代的”是指包括一個(gè)或多個(gè)上文所述的取代基。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“烷芳基”是指具有芳基取代基的烷基，通過(guò)烷基鍵合。術(shù)語(yǔ)“芳烷基”是指具有烷基取代基的芳基，通過(guò)芳基鍵合。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“烷氧基”是指基團(tuán)“烷基-O-”，其中的烷基如上文定義。優(yōu)選的烷氧基基團(tuán)包括實(shí)例甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1,2-二甲基丁氧基等。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”是指優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有2-6個(gè)碳原子，并且至少、和優(yōu)選有1-2個(gè)烯基不飽和鍵的烯基基團(tuán)，優(yōu)選的烯基基團(tuán)包括乙烯基(-CH=CH2)、正丙烯基(-CH2CH=CH2)、異丙烯基(-C(CH3)=CH2)等。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“炔基”是指優(yōu)選具有2-10個(gè)碳原子，更優(yōu)選具有2-6個(gè)碳原子，并且至少、和優(yōu)選有1-2個(gè)炔基不飽和鍵的炔基基團(tuán)。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“?；笔侵富鶊F(tuán)烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、環(huán)烷基-C(O)-、取代的環(huán)烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、雜芳基-C(O)-和雜環(huán)基-C(O)-，其中的烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基如本文定義。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“酰胺基”是指基團(tuán)-C(O)NRR，其中的R各自獨(dú)立地是氫、烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其中的烷基、取代的烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)基如本文定義。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“芳基”是指具有6-14個(gè)碳原子，和具有單環(huán)(如苯基)或多個(gè)稠合(condensed,fused)環(huán)(如萘基或蒽基)的不飽和芳族碳環(huán)基團(tuán)。優(yōu)選的芳基包括苯基、萘基等。除非對(duì)芳基取代基的定義另有說(shuō)明，這些芳基基團(tuán)可選擇地被1-5個(gè)取代基，優(yōu)選1-3個(gè)取代基所取代，所述的取代基選自下述基團(tuán)羥基、?；?、烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的鏈烯基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、酰氧基、酰胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨基酰氧基、氧基酰胺基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基、三鹵代甲基。優(yōu)選的取代基包括烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、三鹵代甲基和硫代烷氧基。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指具有3-12個(gè)碳原子，和具有單環(huán)或多個(gè)稠合環(huán)的環(huán)烷基基團(tuán)。這些環(huán)烷基基團(tuán)的實(shí)例包括單環(huán)結(jié)構(gòu)如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基等，或者多環(huán)結(jié)構(gòu)如金剛烷基等。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“鹵”或“鹵素”是指氟、氯、溴和碘，優(yōu)選氟或氯。
如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“雜芳基”是指具有1-15個(gè)碳原子和至少在一個(gè)環(huán)上(如果有一個(gè)以上的環(huán)時(shí))具有1-4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子的芳族碳環(huán)基團(tuán)。
除非對(duì)雜芳基取代基的定義另有說(shuō)明，這些雜芳基基團(tuán)可選擇地被1-5個(gè)取代基，優(yōu)選1-3個(gè)取代基所取代，所述的取代基選自下述基團(tuán)羥基、?；⑼榛?、烷氧基、鏈烯基、炔基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的鏈烯基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、酰氧基、酰胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨基酰氧基、氧基酰胺基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基和三鹵代甲基。優(yōu)選的取代基包括烷基、烷氧基、鹵素、氰基、硝基、三鹵代甲基和硫代烷氧基。這些雜芳基基團(tuán)可以是單環(huán)(例如吡啶基或呋喃基)，或是多個(gè)稠合環(huán)(如中氮茚基或苯并噻吩基)。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”是指具有1-15個(gè)碳原子，和在環(huán)內(nèi)具有1-4個(gè)選自氮、硫和氧的雜原子的單環(huán)或多個(gè)稠合環(huán)的一價(jià)飽和與不飽和基團(tuán)。
除非對(duì)這些雜環(huán)取代基的定義另有指示，這些雜環(huán)基團(tuán)可選擇地具有1-5個(gè)選自下述的取代基烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、芳基、芳氧基、鹵素、硝基、雜芳基、硫醇基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、三鹵代甲基等。這些雜環(huán)基可以是單環(huán)或多個(gè)稠合環(huán)。
當(dāng)然，可以理解的是，就含有一個(gè)或多個(gè)取代基的任一上述基團(tuán)而言，這些基團(tuán)都不含有在立體結(jié)構(gòu)上是不實(shí)際的，和/或在合成上是不可能的取代基或取代基類型。
如本文所用的“羧酸衍生物”和“磺酸衍生物”是指-C(X)R1、-C(X)-N(R1)2、-C(X)OR1、-C(X)SR1、-SOnR1、-SOnOR1、-SOnSR1或-SOn-N(R1)2，式中的X是O、S和NR1，其中R1是氫、烷基、取代的烷基或芳基，及其活性衍生物，例如，酸酐、酯和鹵化物，如氯化物、溴化物和碘化物，采用標(biāo)準(zhǔn)的偶合方法，可將它們與羧酸或磺酸的衍生物偶合，成為5′-胺。
“藥用鹽”是指化合物式ⅠA、ⅠB或ⅠC的藥學(xué)上可接受的鹽，這些鹽是由本領(lǐng)域已知的各種有機(jī)和無(wú)機(jī)的平衡離子衍生得到的鹽，例如僅作為實(shí)例的包括鈉、鉀、鈣、鎂、銨、四烷基銨等；以及當(dāng)分子中含有堿性官能團(tuán)時(shí)，有機(jī)或無(wú)機(jī)酸的鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、馬來(lái)酸鹽、草酸鹽等都可以作為藥學(xué)上可接受的鹽。
術(shù)語(yǔ)“保護(hù)基團(tuán)”或“封閉基團(tuán)”是指任何下述基團(tuán)其中當(dāng)其鍵合于本發(fā)明化合物(包括其中間體如氨基內(nèi)酰胺類，氨基內(nèi)酯類等)的一個(gè)或多個(gè)羥基、氨基或羧基基團(tuán)時(shí)，能夠防止這些基團(tuán)與發(fā)生反應(yīng)，以及可通過(guò)常規(guī)的化學(xué)方法或酶方法重新恢復(fù)成羥基、氨基或羧基。優(yōu)選的可除去的氨基保護(hù)基團(tuán)例如包括是下述常用的基團(tuán)叔丁氧基羰基(t-BOC)、芐氧羰基(CBZ)等，這些基團(tuán)可用與產(chǎn)品的性質(zhì)相容的條件除去。
本文使用了下述縮寫(xiě)，縮略語(yǔ)[125I]AB-MECA,[125I]N6-(4-氨基-3-碘代芐基)腺苷-5′N(xiāo)-甲基糖醛酰胺；(R)-PIA,(R)-N6-(苯基異丙基)腺苷；DMSO，二甲亞砜；I-AB-MECA,[125I]N6-(4-氨基-3-碘代芐基)腺苷-5′N(xiāo)-甲基糖醛酰胺；IB-MECA，[125I]N6-(3-碘代芐基)腺苷-5′N(xiāo)-甲基糖醛酰胺；Ki，抑制平衡常數(shù)；NECA,5′N(xiāo)-乙基甲酰胺基腺苷；THF，四氫呋喃；Tris，三(羥甲基)氨基甲烷?；衔锏闹苽浠瘜W(xué)領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員知道，在進(jìn)行特定的反應(yīng)或系列反應(yīng)之前，通常必須把反應(yīng)活性和片段的官能團(tuán)保護(hù)起來(lái)，在最后的反應(yīng)完成之后，使它們恢復(fù)到最初的形式。一般是把它們轉(zhuǎn)化成相對(duì)穩(wěn)定的衍生物。例如，可以把羥基轉(zhuǎn)化成醚，將氨基轉(zhuǎn)化成酰胺或氨基甲酸酯。保護(hù)或脫保護(hù)的方法，也就是所謂的“封閉”和“解封”的方法在本領(lǐng)域是已知的和廣泛應(yīng)用的，例如參見(jiàn)T.Green,Protective Groupsin Organic Synthesis,John Wiley,New York(1981)或Protective Groupsin Organic Chemistry,Ed.J.F.W.McOmie,Plenum Press,London(1973)。
優(yōu)選用已知的化學(xué)方法使下式Ⅱ化合物與適當(dāng)?shù)聂人峄蚧撬嵫苌锓磻?yīng)制備本發(fā)明化合物， 式Ⅱ化合物可按照下述反應(yīng)流程Ⅰ和Ⅱ制備，其中的R3是呋喃。
試劑A)原甲酸三乙酯；B)2-糠酸酰肼，2-甲氧基乙醇；C)PhOPh,260℃；D)10％HCl，回流；E)氨腈，pTsOH,N-甲基吡咯烷酮。流程Ⅱ 試劑F)糠酸酰肼，二苯醚；E)氨腈，pTsOH,N-甲基吡咯烷酮。
式Ⅰ化合物可通過(guò)反應(yīng)流程Ⅰ所述的間接方法制備，或者通過(guò)反應(yīng)流程Ⅱ所述的直接方法制備。兩種流程的適當(dāng)原料是式Ⅲ的雜環(huán)的鄰-氨基腈化物，它們通?？砂凑誆.C.Taylor和A.McKillop(Vol,7Advances in Organic Chemistry,Interscience出版，1970)的書(shū)中的文獻(xiàn)和報(bào)告所描述的已知方法制備。 通過(guò)與過(guò)量的原甲酸三乙酯在回流溫度下反應(yīng)8-10小時(shí)，將鄰-氨基腈化物Ⅲ轉(zhuǎn)化成式Ⅳ的亞氨酸酯。如對(duì)反應(yīng)的粗產(chǎn)物進(jìn)行IR和1H NMR分析所證明的，在蒸發(fā)除原甲酸三乙酯以后，該反應(yīng)可以高產(chǎn)率得到基本純的亞氨酸酯Ⅳ。 然后，使式Ⅳ的亞氨酸酯進(jìn)行下述兩步反應(yīng)，以高產(chǎn)率得到式Ⅵ的三環(huán)結(jié)構(gòu)。 反應(yīng)順序包括a)在2-甲基乙醇溶液中與2-糠酸酰肼在回流溫度下反應(yīng)8-10小時(shí)，得到中間體化合物V；b)后者經(jīng)過(guò)熱環(huán)合得到相應(yīng)的式Ⅵ化合物，反應(yīng)在二苯醚中于260℃進(jìn)行0.5-1小時(shí)。
然后，三環(huán)化合物Ⅵ用HCl回流水解1-3小時(shí)得到三唑Ⅶ，最后，該化合物在N-甲基吡咯烷酮中和在對(duì)甲苯磺酸存在下與氨腈進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)成為所需要的化合物Ⅱ(反應(yīng)流程Ⅰ)。
在某些情況下，在二甲苯中加熱鄰-氨基腈化物Ⅲ和2-糠酸酰肼可直接得到三唑Ⅶ。然后如反應(yīng)流程Ⅱ環(huán)化三唑Ⅶ。在下面的流程Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ中，更詳細(xì)地描述了其中A為三唑環(huán)的式Ⅱ化合物的合成。
流程Ⅲ5-氨基-7-取代的-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的合成
流程Ⅳ5-氨基-8-取代的-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的合成 試劑A)糠酸酰肼，PhOPh,260℃；B)NH2CN,pTsOH,N-甲基吡咯烷酮。
流程Ⅴ5-氨基-9-取代的-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶衍生物的合成 試劑A)糠酸酰肼，PhOPh,260℃；B)NH2CN,pTsOH,N-甲基吡咯烷酮。
最后，使含有5-氨基的化合物Ⅱ與羧酸、磺酸、活化的羧酸、活化的磺酸、硫代羧酸、活化是硫代羧酸等進(jìn)行反應(yīng)，以形成所需的化合物?；罨聂人岚｛u、酯、酸酐和其它與胺反應(yīng)形成酰胺的已知衍生物?；罨幕撬岚ɑ酋０啡缁酋Ｂ?。
在各種情況下，有必要使用活化的羧酸和磺酸衍生物。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的偶合化學(xué)方法，酸本身可以與胺偶合，例如，用二環(huán)己基二酰亞胺(DCI)和其它常用的偶合劑偶合。形成酰胺鍵的適當(dāng)偶合條件是肽合成領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的。
一般來(lái)說(shuō)，在用3-氰基-2-氨基吡唑作為原料時(shí)，上述化學(xué)方法可用來(lái)制備8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶。在非質(zhì)子極性溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)中，使3-氰基-2-氨基吡唑和烷基鹵(RX)反應(yīng)，可在一個(gè)環(huán)氮原子上引入R基團(tuán)。所得到的化合物與原甲酸三乙酯一起回流可得到亞胺乙酯，使其與糠酸酰肼反應(yīng)，優(yōu)選用Dean-Stark阱共沸，以除去反應(yīng)所形成的水，從而得到8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶。該產(chǎn)物用色譜純化，例如以(EtOAc/己烷1∶1)洗脫，用于后續(xù)的化學(xué)反應(yīng)。
所述反應(yīng)的產(chǎn)物與適當(dāng)?shù)乃崛鏗Cl回流反應(yīng)，接著在溶劑如N-甲基吡咯烷酮中，以對(duì)甲苯磺酸為催化劑，在提高的溫度下，使其與氨腈進(jìn)行反應(yīng)。得到5-氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶。
這些氨基取代的化合物可與適當(dāng)?shù)漠惽杷狨シ磻?yīng)形成脲化合物，與活化羧酸如酰鹵反應(yīng)得到酰胺，與活化的磺酸如磺酰鹵反應(yīng)形成磺酰胺，或與其它的羧酸或磺酸衍生物反應(yīng)形成其它所需的化合物。
三唑-三唑-嘧啶化合物可用類似的化學(xué)方法制備，但是要用適當(dāng)?shù)墓倌芑寞B氮化物作原料，使疊氮化物和H2NC(O)CH2CN反應(yīng)，形成起始的雜環(huán)，接著酰胺基與脫水劑如POCl3反應(yīng)，形成腈化物。所得到的氰基-氨基三唑可以與上面討論的3-氰基-2-氨基吡唑同樣的方式進(jìn)行反應(yīng)，制備三唑-三唑-嘧啶。放射性標(biāo)記類似物的合成所述化合物可以用任何適當(dāng)?shù)姆派湫詷?biāo)記物標(biāo)記。適當(dāng)?shù)姆派湫詷?biāo)記物的實(shí)例包括3H和14C，并可使用任何藥動(dòng)學(xué)研究中常用的基本無(wú)毒的放射性標(biāo)記物。在有機(jī)化合物中引入放射性標(biāo)記物的方法是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的。
當(dāng)化合物是5-[[(取代的苯基)氨基]羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶化合物或5-氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶化合物時(shí)，引入釧標(biāo)記是相當(dāng)簡(jiǎn)單的。
在一個(gè)實(shí)施方案中，適當(dāng)?shù)脑鲜瞧渲?-位的(芳)烷基基團(tuán)包括有雙鍵。在適當(dāng)催化劑入鈀-碳或其它的氫化催化劑存在下，使該雙鍵與氚進(jìn)行反應(yīng)。
例如，通過(guò)使5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-(1-丙烯基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物101)的雙鍵和氫進(jìn)行加成反應(yīng)可制備5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-(1,2-二(三氚丙基))-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物102)。下文將就化合物102對(duì)JURKAT癌細(xì)胞的鍵合親和力進(jìn)行討論。
另外，和5-氨基化合物反應(yīng)以形成5-位的酰胺、脲或其它基團(tuán)的化合物之中可存在氚標(biāo)記。例如，用于制備本文所述5-氨基羰基氨基化合物的異氰酸酯可以有氚標(biāo)記或其它放射性標(biāo)記，因此，可以很容易地將它們引入最終產(chǎn)物。
在另一實(shí)施方案中，當(dāng)環(huán)系在一起時(shí)，可以把放射性標(biāo)記引入分子之中。如上所述，關(guān)于式Ⅱ化合物的合成，將各種式Ⅵ的三環(huán)化合物用鹽酸水解，可得到式Ⅶ的三唑，如反應(yīng)流程Ⅰ所述，在對(duì)甲苯磺酸存在下，使該化合物和氨腈回流反應(yīng)，進(jìn)行環(huán)化。使用14C標(biāo)記的氨腈，在合成的此階段，很容易引入14C標(biāo)記。
例如，在和5-氨基基團(tuán)反應(yīng)的芳族化合物中引入放射活性的碘可制備碘化的化合物。在芳環(huán)上引入碘對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的。的芳族化合物上引入碘原子是很簡(jiǎn)單的，所述的芳族化合物用于和5-氨基基團(tuán)反應(yīng)以制備本發(fā)明化合物。
相應(yīng)的，就本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，很容易制備適當(dāng)?shù)姆派湫詷?biāo)記類似物。熒光標(biāo)記類似物的合成和帶有放射性標(biāo)記化合物一樣，熒光標(biāo)記化合物的合成是相對(duì)簡(jiǎn)單的。雖然熒光基團(tuán)存在于R3-位置液是可行的，但優(yōu)選熒光基團(tuán)存在于R2-位置上。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的一個(gè)或多個(gè)熒光基團(tuán)包括可與呋喃環(huán)連接的R3位置。另外，也可利用其它的芳族環(huán)。熒光標(biāo)記是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，并且用已知方法很容易將其連接于本文所述的化合物上。應(yīng)用化合物的方法本發(fā)明化合物可用于A3受體的激動(dòng)劑和拮抗劑的所有癥狀，包括●治療高血壓；●治療炎性疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和牛皮癬；●治療變應(yīng)性疾病，如花粉哮喘和過(guò)敏性鼻炎；●巨細(xì)胞脫粒；●抗腫瘤劑；●治療心臟低氧；和●防止大腦缺血；
以及如Jacobson,TIPS,1998年5月，pp.185-191中所述，本文引用該文獻(xiàn)的內(nèi)容作為參考。
這些化合物一種優(yōu)選的應(yīng)用是檢測(cè)和/或治療癌癥。如下文所討論的，已經(jīng)指出腫瘤細(xì)胞用A3受體表示。在細(xì)胞沒(méi)有得到適當(dāng)?shù)难汗?yīng)時(shí)，人們確信A3受體能夠保護(hù)細(xì)胞不受缺血的損害。有幾種可買(mǎi)到的藥物以及最近新開(kāi)發(fā)的藥物適用于抑制VEGF表達(dá)，它能夠切斷腫瘤細(xì)胞的血液供應(yīng)。但是，在細(xì)胞沒(méi)有得到適當(dāng)?shù)难汗?yīng)時(shí)，腺苷A3受體的興奮可產(chǎn)生保護(hù)作用，防止腫瘤細(xì)胞死亡。通過(guò)和抗-VEGF或其它抗血管生成化合物一起施用這些受體的拮抗劑，可以切斷腫瘤細(xì)胞新的血液供應(yīng)，并失去A3受體興奮對(duì)缺血損害的保護(hù)作用。
本發(fā)明化合物可通過(guò)任何藥物可接受的途徑施用于患者，適當(dāng)?shù)慕o藥途徑包括口服、直腸、局部或非腸道(包括皮下、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))給藥，口服和非腸道給藥是優(yōu)選的。
作為腺苷受體調(diào)節(jié)劑使用時(shí)所需化合物的量當(dāng)然可以隨需要治療的哺乳動(dòng)物個(gè)體而變化，而且基本是由醫(yī)學(xué)或志愿開(kāi)業(yè)醫(yī)師進(jìn)行選擇。應(yīng)該考慮的因素包括需要處理的癥狀，給藥的途徑，制劑的性質(zhì)，哺乳動(dòng)物的體重、表面積、年齡和基本條件，和給藥的特定化合物。但是適當(dāng)?shù)挠行┝渴窃诿刻烀抗矬w重大約0.1μg/kg至大約10μg/kg的范圍內(nèi)，優(yōu)選在每天每公斤體重大約1mg/kg至大約3mg/kg的范圍內(nèi)。
每天的總劑量可以是一次劑量，也可以是多次的劑量，例如每天給藥2-6次，或在選定的時(shí)間內(nèi)通過(guò)靜脈輸注。上文所述劑量范圍以上或以下均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)，在需要和必要時(shí)可給個(gè)別患者施用所述范圍以上或以下的劑量。例如，對(duì)于一75公斤的哺乳動(dòng)物，每天的劑量范圍可以是大約75mg至大約220mg，典型的劑量可以是每天大約150mg。如果選擇的處方是多次劑量，典型的是每天分三次給藥50mg化合物進(jìn)行治療。
在另一實(shí)施方案中，為了進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定有或沒(méi)有表達(dá)為A3受體的癌性腫瘤細(xì)胞，可給患者施用放射性標(biāo)記的本發(fā)明化合物。將本文所述的對(duì)A3受體亞型具有相當(dāng)高親和力的化合物施用于患者，在該化合物與腫瘤細(xì)胞中存在的A3受體結(jié)合以后，他測(cè)定放射性標(biāo)記化合物所處的位置即可確定化合物的位置。測(cè)定放射性標(biāo)記化合物的位置和劑量的儀器是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的。
在外科手術(shù)中應(yīng)用放射性標(biāo)記和或熒光標(biāo)記化合物確定癌組織轉(zhuǎn)移也是有優(yōu)勢(shì)的。通常，外科需要確定癌組織確實(shí)轉(zhuǎn)移了。可在手術(shù)前或手術(shù)之中將放射性標(biāo)記或熒光標(biāo)記的化合物施用于患者，它們將會(huì)和患者的癌細(xì)胞結(jié)合。給藥的時(shí)間可以是變化的，在其他因素中它取決于特定腫瘤細(xì)胞對(duì)使用的特定化合物的吸收，以及腫瘤在體內(nèi)的位置。手術(shù)后只需要進(jìn)行簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，以便在取出腫瘤后測(cè)定殘留的癌細(xì)胞。應(yīng)用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的分析儀器，通過(guò)測(cè)定手術(shù)部位的熒光或放射性可確定是否存在殘留的癌細(xì)胞。
癌細(xì)胞的離體測(cè)定可通過(guò)下述方法進(jìn)行將化合物施用于處于細(xì)胞培養(yǎng)介質(zhì)的細(xì)胞懸浮液中，使化合物與癌細(xì)胞的腺苷A3受體結(jié)合，并測(cè)定標(biāo)記物。制劑上述化合物優(yōu)選以含有活性化合物的制劑形式給藥，即將式Ⅰ化合物和用藥模式的可接受載體一起給藥。適當(dāng)?shù)乃帉W(xué)上可接受的載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。
組合物可選擇地包括其它治療用活性組分，如抗抗病毒劑、抗腫瘤劑、抗菌劑、抗感染劑、鎮(zhèn)痛劑和免疫抑制劑。在與其它制劑組分相容的意義上，載體必須是藥學(xué)上可接受的，并且對(duì)其接受者不能有害。
制劑中可包括適合于口服、直腸、局部或或非腸道(包括皮下、肌內(nèi)和靜脈內(nèi))給藥的載體，優(yōu)選的載體是適合于口或非腸道給藥的載體。
適于非腸道給藥的制劑通常包括活性化合物的無(wú)菌含水制劑，優(yōu)選與接受者等滲的制劑。這些制劑通常含有蒸餾水，在蒸餾水或鹽水中含有5％葡萄糖。有用的制劑也可以包括含有式(Ⅰ)化合物的濃溶液或固體，然后用適當(dāng)?shù)娜軇┫♂尩玫缴鲜鲞m于非腸道給藥的溶液。
對(duì)于腸道給藥，可將本發(fā)明化合物摻入惰性載體使之成為不連續(xù)的單元，例如膠囊、小袋、片劑或錠劑，各種制劑都含有預(yù)訂量的活性化合物；如粉劑或顆粒劑；或是在含水或非水懸浮液或溶液中的制劑，如糖漿、酏劑、乳劑或飲劑。適當(dāng)?shù)妮d體可以是淀粉或糖，并可包括潤(rùn)滑劑、芳香劑、粘合劑和其它相同性質(zhì)的材料。
片劑可采用壓制或模具成型的方法制備，可選擇的有一種或多種附加成分。壓制的片劑可采用適當(dāng)?shù)臋C(jī)器，將自由流動(dòng)形式的活性化合物如粉末或顆粒進(jìn)行壓制，其中所述的活性化合物中還可選擇的有一種或多種附加成分，如粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、表面活性劑或分散劑。壓模制備的片劑可用適當(dāng)?shù)臋C(jī)器，將含有任何適當(dāng)載體的活性化合物進(jìn)行模具成型來(lái)制備。
糖漿或懸浮液的制備是將活性化合物加入濃的、糖如蔗糖的水溶液，其中還可以加入任何附加成分。這些附加成分可包括芳香劑、能延緩糖結(jié)晶的試劑或能增加任何其它成分溶解度的試劑，例如多元醇，如甘油或山梨醇。
本發(fā)明化合物也可以局部應(yīng)用的溶液、軟膏、霜?jiǎng)?、膠狀物、洗劑或聚合物(例如PluronicTM，BASF)的形式局部給藥，它們可用藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。除了溶液、軟膏、霜?jiǎng)?、膠狀物、洗劑或聚合物基制劑和活性成分以外，這些局部給藥制劑還可以含有防腐劑、香味劑和其它活性藥劑。
直腸給藥的制劑可以為含有常規(guī)載體如作為栓劑基質(zhì)的可可脂或Witepsol S55(Dynamite Nobel Chemical，Germany的注冊(cè)商標(biāo))。
另外，本發(fā)明化合物還可以脂質(zhì)體和微球(或微粒)的形式給藥。給患者使用的脂質(zhì)體和微球可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。這里引用US專利4,789,743的內(nèi)容作為參考，其中描述了使脂質(zhì)體成膠囊的生物材料。所述的材料基本上可溶解于水溶液，必要時(shí)，加入表面活性劑的同時(shí)可加入磷脂和類脂物，以及在需要時(shí)加入鈄析或超聲處理的材料。關(guān)于已知方法的綜述見(jiàn)G.Gregoriadis，第十四章，“Liposomes”,Drug Carries in Biology and Medicine，pp.287-341(Academic Press,1979)。聚合物和蛋白質(zhì)形成的微球是本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的，并可制備用來(lái)經(jīng)過(guò)胃腸道直接進(jìn)入血流。另外，也可把本發(fā)明化合物摻入從數(shù)天至數(shù)月的一定時(shí)間范圍內(nèi)緩慢釋放的微球、微球的組合體。例如。參見(jiàn)US專利4,906,474、4,925,673和3,625,214，本文引用所述的的內(nèi)容作為參考。
優(yōu)選的微粒是用生物可降解的聚合物如聚乙醇酸交酯、聚交酯和它們的共聚物。根據(jù)各種因素，包括所需的藥物釋放速度和所需的劑量，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員很容易確定適當(dāng)?shù)妮d體系統(tǒng)。
制劑通常以單位劑量的形式存在，并可以藥學(xué)領(lǐng)域已知的方法制備。所有的方法都包括引入活性化合物，使其與載體結(jié)合的階段，所述的載體由一種或多種附加成分構(gòu)成。一般來(lái)說(shuō)，制劑的制備是把活性化合物均勻地和直接地與液體載體或精細(xì)分散的固體載體結(jié)合，然后，將產(chǎn)品加工成形為所需的單位劑量形式。
除了上述的成分以外，制劑中還可進(jìn)一步包括一種或多種其它藥學(xué)制劑領(lǐng)域常用的選擇性的附加成分，如稀釋劑、緩沖劑、調(diào)味劑、粘合劑、增稠劑、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、防腐劑(包括抗氧化劑)等?；衔锘钚猿潭鹊臏y(cè)定僅用下述實(shí)驗(yàn)中的任一常規(guī)實(shí)驗(yàn)就可容易地測(cè)定本發(fā)明化合物的活性。大鼠的A1和A2A腺苷受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)?zāi)さ闹苽鋵⑿坌訵istar大鼠(200-250g)去頭，在冰中解剖全腦(微腦干、紋狀體和小腦)。在Polytron(第5檔)于20體積的50mM Tris-HCl,pH7.4破碎腦組織。然后勻漿在48,000g離心10分鐘，小球懸浮于Tris-HCl，其中含有2IU/ml腺苷脫氨酶，Ⅵ型(Sigma Chemical Company,St.Louis,Mo.,USA)。于37℃孵化30分鐘后，離心膜，將小球儲(chǔ)存在-70℃。紋狀體組織在Polytron于25體積的50mM Tris-HCl緩沖溶液中勻漿，所述的緩沖溶液中含有10mM MgCl2,pH7.4。然后勻漿于4℃在48,000g離心10分鐘，并懸浮于含有2IU/ml腺苷脫氨酶的Tris-HCl緩沖溶液中。于37℃孵化30分鐘后，離心膜，并將小球儲(chǔ)存在-70℃。放射性配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)[3H]-DPCPX(1,3-二丙基-8-環(huán)戊基黃嘌呤)和大鼠腦膜的結(jié)合基本上可按照Bruns等人，Proc.NatlAcad.Sci.77,5547-5551,1980所述的方法進(jìn)行。替代實(shí)驗(yàn)可在0.25ml含有1nM[3H]-DPCPX、100μl大鼠腦的稀釋膜(每次實(shí)驗(yàn)100μg蛋白質(zhì))，以及至少6-8個(gè)不同濃度的試驗(yàn)化合物。在有10μM CHA(N6環(huán)己基腺苷)存在的情況下可測(cè)定非特異性結(jié)合，它常?！芸偨Y(jié)合量的10％。在25℃典型的孵化時(shí)間是120分鐘。-SCH 58261(5-氨基-7-(2-苯基乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶)和大鼠紋狀體膜(每次實(shí)驗(yàn)100μg蛋白質(zhì))的結(jié)合可按照Z(yǔ)occhi等人，J.Pharm.and Exper.Ther.276:398-404(1996)所述的方法進(jìn)行。在競(jìng)爭(zhēng)研究中，至少使用6-8個(gè)不同濃度的試驗(yàn)化合物。在有50μM的NECA(5′-(N-乙基羧酰胺基)腺苷)存在的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合。在25℃孵化時(shí)間是60分鐘。
用Brandel細(xì)胞收集器(Gaithesburg,MD,USA)，通過(guò)GF/B玻璃過(guò)濾器過(guò)濾試驗(yàn)混合物可分離結(jié)合的和游離的放射性。培養(yǎng)的混合物可用3ml冰冷卻的孵化緩沖溶液稀釋，快速真空過(guò)濾，過(guò)濾器用3ml孵化用緩沖溶液洗滌3次。測(cè)定過(guò)濾器上的結(jié)合的放射性，例如用液體閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定。可以測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，例如，按照Bio-Rad方法(Bradford,Anal.Biochem.72:248(1976))，以牛清蛋白為參考標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。人體克隆A3腺苷受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)按照Salvatore等人，Proc.Natl.Acad.Sci.90:10365-10369(1993)所述的方法進(jìn)行結(jié)合實(shí)驗(yàn)。在飽和度研究中，由HEK-293細(xì)胞，經(jīng)人體A3腺苷受體的重組體(Research BiochemicalInternational,Natick,MA,USA)轉(zhuǎn)染的一份膜(8mg蛋白質(zhì)/ml)，用10-12種不同濃度的，在0.1-5nM范圍內(nèi)的[125I]AB-MECA孵化。競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)可進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，在含有0.3nM [125I]AB-MECA、50mM Tris-HCl緩沖溶液、10mM MgCl2,pH7.4和20μl稀釋膜(12.4mg蛋白質(zhì)/ml)的試管中進(jìn)行，最終體積為100μl，并且至少有6-8個(gè)不同濃度的測(cè)定配體。
按照前時(shí)程(previous time-course)實(shí)驗(yàn)，在37℃孵化時(shí)間是60分鐘。用Brandel細(xì)胞收集器，通過(guò)Whatman GF/B玻璃過(guò)濾器過(guò)濾試驗(yàn)混合物可分離結(jié)合的和游離的放射性。在有50μM R-PIA存在的情況下可測(cè)定非特異性結(jié)合，并且大約是總結(jié)合量的30％。培養(yǎng)的混合物可用3ml冰冷卻的孵化緩沖溶液稀釋，快速真空過(guò)濾，過(guò)濾器用3ml孵化用緩沖溶液洗滌3次。用Beckman gamma 5500B γ計(jì)數(shù)器測(cè)定過(guò)濾器上結(jié)合的放射性。按照Bio-Rad方法(3)可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，以牛清蛋白為參考標(biāo)準(zhǔn)。數(shù)據(jù)分析按照Cheng & Prusoff公式(Cheng和Prusoff，Biochem.Pharmacol.22:3099-3018(1973))，由IC50可計(jì)算出抑制結(jié)合常數(shù)Ki,Ki=IC50/(1+[C*]/KD*)，其中[C*]是放射性配體的濃度，KD*是解離常數(shù)。
加權(quán)非線形最小二乘方曲線結(jié)合程序LIGAND(Munson和Rodbard，Anal.Biochem.107:220-239(1990))可用于飽和度和抑制率實(shí)驗(yàn)的計(jì)算機(jī)分析。數(shù)據(jù)以幾何平均值表示，括號(hào)內(nèi)的置信度在95％或99％。
反應(yīng)流程Ⅵ制備8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物18-25)的一般方法試劑a)NaH,DMF,RX；b)HC(OEt)3，回流；c)2-糠酸酰肼，MeO(CH2)2OH；d)Ph2O,260℃，快速色譜 在制備化合物18-25時(shí)，將1(10mmol)的40ml冷卻至0℃的DMF溶液用氫化鈉處理，反應(yīng)是在10分鐘內(nèi)將氫化鈉分批加入。45分鐘后，加入適當(dāng)?shù)?芳)烷基鹵化物(12mmol)，將反應(yīng)混合物加熱至25℃，并攪拌3-5小時(shí)(TLC:EtOAc 1∶1)。加水(80ml)使反應(yīng)停止，水層用乙酸乙酯(5×25ml)萃取，合并有機(jī)層，硫酸鈉干燥，過(guò)濾和減壓濃縮，得到烷基化的吡唑(2-9)，是N1和N2異構(gòu)體(比例大約是1∶4)未分離的混合物。然后將此未分離的N1和N2-取代的-4-氰基-5-氨基吡唑(2-9)溶于原甲酸三乙酯(60ml)，該溶液在氮?dú)庵谢亓?小時(shí)。真空除去溶劑，由油狀殘余物由亞胺酸酯(10-17)構(gòu)成，將其溶于2-甲氧基乙醇(50ml)，加入2-糠酸酰肼(13mmol)?；亓骰旌衔?-10小時(shí)，然后冷卻，減壓除去溶劑，環(huán)化得到的黑色油狀殘余物，在二苯醚(50ml)中，于260℃進(jìn)一步進(jìn)行其它純化步驟，用Dean-Stark蒸餾器進(jìn)行共沸蒸餾以除去反應(yīng)所產(chǎn)生的水。1.5小時(shí)后，將混合物傾入己烷(300ml)中，冷卻。過(guò)濾出沉淀，用色譜純化(乙酸乙酯/己烷1∶1)。按照此方法，以好的總產(chǎn)率得到主要產(chǎn)物(N8烷基化)(18-25)。
按照上述的一般方法制備了下述化合物8-甲基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物18)產(chǎn)率45％；黃色固體，M.P.155-156℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1615,1510cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:4.1(s,1H)；6.32(m,1H)；7.25(m,1H)；8.06(m,1H)；8.86(s,1H)；9.38(s,1H)。
8-乙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物19)產(chǎn)率50％；淺黃色固體，M.P.188-189℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1620,1500cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:1.67(t,2H,J=7)；4.53(q,2H,J=7)；6.59(m,1H)；7.23(m,1H)；7.64(s,1H)；8.34(s,1H)；9.10(s,1H)。
8-丙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物20)產(chǎn)率60％；黃色固體，M.P.189-190℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1600,1505cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:0.98(t,2H,J=7)；2.03-2.10(m,2H)；4.41(q,2H,J=7)；6.60(m,1H)；7.24(m,1H)；7.64(s,1H)；8.32(s,1H)；9.10(s,1H)。
8-丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物21)產(chǎn)率50％；淺黃色固體，M.P.245-247℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1610,1500cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:0.9(m,3H)；1.3(m,2H)；1.9(m,2H)；4.5(t,2H,J=7.2)；6.2(m,1H)；7.3(m,1H)；8.0(m,1H)；8.9(s,1H)；9.4(s,1H)。
8-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物22)產(chǎn)率54％；淺黃色固體，M.P.235-237℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1635,1510,1450cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:1.0(d,6H,J=6.2)；1.5-1.9(m,3H)；4.6(t,2H,J=7.4)；6.6(m,1H)；7.3(m,1H)；7.7(m,1H)；8.8(s,1H)；9.1(s,1H)。
8-(2-異戊烯基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物23)產(chǎn)率48％；黃色固體，M.P.210-212℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1625,1500,1430cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:1.79(s,3H)；1.87(s,3H)；5.05(d,2H,J=6)；5.55-5.63(m,1H)；6.60(m,1H)；7.24(m,1H)；7.64(s,1H)；8.34(s,1H)；9.10(s,1H)。
8-(2-苯乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物24)產(chǎn)率56％；M.P.268-270℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1660,1510,1450cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:3.32(t,2H,J=6.7)；4.72(t,2H,J=6.7)；6.73(s,1H)；7.23(m,5H)；7.95(s,1H)；8.8(s,1H)；9.41(s,1H)。Anal.(C18H14N6O)C,H,N.
8-(3-苯丙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物25)產(chǎn)率63％；黃色固體，M.P.165-166℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):1630,1500,1440cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:2.34-2.48(m,2H)；2.67(t,3H,J=7.5)；4.43(t,2H,J=7.5)；6.61(m,1H)；7.16-7.32(m,6H)；7.64(d,1H,J=2)；8.29(s,1H)；9.02(s,1H)。實(shí)施例25-氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物33-40)的制備按照下述流程Ⅶ所述的合成路線制備5-氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶。 反應(yīng)流程Ⅶ制備5-氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物33-40)的一般方法試劑a)HCl，回流；b)NH2CN,1-甲基-2-吡咯烷酮，pTsOH,140℃在制備化合物33-40時(shí)，將三唑-嘧啶(18-25)(10mmol)的10％鹽酸水溶液(50ml)回流3小時(shí)。然后冷卻溶液，于0℃用飽和碳酸氫鈉水溶液中和?；衔?26-33)用乙酸乙酯(3×20ml)萃取，有機(jī)層用硫酸鈉干燥，真空濃縮。把得到粗產(chǎn)物胺(26-33)溶于N-甲基吡咯烷酮(40ml)，加入氨腈(60mmol)和對(duì)甲苯磺酸(15mmol)，混合物于160℃加熱4小時(shí)。然后再加入氨腈(60mmol)，溶液加熱過(guò)夜。然后將溶液用乙酸乙酯(80ml)稀釋，過(guò)濾沉淀(過(guò)量的氨腈)；減壓濃縮濾液，用水洗滌(3×30ml)。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)，殘余物用色譜純化(乙酸乙酯/輕石油醚2∶1)，得到所需產(chǎn)物(34-41)固體。
按照上述的一般方法制備了下述化合物5-氨基-8-甲基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物34)產(chǎn)率53％；黃色固體，M.P.167-168℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3500-2950,1680,1645,1610,1560,1455cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:4.12(s,3H)；6.70(m,1H)；6.99(bs,2H)；7.18(m,1H)；7.81(s,1H)；8.42(s,1H)。
5-氨基-8-乙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物35)產(chǎn)率65％；黃色固體，M.P.249-250℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3430-2950,1680,1655,1620,1550,1450cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:1.46(t,2H,J=7)；4.30(d,2H,J=7)；6.72(m,1H)；7.18(m,1H)；7.93(bs,2H)；7.93(s,1H)；8.62(s,1H)。
5-氨基-8-丙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物36)產(chǎn)率57％；淺黃色固體，M.P.209-210℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3400-2900,1660,1645,1610,1545,1430cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:0.83(t,2H,J=7)；1.81-1.91(m,2H)；4.22(d,2H,J=7)；6.71(m,1H)；7.19(m,1H)；7.63(bs,2H)；7.93(s,1H)；8.61(5,1H)。
5-氨基-8-丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物37)產(chǎn)率47％；白色固體，M.P.200-203℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3500-2900,1685,1640,1620,1550,1450cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:0.9(t,3H)；1.2(m,2H)；1.8(m,2H)；4.2(t,2H)；6.7(m,1H)；7.2(m,2H)；7.6(s,1H)；8.0(s,1H)；8.6(s,1H)。
5-氨基-8-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物38)產(chǎn)率60％；灰白色固體，M.P.212-213℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3500-2850,1670,1650,1615,1560,1455cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:0.96(d,6H,J=6.4)；1.59(m,1H)；1.86(m,2H)；4.32(t,2H,J=6.4)；6.58(m,1H)；6.72(bs,2H)；7.21(d,1H,J=4.2)；7.63(d,1H,J=1.2)；8.10(s,1H)。
5-氨基-8-(2-異戊烯基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物39)產(chǎn)率58％；淺黃色固體，M.P.178-179℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3520-2950,1665,1640,1610,1555,1450cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.74(s,3H)；1.77(s,3H)；4.87(d,2H,J=7)；5.43-5.46(m,1H)；6.72(m,1H)；7.18(m,1H)；7.62(bs,2H)；7.93(s,1H)；8.55(s,1H)。
5-氨基-8-(2-苯乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物40)產(chǎn)率45％；白色固體，M.P.183-185℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3500-2900,1670,1645,1620,1530,1455cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:3.21(t,2H,J=6.4)；4.53(t,2H,J=6.4)；6.7(s,1H)；7.1-7.4(m,6H),7.65(bs,2H)；7.93(s,1H)；8.45(s,1H)。
5-氨基-8-(3-苯丙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物41)產(chǎn)率57％；黃色固體，M.P.168-170℃(乙酸乙酯-輕石油醚)；IR(KBr):3510-2950,1665,1640,1615,1520,1455cm-1；1H NMR(DMSO d6)δ:2.14-2.21(m,2H)；2.54(t,2H,J=7)；4.29(t,2H,J=6.4)；6.71(s,1H)；7.14-7.32(m,6H)；7.64(bs,2H)；7.93(s,1H)；8.64(s,1H)。實(shí)施例35-[[(取代的苯基)氨基]羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物42-57)的制備按照下述流程Ⅷ所述的合成路線制備5-[[(取代的苯基)羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶。
反應(yīng)流程Ⅷ制備5-[[(取代的苯基)氨基]羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物42-57)的一般方法在制備化合物42-57時(shí)，將適當(dāng)?shù)陌坊衔?34-41)(10mmol)溶于新蒸餾的THF(15ml)，加入適當(dāng)?shù)漠惽杷狨?13mmol)，混合物在氬氣中回流18小時(shí)。然后減壓除去溶劑，殘余物用快速色譜純化(乙酸乙酯-輕石油醚4-6)，得到所需化合物42-57。
按照上述的一般方法制備了下述化合物5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-甲基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物42)產(chǎn)率98％；淺黃色固體，M.P.142-145℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3210-2930,1660,1630,1610,1500cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:4.21(s,3H)；6.60(m,1H)；7.11(d,1H,J=8)；7.13-7.28(m,2H)；7.55(d,1H,J=8)；7.65(s,1H)；7.78(d,1H,J=2)；8.22(s,1H)；8.61(bs,1H)；11.24(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-甲基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物43)產(chǎn)率99％；黃色固體，M.P.193-195℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3200-2900,1664,1625,1600,1500cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:3.81(s,3H)；4.20(s,3H)；6.61(m,1H)；6.85(d,2H,J=9)；7.26(m,1H)；7.55(d,2H,J=9)；7.65(s,1H)；8.21(s,1H)；8.59(bs,1H)；10.96(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-乙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物44)產(chǎn)率98％；淺黃色固體，M.P.204-205℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3220-2930,1660,1620,1600,1500cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.71(t,3H,J=7)；4.50(q,2H,J=7)；6.67(m,1H)；7.20(d,1H,J=8)；7.31(m,1H)；7.61(d,1H,J=8)；7.70(s,1H)；7.84(s,1H)；8.30(s,1H),8.67(bs,1H)；11.30(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-乙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物45)產(chǎn)率99％；淺黃色固體，M.P.200-201℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3250-2950,1665,1620,1610,1520cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.71(t,3H,J=7)；3.85(s,3H)；4.49(s,3H)；6.65(m,1H)；6.88(d,2H,J=9)；7.26(m,1H)；7.58(d,2H,J=9)；7.69(s,1H)；8.28(s,1H)；8.63(bs,1H)；10.99(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-丙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物46)產(chǎn)率95％；白色固體，M.P.138-139℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3210-2920,1655,161 5,1600,1510cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.71(t,3H,J=7)；2.04(m,2H)；4.36(q,2H,J=7)；6.62(m,1H)；7.12(d,1H,J=8)；7.27(m,1H)；7.56(d,1H,J=8)；7.66(s,1H)；7.80(s,1H)；8.24(s,1H)；8.62(bs,1H)；11.08(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-丙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物47)產(chǎn)率98％；淺黃色固體，M.P.146-148℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3230-2950,1660,1620,1600,1530cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:0.98(t,3H,J=7)；2.04-2.08(m,2H)；3.82(s,3H)；4.35(t,2H,J=7)；6.61(m,1H)；6.89(d,2H,J=9)；7.25(m,1H)；7.56(d,2H,J=9)；7.65(s,1H)；8.23(s,1H)；8.59(bs,1H)；10.95(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物48)產(chǎn)率97％；白色固體，M.P.210-212℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3240-2970,1650,1610,1510cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.00(t,3H,J=7)；1.39-1.41(m,2H)；1.99-2.03(m,2H)；4.41(q,2H,J=7)；6.63(m,1H)；7.14(d,1H,J=8)；7.29(m,1H)；7.56(d,1H,J=8)；7.67(s,1H)；7.80(s,1H)；8.25(s,1H)；8.63(bs,1H)；11.26(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物49)產(chǎn)率96％；白色固體，M.P.197-198℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3250-2960,1665,1610,1600,1520cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:0.98(t,3H,J=7)；1.38-1.42(m,2H),2.02-2.05(m,2H)；3.82(s,3H)；4.39(t,2H,J=7)；6.63(m,1H)；6.92(d,2H,J=9)；7.25(m,1H)；7.57(d,2H,J=9)；7.67(s,1H)；8.23(s,1H)；8.60(bs,1H)；10.95(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物50)產(chǎn)率97％；灰白色固體，M.P.199-200℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3230-2950,1655,1600,1510cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.01(d,6H,J=7.5)；1.49-1.51(m,1H)；1.88-2.03(m,2H),4.42(t,2H,J=7)；6.62(m,1H)；7.13(d,1H,J=8)；7.34(m,1H)；7.57(d,1H,J=8)；7.67(s,1H)；7.80(s,1H)；8.24(s,1H)；8.63(bs,1H)；11.25(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物51)產(chǎn)率98％；白色固體,M.P.192-193℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3230-2970,1660,1615,1600,1500cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:0.99(d,6H,J=7.5)；1.58-1.22(m,1H)；1.87-1.97(m,2H)；3.82(s,3H)；4.40(t,2H,J=7)；6.62(m,1H)；6.91(d,2H,J=9)；7.23(m,1H)；7.58(d,2H,J=9)；7.66(s,1H)；8.23(s,1H)；8.59(bs,1H)；10.94(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-(2-異戊烯基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物52)產(chǎn)率99％；白色固體，M.P.204-205℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3245-2960,1650,1600,1510cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.84(s,3H)；1.88(s,3H)；5.01(d,2H,J=8)；5.57(m,1H)；6.62(m,1H)；7.12(d,1H,J=8)；7.29(m,1H)；7.56(d,1H,J=8)；7.66(s,1H)；7.80(s,1H)；8.26(s,1H)；8.60(bs,1H)；11.26(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-(2-異戊烯基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物53)產(chǎn)率96％；淺黃色固體，M.P.198-199℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3235-2950,1665,1620,1600,1510cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:1.83(s,3H)；1.87(s,3H)；3.81(s,3H)；4.97(d,2H,J=7)；5.57(m,1H)；6.61(m,1H)；6.93(d,2H,J=9)；7.24(m,1H)；7.54(d,2H,J=9)；7.66(s,1H)；8.25(s,1H)；8.58(bs,1H)；10.96(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-(2-苯乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物54)產(chǎn)率98％；白色固體，M.P.1 86-187℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3250-2970,1660,1610,1515cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:3.33(t,2H,J=7)；4.62(t,2H,J=7)；6.60(m,1H)；7.19-7.35(m,7H)；7.57(d,1H,J=8)；7.61(s,1H)；7.81(s,1H)；7.89(s,1H)；8.63(bs,1H)；11.27(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-(2-苯乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物55)產(chǎn)率99％；白色固體，M.P.180-181℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3245-2960,1660,1615,1600,1500cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:3.42(t,2H,J=7)；3.82(s,3H)；4.60(t,2H,J=7)；6.60(m,1H)；6.93(d,2H,J=9)；7.09(m,2H)；7.20-7.28(m,4H)；7.56(d,2H,J=8)；7.60(s,1H)；7.89(s,1H)；8.59(bs,1H)；10.96(bs,1H)。
5-[[(3-氯苯基)氨基]羰基]氨基-8-(3-苯丙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物56)產(chǎn)率99％；淺黃色固體，M.P.183-184℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3245-2960,1665,1610,1515cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:2.46(m,2H)；2.73(t,2H,J=7)；4.43(t,2H,J=7)；6.66(m,1H)；7.19-7.40(m,8H)；7.59(d,1H,J=8)；7.64(s,1H)；7.85(m,1H)；8.25(s,1H)；8.67(bs,1H)；11.30(bs,1H)。
5-[[(4-甲氧基苯基)氨基]羰基]氨基-8-(3-苯丙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物57)產(chǎn)率98％；白色固體，M.P.174-175℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3240-2950,1665,1615,1600,1510cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:2.46(m,2H)；2.73(t,2H,J=7)；4.42(t,2H,J=7)；6.67(m,1H)；6.96(d,2H,J=9)；7.22-7.41(m,6H)；7.60(d,2H,J=8)；7.64(s,1H)；8.25(s,1H),8.65(bs,1H)；11.16(bs,1H)。實(shí)施例45-[(芐基)羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物58-59)的制備按照下述流程Ⅸ所述的合成路線制備5-[(芐基)羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶。
流程Ⅸ制備5-[(芐基)羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物58-59)的一般方法
在制備化合物58-59時(shí)，將適當(dāng)?shù)陌坊衔?38或41)(10mmol)溶于新蒸餾的THF(15ml)，加入適當(dāng)?shù)聂弱｛u(13mmol)和三乙胺(13mmol)?；旌衔镌跉鍤庵谢亓?8小時(shí)。然后減壓除去溶劑，殘余物溶于乙酸乙酯(30ml)，用水(15ml)洗滌二次。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，減壓濃縮。殘余物用快速色譜純化(乙酸乙酯-輕石油醚4∶6)，得到所需化合物58和59。
按照上述的一般方法制備了下述化合物5-[(芐基)羰基]氨基-8-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c1嘧啶(化合物58)產(chǎn)率85％；淺黃色固體，M.P.144-145℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3255-2930,1673,1620,1610,1520cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:0.98(d,6H,J=7.5)；1.60(m,1H)；1.91(m,1H)；4.40(t,2H,J=7)；4.53(s,2H)；6.60(m,IH)；7.18(m,1H)；7.26-7.39(m,5H)；7.64(s,1H)；8.22(s,1H)；9.11(bs,1H)。
5-[(芐基)羰基]氨基-8-(3-苯丙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶(化合物59)產(chǎn)率95％；淺黃色固體，M.P.116-117℃(乙醚-輕石油醚)；IR(KBr):3250-2900,1675,1625,1600,1500cm-1；1H NMR(CDCl3)δ:2.39(m,2H)；2.67(t,2H,J=7)；4.37(t,2H,J=7)；4.53(s,2H)；6.61(m,1H)；7.16-7.43(m,11H)；7.65(s,1H)；7.64(s,1H)；8.19(s,1H)；9.12(bs,1H)。實(shí)施例51-取代-4-氰基-5-氨基吡唑的制備按照本文引用作為參考的J.Org.Chem.1956,21,1240；J.Am.Chem.Soc.1956,78,784所述的方法制備下面的化合物，原料是可以買(mǎi)到的乙氧基-亞甲基丙二腈和N1-取代的肼，主要也可以是能夠買(mǎi)到的下述化合物1-甲基-4-氰基-5-氨基吡唑；
1-正丁基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-異戊基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-(2-環(huán)戊基)乙基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-羥基乙基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-苯基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-叔丁基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-苯乙基-4-氰基-5-氨基吡唑；1-(2-氯苯基)-4-氰基-5-氨基吡唑；這些化合物可用作制備本申請(qǐng)吡唑并-三唑并-嘧啶化合物的中間體。實(shí)施例61-取代-4-氰基-3-氨基吡唑的制備按照Chem.Pharm.Bull.1970,18,2353或J.Heterocyclic Chem.,1979,16,1113所述的方法，以4-氰基-5-氨基吡唑?yàn)樵现苯油榛芍苽?-取代的4-氰基-3-氨基吡唑，所述的烷基化在無(wú)水碳酸鉀存在下，于二甲基甲酰胺中，在80℃與烷基鹵化物反應(yīng)1-2小時(shí)進(jìn)行的。在反應(yīng)混合物中有N1和N2兩個(gè)烷基化位置的異構(gòu)體，比例大約是1∶2,N2異構(gòu)體可用簡(jiǎn)單的結(jié)晶方法分離，或用硅膠柱色譜方法，以乙酸乙酯或石油醚混合物洗脫分離。用這些方法可制備下述化合物1-甲基-4-氰基-3-氨基吡唑1-丁基-4-氰基-3-氨基吡唑1-芐基-4-氰基-3-氨基吡唑1-異戊基-4-氰基-3-氨基吡唑1-苯乙基-4-氰基-3-氨基吡唑這些化合物可用作制備本申請(qǐng)吡唑并-三唑并-嘧啶化合物的中間體。實(shí)施例7苯基乙基-4-氰基-3-氨基吡唑的制備a)將3-氨基-4-氰基吡唑(20mmol)加入無(wú)水碳酸鉀(30mmol)的DMF(50ml)懸浮液，在80℃加熱30分鐘。在懸浮液中加入苯乙基溴(25mmol)，在80℃加熱2小時(shí)。冷卻至室溫后，將混合物蒸發(fā)至干，得到的殘余物溶于蒸餾水(100ml)，用乙酸乙酯萃取(3×50ml)。合并的有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，真空蒸發(fā)至干。得到的殘余物由1∶3的1-苯基乙基-4-氰基-5-氨基吡唑(20％)和1-苯基乙基-4-氰基-3-氨基吡唑(60％)組成，它們可如此直接用于實(shí)施例9?；蛘哂霉枘z柱色譜純化，以乙酸乙酯/己烷混合物洗脫，得到1-苯基乙基-4-氰基-5-氨基吡唑，M.P.172-173℃；(20％)；1H NMR(DMSO-d6):3.04(t,2H)；4.12(t,2H)；5.85(sb,2H)；7.21-7.30(m,5H)；7.41(s,1H)；1-β-苯基乙基-4-氰基-3-氨基吡唑，M.P.98-100℃(60％)；1H NMR(CDCl3):3.07(t,2H)；4.10(t,2H)；4.23(sb,2H)；7.17(s,1H)；7.00-7.28(m,5H)。
b)將1-β-苯基乙基-4-氰基-5-氨基吡唑(20mmol)的原甲酸三乙酯(40ml)溶液在氮?dú)庵谢亓?小時(shí)。將過(guò)量的原甲酸酯真空蒸發(fā)至干，把殘余的黃色油溶于乙醚，通過(guò)硅膠滲濾，得到相應(yīng)的亞氨醚(產(chǎn)率87％)。將原甲酸酯蒸發(fā)后得到的殘余物純化，和直接用于下一步反應(yīng)。將亞氨醚(20mmol)和2-糠酸酰肼(2.5g,22mmol)的2-甲氧基乙醇(50ml)溶液回流5-10小時(shí)。冷卻后，溶液蒸發(fā)至干，得到油狀殘余物，在二苯醚(50ml)中使其熱環(huán)化，用Dean-Stark儀使其共沸以除去反應(yīng)中形成的水。1.5小時(shí)后，用TLC檢測(cè)反應(yīng)(乙酸乙酯∶石油醚2∶1)，當(dāng)完全沒(méi)有反應(yīng)原料時(shí)，冷卻反應(yīng)混合物，加己烷。過(guò)濾得到的沉淀，結(jié)晶后得到7-(β-苯基乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.174-175℃(20％)；1H NMR(DMSO-d6):3.23(t,2H)；4.74(t,2H)；6.75(s,1H)；7.14-7.17(m,5H)；7.28(s,1H)；7.98(s,1H)；8.53(s,1E)；9.56(s,1H)。
按照類似的方法,以1-β-苯基乙基-4-氰基-3氨基吡唑?yàn)樵?制備8-(β-苯基乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶,M.P.268-270℃(600A)；1H NMR(DMSO-d6):3.32(t,2H)；4.72(t,2H)；6.73(s,1H)；7.23(m,5H)；7.95(s,1H)；8.8(s,1H)；9.41(s,1H)。
c)將b)階段的產(chǎn)物(10mmol)于10％鹽酸(5.0ml)中的懸浮液回流攪拌3小時(shí)。冷卻后，在0℃用濃氫氧化銨堿化溶液，過(guò)濾得到的沉淀，或用乙酸乙酯萃取(3×100ml)，干燥和真空蒸發(fā)至干，得到相應(yīng)的1-(β-苯基乙基)-4-[3(2-呋喃基)1,2,4-三唑-5-基]-5-吡唑,M.P.175-176℃；1HNMR(DMSO-d6):3.15(t,2H)；4.48(t,2H)；5.78(s,1H)；6.37(s,1H)；6.68(s,1H)；7.1(s,1H)；7.27-7.28(m,5H)；7.82(s,1H)；14.51(sb,2H)。按照類似的方法制備1-(β-苯基乙基)-4-[3(2-呋喃基)1,2,4-三唑-5-基]-5-吡唑,(M.P.205-206℃)；1H NMR(DMSO-d6):3.12(t,2H)；4.46(t,2H)；5.75(s,1H)；14.41(sb,2H)。
d)將氨腈(60mmol)加入c)階段的胺(10mol)于N-甲基吡咯烷酮(40ml)中的懸浮液，接著加入對(duì)甲苯磺酸(15mmol)?；旌衔镌?60℃回流攪拌，4小時(shí)后加入第二批氨腈(60mmol)，加熱過(guò)夜。然后混合物用熱水(200ml)處理，過(guò)濾沉淀，用水洗滌，用乙醇結(jié)晶，得到相應(yīng)的5-氨基-7-(β-苯基乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.225-226℃.1H NMR(DMSO-d6):3.21(t,2H)；4.51(t,2H)；6.65(s,1H)；7.1-7.44(m,5H，原子和1H)；7.78(s,1H)；7.89(sb,2H)；8.07(s,1H)。
按照類似的方法制備5-氨基-8-(β-苯基乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.212-213℃.1H NMR(DMSO-d6):3.21(t,2H)；4.53(t,2H)；6.7(s,1H)；7.1-7.4(m,5H，原子和1H)；7.65(sb,2H)；7.93(s,1H)；8.45(s,1H)。實(shí)施例84-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑的制備將氰基乙酰胺(70mmol)和對(duì)氟代芐基疊氮化物(54.5mmol)依次加入無(wú)水碳酸鉀(0.23mol)的DMSO(70ml)懸浮液，得到的溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后傾入大體積的水中(1.5L)。過(guò)濾分離除固體，用水洗滌和在70℃的烘箱中干燥，得到1-(對(duì)氟代芐基)-4-酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑(產(chǎn)率96％)。M.P.198-199℃；1H NMR(DMSO-d6):7.5-7.1(m,6H)；6.4(s,2H)；5.4(s,2H)。攪拌DMF(5ml)中的胺(0.005mol)懸浮液，冷卻至0℃，加入氯氧化磷(0.01mol)。得到的溶液在0℃攪拌5分鐘，在25℃攪拌10分鐘，在80℃攪拌15分鐘。冷卻至室溫后，加入5ml的N鹽酸，回流混合物5分鐘，由冷卻的溶液中分離出1-(對(duì)氟代芐基)-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑(產(chǎn)率90％)。M.P.185-186℃；1H NMR(DMSO-d6):7.3-7.0(m,6H)；5.5(s,2H)；IR(KBr):3400,3220,2220,1655cm-1.
類似地，制備下述化合物1-或2-芐基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-(鄰氟代芐基)-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-(對(duì)氟代芐基)-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-丁基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-異戊基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-(2-甲氧基乙基)-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-庚基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑1-或2-辛基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑這些化合物可用于制備本發(fā)明的三唑并-三唑并-嘧啶化合物的中間體。實(shí)施例9乙氧基亞甲基氨基雜環(huán)化合物的制備式Ⅳ的乙氧基亞甲基雜環(huán)化合物是按照下述方法制備的將鄰氨基乙腈和原甲酸乙酯回流。按照實(shí)施例所述的方法制備4-氰基-5-(乙氧基亞甲基氨基)-1-丁基吡唑。于氮?dú)夥罩校瑢?-氰基-5-氨基-1-丁基吡唑(20mmol)在原甲酸三乙酯(40ml)溶液在回流溫度下加熱8小時(shí)。真空蒸發(fā)除去過(guò)量的原甲酸酯至干，把得到的黃色油溶于乙醚，通過(guò)硅膠柱洗脫，得到純的化合物(產(chǎn)率87％)。在許多情況下，蒸發(fā)得到的殘余物基本上是純的，并且可直接用于下一步反應(yīng)。IR(nujol):3140,2240,1640cm-1；1H NMR(CDCl3):8.4(s,1H)；7.9(s,1H)；4.5(t,2H)；4.3(q,2H)；1.8(m,2H)；1.5(m,2H)；1.4(t,3H)；0.9(t,M)。實(shí)施例10乙氧基亞甲基氨基雜環(huán)化合物的環(huán)化將乙氧基亞甲基雜環(huán)化合物(20mmol)和2-糠酸酰肼(2.5g,22mmol)的2-甲氧基乙醇(50ml)溶液回流5-10小時(shí)。冷卻后，溶液蒸發(fā)至干，用配備有Dean-Stark儀的圓底燒瓶將得到油狀殘余物在二苯醚(50ml)中熱環(huán)化，使其共沸以除去反應(yīng)中形成的水。在反應(yīng)的各個(gè)時(shí)間時(shí)(3-5小時(shí))，用TLC檢測(cè)反應(yīng)(2∶1乙酸乙酯∶石油醚)，當(dāng)完全沒(méi)有反應(yīng)原料時(shí)，冷卻反應(yīng)混合物，加己烷。過(guò)濾得到的沉淀，用適當(dāng)?shù)娜軇┙Y(jié)晶。在某些情況下，從溶液中可分離出粘稠的油，然后潷析和萃取，油狀殘余物用硅膠色譜純化，以乙酸乙酯/石油醚混合物洗脫，得到三環(huán)化合物Ⅵ。
按照實(shí)施例所述的方法，列出了用這些方法制備的一些化合物的分析和光譜學(xué)特征7-丁基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶1H NMR(DMSO-d6):9.4(s,1H)；8.6(s,1H)；8.0(m,1H)；7.4(m,1H)；6.7(m,1H)；4.5(t,2H)；1.9(m,2H)；1.3(m,2H)；0.9(t,3H)。
8-丁基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶1H NMR(DMSO-d6):9.4(s,1H)；8.9(s,1H)；8.0(m,1H)；7.3(m,1H)；6.2(m,1H)；4.5(t,2H)；1.9(m,2H)；1(m,2H)；0.9(m,3H)。在2D-NMR(NOESY)光譜中，N-CH2的特征共振4.5說(shuō)明C9-H特征共振8.9的寬峰。
7-異戊基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶1H NMR(CDCl3):9.1(s,1H)；8.8(s,1H)；7.7(m,1H)；7.3(m,1H)；6.6(m,1H)；4.6(t,2H)；1.18-1.7(m,3H)；1.0(d,6H)。
8-異戊基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶9.1(s,1H)；8.8(s,1H)；7.7(m,1H)；7.3(m,1H)；6.6(m,1H)；4.6(t,2H)；1.9-1.5(m,3H)；1.0(d,6H)。
按照此方法制備下述化合物:
7-甲基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-甲基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-(2-氯苯基)-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-苯乙基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-叔丁基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-(2-環(huán)戊基)-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-芐基-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-芐基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-(2-氟苯基)-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-(4-氟苯基)-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-丁基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-異戊基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-(2-甲氧基)乙基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-庚基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶7-辛基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-芐基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-(2-氟芐基)-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-(4-氟芐基)-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-丁基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-異戊基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-己基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶8-庚基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶
8-辛基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶9-芐基-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶9-(2-氟芐基)-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[4,5-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶9-(4-氟芐基)-2(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[4,5-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶這些化合物可用于制備本發(fā)明的三唑并-三唑并-嘧啶和吡唑并-三唑并-嘧啶化合物的中間體。實(shí)施例115-氨基-7-[芳(烷基)]-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶的制備在式Ⅶ的胺(10mmol)于N-甲基吡咯烷酮(40ml)的懸浮液中加入氨腈(60mmol)，接著加入對(duì)甲苯磺酸(15mmol)?；旌衔镉?60℃加熱，同時(shí)用磁力攪拌器攪拌。4小時(shí)后，加入第二份氨腈(60mmol)，繼續(xù)加熱過(guò)夜。然后，混合物用熱水(200ml)處理，過(guò)濾沉淀的固體，用水洗滌，和在甲醇中結(jié)晶。如果沒(méi)有沉淀，將溶液用乙酸乙酯(4×100ml)萃取，萃取液用鹽水(2×50ml)洗滌，干燥和真空蒸發(fā)至干。殘余物用硅膠柱色譜純化，以乙酸乙酯洗脫。
下面給出用此方法制備的部分混合物的分析和光譜數(shù)據(jù)5-氨基-7-丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶M.P.157-158℃；1H NMR(DMSO-d6):8.1(s,1H)；8.0(s,2H)；7.9(m,1H)；7.2(m,1H)；6.7(m,1H)；4.2(t,2H)；1.9(m,2H)；1.5(m,2H)；0.9(t,3H)。5-氨基-8-丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶,M.P.183-185℃；1H NMR(DMSO-d6):8.6(s,1H)；8.0(s,1H)；7.6(s,2H)；7.2(m,1H)；6.7(m,1H)；4.2(t,2H)；1.8(m,2H)；1.2(m,2H)；0.9(t,3H)。
5-氨基-7-芐基-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.p.295-297℃；1H NMR(DMSO-d6):8.5(s,2H)；8.0(s,1H)；7.3(m,6H)；6.7(m,1H)；5.7(s,2H)。
5-氨基-7-鄰氟代芐基-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.p.310-312℃；1H NMR(DMSO-d6):8.5(s,2H)；8.0(s,1H)；7.3(m,5H)；6.8(s,1H)；5.75(s,2H)。
5-氨基-7-甲基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.210-213℃5-氨基-7-叔丁基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.238-240℃5-氨基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.248-250℃5-氨基-7-(2-羥基乙基)-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.258-260℃5-氨基-7-苯基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.295-297℃5-氨基-7-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.208-210℃5-氨基-8-異戊基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.200-203℃5-氨基-7-苯乙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶，M.P.225℃5-氨基-7-芐氧乙基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶；5-氨基-7-[β-(4-異丁基苯乙基)]-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶；M.P.207-210℃。
使這些化合物與適當(dāng)?shù)乃峄蚧撬嵫苌锓磻?yīng),可得到本發(fā)明的式Ⅰ化合物。實(shí)施例12取代的-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑的制備依次將對(duì)氟芐基疊氮化物(15.1g,0.1mmol)和氰基乙酰胺(10.8g,0.13mol)加入碳酸鉀(57.5g,0.42mol)于二甲亞砜(150ml)的懸浮液中，混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。把混合物傾入3L水，過(guò)濾分離固體，用水充分洗滌后得到22.47g(96％)的1-對(duì)氟芐基-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑。M.P.198-199℃；1H NMR(DMSO-d6):7.5-7.1(m,6H)；6.4(s,2H)；5.4(s,2H)。
類似地，制備得到2-氟-6-氯芐基-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑；M.P.230-231℃；1H NMR(DMSO-d6):5.40(s,2H)；6.52(sb,2H)；7.12-7.45(m,5H)。
3-氟芐基-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑；M.P.211-211℃；1H NMR(DMSO-d6):5.46(s,2H)；6.47(sb,2H)；7.00-7.52(m,6H)。
2-氟芐基-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑，M.P.195-197℃制備得到1-(β-苯乙基)-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑。
M.P.181-183℃；1H NMR(DMSO-d6):3.04(t,2H)；4.35(t,2H)；6.30(sb,2H)；7.20-7.47(m,7H)。實(shí)施例13取代的-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑的制備于0℃，在1-對(duì)氟芐基-4-羧酰胺基-5-氨基-1,2,3-三唑(23.4g,0.1mol)的DMF(100ml)懸浮液中加入20.8ml(0.2mo1)POCl3，用磁力攪拌器攪拌。溶液在0℃攪拌5小時(shí)，在室溫?cái)嚢?0小時(shí)，最后在80℃攪拌15小時(shí)。冷卻后，將1N HCl(100ml)加入溶液，把得到的溶液回流5小時(shí)；在冷卻的情況下沉淀出1-對(duì)氟芐基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑(18.54g,90％)沉淀物。M.P.185-186℃；1H NMR(DMSO-d6):7.3-7.0(m,6H)；5.5(s,2H)；IR(KBr):3400,3220,2220,1655cm-1。
類似地，制備得到下述化合物2-氟-6-氯芐基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑；M.P.181-185℃；1H NMR(DMSO-d6):5.40(s,2H)；7.26-7.50(m,5H)。
3-氟芐基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑；M.P.195-197℃；1H NMR(DMSO-d6):5.44(s,2H)；7.00-7.43(m,6H)。
2-氟芐基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑，M.P.295-197℃。
1-(β-苯乙基)-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑。M.P.149-150℃；1H NMR(DMSO-d6):3.04(t,2H),4.36(t,2H)；7.03(sb,2H)；7.23-7.28(m,5H)。實(shí)施例14取代的-4[3-(2-呋喃基)1,2,4-三唑-5-基]-5-氨基-1,2,3-三唑的制備用Dean-Stark儀，將1-對(duì)氟芐基-4-氰基-5-氨基-1,2,3-三唑(20mmol)和2-糠酸酰肼(22mmol)的于二苯醚(30ml)中的懸浮液攪拌和加熱回流(260℃)，直到原料完全消失(TLC,1-2小時(shí))。冷卻后，混合物用石油醚稀釋，得到的沉淀或者過(guò)濾分離，或者潷析出來(lái)，并且進(jìn)行硅膠柱色譜純化，以2∶1乙酸乙酯∶石油醚洗脫。
1-對(duì)氟芐基-4[3-(2-呋喃基)1,2,4-三唑-5-基]-5-氨基-1,2,3-三唑；M.P.266-268℃；1H NMR(DMSO-d6):14.5(s,1H)；7.8(s,1H)；7.4-7.1(m,5H)；6.6(s,1H)；6.5(s,2H)；5.5(s,2H)。
類似地，制備得到1-(β-苯乙基)-4-[3-(2-呋喃基)1,2,4-三唑-5-基]-5-氨基-1,2,3-三唑(50％)；M.P.200-202℃.1H NMR(DMSO-d6):3.07(t,2H)；4.16(t,2H)；5.50(sb,2H)；6.61(s,1H)；6.95(s,1H)；7.2-7.4(m,5H)；7.78(s,1H)；13.8(sb,1H)。實(shí)施例155-氨基-7-取代的-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5,-c]嘧啶的制備在1-對(duì)氟芐基-4[3-(2-呋喃基)1,2,4-三唑-5-基]-5-氨基-1,2,3-三唑(0.325g,1mmol)于N-甲基吡咯烷酮(4ml)的懸浮液中加入氨腈(6mmol)，接著加入對(duì)甲苯磺酸(1.5mmol)。混合物于160℃加熱，同時(shí)用磁力攪拌器攪拌。4小時(shí)后，加入第二份氨腈(6mmol)，繼續(xù)加熱過(guò)夜。然后，混合物用熱水(20ml)處理，過(guò)濾沉淀的固體，用水洗滌，和在甲醇中結(jié)晶。如果沒(méi)有沉淀，將溶液用乙酸乙酯(4×10ml)萃取，萃取液用鹽水(2×5ml)洗滌，干燥和真空蒸發(fā)至干。殘余物用硅膠柱色譜純化，以乙酸乙酯洗脫，得到105mg(產(chǎn)率30％)5-氨基-7-對(duì)氟芐基-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5,-c]嘧啶。M.P.266-268℃；1H NMR(DMSO-d6):8.5(sb,2H)；7.95(s,1H)；7.4-7.1(m,6H)；6.7(s,1H)；5.7(s,2H)。
類似地,制備得到5-氨基-7-鄰氟芐基-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5,-c]嘧啶，M.P.310℃。
5-氨基-7-芐基-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5,-c]嘧啶，M.P.295-297℃。
5-氨基-7-(2-氟-6-氯芐基)-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5,-c]嘧啶；M.P.218-220℃；1H NMR(DMSO-d6):8.51(sb,2H)；7.98(s,1H)；7.55-7.28(m,4H)；6.77(m,1H)；5.73(s,2H)。
5-氨基-7-(間氟芐基)-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5,-c]嘧啶；M.P.280-283℃；1H NMR(DMSO-d6):8.45(bs,2H)；7.98(s,1H)；7.4-7.1(m,5H)；6.76(s,1H)；5.75(s,2H)。
5-氨基-7-(β-苯乙基)-2-(2-呋喃基)-1,2,3-三唑并[5,4-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶；M.P.269-271℃；1H NMR(DMSO-d6):8.4(sb,2H)；7.98(s,1H)；7.3-7.15(m,6H)；6.8(s,1H)；4.71(t,2H)；3.31(t,2H)。
替代實(shí)驗(yàn)可在500μl Tris-HCl緩沖溶液中進(jìn)行，其中含有1nM選擇的腺苷A1受體的配體[3H]CHA(N6環(huán)己基腺苷)和大鼠的腦膜(每次實(shí)驗(yàn)150-200μg蛋白質(zhì))。
替代實(shí)驗(yàn)可在500μl Tris-HCl緩沖溶液中進(jìn)行，其中含有10mMMgCl2和0.2nM選擇的腺苷A2A受體的配體[3H]SCH 58261(5-氨基-7-(2-苯基乙基)-2(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶)和大鼠紋狀體膜(每次實(shí)驗(yàn)80-100μg蛋白質(zhì))。為了測(cè)定IC50(IC50是替代50％的標(biāo)記配體時(shí)的抑制劑濃度)，加入結(jié)合實(shí)驗(yàn)樣品的試驗(yàn)化合物進(jìn)行三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)至少有6個(gè)不同的濃度。應(yīng)用Whatman GF/B玻璃過(guò)濾器快速過(guò)濾可分離結(jié)合的和游離的放射性，所述的過(guò)濾器用冰冷卻的緩沖溶液洗滌3次。在加入Aquassure之后，用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定過(guò)濾器上的結(jié)合的放射性。在有10μM R-PIA(N6-(苯基異丙基)腺苷)和10μM NECA(5′-(N-乙基羧酰胺基)腺苷)存在的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合，并且通常是總結(jié)合量的10％。按照前時(shí)-程實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，孵化的時(shí)間范圍是在0℃孵化150分鐘至在30℃孵化75分鐘。Ki值由Cheng＆ Prusoff公式計(jì)算。用非線形回歸曲線-結(jié)合的計(jì)算機(jī)程序LIGAND分析所有的結(jié)合數(shù)據(jù)。人體克隆A3腺苷受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)由HEK-293細(xì)胞，經(jīng)人體A3腺苷受體的重組體轉(zhuǎn)染的一份膜(8mg蛋白質(zhì)/ml)用于結(jié)合實(shí)驗(yàn)。

圖1說(shuō)明了[125I]AB-MECA(N6-(4-氨基-3-碘代芐基)-5′-(N-甲基氨基甲?；?腺苷)對(duì)HEK-293細(xì)胞的飽和。抑制實(shí)驗(yàn)進(jìn)行二次重復(fù)試驗(yàn)，試管中的最終體積為100μl，其中含有0.3nM[125I]AB-MECA、50nM Tris-HCl緩沖溶液、10mM MgCl2，pH7.4和20μl稀釋膜(12.4mg蛋白質(zhì)/ml)，典型的腺苷受體拮抗劑至少有6-8個(gè)不同濃度。在有50μM R-PlA存在的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合，大約是總結(jié)合量的30％。按照前時(shí)-程實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，在37℃的孵化時(shí)間是60分鐘。用Brandel細(xì)胞收集器，通過(guò)Whatman GF/B玻璃過(guò)濾器過(guò)濾試驗(yàn)混合物可分離結(jié)合的和游離的放射性。結(jié)果和討論對(duì)化合物34-59進(jìn)行了與大鼠的A1和A2A以及人體A3腺苷受體的放射性配體的結(jié)合實(shí)驗(yàn)，結(jié)果綜合列于表1。
數(shù)據(jù)表明在N5位置沒(méi)有大體積基團(tuán)的化合物(化合物38、40和41)對(duì)A1顯示出較低的選擇性，對(duì)A2A腺苷受體顯示出較大的親和力，對(duì)人體A3腺苷受體亞型顯示出低親和力，而在N5位置有苯基氨基甲?；湹幕衔飳?duì)納摩爾級(jí)的hA3腺苷受體亞型顯示出親和力，并且對(duì)A1和A2A受體亞型有不同程度的選擇性。具體地說(shuō)，4-甲氧基苯基氨基甲?；糠?化合物51、55和57)帶來(lái)了較高的親和力，比3-氯苯基氨基甲?；糠?化合物50、54和56)要高出大約3個(gè)數(shù)量級(jí)。
在N8位置引入不同立體性質(zhì)的鏈可使衍生物對(duì)人體A3腺苷受體的親和力有提高的趨勢(shì)，以及對(duì)A1和A2A受體亞型有更好的選擇性。
圖1給出了[125I]AB-MECA對(duì)腺苷A3受體的飽和曲線，在插圖中指出了斯卡查德圖(Scatchard plot)的線形關(guān)系，在我們的實(shí)驗(yàn)條件下，存在有KD為0.9+0.01nM和Bmax為62+1fmol/mg蛋白質(zhì)(n=3)結(jié)合位點(diǎn)的單一類型。
表1.化合物35,36,38,40,41,44-47,50,51和54-47對(duì)rA1,rA2A和hA3腺苷受體的結(jié)合親和力
*數(shù)值取自Kim等J.Med.Chem,39:4142-4148(1996)。
數(shù)據(jù)表明本文所述5-[[(取代苯基)氨基]羰基]氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶化合物的8-位上有短鏈(C1-3)取代基時(shí)，具體地說(shuō)，有甲基、乙基和丙基基團(tuán)時(shí)，優(yōu)于有更長(zhǎng)鏈如戊基和己基基團(tuán)的情況。具體地，化合物45和47,8-甲基、8-乙基和8-丙基、5-(4-甲氧基苯基)取代的化合物顯示出最高的親和力和選擇性，并且可以確信其確實(shí)在已經(jīng)合成的任一化合物中它們對(duì)人體腺苷A3受體亞型(hA3)具有最高的親和力和選擇性。
甲基、乙基和丙基鏈可取代在苯基或取代的苯基上，并且對(duì)A3受體亞型顯示出高親和力和選擇性，但親和力減少的系數(shù)在10-100之間。就親和力和選擇性而言，在N8位上有β-苯基乙基鏈和在N5位上有4-MeO-苯基氨基甲酰基鏈的化合物(化合物55)顯示出相當(dāng)好的數(shù)值(KihA3=1.47nM,rA1/hA3=872,rA2A/hA3=951)。
即使在化合物50和51上有較大的戊基基團(tuán)，它們對(duì)A3受體亞型也顯示出相當(dāng)高的親和力(分別為81.10和29.57nm)，雖然選擇性下降的系數(shù)大約為10-100。
以前研究表明5-氨基-8-(芳)烷基-2-(2-呋喃基)-吡唑并[4,3-e]1,2,4-三唑并[1,5-c]嘧啶化合物對(duì)腺苷A2受體亞型的親和力有隨8-位基團(tuán)大小增加的趨勢(shì)。很顯然，本發(fā)明化合物對(duì)A3受體亞型的親和力有相反的趨勢(shì)。就和A3受體亞型相互作用而言，C1-3取代基顯然代表了理想的立體和親脂性能。實(shí)施例18與放射性標(biāo)記化合物的結(jié)合實(shí)驗(yàn)用0.5nM [125I]AB-MECA，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行了一系列的結(jié)合實(shí)驗(yàn)，非特異性結(jié)合的測(cè)定在有50μM R-PIA或200μM NECA存在的情況下對(duì)所述細(xì)胞系的細(xì)胞膜進(jìn)行。從總的結(jié)合中減去非特異性結(jié)合，可確定特異性結(jié)合。所述的細(xì)胞系是HL60、NB4、SKN-MC、SKN-Be2C、SKN-SH和JURKAT細(xì)胞系。結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果列于表2。
表2
以圖的形式顯示的結(jié)果見(jiàn)圖2。
在細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)中Jurkat顯示出最好的結(jié)果。在37℃，用[125I]-ABMECA(0.125-1.5nM)，進(jìn)行Jurkat的飽和實(shí)驗(yàn)，孵化時(shí)間1小時(shí)，非特異性結(jié)合的測(cè)定用50μM R-PIA進(jìn)行。Kd(nM)值是4,Bmax(fmol/mg蛋白質(zhì))是290。結(jié)果見(jiàn)圖3。
接著其它實(shí)驗(yàn)以測(cè)定A1受體是否存在。替代實(shí)驗(yàn)是對(duì)Jurkat細(xì)胞系，用[3H]DPCPX，一種特異性的A1拮抗體(0.5nM)在0℃進(jìn)行150分鐘，用50μM R-PIA進(jìn)行非特異性結(jié)合的測(cè)定?？偟慕Y(jié)合為13208，非特異性結(jié)合是2997，和特異性結(jié)合是10211(77％)。相應(yīng)的，觀察到顯著數(shù)量的A1結(jié)合。
下面的實(shí)驗(yàn)第一次描述了應(yīng)用本文所述的新的選擇性拮抗劑(化合物102)在人體腫瘤細(xì)胞系，如HL60、早幼粒細(xì)胞的人體白細(xì)胞和Jurkat、人體T-細(xì)胞的白細(xì)胞中A3受體的特性。在此研究中，Jurkat和HL60細(xì)胞的膜(0.5mg蛋白質(zhì)/ml)與10-12個(gè)不同濃度的化合物102一起孵化，Jurkat和HL60細(xì)胞的濃度范圍分別是0.2-15nM和0.1-10nM。圖3是化合物102與Jurkat和HL60細(xì)胞膜的腺苷A3受體結(jié)合的飽和曲線，在插圖中指出了斯卡查德圖的線形關(guān)系，其中存在有Kd為1.9+0.2nM和Bmax為1.30+0.03pmol/mg蛋白質(zhì)(n=3)結(jié)合位點(diǎn)的單一類型。圖4是化合物102與HL60細(xì)胞膜的腺苷A3受體結(jié)合的飽和曲線，在插圖中指出了斯卡查德圖的線形關(guān)系，其中存在有Kd為1.2±0.1nM和Bmax為626+42fmol/mg蛋白質(zhì)(n=3)結(jié)合位點(diǎn)的單一類型。
這些結(jié)果說(shuō)明許多細(xì)胞系含有相當(dāng)大量的腺苷受體，因?yàn)橐阎衔?02與A3受體結(jié)合具有高親和力和選擇性，在腫瘤細(xì)胞中很可能存在大量的A3受體。
(C)注射劑-1000個(gè)1ml的安瓿
于50℃將活性化合物和緩沖劑溶解于丙二醇，然后一邊攪拌一邊加水，過(guò)濾得到的溶液，充入安瓿，密封和用高壓鍋消毒。
(D)連續(xù)輸注劑-1000ml
本領(lǐng)域數(shù)量技術(shù)人員知道，或者僅用常規(guī)的試驗(yàn)就可以確定，本發(fā)明所述的具體實(shí)施方案有許多等同物，這些等同物也包括在下面的權(quán)利要求書(shū)之中。
權(quán)利要求
1．下式化合物和其藥用鹽 或 其中A是咪唑基、吡唑基或三唑基；R是-C(X)R1、-C(X)-N(R1)2、-C(X)OR1、-C(X)SR1、-SOnR1、-SOnOR1、-SOnSR1或-SOn-N(R1)2；R1是氫、烷基、取代的烷基、鏈烯基、取代的鏈烯基、炔基、取代的炔基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、低級(jí)鏈烯基、低級(jí)烷?；蛘?，如果該基團(tuán)連接于氮原子時(shí)，與氮原子一起形成氮雜環(huán)丁烷，或形成5-6元雜環(huán)基所述雜環(huán)基含有一個(gè)或多個(gè)諸如N、O、S的雜原子；R2是氫、烷基、鏈烯基、炔基、取代的烷基、取代的鏈烯基、取代的炔基、芳烷基、取代的芳烷基、雜芳基、取代的雜芳基或芳基；R3是呋喃基、吡咯基、噻吩基、苯并呋喃基、苯并吡咯基、苯并噻吩基，它們由一個(gè)或多個(gè)選自下述的取代基所取代羥基、?；?、烷基、烷氧基、鏈烯基、炔基、取代的烷基、取代的烷氧基、取代的鏈烯基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基?；ⅤＱ趸?、酰胺基、烷芳基、芳基、芳氧基、疊氮基、羧基、羧基烷基、氰基、鹵素、硝基、雜芳基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、氨基酰氧基、氧基酰胺基、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、硫代芳氧基、硫代雜芳氧基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-取代的烷基、-SO2-芳基、-SO2-雜芳基和三鹵代甲基；X是O、S或NR1；n是1或2。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R選自脲、酰胺、硫脲、硫代酰胺和磺酰胺。
3．權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自氫、烷基、鏈烯基和芳基。
4．權(quán)利要求1的化合物，其中R2選自氫、烷基、鏈烯基和芳基。
5．權(quán)利要求1的化合物，其中R3選自呋喃。
6．權(quán)利要求1的化合物，其中X是O。
7．權(quán)利要求1的化合物，其中A是三唑環(huán)。
8．權(quán)利要求1的化合物，其中A是吡唑環(huán)。
9．治療高血壓、炎癥、變應(yīng)性反應(yīng)、巨細(xì)胞脫粒、腫瘤和心臟低氧，以及避免大腦缺血的方法，該方法包括給需要治療的患者施用有效量的權(quán)利要求1化合物。
10．權(quán)利要求9的方法，其中R選自脲、酰胺、硫脲、硫代酰胺和磺酰胺。
11．權(quán)利要求9的方法，其中R1選自氫、烷基、鏈烯基和芳基。
12．權(quán)利要求9的方法，其中R2選自氫、烷基、鏈烯基和芳基。
13．權(quán)利要求9的方法，其中X是O。
14．權(quán)利要求9的方法，其中A是吡唑環(huán)。
15．權(quán)利要求9的方法，其中A是三唑環(huán)。
16．權(quán)利要求9的方法，其中需要治療的疾病選自心臟低氧和大腦缺血。
17．測(cè)定患者存在腫瘤細(xì)胞的方法，所述的腫瘤細(xì)胞中有高濃度的腺苷A3受體，該方法包括a)給患者施用被標(biāo)記的權(quán)利要求1化合物，該標(biāo)記化合物和腫瘤細(xì)胞結(jié)合后能夠被檢測(cè)出來(lái)；b)使該化合物和腫瘤細(xì)胞結(jié)合；c)測(cè)定標(biāo)記物。
18．測(cè)定細(xì)胞樣品中存在腫瘤細(xì)胞的方法，所述的腫瘤細(xì)胞中有高濃度的腺苷A3受體，該方法包括a)在細(xì)胞朋友介質(zhì)中指標(biāo)細(xì)胞懸浮液；b)給細(xì)胞施用被標(biāo)記的權(quán)利要求1化合物，該標(biāo)記化合物和腫瘤細(xì)胞結(jié)合后能夠被檢測(cè)出來(lái)；c)使該化合物和腫瘤細(xì)胞結(jié)合；d)測(cè)定標(biāo)記物。
19．在手術(shù)摘除腫瘤后，測(cè)定是否存在殘留腫瘤細(xì)胞的方法，該方法包括a)在手術(shù)摘除腫瘤之前、之后和手術(shù)期間給患者施用被標(biāo)記的權(quán)利要求1化合物，該標(biāo)記化合物和殘留的腫瘤細(xì)胞結(jié)合后能夠被檢測(cè)出來(lái)；b)使該化合物和殘留的腫瘤細(xì)胞結(jié)合；c)測(cè)定標(biāo)記物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了通式化合物,其中的R、R
文檔編號(hào)A61P9/00GK1303289SQ99806594
公開(kāi)日2001年7月11日 申請(qǐng)日期1999年9月15日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月16日
發(fā)明者皮爾·佐凡尼·巴拉爾蒂, 皮爾·安德瑞·鮑雷亞 申請(qǐng)人:麥德可研究公司