專利名稱：與診斷/治療劑有關(guān)的改進的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含氣體微泡的診斷和/或治療活性劑，更具體地說，涉及包含用脂肽穩(wěn)定化的氣體微泡的診斷和/或治療活性劑。如果需要，這些活性劑中可以引入對身體中的位點和/或結(jié)構(gòu)具有親合力的部分，從而可以增強體內(nèi)特定部位的診斷成像和/或治療。其中特別令人感興趣的是用于超聲波成像的診斷劑。新的脂肽構(gòu)成了本發(fā)明的另一個特征。
眾所周知，超聲波成像包括可能非常珍貴的診斷器械，例如在血管系統(tǒng)、特別是在心動描記法中和在組織微脈管系統(tǒng)的研究中?，F(xiàn)已提出了用于增強所得到的聲像的各種各樣的造影劑，包括固體顆粒的懸浮液、乳化液滴、氣泡和包囊氣體或液體。普遍可以接受的是，容易壓縮的低密度造影劑在產(chǎn)生聲反向散射方面是特別有效的，因此已在制備含有氣體和生成氣體的系統(tǒng)方面引起極大興趣。
最初與通過心內(nèi)注射可藥用物質(zhì)而在體內(nèi)產(chǎn)生游離氣泡有關(guān)的研究已證明了這類氣泡作為回波描記術(shù)中的造影劑的潛在效能；然而，由于游離氣泡的壽命非常短，使得這類技術(shù)在實際應(yīng)用中受到很大限制。于是，穩(wěn)定用于心回波描記術(shù)和其他超聲波研究的氣泡的方法引起了人們的興趣，例如通過使用乳化劑、油、增稠劑或糖，或者通過在各種系統(tǒng)中產(chǎn)生或封包氣體或其前體，例如作為含有氣體的多孔微?；蜃鳛榘覛怏w微泡。
有許多在先技術(shù)是關(guān)于可能存在于微粒、微泡等中的包囊物質(zhì)和氣體的性質(zhì)的。一個優(yōu)選的包囊系統(tǒng)使用帶負電荷的磷脂作為成壁物質(zhì)來使氣體微泡穩(wěn)定化-參見WO-A-9729783，該文結(jié)合在此作為參考并且此文中含有對這方面在先技術(shù)的全面回顧。盡管已進行了大量的研究，但仍然需要可用作超聲造影劑并且是藥理學上耐受和可產(chǎn)生回波的、穩(wěn)定化的氣體填充微泡或微粒。例如，許多現(xiàn)有造影劑因連續(xù)接受超聲波處理而遭到破壞，因此，造影劑穩(wěn)定性的任何一點增強都可減少此問題的出現(xiàn)。
近來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些帶有交替疏水殘基和親水殘基的肽可以自發(fā)地形成稍放大即能可見的肽膜，這些肽膜可能是有用的醫(yī)學產(chǎn)品用生物材料，例如作為用于緩慢擴散型藥物釋放的載體、隔離材料、可生物降解的聚合物和人工縫合線。US-A-5,670,483描述了用從蛋白質(zhì)zuotin產(chǎn)生的肽EAK16形成的膜〔參見Zhang,S,《生物聚合物》(1994年)34,663；Zhang,S,《生物材料》(1995年)16,1385；和Zhang,S,《美國國家科學院院報》(1993年)90,3334〕。這些膜在水溶液中是穩(wěn)定的，并且能抵抗熱、酶降解、堿性和酸性pH的降解作用；同時也發(fā)現(xiàn)它們是非細胞毒性的。這些肽在水溶液中是可溶的，并且按照US-A-5,670,483的描述，它們需要至少12個氨基酸殘基的序列長度，優(yōu)選16個殘基以上，目的是形成膜結(jié)構(gòu)。
Fujita,K.等在《生物物理學進展》(1997年)34,127中描述了使用螺旋肽的超分子組件。當利用超聲處理方法將這類肽懸浮于含水介質(zhì)中時，得到了稱之為“肽質(zhì)體”的囊泡的分散體。這些肽質(zhì)體具有與標準脂質(zhì)體類似的大小分布，即在納米范圍內(nèi)的；一般它們的平均粒徑為75nm。Imanishi,Y.等在《超分子科學》(1996年)13中描述了其他包含肽結(jié)構(gòu)的分子組件，其中發(fā)現(xiàn)短桿菌肽A/PEG綴合物也形成納米尺寸范圍內(nèi)的肽質(zhì)體。
我們現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，一定范圍內(nèi)的脂質(zhì)取代的肽衍生物，在本文中稱作脂肽，可以用于形成適于用作例如超聲回波描記術(shù)中的診斷和/或治療劑的穩(wěn)定化的氣體微泡。已發(fā)現(xiàn)這類微泡顯示出良好的穩(wěn)定性，例如在成像操作中的超聲波處理過程中。另外我們還令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，含有少到兩個氨基酸殘基的脂肽也可顯示出成膜性能，這與US-A-5,670,483的有關(guān)自裝配肽結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)形成對照。這類短脂肽可以相當容易且經(jīng)濟地制備，因此可能具有實質(zhì)性的優(yōu)于天然產(chǎn)的、半合成或合成的脂肽諸如磷脂酰絲氨酸的成本優(yōu)勢。
因此按照本發(fā)明的一個方面，它提供了一種診斷和/或治療活性劑，例如一種超聲造影劑，該活性劑包含利用成膜兩親性脂肽穩(wěn)定化的包囊氣體填充微泡。
從本發(fā)明的另一個方面來看，它提供了如上文所定義的活性劑作為超聲造影劑的用途。
另一方面，本發(fā)明還提供了一種生成增強的人體或非人動物體影像的方法，該方法包含對所述人體或動物體給藥如上所定義的活性劑并在至少部分所述軀體產(chǎn)生超聲、磁共振、X射線、放射照相的或光學圖像。
可以用包含2-50個氨?；鶜埢膯蝹€的肽單元形成稍放大即能可見的膜。每個肽單元可以帶有長度在5-約50個碳原子之間的一個或多個親脂性烴鏈。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的單個脂肽單元中氨基酸殘基的數(shù)目應(yīng)是形成一個有效的穩(wěn)定化膜所需殘基的最小數(shù)目，且優(yōu)選少于20個殘基，更優(yōu)選少于10個殘基，首選在2-8個殘基之間。很清楚，保持殘基的數(shù)目為最小將降低本發(fā)明脂肽的成本并使其制備更容易。
任何氨基酸殘基都可以用于制備本發(fā)明的單個脂肽單元，盡管該脂肽必須是兩親性的。在一個優(yōu)選的實施方案中，該脂肽將包含選自容易獲得的天然存在的20個必需氨基酸的氨基酸殘基。
在一個實施方案中，肽單元可以包含交替的疏水和親水殘基，諸如丙氨?；投被；?，并可以包含一個或多個對生物受體具有親和力的互補序列和/或引導(dǎo)肽。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，選擇帶電氨基酸如賴氨酸和谷氨酸來提供在中性pH下分別含有陽性和/或陰性電荷基團的側(cè)鏈官能團。盡管不希望受到理論的限制，但預(yù)想這些帶電基團通過形成離子對或鹽橋來幫助使膜的外部穩(wěn)定。只要所涉及的肽序列是彼此互補的，就有可能通過相反電荷基團的對準而使膜穩(wěn)定，這構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。
該脂肽的脂質(zhì)組分優(yōu)選包含烷基、鏈烯基或炔基鏈，尤其是烷基鏈。烴鏈優(yōu)選具有5-25個碳原子，首選可從易于得到的脂肪酸衍生物獲得。合適的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、棕櫚酸等；這類脂肪酸是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。每個脂肽單元中烴鏈的數(shù)目將根據(jù)所存在的氨基酸殘基的數(shù)目而變化，并可由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定；一般每個脂肽分子將包含一個或兩個烴鏈。
肽鏈可包含將達到自穩(wěn)定二級結(jié)構(gòu)諸如β-折疊或α-螺旋的氨基酸序列。這些可為膜和相應(yīng)的微泡提供有利的行為表現(xiàn)特性，諸如穩(wěn)定性、藥動學、生物耐受性或受體親和力。形成β-折疊的脂肽，例如象棕櫚酰-(Glu-Ile-Lys-Ile)2，將通過抗衡離子和疏水性的重復(fù)而穩(wěn)定化，并可為表面提供離子和疏水穩(wěn)定作用。
除了具有穩(wěn)定作用的脂肽自身的氨基酸序列以外，也可以選擇與脂肽中的氨基酸殘基相連的脂?；渷硖峁┚哂心撤N特性的結(jié)構(gòu)。于是，例如，將向無定形膜中加入順式和反式不飽和?；湹幕旌衔?，由此使膜的柔韌性更好，尤其是在較高的超聲頻率下，例如，提供更好的二次諧波信號。類似地，通過引入分支的脂?；?，包括具有不同分支部位的酰基鏈的混合物，可以使脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的無定形性增加或結(jié)晶度降低。
正如蛋白質(zhì)化學領(lǐng)域中眾所周知的，脂肽中的某些氨基酸序列可以形成α-螺旋。在這類序列中，適當分離的側(cè)鏈和選定氨基酸之間的大量氫鍵將使該肽鏈保持α螺旋結(jié)構(gòu)。例如，象Lys-Lys(酰基)-Gln-Lys(二?；?-Asn-Lys(?；?-Gln-Leu這樣一個結(jié)構(gòu)，將在Asn和Gln側(cè)鏈之間提供強的氫鍵鍵合，并為含有這類結(jié)構(gòu)的微泡提供一個極性的、不帶電的表面。
上述脂肽構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面，并且盡管本發(fā)明的脂肽優(yōu)選是合成的，但它們的來源實際上可能是天然的、半合成的或合成的。因此，本發(fā)明也提供了一種通式如下的成膜兩親性肽A-B(其中A代表一個包含2-50個殘基的肽，B代表一個或多個5至約50個碳原子的烴鏈)。
在一個實施方案中，一個或多個肽末端或可利用的側(cè)鏈可以與一個聚乙二醇衍生物偶聯(lián)，目的是延遲被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吸收。聚乙二醇衍生物也被認為可降低血清蛋白對微泡的調(diào)理作用。當需要微泡的定向作用時，這一點被認為是尤其相關(guān)的。
在另一個實施方案中，多官能芳香系統(tǒng)可以用于連接本發(fā)明的肽和親脂部分，以增強膜的穩(wěn)定性。由于π-π交蓋相互作用，因此芳香系統(tǒng)的存在可以進一步加強膜中分子間的締合。芳香基團，有可能是一個碳環(huán)或雜環(huán)、單環(huán)或多環(huán)芳基，最好是苯基。它可以連接一個或多個肽以及一個或多個疏水性烴類殘基。該肽可以方便地經(jīng)一個酰胺鍵連接到芳香系統(tǒng)上；例如，適宜肽的N末端可以偶聯(lián)到一個苯甲酸衍生物上。一個或多個疏水基，如脂肪酸衍生物，可以直接連接到芳香基團上，例如借助于一個酰胺鍵，或者可以通過合適的一個或多個接頭與芳香基團相連。在一個優(yōu)選的實施方案中，這類脂肽可以用下式表示 其中A是通過合適的接頭(如酰胺基)與苯環(huán)連接的烷基鏈，B或者是通過合適的接頭與苯環(huán)連接的烷基鏈，或者是通過合適的接頭與苯環(huán)連接的如上文所述的肽序列，C是通過合適的接頭與苯環(huán)連接的如上文所述的肽序列。
優(yōu)選這些取代基最好在苯環(huán)的1、3和5位。
一個特別優(yōu)選的芳香系統(tǒng)是基于3,5-二氨基苯甲酸的。該二氨基苯甲酸支架結(jié)構(gòu)允許不必采用復(fù)雜的保護策略就能進行差別偶聯(lián)。這是因為當?shù)谝粋€氨基?；?，第二個氨基的反應(yīng)性降低了。
用于烴鏈或肽與芳香系統(tǒng)的連接的適宜連接基包括氨基、羥基、巰基、羧基和羰基，以及碳水化物基、鄰位二醇、硫醚、2-氨基醇、2-氨基硫醇、胍基、咪唑基、酚基和X-CH2CO-(其中X=Br,Cl或I)類型的α-鹵代乙酰化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員當然可以容易地確定其它連接部分。
上述芳基連接脂肽構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面。
為了形成一個包囊膜，可以使用一個單個脂肽組分的均勻制劑或兩個或多個互補脂肽組分的非均勻混合物。優(yōu)選采用兩個互補脂肽組分的混合物。
本發(fā)明微泡的膜可以包含一個或多個一價、二價或多價金屬離子，盡管不希望受到理論的限制，但我們相信金屬離子可能在使膜穩(wěn)定中發(fā)揮作用。合適的金屬離子包括釓(Ⅲ)、釔(Ⅲ)和鈣(Ⅱ)，但優(yōu)選一價金屬離子，例如鈉或鉀離子。膜中存在金屬離子也可促進它與緩沖系統(tǒng)的相容性，并可給膜提供一些絡(luò)合或螯合穩(wěn)定性。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，可以制備摻合了結(jié)合金屬離子如釓、銦或锝的螯合物的氣體填充脂肽微泡。適合碘化的脂肽，例如含有酪氨酸的脂肽，可以形成包囊膜。以這種方式可以進行多模式成像。
例如，根據(jù)不同的制備方法，該微泡膜可以是一個單層、雙層、少層或纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的交織脂肽。
本發(fā)明的微泡中可以存在任何生物相容的氣體。本文中所用的術(shù)語“氣體”包括任何在人正常體溫37℃下基本上或完全為氣態(tài)形式(包括蒸汽)的物質(zhì)(包括混合物)。因此，例如，氣體可包含空氣；氮氣；氧氣；二氧化碳；氫氣；惰性氣體如氦、氬、氙或氪；氟化硫如六氟化硫、十氟化二硫或三氟甲基五氟化硫；六氟化硒；可選鹵代的硅烷如甲基硅烷或二甲基硅烷；低分子量烴(例如含有最多7個碳原子的)，例如烷烴，象甲烷、乙烷、丙烷、丁烷或戊烷，環(huán)烷烴，象環(huán)丙烷、環(huán)丁烷或環(huán)戊烷，烯烴，象乙烯、丙烯、丙二烯或丁烯，炔烴，象乙炔或丙炔；醚如二甲醚；酮；酯；鹵代低分子量烴(例如含有最多7個碳原子)；或是前述任何幾種物質(zhì)的混合物。有利的是，鹵代氣體中至少有一些鹵素原子是氟原子；于是，生物相容的鹵代烴氣體可以選自，例如溴氯二氟甲烷，一氯二氟甲烷，二氯二氟甲烷，一溴三氟甲烷，一氯三氟甲烷，一氯五氟乙烷，二氯四氟乙烷，一氯三氟乙烯，氟乙烯，乙基氟，1,1-二氟乙烷和全氟化碳，例如全氟烷烴，象全氟甲烷，全氟乙烷，全氟丙烷，全氟丁烷(例如全氟正丁烷，可選地是與其它異構(gòu)體如全氟異丁烷的混合物)，全氟戊烷，全氟己烷和全氟庚烷；全氟烯烴，諸如全氟丙烯，全氟丁烯(例如全氟丁-2-烯)和全氟丁二烯；全氟炔烴，如全氟丁-2-炔；全氟環(huán)烷烴，諸如全氟環(huán)丁烷，全氟甲基環(huán)丁烷，全氟二甲基環(huán)丁烷，全氟三甲基環(huán)丁烷，全氟環(huán)戊烷，全氟甲基環(huán)戊烷，全氟二甲基環(huán)戊烷，全氟環(huán)己烷，全氟甲基環(huán)己烷和全氟環(huán)庚烷。其他鹵代氣體包括甲基氯，氟化(例如全氟化)酮如全氟丙酮，和氟化(例如全氟化)醚如全氟二乙醚。考慮到在含有這類氣體的微泡的血流中的認可的高穩(wěn)定性，特別有利的是使用全氟化氣體，例如六氟化硫和全氟化碳，諸如全氟丙烷，全氟丁烷和全氟戊烷。
氣體微泡的起始平均大小優(yōu)選不超過10μm(例如為7μm或更小)，以允許它們在給藥后自由地通過肺系統(tǒng)，例如在通過靜脈注射給藥后。不過也可以采用較大的微泡，此時這些微泡中含有例如一種或多種相對血溶性的或者可擴散的氣體如空氣、氧氣、氮氣或二氧化碳和一種或多種基本上不溶的或不可擴散的氣體如全氟化碳的混合物。給藥后可溶性/可擴散的氣體內(nèi)含物的向外擴散將使這類微泡迅速地縮小到一定尺寸，這個尺寸將由所存在的不溶性/不可擴散的氣體的量決定，可以選擇這樣一個尺寸，以允許所產(chǎn)生的微泡通過肺系統(tǒng)的肺毛細管。
通過結(jié)合疏水、離子對和氫鍵鍵合相互作用使分子間產(chǎn)生締合作用，可以使上面所討論的脂肽結(jié)構(gòu)有利地增強膜的穩(wěn)定性。氫鍵鍵合可以發(fā)生在并排脂肽鏈上的供體和受體原子之間。疏水相互作用可以發(fā)生在疏水部分如烷基鏈或疏水氨基酸殘基的序列之間，以致形成膜的一個疏水內(nèi)芯。
本發(fā)明的一個優(yōu)選方面涉及用于疾病成像和藥物釋放的超聲微泡的定向。因此，在另一個方面，本發(fā)明提供了一種靶向診斷和/或治療活性劑，例如一種超聲造影劑，所述活性劑包含(ⅰ)利用能與超聲輻射相互作用產(chǎn)生可檢測信號的成膜兩親性脂肽穩(wěn)定的氣體填充微泡；(ⅱ)一種或多種載體或藥物分子或二者的組合，其中所述載體對體內(nèi)的特定目標位點和/或結(jié)構(gòu)具有親和力，例如對特定細胞或病變區(qū)域具有親和力；(ⅲ)連接所述微泡與載體的一個或多個接頭，結(jié)果微泡和接頭不是直接相連的。
使用載體來定向到體內(nèi)特定研究區(qū)域是本領(lǐng)域中眾所周知的，載體的使用對熟練技術(shù)人員來說是常規(guī)的。用于本發(fā)明的適宜載體包括蛋白質(zhì)和肽載體如抗體，細胞粘著分子如L-選擇蛋白、RGD-肽、PECAM和整合蛋白(intergrin)，包含細胞因子/生長因子/肽激素及其片段的載體，鏈霉抗生物素蛋白，纖連蛋白結(jié)合蛋白，抗體的Fc部分，轉(zhuǎn)鐵蛋白，鏈激酶/組織纖溶酶原激活物，纖溶酶原，纖溶酶，肥大細胞蛋白酶，彈性蛋白酶，脂蛋白，脂肪酶，凝固酶，細胞外超氧化物歧化酶，肝素輔因子Ⅱ，視網(wǎng)膜生存因子，結(jié)合肝素的腦促分裂原，載脂蛋白(例如載脂蛋白B或載脂蛋白E)，粘著促進蛋白(例如紫紅素)，病毒外殼蛋白(例如來自HIV或皰疹的)，微生物粘著物(例如β-淀粉樣蛋白前體)，腱生蛋白(例如腱生蛋白C)，包含細胞因子/生長因子/肽激素/細胞粘著分子的非肽類興奮劑/拮抗劑的載體，包含抗血管生成因子的載體，包含血管生成因子的載體，已知對血管生成相關(guān)受體具有親和力的公認為血管生成因子以外的載體分子，與血管生成相關(guān)的受體/目標，寡核苷酸載體，修飾寡核苷酸載體，核苷與核苷酸載體，包含DNA結(jié)合藥物的受體，包含蛋白酶底物的受體，包含蛋白酶抑制劑的受體，來自組合文庫的載體，碳水化物載體，脂質(zhì)載體和小分子載體，如腎上腺素和β-阻斷劑。
本發(fā)明的微泡可以與一個或多個載體或者直接或者通過連接基偶聯(lián)。這些微泡可以偶聯(lián)到能識別特定目標區(qū)域的單克隆抗體之類的載體上，或者偶聯(lián)到一個對初級抗體具有特異性的次生抗體上，所述初級抗體又對一個目標區(qū)域具有特異性。象這樣使用次生抗體是有利的，其中適當?shù)剡x擇一個次生抗體可以允許制備用途廣泛的“通用”微泡，因為初級抗體可以定制到特定的目標區(qū)域。
微泡與所需載體的偶聯(lián)可以通過共價或非共價方式實現(xiàn)，例如這些方式牽涉到與位于微泡和/或載體上的一個或多個官能基的相互作用?？梢杂糜谶@一目的的化學反應(yīng)基的實例包括氨基、羥基、巰基、羧基和羰基，以及碳水化物基、鄰位二醇、硫醚、2-氨基醇、2-氨基硫醇、胍基、咪唑基、酚基。載體和微泡也可以通過一個連接基相連；許多這類基團都是本領(lǐng)域中公知的。接頭與載體和微泡的連接可以使用常規(guī)化學合成技術(shù)實現(xiàn)。國際專利申請WO-A-9818501中公開了在定向超聲回波描記術(shù)中有用的已知載體和連接基的全面總結(jié)，該文的內(nèi)容結(jié)合在此作為參考。
本發(fā)明也提供了一種器械，用于將與載體介導(dǎo)的產(chǎn)品方向結(jié)合在一起的治療藥物釋放到所需部位?！爸委熕幬铩笔侵笇钊嘶蚍侨藙游锏奶囟膊【哂杏幸孀饔玫乃巹?。雖然在例如WO-A-9428873和WO-A-9507072中已經(jīng)提出了藥物與超聲造影劑的組合物，但這些產(chǎn)品不含對特定部位具有親和力的載體，因此在藥物釋放前和藥物釋放當中在所需部位顯示出較低的比保留值。
按照本發(fā)明所用的治療化合物可以包封在微泡的內(nèi)部，或者附著到膠囊壁上，或者結(jié)合在膠囊壁中。 因此，治療化合物可以通過例如共價鍵或離子鍵與部分膠囊壁相連；或者可以物理混合到包囊材料中，特別是如果藥物與膜物質(zhì)具有類似的極性或溶解性的話，以便阻止其在體內(nèi)發(fā)揮預(yù)期作用之前從產(chǎn)品中漏失。藥物給藥后只要與血液接觸變濕后就可以開始釋放，或者也可以是其他內(nèi)部或外部影響的結(jié)果，例如酶催化的溶解過程或超聲波的使用。就超聲造影劑而言，使用外部超聲波來破壞含有氣體的微粒是一種眾所周知的現(xiàn)象，例如象WO-A-9325241中所描述的；根據(jù)治療應(yīng)用的類型，通過使用來自轉(zhuǎn)換器的特定量的超聲能量就可以改變藥物釋放的速率。
治療劑可以利用合適的連接劑與包囊膜表面共價連接。于是，例如，我們可以一開始先制備一個脂肽衍生物，藥物通過一個可生物降解的或者可以選擇性斷裂的接頭鍵合在該衍生物上，然后將該物質(zhì)加入到微泡中?；蛘?，可以將不需要加工就可釋放活性藥物的脂質(zhì)化的藥物分子直接加入到膜中。例如，該活性脂質(zhì)化藥物可以通過提高超聲波束的強度而釋放出來。
舉例而言，適合用于本發(fā)明組合物的藥物釋放系統(tǒng)包括含有巰基的已知治療藥物和其活性類似物；他們可以在氧化條件下與含有巰基的微泡偶聯(lián)形成二硫橋鍵。與一個載體或多個載體結(jié)合后，這種藥物/載體修飾微泡可以在靶組織中蓄積；然后給藥一種還原劑如還原谷胱甘肽，就可使藥物分子在靶組織附近從該定向微泡中釋放出來，從而增加了藥物的局部濃度，增強了其治療作用。也有可能制備能在使用前立即與治療藥物偶聯(lián)或者用治療藥物包覆的微泡。因此，例如，可以將治療藥物加入到這類微泡在含水介質(zhì)中的懸浮液中并進行振搖，以使藥物附著或粘附到微泡上。
在前面所提到的WO-A-9818501中可以找到有關(guān)在藥物釋放應(yīng)用中使用微泡的全面總結(jié)。
例如，本發(fā)明的脂肽可以使用適宜的保護策略利用常規(guī)肽合成技術(shù)制備。合成可以方便地使用自動肽合成儀進行，例如使用Merrifield固相肽合成技術(shù)。例如使用標準有機化學方法可以將烴鏈在任何適當階段偶聯(lián)到肽上，例如在將殘基加入肽中之前，或者在整個肽已合成完之后。優(yōu)選任一烴鏈上帶有一個羧化官能團如一個酰基氯部分或羧酸基，他們可以容易地偶聯(lián)到肽的游離氨基側(cè)鏈或N-末端上。如果肽和親脂組分想要經(jīng)一個芳香系統(tǒng)如3,5-二氨基苯甲酸連接的話，熟練技術(shù)人員將容易地完成與芳香系統(tǒng)的結(jié)合。例如，可以利用簡單的肽合成法將肽偶聯(lián)到3,5-二氨基苯甲酸的羧酸基上。然后可以將一個脂肪酸偶聯(lián)到一個氨基官能基上，從而得到一個1,3-二取代衍生物；這種與一個氨基的反應(yīng)鈍化了其他的游離氨基官能團，所以不會再產(chǎn)生1,3,5-三取代化合物。然后，再次使用簡單的合成化學步驟，但使用更嚴格的反應(yīng)條件，可以將該1,3-二取代衍生物進一步與一個所需肽或親脂基偶合。
例如，通過超聲處理和加熱包含所需脂肽以及可選地還包含任何金屬離子和/或其他所需組分的水溶液，同時讓該溶液接觸適宜的氣體，就可制備本發(fā)明的微泡。其他微泡制備技術(shù)，以及適宜的分離和純化步驟，都是本領(lǐng)域中公知的。
現(xiàn)在將參考以下非限制性的實施例和附圖對本發(fā)明作進一步的描述。
在附圖中

圖1闡明了包封了一種氣體微泡的部分兩親性脂肽膜的理論結(jié)構(gòu)。該膜包含兩個含有陽性和陰性電荷的氨基酸殘基的互補脂肽。疏水相互作用由雙向箭頭表示。
圖2顯示了含有一種2×2脂肽的互補混合物的、含有氣體的單層膜的理論切面圖。圖上部顯示了疏水和離子對相互作用，據(jù)認為他們能穩(wěn)定膜的形成。
圖3闡明了作為肽/脂質(zhì)接頭的3,5-二氨基苯甲酸的使用。
實施例1含有全氟戊烷的微泡的制備，該微泡包含脂肽N-α-棕櫚酰-N-ε棕櫚酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酸和N-α-棕櫚酰-N-ε棕櫚酰-賴氨酰-谷氨酰-谷氨酰-谷氨酰-谷氨酸的1∶1w/w混合物a)N-α-棕櫚酰-N-ε-棕櫚酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酸的合成 用ABI 433A自動肽合成儀合成該脂肽，合成從Fmoc-Lys(Boc)-王氏樹脂以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，同時除去樹脂中的肽和側(cè)鏈保護基，得到200mg粗產(chǎn)物。用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱)純化粗物質(zhì)的等分試樣，使用80％-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈)。冷凍干燥后得到65mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度70-100％B，其中A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈；柱-Vydac218TP54；在UV 214下檢測；產(chǎn)物保留時間=12分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物的特性預(yù)期M+H在1136，實際在1138。
b)N-α-棕櫚酰-N-ε-棕櫚酰-賴氨酰-谷氨酰-谷氨酰-谷氨酰-谷氨酸的合成 用ABI 433A自動肽合成儀合成該脂肽，合成從Fmoc-Glu(OtBu)-Wang樹脂以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，同時除去樹脂中的肽和側(cè)鏈保護基，得到200mg粗產(chǎn)物。使用0.1％的氨溶液在Sephadex G-200柱上進行純化，得到30mg純產(chǎn)物-在UV 214下檢測。使用MALDI質(zhì)譜法描繪產(chǎn)物的特性預(yù)期M+H在1138，實際在1140。
c)制備包含實施例1(a)和(b)所得肽的1∶1 w/w混合物的、含有全氟戊烷的微泡儲備溶液1存在于水中的1.4％丙二醇/2.4％甘油。
儲備溶液2:20mg NaCl溶于10ml水(大約34mmol)。
儲備溶液3:4ml儲備溶液1與1ml儲備溶液2混合。
將從實施例1(a)和(b)得到的肽(各1.0mg)稱取到一個干凈的小瓶中并加入0.6ml儲備溶液3。該混合物首先超聲處理2-3分鐘，然后加熱至79℃并保持幾分鐘。之后將該樣品冷卻至室溫，將頂部空間用全氟戊烷氣體充滿。該小瓶在一個有蓋的混合器中振搖60秒鐘后，將所得微泡分散體轉(zhuǎn)移到一個干凈的5ml小瓶中。加入水使體積接近4ml。使浮渣漂浮到頂部，用一個注射器從下面收集微泡。
d)描繪微泡的特性用庫爾特計數(shù)器分析實施例1(c)的半分離微泡，并分析其壓力穩(wěn)定性大小分布％直徑1-10微米93直徑1-3微米 6直徑3-5微米 29直徑5-7微米 36直徑7-10微米21直徑10-30微米 7壓力穩(wěn)定性120mmHg 穩(wěn)定160mmHg 穩(wěn)定200mmHg 穩(wěn)定實施例2含有全氟丁烷的微泡的制備，該微泡包含N-β-PEG2000-Dpr-Lys(Hds)-Lys-Lys(Hds)-Glu-OH(其中Dpr=二氨基丙酸，Hds=2-正十六烷基硬脂酸)a)N-β-PEG2000-Dpr-Lys(Hds)-Lys-Lys(Hds)-Glu-OH的合成 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Fmoc-Glu(OtBu)-Wang樹脂以0.2mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。Fmoc-Lys(Dde)-OH在與2-正十六烷基硬脂酸偶聯(lián)之前，先用2％肼/DMF溶液選擇性脫保護。所有的氨基酸用HBTU預(yù)活化。Hds和PEG2000用HATU預(yù)活化后人工加入合成儀中。用含有5％H2O的TFA處理2小時，同時除去樹脂中的脂肽和側(cè)鏈保護基，得到500mg粗產(chǎn)物。用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱-二苯基)純化粗物質(zhì)的等分試樣，使用70-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=水，B=甲醇)。冷凍干燥后得到8mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度70-100％B，其中A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈；柱-Vydac 218TP54；在UV 214下檢測；產(chǎn)物保留時間=19.7分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法描繪產(chǎn)物的特性預(yù)期多個M+H峰在3600周圍，實際在3600。
b)PEG化(pegylated)脂肽微泡的制備將從實施例2(a)得到的2.5mg脂肽稱取到一個干凈的小瓶中，并加入0.5ml 1.4％丙二醇/2.4％甘油溶液。將該混合物加熱至60℃持續(xù)3分鐘，然后冷卻至室溫。該小瓶的頂部空間用全氟丁烷氣體充滿并在一個帶蓋的混合器中振搖30秒鐘。所得微泡用去離子水洗滌3次。
c)描繪微泡的特性利用庫爾特計數(shù)器分析實施例2(b)的微泡懸浮液的大小分布
直徑1-3微米--17.0％直徑3-5微米--32.4％直徑5-7微米--25.3％實施例3含有全氟戊烷的微泡的制備，該微泡包含互補肽棕櫚酰-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys-OH和棕櫚酰-Ala-Lys-Ala-Lys-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys-Ala-Glu-Ala-Glu-OH的混合物a)棕櫚酰-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys-OH的合成在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Fmoc-Lys(Boc)-王氏樹脂以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，同時除去樹脂中的肽和側(cè)鏈保護基，得到300mg粗產(chǎn)物。用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱)純化30mg粗物質(zhì)試樣，使用70-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=水，B=甲醇)。冷凍干燥后得到13mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度30-80％B，其中A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈；柱-Vydac 218TP54；在UV 214下檢測；產(chǎn)物保留時間=12.6分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物的特性預(yù)期M+H在1853，實際在1858。
b)棕櫚酰-Ala-Lys-Ala-Lys-Ala-Glu-Ala-Glu-Ala-Lys-Ala-Lys-Ala-Glu-Ala-Glu-OH的合成在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Fmoc-Glu(OtBu)-王氏樹脂(Novabiochem)以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，同時除去樹脂中的肽和側(cè)鏈保護基，得到300mg粗產(chǎn)物。用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱)純化30mg粗物質(zhì)試樣，使用30-80％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈)。冷凍干燥后得到4mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度30-80％B，其中A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈；柱-Vydac 218TP54；在UV 214下檢測；產(chǎn)物保留時間=9.6分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物的特性預(yù)期M+H在1853，實際在1858。
c)制備包含實施例3(a)和(b)所得肽的1∶1 w/w混合物的、含有全氟戊烷的微泡儲備溶液1存在于水中的1.4％丙二醇/2.4％甘油。
將從實施例3(a)和(b)得到的肽(各0.5mg)稱取到一個干凈的小瓶中并加入0.5ml儲備溶液1。該混合物首先超聲處理2-3分鐘，然后加熱至79℃并保持幾分鐘。之后將該樣品冷卻至室溫，將頂部空間用全氟戊烷氣體充滿。該小瓶在一個有蓋的混合器中振搖120秒鐘后，將所得微泡分散體轉(zhuǎn)移到一個干凈的5ml小瓶中。加入水使體積接近4ml。使浮渣漂浮到頂部，用一個注射器從下面收集微泡。
d)描繪微泡的特性用庫爾特計數(shù)器分析實施例3(c)的半分離微泡的大小分布大小分布 ％直徑1-10微米100直徑1-3微米 24直徑3-5微米 51直徑5-7微米 22直徑7-10微米1實施例4含有全氟丁烷的微泡的制備，該微泡包含N-[3-(2-氨基乙酰氨基)-5-[2-(正十六烷基)硬脂酰氨基]-苯甲?；鵠-甘氨酸 a)3,5-二(Fmoc-氨基)苯甲酸的合成使用碳酸氫鈉作為堿，在水和適宜有機溶劑的混合物中，從3,5-二氨基苯甲酸和Fmoc-氯合成該化合物。NMR分析數(shù)據(jù)與結(jié)構(gòu)一致。
b)N-[3-(2-氨基乙酰氨基)-5-[2-(正十六烷基)-硬脂酰氨基]苯甲?；鵠甘氨酸的合成使用一個手動氮氣鼓泡器裝置，從Fmoc-Gly王氏樹脂開始并使用實施例4(a)所得化合物、2-正十六烷基硬脂酸和Fmoc-保護的甘氨酸，以0.15mmol的規(guī)模合成該結(jié)構(gòu)。使用標準TBTU/HOBt/DIEA方案進行偶聯(lián)。使用95％TFA處理2小時而從樹脂上除去該化合物。該產(chǎn)物利用制備型液相色譜法(Vydac 218TP1022柱)純化，使用90-100％B的梯度以10ml/分鐘的流速洗脫60分鐘(A=水/0.1％TFA，B=乙腈/0.1％TFA)。冷凍干燥后得到4mg純化物質(zhì)(分析型HPLC柱-Vydac 218TP54；梯度95-100％B洗脫20分鐘(A和B如上所述)；流速1.0ml/分鐘；在254nm下檢測，保留時間為24.9分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法(α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì))進一步描繪產(chǎn)物特性，如期在m/z 758產(chǎn)生[M+H]+峰。
c)制備含有全氟丁烷的微泡，該微泡包含N-[3-(2-氨基乙酰氨基)-5-[2-(正十六烷基)硬脂酰氨基]-苯甲?；鵠-甘氨酸將DMF(25μl)加入到實施例4(b)所得化合物(1mg)在1.4％丙二醇/2.4％甘油溶液(0.5ml)中的懸浮液中。該混合物在70℃下加熱2分鐘并超聲處理2分鐘。將該小瓶的頂部空間充滿全氟丁烷并在一個有蓋的混合器中振搖45秒鐘。在偏振光下用顯微鏡檢查，在微泡周圍顯示出層狀類型結(jié)構(gòu)的圖形特征。
實施例5包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸的、含有全氟丁烷的微泡的制備a)Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲酰基]賴氨酸的合成 使用一個手動氮氣鼓泡器裝置，從Fmoc-Lys(Boc)王氏樹脂開始并使用硬脂酸和從實施例4(a)得到的Fmoc-保護的3,5-二氨基苯甲酸，以0.15mmol的規(guī)模合成所示結(jié)構(gòu)。使用標準TBTU/HOBt/DIEA方案進行偶聯(lián)。用90％TFA處理3小時，從樹脂上除去該化合物的同時進行側(cè)鏈Boc基的脫保護。該產(chǎn)物利用制備型液相色譜法(Vydac 218TP1022柱)純化，使用90-100％B的梯度以10ml/分鐘的流速洗脫60分鐘(A=水/0.1％TFA,B=在乙腈/0.1％TFA中的20％2-丙醇)。冷凍干燥后得到46mg純化物質(zhì)(分析型HPLC柱-Vydac218TP54；梯度95-100％B洗脫20分鐘(A=水/0.1％TFA,B=乙腈/0.1％TFA)；流速1.0ml/分鐘；在254nm下檢測，保留時間為13.2分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法(α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì))進一步描繪產(chǎn)物特性，在m/z 815產(chǎn)生[MH]+峰，預(yù)期在814。
b)包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸的、含有全氟丁烷的微泡的制備將Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸(1.4mg)和1.4％丙二醇/2.4％甘油混合物(463mg)的混合物在60℃下加熱2分鐘后冷卻。在小瓶的頂部空間填充了全氟丁烷后，將該小瓶在一個有蓋的混合器中振搖30秒鐘。所得氣體填充微泡利用庫爾特計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性。
實施例6用于靶向超聲波成像的、用凝集素包覆的、含有全氟丁烷的脂肽微泡的制備a)硫醇官能化的脂質(zhì)分子棕櫚酰-Lys(棕櫚酰)-Lys-Lys-Ahx-Cys-OH(其中Ahx=氨基已酸)的合成 在ABI 433A自動肽合成儀上合成如上所示的脂肽結(jié)構(gòu)，合成從Fmoc-Cys(Trt)-王氏樹脂以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％EDT和5％H2O的TFA處理2小時，在從樹脂上除去肽的同時進行側(cè)鏈保護基的脫保護，得到250mg粗產(chǎn)物。用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱)純化40mg粗物質(zhì)試樣，使用90-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫50分鐘(A=0.1％TFA/水，B=MeOH)。冷凍干燥后得到24mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度70-100％B，其中B=0.1％TFA/乙腈，A=0.01％TFA/水；柱-Vydac 218TP54；在UV 214nm下檢測；產(chǎn)物保留時間=23分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物的特性預(yù)期M+H在1096，實際在1099。
b)制備含有全氟丁烷的微泡，該微泡包含從實施例6(a)得到的含有硫醇的脂肽結(jié)構(gòu)和從實施例1(b)得到的脂肽的混合物將2mg從實施例1(b)得到的脂肽和0.5mg從實施例6(a)得到的含有硫醇的脂肽稱取到一個干凈的小瓶中，加入0.6ml含有1.4％丙二醇/2.4％甘油在0.05M NaCl中的溶液。該混合物加熱至80℃持續(xù)5分鐘。將該樣品冷卻至室溫，將頂部空間充滿全氟丙烷氣體。該小瓶在一個有蓋的混合器中振搖60秒鐘后，所得微泡用去離子水洗滌一次。
c)用磺基-SMPB修飾凝集素向1mg熒光素標記的凝集素(Ulex europaeus,Sigma)在PBS(0.8ml)中的混合物中加入含有1mg磺基-SMPB[磺基琥珀酰亞氨基-4-(對馬來酰亞氨基苯基)丁酸酯-Pierce]的0.1ml DMSO溶液。該混合物在室溫下攪拌45分鐘，然后通過一個Sephadex G-200柱，用PBS作為洗脫劑。收集蛋白質(zhì)級分，在使用前儲存于4℃下。
d)微泡與修飾凝集素蛋白偶聯(lián)向從實施例6(b)得到的含有硫醇的脂肽微泡中加入1.5ml從實施例6(c)得到的修飾凝集素蛋白溶液。將該溶液的pH調(diào)節(jié)至pH8后，使該偶聯(lián)反應(yīng)在室溫下進行1小時。然后用水充分洗滌這些微泡。
e)描繪微泡的特性從實施例6(d)得到的微泡懸浮液用庫爾特計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性大小分布直徑1-10微米--84％直徑1-3微米--12.5％直徑3-5微米--37％直徑1-7微米--24％壓力穩(wěn)定性120mmHg--穩(wěn)定200mmHg--穩(wěn)定f)用凝集素包覆的含有全氟丁烷的靶向脂肽微泡的體外研究在流動條件下與內(nèi)皮細胞的結(jié)合從正常臍帶衍生的人內(nèi)皮細胞系ECV 304(ATCC CRL-1998)在260ml Nunc培養(yǎng)瓶(Chutney 153732)中在RPMI 1640培養(yǎng)基(BioWhittaker)中培養(yǎng)，其中RPMI 1640培養(yǎng)基中加入了L-谷氨酰胺200mM，青霉素/鏈霉素(10000U/mL和10000mcg/mL)和10％胎牛血清(Hyelone Lot no.AFE 5183)。當這些細胞鋪滿時，以割裂比1∶5-1∶7進行傳代培養(yǎng)。將直徑為22mm的蓋玻片滅菌后置于12孔培養(yǎng)板的底部，之后將在0.5ml帶有血清的完全培養(yǎng)基中的細胞加在上面。當細胞鋪滿后，將蓋玻片置于一個特制的流動室中，該流動室由一個開口到玻璃板中的凹槽構(gòu)成，帶有細胞的蓋玻片置于該玻璃板上，使細胞面對凹槽，由此形成一個流動通道。使用一個蠕動泵，使從實施例6(d)得到的微泡從一個保存在37℃下的儲器中開始流出，通過該流動室后又返回到該儲器中。調(diào)節(jié)流速以模擬生理學相關(guān)剪切速率。將該流動室放置在顯微鏡下，直接觀察微泡和細胞間的相互作用。安裝在該顯微鏡上的攝影機與一個彩色圖象打印機和一個監(jiān)視器相連。微泡逐漸在細胞上蓄積，這取決于流速。隨著流速的增加，細胞開始從蓋玻片上分離，而微泡仍然結(jié)合在這些細胞上。未攜帶載體的對照微泡不粘附到內(nèi)皮細胞上，并在最小流動條件下從細胞上消失。
實施例7用于靶向超聲波成像的、用FITC標記的凝集素包覆的、包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸的、含有全氟丁烷的微泡的制備a)包含摻雜了含有硫醇的脂肽的、Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲酰基]賴氨酸的含全氟丁烷的微泡的制備將1.4％丙二醇/2.4％甘油混合物(1.0ml)加入到一個含有從實施例6(a)得到的硫醇官能化的脂肽(0.5mg)和從實施例5(a)得到的Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸(4.5mg)的小瓶中。該混合物在60℃下加熱3分鐘，然后超聲處理2分鐘，將小瓶的頂部空間充滿全氟丁烷后，將其在一個有蓋的混合器中振搖45秒鐘。所得微泡用水洗滌，大泡沫利用簡單的浮選法除去。
b)微泡與修飾的帶有磺基-SMPB的FITC標記的凝集素偶聯(lián)向從實施例7(a)得到的微泡懸浮液中加入從實施例6(c)得到的修飾凝集素溶液。使該反應(yīng)在室溫下進行1小時。微泡用去離子水洗滌并用庫爾特計數(shù)器進行分析(81％在1-3μm之間)。用流式細胞計測量凝集素的存在，結(jié)果顯示熒光總數(shù)為75％。
c)與內(nèi)皮細胞結(jié)合按照實施例6(f)的方法分析實施例7(b)所得微泡與內(nèi)皮細胞的結(jié)合情況。
實施例8包含陽性和陰性電荷結(jié)構(gòu)的混合物的帶電脂肽微泡的制備a)N-α-棕櫚酰-N-β-棕櫚酰-L-二氨基丙酰-賴氨酰-賴氨酸酰胺的合成 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Rink酰胺樹脂以0.2mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，從樹脂上除去肽的同時除去側(cè)鏈保護基，得到150mg粗產(chǎn)物。在SephadexG-10凝膠過濾柱上進行純化，使用pH2的1∶1甲醇/水洗脫。MALDI質(zhì)譜法預(yù)期M+H在836，實際在837。在制備微泡之前，將該肽以0.5mg/ml的濃度溶于1.4％丙二醇/2.4％甘油標準溶液。加入0.1％HCl溶液將該儲備溶液調(diào)節(jié)至pH3。
b)N-α-棕櫚酰-N-β-棕櫚酰-L-二氨基丙酰-谷氨酰-谷氨酸的合成 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Fmoc-Glu(OtBu)-王氏樹脂以0.2mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有的氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，從樹脂上除去肽的同時除去側(cè)鏈保護基，得到120mg粗產(chǎn)物。在Sephadex G-10凝膠過濾柱上進行純化，使用pH8的1∶1甲醇/水洗脫。MALDI質(zhì)譜法預(yù)期M+H在839，實際在839。在制備微泡之前，將該肽以0.5mg/ml的濃度溶于1.4％丙二醇/2.4％甘油標準溶液。通過逐滴加入0.1MNaOH溶液使該儲備溶液呈堿性，最終pH為9。
c)使用從實施例8(a)和(b)得到的脂肽混合物制備微泡將不同體積的從實施例8(a)和8(b)得到的溶液在一個小瓶中混合，從而得到電荷性能不同的混合物。然后將該小瓶的頂部空間充滿全氟戊烷氣體，并將該小瓶在一個有蓋的混合器中振搖2分鐘。所得微泡用蒸餾水洗滌幾次。在一個希望得到具有負Z電勢的微泡的典型試驗中，將0.4ml從實施例8(b)得到的脂肽溶液和0.2ml從實施例8(a)得到的脂肽溶液在一個干凈的小瓶中混合，并向頂部空間加入全氟戊烷氣體。將該小瓶置于有蓋的混合器上振搖2分鐘。微泡用蒸餾水洗滌幾次，并分析其壓力穩(wěn)定性、大小分布和Z電勢。
實施例9治療性脂肽微泡制劑制備加載阿霉素(doxirubicin)的微泡將阿霉素以0.2mg/ml的濃度溶于1.4％丙二醇/2.4％甘油溶液。向在一個干凈小瓶中的、0.4ml從實施例8(b)得到的負電荷脂肽的儲備溶液中加入0.2ml從實施例8(a)得到的儲備溶液和0.05ml上述阿霉素溶液。所得溶液因存在阿霉素而呈桔紅色。將該小瓶的頂部空間充滿全氟戊烷氣體并在一個有蓋的混合器上振搖1分鐘。微泡經(jīng)過浮選后，觀察到桔紅色現(xiàn)在已到了微泡層，而上清液則事實上沒有顏色。然后這些微泡用蒸餾水洗滌幾次，洗完后它們?nèi)匀痪哂薪奂t色外觀，這表明存在阿霉素。
實施例10治療性脂肽微泡制劑制備加載放線菌素D的微泡重復(fù)實施例9的步驟，只是用放線菌素D代替阿霉素。所觀察到的顏色不是桔紅色而是黃色。
實施例11表面PEG化的脂肽微泡的制備a)合成脂肽棕櫚酰-Dpr(棕櫚酰)-Arg-Arg-Lys(PEG2000)-NH2(其中Dpr=二氨基丙酸) 該脂肽在一個ABI 433A自動肽合成儀上部分地合成。從Rink酰胺AM樹脂(0.25mmol規(guī)模)開始，將各為1mmol的HBTU活化的氨基酸衍生物Fmoe-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Arg(Pmc)-OH、Fmoc-Arg(Pmc)-OH、Fmoc-Dpr(Fmoc)-OH和棕櫚酸以上述順序裝配到該聚合物上。然后將該樹脂轉(zhuǎn)移到一個氮氣鼓泡器中，通過用2％在DMF中的一水合肼處理而除去Dde保護基。接著通過用(HATU)預(yù)活化的CH3O-POE-NHCOCH2CH2COOH(分子質(zhì)量2000道爾頓，RappPolymere)重復(fù)偶聯(lián)而引入PEG2000部分。用含有5％苯酚、5％三異丙基硅烷和5％H2O的TFA處理2.5小時，從該樹脂上同時除去肽和側(cè)鏈保護基，得到27mg粗制脂肽。使用MALDI質(zhì)譜法描繪該粗制脂肽的產(chǎn)品特性由于PEG2000組分的不均勻性質(zhì)，使得圖譜很復(fù)雜(M+H)+預(yù)期范圍是2900-3200，實際是2900-3200。在制備微泡之前，將該脂肽以0.5mg/ml的濃度溶于1.4％丙二醇/2.4％甘油標準溶液。
b)制備微泡向在一個干凈小瓶中的、從實施例8(b)得到的脂肽溶液(0.4ml)中加入0.15ml從實施例8(a)得到的脂肽溶液和0.1ml從實施例11(a)得到的脂肽溶液。將該小瓶的頂部空間充滿全氟戊烷氣體并在一個有蓋的混合器上振搖2分鐘，從而產(chǎn)生含有全氟戊烷的微泡。向該小瓶中加入0.4ml蒸餾水，然后將其置于一個滾子臺上3小時。之后這些微泡用蒸餾水洗滌幾次并用庫爾特計數(shù)器進行分析。
實施例12包含陽性和陰性電荷結(jié)構(gòu)的混合物的帶電脂肽微泡的制備a)N-α-棕櫚酰-N-β-棕櫚酰-L-二氨基丙酰-賴氨酸的合成 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Fmoc-Lys(Boc)-SASRIN樹脂以0.3mmol規(guī)模開始，使用1mmol柱體并用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，從樹脂上除去肽的同時除去側(cè)鏈保護基，得到210mg粗產(chǎn)物。MALDI質(zhì)譜法預(yù)期M+H在710，實際在709。在制備微泡之前，將該脂肽以0.5mg/ml的濃度溶于1.4％丙二醇/2.4％甘油標準溶液。加入10％HCl溶液將該儲備溶液調(diào)節(jié)至pH2。
b)N-α-棕櫚酰-N-β-棕櫚酰-L-二氨基丙酰-谷氨酸的合成 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Fmoc-Glu(OtBu)-王氏樹脂以0.3mmol規(guī)模開始，使用1mmol柱體和HBTU活化。用含有5％H2O的TFA處理2小時，從樹脂上除去肽的同時除去側(cè)鏈保護基，得到150mg粗產(chǎn)物。MALDI質(zhì)譜法預(yù)期M-H-在709，實際在709。在制備微泡之前，將該脂肽以0.5mg/ml的濃度溶于1.4％丙二醇/2.4％甘油標準溶液。通過逐滴加入1M NaOH溶液使該溶液呈堿性，最終pH為10。
c)使用從上述實施例12(a)和(b)得到的脂肽混合物制備微泡向在一個干凈小瓶中的從實施例12(b)得到的脂肽溶液(0.4ml)中加入0.4ml從實施例12(a)得到的脂肽溶液。將該小瓶的頂部空間充滿全氟戊烷氣體并在一個有蓋的混合器中振搖1分鐘，從而產(chǎn)生氣體填充微泡。向該小瓶中加入0.4ml蒸餾水，然后將其置于一個滾子臺上1小時。之后這些微泡用蒸餾水洗滌幾次并用庫爾特計數(shù)器進行分析。
實施例13合成N-α-棕櫚酰-N-γ-棕櫚酰-L-二氨基丁酰-賴氨酰-賴氨酰-PEG3400-賴氨酰-精氨酰-賴氨酰-精氨酰-賴氨酰-精氨酸酰胺這是一種適于引入脂肽微泡的載體-PEG-脂質(zhì)分子在Rink酰胺樹脂上以0.1mmol規(guī)模合成該脂肽，其中使用1mmol氨基酸柱體。在一臺ABI 433合成儀上，先使用HBTU預(yù)活化的Fmoc-Arg(Pmc)-OH，再使用HBTU預(yù)活化的Fmoc-Lys(Boc)-OH偶聯(lián)劑，經(jīng)過數(shù)次循環(huán)后裝配上載體部分。為了在載體和脂質(zhì)之間引入PEG間隔，將該肽樹脂轉(zhuǎn)移到一個氮氣鼓泡瓶裝置中，將Fmoc-PEG3400-NHS(Shearwater)偶聯(lián)到該肽樹脂上，直到Kaiser試驗為陰性。然后將該樹脂轉(zhuǎn)回到合成儀上，繼續(xù)用兩次Fmoc-Lys(Boc)-OH循環(huán)、一次二-Fmoc-二氨基丁酸和一次棕櫚酸進行裝配，從而引入脂質(zhì)組分。用含有5％H2O和5％酚的TFA處理2小時，從樹脂上除去肽的同時除去側(cè)鏈保護基。該產(chǎn)物用反向制備色譜法純化(柱-Vydac 218TP1022；溶劑A=水/0.1％TFA，B=乙腈/0.1％TFA；梯度為50-100％B 40分鐘；流速為9ml/分鐘；在214nm下檢測)，純產(chǎn)物經(jīng)過分析型HPLC柱-Vydac 218TP54；溶劑A=水/0.1％TFA，B=乙腈/0.1％TFA；梯度為50-100％B 20分鐘；流速為1.0ml/分鐘；在214nm下檢測，保留時間為18.9分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物特性，預(yù)期M+H在4500-5300，實際在4500-5300。
實施例14合成一種適于微泡制備的帶陽性和陰性電荷的脂肽棕櫚酰-Dpr(棕櫚酰)-Dpr-Asp-NH2(其中Dpr=二氨基丙酸) 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Rink酰胺AM樹脂以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。棕櫚酸和Fmoc氨基酸衍生物在偶聯(lián)前用HBTU預(yù)活化。用含有EDT(0.2ml)和H2O(0.1ml)的TFA(15ml)處理2小時，從樹脂上同時除去肽和側(cè)鏈保護基。粗物質(zhì)(171mg)通過從水/甲醇(80∶20,20ml)中重結(jié)晶而純化，得到73mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度為85-90％B，其中A=水/0.1％TFA,B=CH3CN/0.1％TFA；柱-PLRP-S；在UV214nm下檢測；產(chǎn)物保留時間為17.92分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物特性，預(yù)期M+H+在782，實際在783。
實施例15合成適于制備靶向脂肽微泡的結(jié)合了硫酸肝素的脂肽棕櫚酰-Lys(棕櫚酰)-Lys-Lys-Ahx-Lys-Arg-Lys-Arg-Lys-Arg-NH2(其中Ahx=氨基己酸)。 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Rink酰胺樹脂(Novabiochem)以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。首先使用Fmoc-Arg(Pmc)-OH和Fmoc-Lys(Boc)衍生物裝配結(jié)合了肝素的共有序列。接著使用Fmoc-氨基己酸和兩次Fmoc-Lys(Boc)-OH循環(huán)引入一個間隔。最后，通過偶聯(lián)Fmoc-Lys(Fmoc)-OH后再偶聯(lián)棕櫚酸而引入脂質(zhì)組分。用含有5％苯酚、5％三異丙基硅烷和5％H2O的TFA處理2小時，從該樹脂上同時除去肽和側(cè)鏈保護基，得到150mg粗產(chǎn)物。利用制備型HPLO(Vydac 218TP1022柱)純化30mg粗物質(zhì)試樣，使用70-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=0.1％TFA/水，B=乙腈)。冷凍干燥后得到19mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度為70-100％B，其中B=乙腈，A=0.01％TFA/水；柱-Vydac 218TP54；在UV 214nm下檢測；產(chǎn)物保留時間=11分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物特性，預(yù)期M+H在1845，實際在1850。
實施例17合成適于制備微泡的含有二十二烷酸(Beh)-Beh-Asp-Ala-Asp-Ala-Dpr-Ala-Dpr-NH2的脂肽(其中Dpr=二氨基丙酸) 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Rink酰胺樹脂(Novabiochem)以0.25mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有氨基酸和二十二烷酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％EDT和5％H2O的TFA處理2小時，從該樹脂上同時除去肽和側(cè)鏈保護基，得到150mg粗產(chǎn)物。粗物質(zhì)利用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱)純化，使用70-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/MeOH)。冷凍干燥后得到6mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度為70-100％B，其中A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/MeOH；柱-Vydac 218TP54；在UV 214nm下檢測；產(chǎn)物保留時間為21分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物特性，預(yù)期M+H在955，實際在957。
實施例18制備在膜上夾雜了PEG化衍生物的、包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸的、含有全氟丁烷的微泡a)合成用于引入到微泡膜中的PEG化衍生物 使用一個手動氮氣鼓泡器裝置，從Fmoc-Lys(Boc)-王氏樹脂開始，以0.30mmol規(guī)模合成所示結(jié)構(gòu)。氨基酸、從實施例5(a)得到的Fmoc-保護的3,5-二氨基苯甲酸和硬脂酸用TBTU/HOBt/DIEA預(yù)活化。PEG化側(cè)鏈使用從Rapp Polymere購得的CH3O-POE-NH-CO-CH2CH2-COOH(MW 750)進行偶聯(lián)。使用90％TFA處理2.5小時，在從該樹脂上除去該化合物的同時進行側(cè)鏈Boc基的脫保護。該產(chǎn)物利用反向制備色譜法純化(Vydac 218TP1022柱；溶劑A=水/0.1％TFA，B=乙腈/0.1％TFA；梯度為70-100％B洗脫60分鐘后用100％B洗脫140分鐘；流速為10ml/分鐘；在254nm下檢測)。得到83mg純物質(zhì)(分析型HPLC柱-Vydac 218TP54；溶劑A=水/0.1％TFA,B=乙腈/0.1％TFA；梯度為70-100％B 20分鐘；流速為1.0ml/分鐘；在254nm下檢測，保留時間為17.4分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法(α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì))進一步描繪產(chǎn)物特性，得到集中在m/z1767周圍的[M+H]+峰分布。
b)制備含有全氟丁烷的微泡，該微泡包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和從實施例18(a)得到的PEG化衍生物的8.5∶1w/w混合物將從實施例5(a)得到的Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸(1.7mg)、從實施例18(a)得到的PEG化衍生物(0.2mg)和1.4％丙二醇/2.4％甘油溶液(1.0ml)的混合物在70℃下加熱2分鐘得到一個均勻的懸浮液。將該小瓶的頂部空間充滿全氟丁烷并在一個有蓋的混合器中振搖60秒鐘。除去泡沫，微泡利用浮選法收集并用去離子水洗滌3次。
c)描繪該微泡的特性從實施例18(b)得到的微泡利用庫爾特多功能計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性大小分布直徑(微米)1-10--99.8％1-3 --84％3-5 --13％聲能衰減測量顯示，這些微泡在120和200mmHg的過壓下是穩(wěn)定的。
如下確認在膜中存在從實施例18(a)得到的PEG化衍生物將100μl微泡懸浮液試樣加入到200μl甲醇中，該混合物用超聲波處理20秒。利用分析型HPLC(條件如上所述)顯示存在從實施例18(a)得到的衍生物。另外，該混合物利用MALDI質(zhì)譜法(α-氰基-4-羥基肉桂酸基質(zhì))進行分析，在m/z 814產(chǎn)生一個對應(yīng)于Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸的[M+H]+峰，和一個對應(yīng)于PEG化衍生物的集中在m/z 1767周圍的峰分布。
實施例19制備用于醫(yī)療用途的、包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和一種含有卡托普利的脂肽的、含有全氟丁烷的微泡 如WO-A-9818501中所述合成如上所示的含有卡托普利的脂肽。向一個含有Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲酰基]賴氨酸(0.92mg)和含有卡托普利的脂肽(0.13mg)的小瓶中加入1.4％丙二醇/2.4％甘油混合物(1.0ml)。該小瓶在60℃下加熱2分鐘，然后超聲處理得到一個均勻的懸浮液。該小瓶的頂部空間充滿全氟丁烷后，在一個有蓋的混合器中振搖60秒。所得微泡用浮選法收集并用去離子水充分洗滌。這些微泡用庫爾特多功能計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性。
實施例20制備用于診斷和醫(yī)療用途的、包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和一種含有阿替洛爾的脂肽的、含有全氟丁烷的微泡
如WO-A-9818501中所述合成如上所示的含有阿替洛爾的脂肽。使用0.96mg Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和0.11mg含有阿替洛爾的脂肽，按照實施例19中描述的方法形成微泡。這些微泡用庫爾特多功能計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性。
實施例21制備用于醫(yī)療用途的、包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和一種含有苯丁酸氮芥的脂肽的、含有全氟丁烷的微泡 如WO-A-9818501中所述合成如上所示的含有苯丁酸氮芥的脂肽。使用0.97mg Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和0.13mg含有苯丁酸氮芥的脂肽，按照實施例19中描述的方法形成微泡。這些微泡用庫爾特多功能計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性。
實施例22制備用于醫(yī)療用途的、包含Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和一種阿糖胞苷的親脂衍生物的、含有全氟丁烷的微泡
如Akiyama,M.等在《化學與藥學通報》1978年26卷981-984頁中所述合成N4-硬脂酰-1-β-D-阿糖型呋喃糖基胞嘧啶(結(jié)構(gòu)如上所示)。使用O.97mg Nα-[3,5-二(硬脂酰氨基)苯甲?；鵠賴氨酸和0.15mg N4-硬脂酰-1-β-D-阿糖型呋喃糖基胞嘧啶，按照實施例19中描述的方法形成微泡。這些微泡用庫爾特多功能計數(shù)器進行分析，并分析其壓力穩(wěn)定性。
實施例23合成適于碘化(多模式成像)的脂肽N-α-棕櫚酰-N-ε-棕櫚酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-賴氨酰-酪氨酰-酪氨酸酰胺 在ABI 433A自動肽合成儀上合成該脂肽，合成從Rink酰胺樹脂以0.2mmol規(guī)模開始，使用1mmol氨基酸柱體。所有氨基酸和棕櫚酸用HBTU預(yù)活化。用含有5％H2O和5％EDT的TFA處理2小時，從該樹脂上除去肽的同時除去側(cè)鏈保護基，得到300mg粗產(chǎn)物。粗物質(zhì)試樣利用制備型HPLC(Vydac 218TP1022柱)純化，使用50-100％B的梯度以9ml/分鐘的流速洗脫40分鐘(A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈)。冷凍干燥后得到50mg純物質(zhì)(分析型HPLC梯度為50-100％B，其中A=0.1％TFA/水，B=0.1％TFA/乙腈；柱-Vydac 218TP54；在UV 214下檢測；產(chǎn)物保留時間=14分鐘)。使用MALDI質(zhì)譜法進一步描繪產(chǎn)物特性預(yù)期M+H在1463，實際在1462。
權(quán)利要求
1.一種診斷和/或治療活性劑，它包含用成膜兩親性脂肽穩(wěn)定化的包囊氣體填充微泡。
2.如權(quán)利要求1所述的診斷劑，它是一種超聲造影劑。
3.如權(quán)利要求1或2所述的活性劑，其中所述脂肽的肽部分各包含少于20個氨基酸殘基。
4.如權(quán)利要求3所述的活性劑，其中所述肽部分各包含少于10個氨基酸殘基。
5.如權(quán)利要求4所述的活性劑，其中所述肽部分各包含2-8個氨基酸殘基。
6.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，其中所述脂肽的肽部分由來自天然必需氨基酸的氨基酸殘基構(gòu)成。
7.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，其中所述脂肽的肽部分包含交替的親水和疏水氨基酸殘基。
8.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，其中所述脂肽的肽部分因存在能對準的帶相反電荷的基團而成為互補的。
9.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，其中所述脂肽的脂質(zhì)部分包含5-25個碳原子的烷基、鏈烯基或炔基。
10.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，其中氣體包含空氣，氮氣，氧氣，二氧化碳，氫氣，惰性氣體，氟化硫，六氟化硒，可選鹵代的硅烷，可選鹵代的低分子量烴，醚，酮，酯或前述任何幾種的混合物。
11.如權(quán)利要求10所述的活性劑，其中氣體包含一種全氟化碳或一種氟化硫。
12.如權(quán)利要求11所述的活性劑，其中氣體包含六氟化硫、全氟丙烷、全氟丁烷或全氟戊烷。
13.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，其中脂肽具有偶聯(lián)其上的聚乙二醇部分。
14.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，它進一步包含(a)一種或多種對人體或動物體內(nèi)的目標位點或結(jié)構(gòu)具有親和力的載體，或者包含(b)一種對初級抗體具有特異性的次生抗體，所述初級抗體又對這樣一個目標位點或結(jié)構(gòu)具有特異性。
15.如上述權(quán)利要求任一項所述的活性劑，它進一步包含一種治療藥物。
16.如權(quán)利要求1-13任一項所述的活性劑，它進一步包括用于超聲以外的成像模式的對比度增強部分。
17.如權(quán)利要求1-13任一項所述的活性劑，它混入了結(jié)合金屬離子的螯合物。
18.一種生成增強的人體或非人動物體影像的方法，該方法包含對所述人體或動物體給藥如上述任一項權(quán)利要求所定義的活性劑并產(chǎn)生一個至少部分所述軀體的超聲、磁共振、X射線、放射照相的或光學圖像。
19.一種成膜兩親性脂肽，它包含一個含有2-50個氨基酸殘基的肽和一個或多個各含有5-50個碳原子的烴鏈。
20.一種成膜兩親性脂肽，它包含一個具有至少一個含2-50個氨基酸殘基的肽部分的芳環(huán)和至少一個偶聯(lián)或連接其上的含5-50個碳原子的烴鏈。
21.如權(quán)利要求20所述的脂肽，其中所述芳環(huán)是一個1,3,5-三取代的苯環(huán)。
22.本文實施例中所公開的脂肽。
全文摘要
包含一個或多個含2—50個氨?；鶜埢碾牟糠趾鸵粋€或多個含5—50個碳原子的烴鏈的新的成膜兩親性脂肽。這類脂肽可以用于形成穩(wěn)定化的氣體微泡分散體,該分散體適于用作診斷和/或治療劑,例如用作超聲造影劑。
文檔編號A61K51/12GK1302211SQ9980655
公開日2001年7月4日 申請日期1999年4月22日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月28日
發(fā)明者A·卡斯比爾特森, M·索巴肯, H·R·沃爾弗 申請人:奈科姆成像有限公司