專利名稱：纖維蛋白原復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及纖維蛋白原復(fù)合物，特別是一種利用哺乳動物血液為原料的纖維蛋白原復(fù)合物及其制備方法。
纖維蛋白原復(fù)合物是可吸收性生物止血膠的主要成分之一，它的作用機(jī)制是效仿血液凝固的最后階段，使纖維蛋白原在凝血酶和鈣離子的作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白網(wǎng)，再在第XIII因子的作用下，變?yōu)榉€(wěn)定的纖維蛋白網(wǎng)。從而發(fā)揮其止血功效。普通的纖維蛋白原復(fù)合物是由匯集的人血漿制備，其制備方法是在無菌技術(shù)下采集人全血，用離心法、沉淀法或過濾法獲取血漿，而后利用各種化學(xué)試劑如聚乙二醇、乙醚、乙醇、硫酸銨或甘氨酸，借助低溫沉淀和沉淀而從人血漿中濃縮纖維蛋白原復(fù)合物。其整個制備過程須在無菌條件下進(jìn)行，否則難以用常規(guī)的方法(如過濾法、加熱法、氣體滅菌法、化學(xué)消毒法)將濃縮的纖維蛋白原復(fù)合物中的微生物去除。采用人血制備的纖維蛋白原復(fù)合物，其不足之處在于原料來源饋乏，成本昂貴，易導(dǎo)致人類血源性疾病(如乙型肝炎，丙型肝炎，愛滋病等)的傳播。因此常規(guī)的纖維蛋白膠至今未獲美國FDA的批準(zhǔn)。有關(guān)采用哺乳動物血制備纖維蛋白原復(fù)合物及其制備方法，目前無特別報(bào)道，文獻(xiàn)上也未見有關(guān)用哺乳動物血纖維蛋白原復(fù)合物配制的可吸收性生物止血膠的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用研究報(bào)道。
本發(fā)明的目的是提供一種原料來源廣泛、成本低廉，能避免人類血源性疾病傳播的哺乳動物血液來源的纖維蛋白原復(fù)合物及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是纖維蛋白原復(fù)合物是采用哺乳動物(豬、牛、羊、狗、馬)的血液，在嚴(yán)格的無菌技術(shù)下或不采用無菌技術(shù)，或部分過程采用無菌技術(shù)進(jìn)行采集、血漿的分離、提取、儲存和分裝而制成的，對這種來源于動物血的纖維蛋白原復(fù)合的滅菌法，是采用鈷60輻射滅菌法，該滅菌法可在纖維蛋白復(fù)合物水溶液狀態(tài)下或凍干粉劑狀態(tài)下實(shí)施，其輻射劑量為5萬至240萬拉德。
本發(fā)明的制備方法是將采集的動物血液導(dǎo)入一裝有抗凝劑為1∶9之3.8％枸櫞酸納的密閉無菌容器內(nèi)，將血以3000RPM離心30分鐘，獲得血漿，再利用冷沉淀法在無菌容器中制取濃縮的動物纖維蛋白原復(fù)合物，溶于生理鹽水中，濃度為20～200毫克/毫升，分裝2毫升/瓶，冷凍干燥，經(jīng)鈷60照射，輻射劑量分別為5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240萬拉德，經(jīng)上述照射后，作需氧及厭氧菌菌檢，經(jīng)10萬拉德以上劑量輻照的纖維蛋白原復(fù)合物未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長。將該復(fù)合物用2毫升生理鹽水溶解后，加入等量含40毫摩爾氯化鈣，500國際單位凝血酶溶液，觀察纖維蛋白凝膠形成情況，經(jīng)160萬拉德以下輻射劑量處理的纖維蛋白原復(fù)合物在15秒內(nèi)形成半透明乳白色凝膠樣物，該凝膠狀物可對手術(shù)術(shù)野的滲血和靜脈性出血發(fā)揮有效的止血功效。
本發(fā)明可制成凍干粉劑或水溶液，還可將其粘附于其它高分子生物材料，如明膠海棉、膠原蛋白膜及聚四氟乙烯膜等。
本發(fā)明是一種可吸收性生物止血膠，是一種生物衛(wèi)生材料。它的作用機(jī)制是效仿血液凝固的最后階段，使纖維蛋白原在凝血酶和鈣離子的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白網(wǎng)，再在第XIII因子的作用下變?yōu)榉€(wěn)定的纖維蛋白網(wǎng)，從而發(fā)揮其止血功效。本發(fā)明作為一種局部止血劑在臨床上可廣泛用于普通外科，神經(jīng)外科、心腦血管外科、泌尿外科、婦產(chǎn)科、整形外科、五官科燒傷科等領(lǐng)域。對手術(shù)術(shù)野的滲血和靜脈性出血實(shí)施有效地止血作用。本發(fā)明不僅原料來源廣泛，價格低廉，同時還可有效地避免各種人類血源性疾病的傳播。
下面對來源于豬血的纖維蛋白原復(fù)合物及其制備方法加以說明。
實(shí)施例一對原料豬作全身清洗后，再用1∶1000新潔爾滅溶液對豬體表實(shí)施消毒10分鐘。在潔凈度為10萬級的車間內(nèi)經(jīng)穿刺采集豬血，將豬血導(dǎo)入一密閉無菌容器(抗凝劑1∶9之3.8％枸櫞酸鈉)。在上述車間內(nèi)將豬血以3000PRM離心30分鐘，獲取血漿。利用冷沉淀法在無菌容器中制取濃縮的豬纖維蛋白原復(fù)合物，溶于生理鹽水中，濃度為20-200毫克/毫升，優(yōu)選濃度為70-140毫克/毫升。分裝2毫升/瓶；冷凍干燥，鈷60照射，輻射劑量分別為5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240萬拉德。經(jīng)上述照射后，作需氧及厭氧菌菌檢。經(jīng)10萬拉德以上劑量輻照的纖維蛋白原復(fù)合物未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長時。將該復(fù)合物用2毫升生理鹽水溶解后，加入等量含40毫摩爾氯化鈣，500國際單位凝血酶生理鹽水溶液，觀察纖維蛋白凝膠形成情況。經(jīng)160萬拉德以下輻射劑量處理的纖維蛋白原復(fù)合物在15秒內(nèi)形成半透明乳白色凝膠樣物。該凝膠樣物對大白鼠、家兔、恒河猴及人類手術(shù)創(chuàng)面的滲血和靜脈性出血具有特處的止血效果。
實(shí)施例二從屠宰場獲取新鮮豬血。以1∶9之3.8％枸櫞酸鈉抗凝。將豬血以3000RPM離心30分鐘，獲取血漿。利用冷沉淀法制取濃縮的豬纖維蛋白原復(fù)合物。溶于生理鹽水中，濃度為20-200毫克/毫升，優(yōu)選濃度為70-140毫克/毫升，分裝2毫升/瓶，冷凍干燥，鈷60照射，輻射劑量分別為5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240萬拉德。經(jīng)上述照射后，作需氧及厭氧菌菌檢。經(jīng)30萬拉德以上劑量輻照的纖維蛋白原復(fù)合物未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長。將該復(fù)合物用2毫升生理鹽水溶解后，加入等量含40毫摩爾氯化鈣，500國際單位凝血酶生理鹽水溶液，觀察纖維蛋白凝膠形成情況。經(jīng)160萬拉德以下輻射劑量處理的纖維蛋白原復(fù)合物在15秒內(nèi)形成半透明乳白色凝膠樣物。該凝膠樣物對大白鼠、家兔、恒河猴及人類手術(shù)創(chuàng)面的滲血和靜脈性出血具有特處的止血效果。
權(quán)利要求
1.一種纖維蛋白原復(fù)合物，其特征在于該復(fù)合物是采用哺乳動物(豬、牛、羊、狗、馬)的血液，在嚴(yán)格的無菌技術(shù)下；或部分過程采用無菌技術(shù)，部分過程不采用無菌技術(shù)；或整個過程不采用無菌技術(shù)進(jìn)行采集、血漿的分離、提取、儲存和分裝而制成的，其中對這種動物血來源的纖維蛋白原復(fù)合物的滅菌方法是采用鈷60輻射滅菌法。該滅菌法可在纖維蛋白復(fù)合物水溶液狀態(tài)下或凍干粉劑狀態(tài)下實(shí)施。其輻射劑量為5萬至240萬拉德。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原復(fù)合物，其特征在于采用嚴(yán)格無菌技術(shù)制備的纖維蛋白原復(fù)合物輻射滅菌法的最佳輻射劑量為10萬至50萬拉德；對未采用無菌技術(shù)或部分過程采用無菌技術(shù)制備的纖維蛋白原復(fù)合物的最佳輻射劑量為60萬至100萬拉德。
3.一種制備權(quán)利要求1的方法，其特征在于將采集的動物血液倒入一裝有抗凝劑為1∶9之3.8％枸櫞酸鈉的容器內(nèi)，將血以3000RPM離心30分鐘，獲得血漿，再利用冷沉淀法制取濃縮的動物纖維蛋白原復(fù)合物，溶于生理鹽水中，濃度為20～200毫克/毫升，分裝2毫升/瓶，冷凍干燥，經(jīng)鈷60照射，輻射劑量分別為5、10、20、40、60、80、100、120、140、160、200、220、240萬拉德，經(jīng)上述照射后，作需氧及厭氧菌菌檢。經(jīng)10萬拉德以上劑量輻照的纖維蛋白原復(fù)合物未發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長時，將該復(fù)合物用2毫升生理鹽水溶解后，加入等量含40毫摩爾氯化鈣，500國際單位凝血酶溶液，觀察纖維蛋白凝膠形成情況，經(jīng)160萬拉德以下輻射劑量處理的纖維蛋白原復(fù)合物在15秒內(nèi)形成半透明乳白色凝膠樣物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的纖維蛋白原復(fù)合物的制備方法，其特征在于利用冷沉淀法制取濃縮的動物纖維蛋白復(fù)合物，溶于生理鹽水中的優(yōu)選濃度為70～140毫克/毫升。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原復(fù)合物，其特征在于該纖維蛋白原復(fù)合物為凍干粉劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原復(fù)合物，其特征在于該纖維蛋白原復(fù)合物為水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的纖維蛋白原復(fù)合物，其特征在于該復(fù)合物可粘附于其它高分子生物材料，如明膠海棉、膠原蛋白膜及聚四氟乙烯膜。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種纖維蛋白原復(fù)合物及其制備方法。是利用哺乳動物血液為原料制備的蛋白復(fù)合物?？商娲搜獊碓吹睦w維蛋白原復(fù)合物，作為可吸收性生物止血膠的主要成分，能對各種手術(shù)術(shù)野的滲血和靜脈性出血實(shí)施有效的止血。該發(fā)明是在嚴(yán)格的無菌技術(shù)下進(jìn)行動物血的采集血漿的分離，提取，儲存和分裝而制得的。用該法制得的纖維蛋白復(fù)合物采用鈷60輻射滅菌，制成半透明乳白色凝膠樣纖維蛋白原復(fù)合物。該發(fā)明不僅大大拓寬了纖維蛋白原復(fù)合物的原料來源，降低制作成本，同時避免了人類血源性疾病的傳播。
文檔編號A61K38/39GK1138483SQ95106859
公開日1996年12月25日 申請日期1995年6月22日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月22日
發(fā)明者楊莉 申請人:楊莉, 廣州倍特生物技術(shù)有限公司