專利名稱：抗寄生蟲藥物doramectin的中間體及其制備方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及制備下式(I)化合物的新中間體(以下稱作doramectin)。 制備所述中間體的改進(jìn)方法。本發(fā)明還涉及所述中間體直接作為抗寄生蟲藥物的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步涉及從下式(II)化合物制備doramectin的改進(jìn)方法。 Doramectin為廣譜抗寄生蟲藥物和驅(qū)腸蟲藥，它屬于稱作avermectin的二級(jí)代謝產(chǎn)物。如美國專利5,089,480(這里引作參考)所述，通過在有氧條件和含有無機(jī)鹽及可同化的碳和氮源的營養(yǎng)介質(zhì)中發(fā)酵產(chǎn)生微生物菌株Streptomyces avermitilis如ATCC31267，31271或31272的avermectin可制備doramectin。另一種產(chǎn)生avermectin的微生物菌株是Dutton等人公開在Journalof Antibiotics，44 357-65(1991)中的Streptomycesavermitilis ATCC53568。根據(jù)布達(dá)佩斯條約，Streptomycesavermitilis ATCC31267，31271，31272和53568現(xiàn)在保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)，12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland 20852，U.S.A.。
在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的上述式(I)化合物的各種副產(chǎn)物可被分離。在上述微生物菌株的發(fā)酵中分離的主要副產(chǎn)物具有上述式(II)的結(jié)構(gòu)。從Streptomyces avermitilis ATCC53568肉湯發(fā)酵分離的式(II)化合物由Dutton等人在上述文獻(xiàn)中公開。式(II)化合物是活性抗寄生蟲和驅(qū)腸蟲化合物，該化合物在美國專利5,089,480中公開和要求保護(hù)。但是doramectin是優(yōu)選的。利用本發(fā)明方法將副產(chǎn)物式(II)轉(zhuǎn)化為更有價(jià)值的式(I)的doramectin抗寄生蟲劑。
該方法中整個(gè)轉(zhuǎn)化過程是消除C-23的羥基，在分子中C-22到C-23位留下一個(gè)雙鍵。對(duì)略有差別的avermectin上的相同轉(zhuǎn)化的低產(chǎn)率方法已有報(bào)道。例如，其中C-25環(huán)己基被仲丁基代替，其轉(zhuǎn)化用五步以總產(chǎn)率3.6％完成(Mrozik等人，TetrahedronLetters，1982，23，2377-78)。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)中的低產(chǎn)率方法，發(fā)明一種其中起始原料更有效地轉(zhuǎn)化為doramectin的方法是期望的。
因此，本發(fā)明目的是將式(II)化合物以高總產(chǎn)率轉(zhuǎn)化為doramectin。本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供對(duì)本發(fā)明有用的中間體。發(fā)明概述本發(fā)明提供新的式(III)中間體 其中R1是(C2-C5)烷酰基或芳氧乙?；蚏2是氫或芳氧硫代羰基。
本發(fā)明進(jìn)一步提供新的式(IV)中間體 其中R1是(C2-C5)烷?；蚍佳跻阴；?。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是其中R1為(C2-C5)烷酰基，苯氧乙酰基或(C1-C4)烷基苯氧乙?；蚏2為氫或(C1-C4)烷基苯氧硫代羰基的式(III)化合物。在該組特別優(yōu)選的化合物是其中R1為乙?；虮窖跻阴；蚏2為氫或?qū)妆窖趿虼驶氖?III)化合物。
本發(fā)明還特別優(yōu)選的化合物是其中R1為(C2-C5)烷?；窖跻阴；?C1-C4)烷基苯氧乙?；氖?IV)化合物。在該組特別優(yōu)選的化合物是其中R1為乙?；虮窖跻阴；氖?IV)化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供制備式(I)化合物的方法， 包括以下連續(xù)步驟(a)式(II)化合物 與式(R4CO)2O或R4COX(其中R4為芳氧基甲基及X為Cl或Br)的?；噭┓磻?yīng)形成其中R1為芳氧乙酰基及R2為H的式(III)化合物；(b)其中R1為芳氧乙酰基及R2為H的式(III)化合物與式R3OC(＝S)X(其中R3為芳基及X為Cl或Br)化合物反應(yīng)形成其中R1為芳氧乙?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物；(c)其中R1為芳氧乙酰基及R2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物在反應(yīng)惰性溶劑和約150℃到200℃，在碳酸鈣的存在下和連續(xù)通入反應(yīng)惰性氣體時(shí)反應(yīng)約2小時(shí)-48小時(shí)形成其中R1為芳氧乙?；氖?IV)化合物；和(d)其中R1為芳氧乙?；氖?IV)化合物與堿在醇溶劑中反應(yīng)形成式(I)化合物。
在該方法中特別優(yōu)選的方法是其中所述反應(yīng)惰性氣體為氮?dú)獾姆椒?。在這個(gè)特別優(yōu)選的方法中更優(yōu)選的方法是其中的堿為NH3，KOH，KCN，Na2CO3，NaHCO3，或NaOAc的方法。在這個(gè)特別優(yōu)選的方法中更進(jìn)-步優(yōu)選的方法是利用本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及式(I)化合物的制備方法，該方法包括以下連續(xù)步驟(a)式(II)化合物與式(R4CO)2O或R4COX(其中R4為(C1-C4)烷基及X為Cl或Br)的?；噭┓磻?yīng)形成其中R1為(C1-C4)烷?；癛2為H的式(III)化合物；(b)其中R1為(C1-C4)烷?；癛2為H的式(III)化合物與式R3OC(＝S)X(其中R3為芳基及X為Cl或Br)反應(yīng)形成其中R1為(C1-G4)烷?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物；(c)其中R1為(C1-C4)烷?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物在反應(yīng)惰性溶劑和約150℃到200℃，在碳酸鈣的存在下和連續(xù)通入反應(yīng)惰性氣體時(shí)反應(yīng)約2小時(shí)-48小時(shí)形成其中R1為(C1-C4)烷酰基的式(IV)化合物；和
(d)其中R1為(C1-C4)烷?；氖?IV)化合物與氫化鋁鋰，氰基硼氫化鈉或三乙基硼氫化鋰在反應(yīng)惰性溶劑中反應(yīng)形成式(I)化合物。
在該方法中特別優(yōu)選的方法是其中所述反應(yīng)惰性氣體為氮?dú)獾姆椒āＴ谶@個(gè)特別優(yōu)選的方法中更進(jìn)一步優(yōu)選的方法是利用本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步提供治療患有寄生蟲病的哺乳動(dòng)物的方法，包括給所述哺乳動(dòng)物施用抗寄生蟲有效量的式(III)或(IV)化合物。發(fā)明詳述根據(jù)下面詳述的本發(fā)明方法容易制備本發(fā)明化合物。
本發(fā)明式(I)化合物為公開在美國專利5,089,480(在此引作參考)中的dorametin，它可用作抗寄生蟲和驅(qū)腸蟲劑。從本發(fā)明所述式(IV)化合物通過式(IV)化合物與氫化鋁鋰，氰基硼氫化鈉或三乙基硼氫化鋰反應(yīng)或通過根據(jù)被裂解酯的性質(zhì)皂化所述酯制備doramectin。
當(dāng)R1為(C2-C5)烷酰基時(shí)，通過其中R1為(C2-C5)烷?；氖?IV)化合物與氫化鋁鋰，氰基硼氫化鈉或三乙基硼氫化鋰在反應(yīng)惰性溶劑中和溫度約-100℃到約0℃反應(yīng)約15分鐘至24小時(shí)，將(C2-C5)烷酰氧基轉(zhuǎn)化為羥基。該反應(yīng)適宜的反應(yīng)惰性溶劑將還原劑進(jìn)行選擇并且選自(但不限于)這些溶劑如乙醚，二惡烷，四氫呋喃，2-甲氧基甲基醚和1，2-甲氧基乙烷。該反應(yīng)特別優(yōu)選的還原劑是三乙基硼氫化鋰，特別好的溶劑是四氫呋喃。溫度一般在試劑與反應(yīng)物混合過程中保持-78℃到-70℃并且其后短時(shí)間例如15分鐘到1小時(shí)保持該溫度?；旌贤瓿芍螅ǔＴ?5分鐘到1小時(shí)內(nèi)，時(shí)溫度慢慢升至室溫。淬滅反應(yīng)混合物并根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法分離產(chǎn)物式(I)化合物。
當(dāng)R1為芳氧乙酰基時(shí)，通過其中R1為芳氧乙?；氖?IV)化合物與堿金屬氫氧化物在醇溶劑中和溫度約-75℃到約0℃反應(yīng)約15分鐘至24小時(shí)，將芳氧乙酰氧基轉(zhuǎn)化為羥基。特別優(yōu)選的堿金屬氫氧化物是氫氧化鉀，特別優(yōu)選的溶劑是甲醇。該反應(yīng)一般在溫度-35℃進(jìn)行約1小時(shí)，然后根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法分離產(chǎn)物式(I)化合物?；蛘哂冒贝鎵A金屬氫氧化物進(jìn)行該反應(yīng)。當(dāng)使用氨時(shí)上述反應(yīng)一般在約-35℃至約0℃進(jìn)行約1小時(shí)至16小時(shí)。該反應(yīng)優(yōu)選在甲醇中在-15℃進(jìn)行約5-6小時(shí)。根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的有機(jī)化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法分離產(chǎn)物式(I)化合物。
根據(jù)本發(fā)明方法容易制備本發(fā)明式(IV)化合物，即本發(fā)明式(III)化合物在高沸點(diǎn)溶劑如(但不限于)2-甲氧基乙基醚或2-乙氧基乙基醚中，在溫度約150℃至約200℃反應(yīng)約2小時(shí)至48小時(shí)。為了獲得最大產(chǎn)率，將反應(yīng)混合物中連續(xù)通入反應(yīng)惰性氣體如氮?dú)饣驓鍤?。?56℃至158℃和2-甲氧基乙基醚中連續(xù)通入氮?dú)膺M(jìn)行反應(yīng)12小時(shí)是特別優(yōu)選的。當(dāng)反應(yīng)完成后根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法分離產(chǎn)物式(IV)化合物。
根據(jù)本發(fā)明方法制備其中R2為芳氧硫代羰基的本發(fā)明式(III)化合物，即將R2為氫的本發(fā)明式(III)化合物與式R3OC(＝S)X的鹵代硫羰甲酸酯(其中R3如上定義)在惰性溶劑中在質(zhì)子清除劑如吡啶或4-二甲氨基吡啶反應(yīng)約30分鐘到12小時(shí)。該反應(yīng)適宜的反應(yīng)惰性溶劑包括乙酸乙酯，1，2-二甲氧基乙烷，2-甲氧基甲醚，2-甲氧基乙醚，芳烴溶劑如甲苯，二甲苯和苯，以及氯代烴溶劑如氯仿和二氯甲烷。該反應(yīng)優(yōu)選的溶劑是乙酸乙酯或甲苯。該反應(yīng)進(jìn)行2-4小時(shí)是優(yōu)選的。將反應(yīng)混合物加熱至40℃到約具體反應(yīng)所選溶劑的回流溫度。淬滅反應(yīng)混合物并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法分離產(chǎn)物即其中R2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物。
根據(jù)本發(fā)明方法容易制備其中R2為H及R1為(C2-C5)烷酰基或芳氧乙?；氖?III)化合物。式(II)化合物與酰化試劑在反應(yīng)惰性溶劑中，在質(zhì)子清除劑如(但不限于)吡啶，4-二甲氨基吡啶，哌啶，吡咯烷，三乙胺，嗎啉或二異丙基乙胺的存在下，在溫度約-75℃至約0℃反應(yīng)約5分鐘至約8小時(shí)。該反應(yīng)適宜的惰性溶劑包括芳烴如甲苯，苯或二甲苯或氯代烴如二氯甲烷，氯仿或1，2-二氯乙烷。適宜的酰化試劑為酰鹵，通常為酰氯或酸酐。當(dāng)酰氯被用作該反應(yīng)中的酰化試劑時(shí)，特別優(yōu)選的有機(jī)胺為吡啶。當(dāng)酸酐被用作該反應(yīng)中的酰化試劑時(shí)，特別優(yōu)選的有機(jī)胺為三乙胺。無論用酰氯還是酸酐作?；噭话氵@些反應(yīng)優(yōu)選的溶劑均為氯代烴。其中二氯甲烷是特別優(yōu)選的。當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，淬滅反應(yīng)混合物并根據(jù)有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法分離產(chǎn)物即其中R2為H及R1為(C2-C5)烷?；蚍佳跻阴；氖?III)化合物。
如美國專利5,089,480(在此引作參考)所述，經(jīng)過產(chǎn)生Streptomyces avermitilis菌株如ATCC 31267或31272的avermetin的發(fā)酵可分離式(II)化合物。獲得式(II)化合物的其它方法包括從Streptomyces avermitilis肉湯發(fā)酵中分離，如Dutton等人在Journal of Antibiotics，44，357-65(1991)中所述。
本發(fā)明新的化合物(III)-(IV)用作從式(II)化合物合成式(I)化合物即doramectin的中間體。
本發(fā)明新的化合物(III)-(IV)還用作抗寄生蟲劑。所說化合物(III)-(IV)作為抗寄生蟲劑的實(shí)用性通過Gration等人在Veterinary Parasitology，42，1992，273-279中所述嚙齒動(dòng)物模型體內(nèi)所述化合物的活性來證明。
式(III)和(IV)化合物是高活性抗寄生蟲劑，它們作為驅(qū)蟲劑，殺外寄生蟲劑，殺昆蟲劑和殺螨蟲劑具有特別的實(shí)用性。
式(III)和(IV)化合物對(duì)治療和預(yù)防由內(nèi)寄生蟲引起的疾病特別是蠕蟲病是有效的，蠕蟲病經(jīng)常由一組寄生蟲即線蟲引起，并且在豬，羊，馬和牛以及感染家養(yǎng)動(dòng)物和家禽中造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。Doramectin對(duì)付感染各種動(dòng)物的其它線蟲也是有效的，所述線蟲包括，例如狗的惡絲線蟲，和各種寄生蟲如鉤口線蟲屬，板口線蟲屬，蛔蟲，類圓線蟲屬，毛線蟲屬，毛細(xì)線蟲屬，鞭蟲屬，蟯蟲屬和在血液或其它組織和器官中發(fā)現(xiàn)的寄生蟲如絲蟲屬和外腸中的類圓線蟲屬和毛線蟲屬。
式(III)和(IV)化合物對(duì)于治療和預(yù)防外寄生蟲感染特別是節(jié)肢動(dòng)物外寄生蟲和飛蟲如蟬，螨，虱，蚤，蠅，叮咬蟲類和可感染牛和馬的行走雙翅幼蟲也是有價(jià)值的。
式(III)和(IV)化合物對(duì)家庭害蟲如蟑螂，衣物中的蛾，地毯甲蟲和飛蟲也具有殺蟲活性，以及對(duì)付儲(chǔ)存在谷物和農(nóng)業(yè)植物中的害蟲如蜘蛛螨，蚜蟲，毛蟲和行走直目翅如蚱蜢也是有用的。
式(III)和(IV)化合物以適合具體用途的制劑對(duì)治療的宿主動(dòng)物品種和寄生蟲或所述害蟲進(jìn)行給藥。作為驅(qū)蟲劑該化合物可以口服膠囊，丸劑，片劑，優(yōu)選液體灌劑形式給藥，或者通過注射，灌注或輸注給藥。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)獸醫(yī)應(yīng)用的方法制備上述制劑。因此，膠囊，丸劑或片劑可通過將活性成分與適宜的精細(xì)的稀釋劑或另加分散劑和/或粘結(jié)劑如淀粉乳糖，滑石，硬脂酸鎂等載體混合來制備。通過將活性成分分散在含有分散劑或濕潤劑等液體溶液中可制備灌用制劑，注射劑可以滅菌溶液形式制備，其中含有其它物質(zhì)例如足量的鹽或葡萄糖以使溶液與血液等滲。這些制劑將根據(jù)活性化合物的重量變化，而該重量又取決于被治療宿主動(dòng)物的種類，疾病的嚴(yán)重程度，感染的類型和宿主的體重?？诜蜃⑸浣o藥一般劑量約為單劑量每公斤體重0.001-10mg或分劑量用1-5天是滿意的，當(dāng)然，也可以使用常量即指定較高或較低的劑量范圍，這些均屬于本發(fā)明范圍。對(duì)于口服或注射給藥更優(yōu)選的劑量為單劑量每公斤體重約0.02-2mg或分劑量使用1-5天。
本發(fā)明化合物還可與動(dòng)物飼料一起給藥，為此可制備濃飼料添加劑或預(yù)混合料以便與動(dòng)物飼料混合。
為了用作殺蟲劑和治療農(nóng)業(yè)害蟲，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)方法將化合物以噴霧劑，粉劑，乳劑等形式使用。
此處和權(quán)利要求書中所用術(shù)語“反應(yīng)惰性溶劑”意指不與起始原料，試劑，中間體或產(chǎn)物相互作用且不以任何方式影響所需產(chǎn)物的產(chǎn)率的任何溶劑。術(shù)語“反應(yīng)惰性氣體”意指不與起始原料，試劑，中間體或產(chǎn)物相互作用且不以任何方式影響所需產(chǎn)物的產(chǎn)率的任何氣體。
此處和權(quán)利要求書中所用術(shù)語“芳基”意指苯基或任意被1-3個(gè)(C1-C4)烷基，(C1-C4)烷氧基或鹵素取代的苯基。
此處和權(quán)利要求書中所用術(shù)語“芳氧基”意指芳氧基或任意被1-3個(gè)(C1-C4)烷基，(C1-C4)烷氧基或鹵素取代的苯氧基。
通過下列實(shí)施例說明本發(fā)明。但是應(yīng)該理解本發(fā)明范圍不限于對(duì)這些具體實(shí)施例的描述。
實(shí)施例1式(III)化合物(其中R1為苯氧乙酰基及R2為H)將20g式(II)化合物的400ml二氯甲烷和10ml無水吡啶溶液在氮?dú)庀吕鋮s至-78℃并在10分鐘內(nèi)滴加15.1ml苯氧乙酰氯。將反應(yīng)混合物保持在-70℃至-78℃ 1.5小時(shí)，然后用250ml飽和碳酸氫鈉溶液淬滅。將混合物攪拌1.5小時(shí)，分離有機(jī)相，用250ml飽和碳酸氫鈉溶液再萃取，并用無水硫酸鎂干燥。真空除去溶劑得到25.7g 97％純標(biāo)題化合物為米色固體(產(chǎn)率96％)。HPLC保留時(shí)間為7.9分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水 559∶383∶58；1.5ml/min；UV245nm)。實(shí)施例2式(III)化合物(其中R1為苯氧乙?；癛2為對(duì)甲苯氧硫代羰基)將10g實(shí)施例1的標(biāo)題化合物的100ml甲苯和30ml無水吡啶溶液在氮?dú)庀录訜嶂?00℃并在5分鐘內(nèi)加入7.7ml O-對(duì)甲苯氯硫羰甲酸酯。將混合物保持在100±5℃2小時(shí)以完成反應(yīng)，再冷卻至50℃，并真空除去溶劑得到棕色剩余物。將其溶解在120ml甲苯中，用120ml水萃取溶液在用100ml飽和碳酸氫鈉溶液萃取兩次。將分離的有機(jī)相濃縮至約80ml，過濾，并用裝有兩個(gè)硅膠柱的Prep-500系統(tǒng)(Waters Associates)進(jìn)行色譜分離。洗脫劑是75∶25己烷∶乙酸乙酯。合并含有產(chǎn)物的部分并真空除去溶劑，得到9.8g 95.7％純產(chǎn)物為淡黃棕色固體(產(chǎn)率83.2％)。HPLC保留時(shí)間為15.2分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV245nm)。
實(shí)施例35，4＂-O-二苯氧乙?；?doramectin(其中R1為苯氧乙?；氖?IV)化合物)將4.5g碳酸鈣加到8.5g實(shí)施例2的標(biāo)題化合物的90ml甲氧基乙醚溶液中。然后在連續(xù)通入氮?dú)夂统浞謹(jǐn)嚢柘聦⒒旌衔锛訜嶂?56-158℃。在156-158℃24小時(shí)后，分析混合物表明含有6.68g產(chǎn)物(產(chǎn)率90％)。過濾混合物后，真空蒸發(fā)溶劑得到產(chǎn)物為黃色膠狀物。HPLC保留時(shí)間為10.4分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)。實(shí)施例45，4＂-O-二苯氧乙酰基-doramectin(其中R1為苯氧乙?；氖?IV)化合物)將500mg碳酸鈣加到1g實(shí)施例2的標(biāo)題化合物的20ml 2-乙氧基乙醚溶液中。然后在連續(xù)通入氮?dú)夂统浞謹(jǐn)嚢柘聦⒒旌衔锛訜嶂?85℃。在185℃5小時(shí)后，將混合物冷卻至室溫并過濾。HPLC分析溶液(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水55 9∶383∶58；1.5ml/min；UV 245nm)表明含有796mg產(chǎn)物(產(chǎn)率91％)。實(shí)施例5 doramectin(式(I)化合物)將500mg實(shí)施例3的標(biāo)題化合物的1ml 2-甲氧基乙醚和3.5ml甲醇溶液冷卻至-35℃并在1分鐘內(nèi)滴加2.1ml 2M甲醇的KOH溶液。在充分?jǐn)嚢柘聦⒒旌衔锉３衷?5℃1小時(shí)以完成反應(yīng)，然后加入252mg冰醋酸的0.5ml甲醇溶液。中止冷卻，開始結(jié)晶后在1小時(shí)內(nèi)滴加2.2ml水。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，過濾收集結(jié)晶，用0.5ml 7∶3甲醇∶水洗滌兩次并在真空箱中干燥。從甲醇/水中重結(jié)晶得到272mg 93.8％純產(chǎn)物(產(chǎn)率70.6％)。HPLC保留時(shí)間為6.5分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水860∶51∶89；1.5ml/min；UV 245nm)。實(shí)施例6 doramectin(式(I)化合物)將75ml氨的甲醇飽和溶液加到6.6g實(shí)施例3的標(biāo)題化合物的75ml的甲醇(冷卻至-15℃)溶液中。將混合物保持在-15℃ 5.5小時(shí)以完成反應(yīng)，然后通入氮?dú)?0分鐘。真空除去揮發(fā)性物質(zhì)，將所得淡黃色油溶解在45ml甲醇中，過濾使溶液澄清。開始結(jié)晶后向溶液中滴加5ml水。室溫?cái)嚢杌旌衔?小時(shí)然后在2.5小時(shí)內(nèi)加入6.3ml水。再攪拌1.5小時(shí)后，過濾收集固體并用2.5ml甲醇∶水(7∶3)洗滌兩次。室溫真空箱干燥24小時(shí)后得到3.75g 87.7％純產(chǎn)物(產(chǎn)率64％)。實(shí)施例7式(III)化合物(其中R1為乙酰基及R1為H)將28.6g三乙胺和1.06g 4-二甲氨基吡啶在氮?dú)庀录拥?0g式(II)化合物的200ml二氯甲烷溶液中。將溶液冷卻至-5℃-0℃并在5分鐘內(nèi)滴加14.5g乙酐。將混合物保持在0℃20分鐘以完成反應(yīng)，然后在0℃用20ml飽和碳酸氫鈉溶液淬滅。用飽和碳酸氫鈉再萃取有機(jī)相兩次，干燥(MgSO4)，真空除去溶劑得到22.2g95％純產(chǎn)物為白色固體(產(chǎn)率96.7％)。HPLC保留時(shí)間為6.6分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)。
實(shí)施例8式(III)化合物(其中R1為乙?；癛1為H)將7.24g三乙胺和266mg 4-二甲氨基吡啶在氮?dú)庀录拥?g式(II)化合物的100ml甲苯的漿狀物中。將混合物冷卻至-15℃并在5分鐘內(nèi)滴加3.58g乙酐。將混合物在-10℃至-15℃攪拌30分鐘以完成反應(yīng)，然后用50ml飽和碳酸氫鈉溶液淬滅并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用50ml飽和碳酸氫鈉再萃取有機(jī)相兩次，用Dean-Stark儀通過部分蒸餾溶劑來干燥。HPLC(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245 nm)分析溶液得到5.27g產(chǎn)物(產(chǎn)率96.5％)。實(shí)施例9式(III)化合物(其中R1為乙?；癛1為對(duì)甲苯氧硫代羰基)將60ml無水吡啶在氮?dú)庀录拥?0g實(shí)施例7的標(biāo)題化合物的200ml乙酸乙酯中，接著加入22.2g O-對(duì)甲苯氯硫羰甲酸酯形成黃色沉淀溶液。將混合物在充分?jǐn)嚢柘录訜峄亓?小時(shí)以完成反應(yīng)，然后冷卻至室溫。真空除去揮發(fā)性物質(zhì)并將剩余物在150ml乙酸乙酯和150ml水間分配，用飽和碳酸氫鈉水溶液萃取有機(jī)相兩次再用水萃取一次。干燥(MgSO4)乙酸乙酯相并真空除去溶劑。將剩余物溶解在25ml乙酸乙酯和5ml二氯甲烷中，過濾使溶液澄清并用裝有兩個(gè)硅膠柱的Prep-500系統(tǒng)(Waters Associates)進(jìn)行色譜分離。洗脫劑為70∶25∶5己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷。合并含產(chǎn)物部分并真空蒸發(fā)溶劑，得到19g(產(chǎn)率82.6％)產(chǎn)物為淡黃色固體。HPLC保留時(shí)間為17.1分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)。實(shí)施例105，4＂-O-二乙?；?doramectin(其中R1為乙酰基的式(IV)化合物)將9.5g碳酸鈣懸浮液在連續(xù)通入氮?dú)庀录訜嶂?56-158℃。向該混合物中加入18.7g實(shí)施例9的標(biāo)題化合物；加熱，攪拌并通入氮?dú)?5小時(shí)。冷卻至50℃后，過濾混合物并真空除去溶劑。將剩余物溶解在55ml二氯甲烷中，加入25ml乙酸乙酯和70ml己烷，過濾溶液并用裝有兩個(gè)硅膠柱的Prep-500系統(tǒng)(WatersAssociates)進(jìn)行色譜分離。洗脫劑為70∶25∶5己烷∶乙酸乙酯∶二氯甲烷。合并含有產(chǎn)物的部分并真空除去溶劑得到13.7g87％純產(chǎn)物為黃色固體(產(chǎn)率74.8％)。HPLC保留時(shí)間為11.1分鐘(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水902∶36∶62；1.0ml/min；UV 245nm)。實(shí)施例115，4＂-O-二乙?；?doramectin(其中R1為乙酰基的式(IV)化合物)將250mg碳酸鈣加到504mg實(shí)施例9的標(biāo)題化合物的25ml 2-乙氧基乙醚溶液中。然后將混合物在充分?jǐn)嚢韬瓦B續(xù)通入氮?dú)庀录訜嶂?83-185℃。在183-185℃1.5小時(shí)后，分析混合物表明含有產(chǎn)物364.4mg(產(chǎn)率84.7％)。實(shí)施例12doramectin(式(I)化合物)在45分鐘內(nèi)和冷至-72℃的氮?dú)庀略?.3g實(shí)施例10的標(biāo)題化合物的145ml無水四氫呋喃溶液中滴加59.5ml 1.0M三乙基硼氫化鋰的四氫呋喃溶液。將反應(yīng)混合物在-72℃至-70℃攪拌1小時(shí)然后使其慢慢升至室溫以完成反應(yīng)。用75ml水和75ml二氯甲烷淬滅混合物并攪拌1小時(shí)。分離兩相，水相用75ml二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)相用75ml飽和碳酸氫鈉萃取兩次。真空蒸發(fā)溶劑，將剩余物溶解在54ml甲醇中，并過濾使溶液澄清。結(jié)晶開始后在20分鐘內(nèi)向溶液中滴加6.9ml水。將混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，然后在30分鐘內(nèi)滴加6.2ml水。將混合物攪拌18小時(shí)，過濾收集固體，用2ml 75∶25甲醇∶水洗滌兩次并在真空箱中干燥，得到4.27g89.5％純產(chǎn)物(產(chǎn)率57.3％)。實(shí)施例13通入氮?dú)庠跓嵯シ磻?yīng)中的作用將2.5g碳酸鈣加到5.3g實(shí)施例2的標(biāo)題化合物的55ml 2-甲氧基乙醚溶液中。將混合物在充分?jǐn)嚢韬徒?jīng)過氣體分散管連續(xù)通入氮?dú)庀录訜嶂?57℃。在154-157℃30小時(shí)后，將混合物冷卻至室溫，過濾并用HPLC分析(Ultrasphere ODS 5μ，25cm×4.6mm(Beckman)；甲醇∶乙腈∶水559∶383∶58；1.5ml/min；UV245nm)。分析表明含有3.93g 5，4＂-O-二苯氧乙?；?doramectin(產(chǎn)率84.8％)。
該實(shí)驗(yàn)在相同條件下重復(fù)，包括使用相同的實(shí)施例標(biāo)題化合物，但是沒有氮?dú)馔ㄈ?。在這種情況下產(chǎn)物的產(chǎn)率為47.5％，說明通入氮?dú)獾挠幸嫘Ч?br> 權(quán)利要求
1.下式(III)化合物 其中R1是(C2-C5)烷?；蚍佳跻阴；?；和R2是氫或芳氧硫代羰基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是(C2-C5)烷?；?，苯氧乙酰基或(C1-C4)烷基苯氧乙?；蚏2是氫或(C1-C4)烷基苯氧硫代羰基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R1是C6H5OCH2(＝O)-。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R2是氫。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R2是對(duì)CH3-C6H5OC(＝S)-。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R1是CH3C(＝O)-。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中R2是氫。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中R2是對(duì)-CH3-C6H5OC(＝S)-。
9.下式(IV)化合物 其中R1是(C2-C5)烷?；蚍佳跻阴；?。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中R1是(C2-C5)烷?；?，苯氧乙?；?C1-C4)烷基苯氧乙酰基。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1是CH3C(＝O)-。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1是C6H5OCH2(＝O)-。
13.制備式(I)化合物的方法， 包括以下步驟(a)式(II)化合物 與式(R4CO)2O或R4COX(其中R4為芳氧基甲基及X為Cl或Br)的?；噭┓磻?yīng)形成式(III)化合物， 其中R1為芳氧乙?；癛2為H；(b)其中R1為芳氧乙?；癛2為H的式(III)化合物與式R3OC(＝S)X(其中R3為芳基及X為Cl或Br)反應(yīng)形成其中R1為芳氧乙?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物；(c)其中R1為芳氧乙?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物在反應(yīng)惰性溶劑和約150℃到200℃，在碳酸鈣的存在下和連續(xù)通入反應(yīng)惰性氣體時(shí)反應(yīng)約2小時(shí)-48小時(shí)形成式(IV)化合物， 其中R1為芳氧乙?；?；和(d)其中R1為芳氧乙?；氖?IV)化合物與堿在醇溶劑中反應(yīng)形成式(I)化合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中反應(yīng)惰性氣體為氮?dú)狻?br> 15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中堿為NH3，KOH，KCN，Na2CO3，NaHCO3，或NaOAc。
16.制備式(I)化合物的方法， 包括以下步驟(a)式(II)化合物 與式(R4CO)2O或R4COX(其中R4為(C1-C4)烷基及X為Cl或Br)的?；噭┓磻?yīng)形成式(III)化合物， 其中R1為(C1-C4)烷酰基及R2為H；(b)其中R1為(C1-C4)烷酰基及R2為H的式(III)化合物與式R3OC(＝S)X(其中R3為芳基及X為Cl或Br)反應(yīng)形成其中R1為(C1-C4)烷?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物；(c)其中R1為(C1-C4)烷?；癛2為芳氧硫代羰基的式(III)化合物在反應(yīng)惰性溶劑和約150℃到200℃，在碳酸鈣的存在下和連續(xù)通入反應(yīng)惰性氣體時(shí)反應(yīng)約2小時(shí)-48小時(shí)形成式(IV)化合物， 其中R1為(C1-C4)烷酰基；和(d)其中R1為(C1-C4)烷?；氖?IV)化合物與氫化鋁鋰，氰基硼氫化鈉或三乙基硼氫化鋰在反應(yīng)惰性溶劑中反應(yīng)形成式(I)化合物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中惰性氣體為氮?dú)狻?br> 18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，包括將其中R1為(C1-C4)烷?；氖?IV)化合物與三乙基硼氫化鋰反應(yīng)。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，包括將其中R1為(C1-C4)烷?；氖?IV)化合物與三乙基硼氫化鋰在溫度-78℃至-70℃混合，并保持溫度-78℃至-70℃15分鐘至1小時(shí)，然后調(diào)節(jié)所述溫度至室溫。
20.制備式(IV)化合物的方法， 其中R1是(C2-C5)烷?；蚍佳跻阴；?，包括式(III)化合物的下述反應(yīng)， 其中R1是(C2-C5)烷?；蚍佳跻阴；癛2是芳氧硫代羰基，在反應(yīng)惰性溶劑中從約150℃至200℃，在碳酸鈣的存在下和連續(xù)通入反應(yīng)惰性氣體時(shí)反應(yīng)約2-48小時(shí)。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中反應(yīng)惰性氣體為氮?dú)狻?br> 22.一種治療哺乳動(dòng)物寄生蟲疾病的方法，包括將抗寄生蟲有效量的權(quán)利要求1化合物給藥予哺乳動(dòng)物。
23.一種治療哺乳動(dòng)物寄生蟲疾病的方法，包括將抗寄生蟲有效量的權(quán)利要求9化合物給藥予哺乳動(dòng)物。
全文摘要
本發(fā)明公開了doramectin即式(I)化合物的中間體和制備方法，并且，對(duì)發(fā)酵過程副產(chǎn)物半合成也可產(chǎn)生式(I)化合物。用本發(fā)明方法制備的中間體也可作為抗寄生蟲劑使用。本發(fā)明方法是在連續(xù)通入氮?dú)庀逻M(jìn)行熱解，結(jié)果其總轉(zhuǎn)化率有很大提高。
文檔編號(hào)A61K31/7042GK1132513SQ94193687
公開日1996年10月2日 申請(qǐng)日期1994年9月19日 優(yōu)先權(quán)日1993年10月5日
發(fā)明者T·C·克羅福, N·迪默斯, S·P·吉布森, C·W·默蒂阿肖, C·施拉沃諾斯 申請(qǐng)人:美國輝瑞有限公司