本發(fā)明涉及保健食品技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種多糖組合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

陽虛證是指體內(nèi)陰氣虧損，機體失卻溫養(yǎng)，推動、蒸騰、氣化等作用減退，臨床常表現(xiàn)出畏冷，肢涼，口淡不渴，或喜熱飲，或自汗，小便清長或尿少不利，大便稀薄，面色晄白，舌淡胖，苔白滑，脈沉遲(或為細(xì)數(shù))無力?？杉嬗猩衿！⒎α?、氣短等氣虛的表現(xiàn)。

造成陽虛的因素主要有兩方面，第一，先天稟賦不足，《景岳全書》中就提到：“稟賦素弱，多有陽衰陰盛者，此先天陽氣不足也?！?；第二，后天習(xí)性養(yǎng)成，如現(xiàn)代人常在空調(diào)環(huán)境下生活、飲食起居習(xí)慣沒有規(guī)律、房事過度、工作生活壓力過大等等因素都可促使健康狀態(tài)朝陽虛發(fā)展。

對于處于亞健康的群體來說，使用保健食品或普通食品進(jìn)行調(diào)理，以此來改善其癥狀，從而恢復(fù)機體健康狀態(tài)是一種重要的保健方式，《千金方·食治》：“夫為醫(yī)者，當(dāng)須先洞曉病源，知其所犯，以食治之；食療不愈，然后命藥”。目前，改善癥狀的治療方案多以藥物為主(如金匱腎氣丸、腎氣丸等使用具有回陽救逆的附子)，鮮有單純以保健食品資源和藥食同源原料為主的治療方案。

基于以上原因，發(fā)明一種保健食品來源的改善陽虛癥狀的多糖組合顯得尤為必要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種多糖組合物，使得所述多糖組合物各組分產(chǎn)生協(xié)同作用，顯著提高對神疲、乏力、畏冷、形體消瘦、面色無光、毛發(fā)稀疏等癥狀的陽虛的功效、顯著提高緩解下丘腦—垂體—腎上腺素軸和下丘腦—垂體—甲狀腺軸功能紊亂以及camp和cgmp水平異常的功效，同時提供所述多糖組合物的制備方法和在上述各方面的應(yīng)用。

肉桂，為樟科常綠喬木植物肉桂的樹皮，味辛、甘，性熱，歸脾、腎、心、肝經(jīng)，有補火助陽、散寒止痛、溫經(jīng)通脈功效，主治腎陽衰弱的陽痿宮冷、虛喘心悸，心腹冷癰，寒疝作痛，寒痹腰痛，胸痹，陰疽，閉經(jīng)，痛經(jīng)等；

巴戟天，為茜草科多年生藤本植物巴戟天的干燥根，味甘、辛，性微溫，歸腎、肝經(jīng)，有補腎壯陽，祛風(fēng)除濕功效，主治腎陽虛弱的陽痿、不孕，少腹冷痛，月經(jīng)不調(diào)，陰陽兩虛，筋骨萎軟，風(fēng)濕久痹等；

益智仁，為姜科植物益智的果實，味辛，性溫，歸脾、腎經(jīng)，有溫脾，暖腎，固氣，澀精功效，主治冷氣腹痛，中寒吐瀉，多唾，遺精，小便余瀝，夜多小便等；

白術(shù)，菊科多年生草本植物白術(shù)的干燥根莖，味苦、甘，性溫，歸脾、胃經(jīng)，有補氣健脾、燥濕利水、止汗、安胎功效，主治脾胃氣虛、脾虛痰飲、水腫、小便不利、多汗、胎動不安等；

熟地，玄參科多年生草本植物地黃的干燥塊根，味甘，性微溫，歸肝、腎經(jīng)，有補血滋陰、益精填髓功效，主治血虛諸癥，腎陰虛諸癥，精血虧虛諸癥；

枸杞，茄科植物寧夏枸杞的果實，味甘性平，歸肝、腎經(jīng)；有滋補肝腎，益精明目功效；主治虛勞精虧、腰膝酸痛、眩暈耳鳴、內(nèi)熱消渴、血虛萎黃、目昏不明等；

本發(fā)明精選上述六種中藥原料，利用水提醇沉法提取多糖組分，組成多糖組合物。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種多糖組合物，由肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖、枸杞多糖組成。

作為優(yōu)選，所述肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖、枸杞多糖的質(zhì)量比為(1-2):(1-4):(1-2):(1-2):(1-5):(2-4)；更優(yōu)選地，所述肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖、枸杞多糖的質(zhì)量比為2:2:2:1:5:3、2:1:1:2:1:2、1:2:2:2:1:4或1:2:2:2:5:4。

在本發(fā)明具體實施過程中，按照重量份數(shù)，所述多糖組合物可由肉桂多糖10～20份、巴戟天多糖10～40份、益智仁多糖10～20份、白術(shù)多糖10～20份、熟地多糖10～50份、枸杞多糖20～40份組成；所述重量份每一份可以表示任何重量單位形式下的任何數(shù)值，例如一重量份可表示為1g、0.5kg、10公斤、0.5斤等。

在本發(fā)明具體實施方式中，所述多糖組合物可具體如下：

(1)肉桂多糖2g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白術(shù)多糖1g、熟地多糖5g、枸杞多糖3g；

(2)肉桂多糖2g、巴戟天多糖1g、益智仁多糖1g、白術(shù)多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g；

(3)肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白術(shù)多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g；

(4)肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白術(shù)多糖2g、熟地多糖5g、枸杞多糖4g；

本發(fā)明所述多糖組合物中各多糖組分可按照常規(guī)方法提取獲得，但是在本發(fā)明具體實施過程中給出了如下獲得方法：

將肉桂、巴戟天、益智仁、白術(shù)、熟地或枸杞加入其12倍量水煎煮1.0～2.0h過濾，得濾液和濾渣；濾渣加入其10倍量水煎煮0.5～1.0h，過濾，合并兩次的濾液，在80℃條件下減壓濃縮水提液，然后邊攪拌邊加入4倍體積70％乙醇，靜置12h；分離沉淀，70％乙醇洗滌，真空冷凍干燥獲得肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖或枸杞多糖。

本發(fā)明由肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖、枸杞多糖組成的多糖組合物能顯著改善模型大鼠的癥狀：改善動物活動減少，喜歡扎堆，體型消瘦，毛稀疏、缺少光澤等陽虛癥狀，對應(yīng)于陽虛患者的神疲、乏力、畏冷、形體消瘦、面色無光以及毛發(fā)稀疏等癥狀；所述多糖組合物不僅能夠顯著調(diào)節(jié)模型動物下丘腦—垂體—腎上腺素軸(hpa)和下丘腦—垂體—甲狀腺軸(hpt)水平，改善功能紊亂，還能夠緩解camp和cgmp水平異常。而且多糖組合物對模型動物的癥狀改善情況與每種多糖單獨使用比較，作用更全面，效果更顯著。由實驗結(jié)果可以看出，多糖組合物與各多糖單獨使用的劑量相同，但是在上述各方面均表現(xiàn)出更加優(yōu)異的特性，這表明在大幅度減少多糖組合物中各多糖組分的使用量的前提下，對于上述各方面的功效反而得到提高，表現(xiàn)出明顯的協(xié)同增效的作用。

基于上述優(yōu)異的技術(shù)效果，本發(fā)明分別提出了所述多糖組合物在如下幾個方面的應(yīng)用：

(1)在制備改善陽虛癥狀藥物和/或保健食品中的應(yīng)用；在該應(yīng)用中，所述陽虛癥狀為陽虛動物活動減少，喜歡扎堆，體型消瘦，毛稀疏、缺少光澤等癥狀，對應(yīng)于陽虛患者的神疲、乏力、畏冷、形體消瘦、面色無光以及毛發(fā)稀疏等癥狀；

(2)在制備改善下丘腦—垂體—腎上腺素軸和下丘腦—垂體—甲狀腺軸功能紊亂的藥物和/或保健食品中的應(yīng)用；

(3)在制備緩解camp和cgmp水平異常的藥物和/或保健食品中的應(yīng)用。

同時，本發(fā)明還提供了所述多糖組合物的制備方法，包括：

將原料加入原料12倍量水煎煮1.0～2.0h過濾，得濾液和濾渣；濾渣加入其10倍量水煎煮0.5～1.0h，過濾，合并兩次的濾液，在80℃條件下減壓濃縮水提液，然后邊攪拌邊加入4倍體積70％乙醇，靜置12h；分離沉淀，70％乙醇洗滌，真空冷凍干燥獲得多糖提取物，所述原料為肉桂、巴戟天、益智仁、白術(shù)、熟地或枸杞；

將肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖和枸杞多糖混合，獲得所述多糖組合物。

由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明選擇保健食品資源和藥食同源的六種原料制備多糖提取物并組成多糖組合物，其可以顯著改善陽虛模型大鼠的活動減少，喜歡扎堆，體型消瘦等癥狀、顯著緩解下丘腦—垂體—腎上腺素軸(hpa)和下丘腦—垂體—甲狀腺軸(hpt)的功能紊亂以及顯著緩解camp和cgmp水平異常，與每種多糖單獨使用比較，作用更全面，效果更顯著。

具體實施方式

本發(fā)明公開了一種多糖組合物及其制備方法和應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述組合物及應(yīng)用已經(jīng)通過實施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的組合物和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

在具體實施方式中，本發(fā)明所述多糖組合物中各多糖組分均采用水提醇沉法提取獲得，具體為將干燥藥材加入原生藥的12倍量水煎煮1.0～2.0h,過濾，得濾液；第二次加入原生藥的10倍量水煎煮0.5～1.0h，過濾，合并兩次的濾液。在80℃條件下減壓濃縮水提液，然后邊攪拌邊加入4倍體積70％乙醇，靜置12h；分離沉淀，70％乙醇洗滌沉淀3次，真空冷凍干燥獲得多糖樣品。

在具體實施方式中，各試驗試劑、儀器、動物、原料等均可由市場購得。其中，雄性sd大鼠，體重180～220g，由湖北省疾病預(yù)防與控制中心提供；肉桂多糖(生產(chǎn)日期：2016年8月15日)、巴戟天多糖(生產(chǎn)日期：2016年9月25日)、益智仁多糖(生產(chǎn)日期：2016年9月25日)、白術(shù)多糖(生產(chǎn)日期：2016年9月25日)、熟地多糖(生產(chǎn)日期：2016年9月25日)、枸杞多糖(生產(chǎn)日期：2016年9月25日)均由無限極(中國)有限公司提供；氫化可的松注射液，2ml/10mg/支，10支/盒，華中藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字h42021507；電子分析天平，bs124s，德國startorius公司；超低溫冷凍冰箱，美國thermofisherscientific；超純水機，mill-qⅱ，milipore，bedford，ma，usa.。

如未特別說明，在試驗中所有多糖組分均采用相同方法在相同環(huán)境下提取獲得。

以下就本發(fā)明所提供的一種多糖組合物及其制備方法和應(yīng)用做進(jìn)一步說明。

實施例1：本發(fā)明所述多糖組合物

按照水提醇沉法制備各多糖組分，稱取肉桂多糖2g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白術(shù)多糖1g、熟地多糖5g、枸杞多糖3g，混合制得多糖組合物。

實施例2：本發(fā)明所述多糖組合物

按照水提醇沉法制備各多糖組分，稱取肉桂多糖2g、巴戟天多糖1g、益智仁多糖1g、白術(shù)多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g，混合制得多糖組合物。

實施例3：本發(fā)明所述多糖組合物

按照水提醇沉法制備各多糖組分，稱取肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白術(shù)多糖2g、熟地多糖1g、枸杞多糖2g，混合制得多糖組合物。

實施例4：本發(fā)明所述多糖組合物

按照水提醇沉法制備各多糖組分，稱取肉桂多糖1g、巴戟天多糖2g、益智仁多糖2g、白術(shù)多糖2g、熟地多糖5g、枸杞多糖4g，混合制得多糖組合物。

實施例5：本發(fā)明所述多糖組合物功效試驗

1、動物分組及處理

分組：雄性sd大鼠(體重180-220g)隨機分為正常對照組(簡稱正常組)、模型組(簡稱模型組)、肉桂多糖組、巴戟天多糖組、益智仁多糖組、白術(shù)多糖組、熟地多糖組、枸杞多糖組、多糖組合i組、多糖組合ii組、多糖組合iii組、多糖組合iv組、多糖組合v組、多糖組合vi組。其中，多糖組合i組(即實施例1，按照組比例為2:2:2:1:5:3的配比獲得)、多糖組合ii組(即實施例2，按照組比例為2:1:1:2:1:2的配比獲得)、多糖組合iii組(即實施例3，按照組比例為1:2:2:2:1:4的配比獲得)、多糖組合iv組(即實施例4，按照組比例為1:2:2:2:5:4的配比獲得)、多糖組合v組(即對比例1，按照肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、白術(shù)多糖、熟地多糖、枸杞多糖比例為1:1:1:6:12:10的配比獲得)、多糖組合vi組(即對比例2，按照山茱萸多糖、肉桂多糖、牡丹皮多糖、枸杞多糖、女貞子多糖、熟地多糖比例為1:2:2:3:4:6的配比獲得)、多糖組合vii組(即對比例3，按照肉桂多糖、巴戟天多糖、益智仁多糖、熟地多糖、枸杞多糖比例為2:2:2:5:3的配比獲得)。每組動物10只。

處理：1)造模：除正常組臀部肌肉注射等體積生理鹽水，其他組別臀部肌肉注射氫化可的松注射液(2.5mg/100g)，每日1次，自由飲食，連續(xù)15天。2)干預(yù)：正常組每日灌胃等體積生理鹽水；模型組在造模同時每天灌胃等體積生理鹽水；藥物組造模的同時每天灌胃相應(yīng)的多糖溶液，給藥劑量為85mg/kg。共干預(yù)4周。

整個實驗過程中控制好給藥時間，注意保持實驗環(huán)境的安靜和實驗裝置的清潔，從而減少外界環(huán)境對實驗結(jié)果的影響。

2、數(shù)據(jù)分析

實驗結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，均采用spss20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。先進(jìn)行正態(tài)性檢驗，正態(tài)分布數(shù)據(jù)兩組以上的比較，采用單因素方差分析，組間兩兩比較，方差齊性的采用其項下的lsd檢驗；方差不齊的則采用其項下的dunnett’st3(3)檢驗。非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用非參數(shù)檢驗，兩組以上的比較，采用kruskal-wallis1-wayanova(ksamples)進(jìn)行檢驗，組間兩兩比較，采用其項下的stepwisestep-down檢驗。以上均采用levene法進(jìn)行方差齊性檢驗。

假設(shè)檢驗采用雙側(cè)檢驗，檢驗水準(zhǔn)為0.05。顯著意義標(biāo)識為p≤0.05。

3、結(jié)果

(1)對陽虛模型大鼠一般情況的影響

與正常對照組比較，各造模組大鼠從造模第5天開始出現(xiàn)自由活動減少，喜歡扎堆，肛周污穢等表現(xiàn)。至實驗結(jié)束時，模型組大鼠大多明顯消瘦，毛稀疏、缺少光澤，采食及飲水量均減少，大便稀，下腹部皮毛潮濕，而其他給藥組脫毛現(xiàn)象減少，飲食、飲水、活動情況均較好，與正常組差異不明顯。

(2)對陽虛模型大鼠體重的影響

實驗結(jié)束后稱取動物體重，結(jié)果見表1。與正常組比較，模型組體重顯著降低(p<0.01)；與模型組比較，除熟地多糖組外，其他多糖組體重顯著增加(p<0.05)，4個多糖組合(多糖組合i組、多糖組合ii組、多糖組合iii組、多糖組合iv組)對大鼠體重增長的恢復(fù)作用明顯強于多糖單獨使用以及其他多糖組合。

表1多糖對陽虛模型大鼠體重的影響(mean±sd，n＝10)

注：與正常組比較，^#p＜0.05，^##p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。

(3)對陽虛大鼠下丘腦—垂體—腎上腺素軸(hpa)和下丘腦—垂體—甲狀腺軸(hpt)的影響

實驗結(jié)束后稱取動物體重，水合氯醛麻醉后心尖取血至抗凝管，靜置30分鐘，3000r/min離心10分鐘，取上層血漿，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。測定血漿中環(huán)腺苷酸(camp)、環(huán)磷鳥嘌呤核苷(cgmp)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(crh)、促腎上腺皮質(zhì)激素(acth)含量、血清皮質(zhì)醇(cort)、血清游離三碘甲腺原氨酸(ft3)、血清游離甲狀腺素(ft4)。

表2可以看出，與正常組比較，臀部肌肉注射氫化可的松注射液可致模型組大鼠hpa軸功能低下，即crh、acth、cort均顯著下降(p<0.01)，hpt軸功能下降，即ft3、ft4均顯著下降(p<0.01)。各多糖組對hpa及hpt軸均有一定的改善作用，與模型組比較，各多糖組crh、acth、cort、ft3、ft4水平顯著上升，表明各多糖組可增強大鼠hpa軸亢進(jìn)功能，增強hpt功能。但是綜合hpa軸及hpt軸數(shù)據(jù)，4個多糖組合(多糖組合i組、多糖組合ii組、多糖組合iii組、多糖組合iv組)對大鼠hpa軸及hpt軸功能的調(diào)節(jié)作用明顯強于多糖單獨使用以及其他多糖組合。

表2多糖對陰虛模型大鼠hpa及hpt值的影響(mean±sd，n＝10)

注：與正常組比較，^#p＜0.05，^##p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。

(4)對陽虛模型大鼠血管氧化相關(guān)因子camp、cgmp的影響

實驗結(jié)束后稱取動物體重，水合氯醛麻醉后心尖取血至抗凝管，靜置30分鐘，3000r/min離心10分鐘，取上層血漿，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。測定血漿中環(huán)腺苷酸(camp)、環(huán)磷鳥嘌呤核苷(cgmp)含量。

由表3可知，與正常組比較，模型組大鼠血漿camp顯著降低、cgmp顯著升高、camp/cgmp顯著降低，各多糖組均能上調(diào)大鼠camp水平、下調(diào)cgmp水平，說明各多糖組均能緩解camp、cgmp紊亂引起的癥狀，但是綜合camp、cgmp、camp/cgmp數(shù)據(jù)，4個多糖組合(多糖組合i組、多糖組合ii組、多糖組合iii組、多糖組合iv組)對大鼠camp、cgmp、camp/cgmp的調(diào)節(jié)作用明顯強于多糖單獨使用及其他多糖組合。

表3多糖對陽虛模型大鼠血管氧化相關(guān)因子camp、cgmp(mean±sd，n＝10)

注：與正常組比較，^#p＜0.05，^##p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。