鱷魚血多糖在肝癌治療中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及鱷魚血多糖在肝癌治療中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鱷魚是最古老的爬行動物，在地球上已生存了 2億3千多萬年，因而具有"活化 石"之稱。
[0003] 中醫(yī)古書記載，鱷魚血具有清熱解毒、消炎、消腫瘤等功效。近年來，國外學(xué)者對鱷 魚血的功效進(jìn)行了研究，已有鱷魚血具有抗菌、抗病毒等方面作用的報道，而且有助于提升 實(shí)驗(yàn)動物在病理?xiàng)l件下的初級免疫應(yīng)答能力?，F(xiàn)代研究表明，鱷魚血有兩大顯著的功能特 點(diǎn)：鱷魚全血、血紅蛋白、血清、血漿和白細(xì)胞有抗細(xì)菌、真菌、病毒和抗癌活性。另一個顯著 功能特點(diǎn)是，鱷魚血紅蛋白的攜氧量超過其它動物的100倍W上，運(yùn)種特殊的血紅蛋白進(jìn) 入人體和人體血紅蛋白合成后可提高人體的血液攜氧量，將足夠的氧送到大腦及身體的各 個部位，增強(qiáng)體液和細(xì)胞的活力及抗突變能力。
[0004] 鱷魚血之所W有如此多的功效，我們認(rèn)為可能與血液中的多糖有很大的關(guān)系，因 為大量研究表明，多糖與免疫功能的調(diào)節(jié)、細(xì)胞與細(xì)胞的識別、細(xì)胞間物質(zhì)的運(yùn)輸、癌癥的 診斷與治療等都有著密切的關(guān)系，具有抗病毒、抗腫瘤與免疫調(diào)節(jié)作用。因此我們將鱷魚血 中的多糖提取出來，進(jìn)行了抗腫瘤活性的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】
陽〇化]有鑒于此，本發(fā)明旨在提出鱷魚血多糖在肝癌治療中的應(yīng)用，W解決現(xiàn)有技術(shù)中 存在的問題。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是運(yùn)樣實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 鱷魚血多糖在制備肝癌治療藥物中的應(yīng)用。
[0008] 進(jìn)一步的，所述應(yīng)用是在制備抑制肝癌生長或轉(zhuǎn)移的治療藥物中的應(yīng)用。
[0009] 進(jìn)一步的，所述鱷魚血多糖為從鱷魚血血粉中分離純化后所得的含至少一種多糖 組分的混合物。
[0010] 進(jìn)一步的，所述鱷魚血多糖包含1~3種多糖組分。
[0011] 更進(jìn)一步的，治療肝癌的所述藥物包含鱷魚血多糖和藥學(xué)上可接受的酸、堿、鹽、 水合物或醋及其他輔料。
[0012] 更進(jìn)一步的，所述藥物可制備成片劑、膠囊、口服液體制劑、乳液和注射液中的至 少一種。
[0013] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所述的鱷魚血多糖制備肝癌治療藥物中的應(yīng)用具有W下 優(yōu)勢：
[0014] 所述鱷魚血多糖為首次從鱷魚血血粉中提純的多糖成分，同時所述鱷魚血多糖與 免疫功能的調(diào)節(jié)、細(xì)胞與細(xì)胞的識別、細(xì)胞間物質(zhì)的運(yùn)輸、癌癥的診斷與治療等都有著密切 的關(guān)系，具有抗病毒、抗腫瘤與免疫調(diào)節(jié)作用；同時，所述鱷魚血多糖成分在藥學(xué)上可與酸、 堿、鹽、水合物或醋；w及其他輔料結(jié)合制備成片劑、膠囊、口服液體制劑、乳液、注射液或它 們的組合，作為治療癌癥或腫瘤藥物使用，具有明顯提高抗腫瘤功能，并有效地控制腫瘤細(xì) 胞的生長，更加有利于抗腫瘤活性的研究。
【附圖說明】
[0015] 構(gòu)成本發(fā)明的一部分的附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實(shí) 施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：
[0016] 圖1示出了鱷魚血干粉中提取的多糖粗提取物過Se地adexG-200柱后的洗脫曲 線；
[0017] 圖2示出了M1T檢測鱷魚血多糖中S種不同組分對邸心7402肝癌細(xì)胞增殖的抑 制作用；
[0018] 圖3示出了MTT檢測鱷魚血多糖中S種不同組分對SMMC-7721肝癌細(xì)胞增殖的抑 制作用；
[0019] 圖4示出了M1T檢測鱷魚血多糖中S種不同組分對化pG2肝癌細(xì)胞增殖的抑制作 用；
[0020] 圖5示出了鱷魚血多糖中組分ABPSI對邸k7402細(xì)胞遷移的抑制作用；
[0021] 圖6示出了鱷魚血多糖中組分ABPSII對邸心7402細(xì)胞遷移的抑制作用；
[0022] 圖7示出了鱷魚血多糖中組分ABPSIII對邸k7402細(xì)胞遷移的抑制作用； 陽02引圖8示出了鱷魚血多糖中組分ABPSI對SMMC-7721細(xì)胞遷移的抑制作用；
[0024]圖9示出了鱷魚血多糖中組分ABPSII對SMMC-7721細(xì)胞遷移的抑制作用； 陽02引 圖10示出了鱷魚血多糖中組分ABPSIII對SMMC-7721細(xì)胞遷移的抑制作用；
[0026] 圖11示出了鱷魚血多糖中組分ABPSI對化pG2細(xì)胞遷移的抑制作用；
[0027] 圖12示出了鱷魚血多糖中組分ABPSII對化pG2細(xì)胞遷移的抑制作用； 陽02引 圖13示出了鱷魚血多糖中組分ABPSIII對化pG2細(xì)胞遷移的抑制作用。
【具體實(shí)施方式】
[0029]下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完 整地描述，需要說明的是，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施 例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明 保護(hù)的范圍。
[0030] 其中，實(shí)施例中，所用的試驗(yàn)材料及其來源包括： 陽0川 1.細(xì)胞系
[0032]B化-7402 (人肝癌細(xì)胞）：購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；
[0033] SMMC-7721(人肝癌細(xì)胞）：購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；
[0034] 化pG2(人肝癌細(xì)胞）：購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；
[0035] 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑
[0036] 鱷魚血凍干粉：粉末狀，由北京百生康生物科技有限公司提供。
[0037] 四甲基偶氮挫鹽（MTT):上海生工生物工程有限公司，貨號：TB0799-lg，批號： XP1008B3012J，級別：分析純，規(guī)格Ig。
[0038] 二甲基亞諷值MSO):購自上海生工生物工程有限公司，貨號：DN3039A，批號： SJ0731S4013J，級別：分析純，規(guī)格500血，用于M1T法溶解紫色結(jié)晶。 W39] 二甲基亞諷值MS0)細(xì)胞培養(yǎng)級：購自北京索萊寶科技有限公司，貨號： D8370-500,批號：2P005970,級別：細(xì)胞培養(yǎng)級，規(guī)格500血，用于細(xì)胞凍存，及藥物配制。[0040] RPMI 1640培養(yǎng)基：購自賽默飛世爾科技有限公司，批號：NYG0920,規(guī)格：500血。 陽〇W 膜蛋白酶：購自上海生工生物工程有限公司，貨號：T0458-10,批號：0301C314,級 另IJ:USP，規(guī)格：10g。 柳42] 3.主要儀器
[0043]AKTA系統(tǒng)：GE公司，型號：UPC-900
[0044] 生物安全柜：西班牙泰事達(dá)燈elstar)，型號：BioII A。
[0045] C〇2培養(yǎng)箱：施都凱儀器設(shè)備（上海）有限公司，型號：STIK IL-161HI。
[0046] 倒置相差顯微鏡：廠家：奧林己斯，型號：CKX41。
[0047] 島津UV-1800紫外分光光度計(jì)：島津企業(yè)管理（中國）有限公司，型號：UV-1800 ; W48]電子天平：上海奧豪斯儀器有限公司，型號：AR2202CN ;
[0049] 臺式冷凍離屯、機(jī)：賽默飛世爾科技公司，型號：ST16R ;
[0050] 超聲波細(xì)胞破碎機(jī)：賽默飛世爾燈hermoFisher),型號：SCIENTZ-IID;
[0051] 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠，型號：RE-5205 ;
[0052] 4°C冰箱：青島海爾股份有限公司，型號：BCD-192KJ ;
[0053] 滿縱混勻器：?？谑衅淞重悹杻x器制造有限公司，型號：QZ-861。
[0054] 4.所用試劑的配制方法包括： 陽化5] 四甲基偶氮挫鹽（MTT)儲液：取M1T粉末1.Og，溶于200ml憐酸緩沖液（PBS)中， 終濃度為5mg/ml，用0. 22ym濾膜過濾W除去溶液里的細(xì)菌，分裝，-20°C避光保存。其中， 溶液的配制及使用均應(yīng)在無菌生物安全柜中操作。
[0056] 下面將參考附圖并結(jié)合實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0057] 實(shí)施例1鱷魚血多糖的制備方法
[0058] 1、鱷魚血多糖粗提物的制備
[0059]稱取鱷魚血凍干粉4.Og，按料液比1:20加入相應(yīng)的雙蒸水（d地20)，于超聲波細(xì) 胞破碎機(jī)中，破碎5min;4°C離屯、機(jī)中4600巧m/min,離屯、lOmin，取上清液，重復(fù)3次，合并 上清液，加入3倍體積的無水乙醇靜止過夜，460化pm/min，離屯、lOmin后，棄去上清液，沉淀 用適量無水乙醇清洗3次，離屯、棄上清液后，用適量乙酸吹打成粉末狀，得到鱷魚血多糖粗 提取物。
[0060] 2、鱷魚血多糖不同組分的分離純化
[0061] 根據(jù)蛋白質(zhì)在氯仿等溶劑中變性的特點(diǎn)，把氯仿與正下醇按4:1體積混合后，置 于棟色瓶中保存。將鱷魚血多糖粗提取物溶于d地20中，按1:4在多糖溶液中加入氯仿-正 下醇溶液，混合后，劇烈振蕩