本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3脂質(zhì)體及其凍干制劑。

背景技術(shù)：

維生素d3(vitamind3,vd3)是一種脂溶性維生素，屬于一種作用于鈣磷代謝的激素前體，又叫做“陽(yáng)光維生素”。維生素d3具有很多方面的功效，如調(diào)節(jié)鈣磷代謝，提高肌體對(duì)鈣、磷的吸收；促進(jìn)人體骨骼的生長(zhǎng)和鈣化，促進(jìn)牙齒發(fā)育，預(yù)防骨質(zhì)疏松；改善心腦血管疾病；通過(guò)腸壁增加磷的吸收，并通過(guò)腎小管增加磷的再吸收；維持血液中檸檬酸鹽的正常水平；提高免疫力，抗氧化等功效。

但是由于維生素d3是脂溶性的，不溶于水，小腸透過(guò)性差，普通片劑口服吸收較差，生物利用度低，限制了其臨床療效。主要是由以下因素導(dǎo)致：（1）胃酸的降解作用。胃酸的ph在1～2.5左右，維生素d3在酸性環(huán)境下性狀改變導(dǎo)致活性降低；（2）酶的降解作用。胃腸道內(nèi)酶的降解作用同樣是影響維生素類(lèi)藥物口服生物利用度低的重要因素之一。而當(dāng)其進(jìn)入腸道后，又進(jìn)一步被腸道內(nèi)的胰蛋白酶、彈性蛋白酶、糜蛋白酶及羧肽酶等降解。（3）胃腸道黏膜的低透過(guò)性。由于胃腸道的蠕動(dòng)以及覆蓋在黏膜上皮細(xì)胞表面的黏液凝膠層所形成的物理屏障，也導(dǎo)致了口服藥物吸收效果不佳（4）肝臟代謝。肝臟代謝酶的影響會(huì)導(dǎo)致經(jīng)胃腸道給藥的藥物進(jìn)入體循環(huán)的藥量減少、藥效降低。

為改善維生素d3水溶性差及口服吸收效果不佳，國(guó)內(nèi)外學(xué)者將其制備成磷脂復(fù)合物，以期達(dá)到提高生物利用度的效果。一般公開(kāi)的采用的制備方法是使用大豆磷脂、卵磷脂等作為膜材，使用膽固醇等進(jìn)行膜的流動(dòng)性改善。本發(fā)明所采用的方法將通過(guò)以下兩種策略提高所制備的脂質(zhì)體的胃腸道穩(wěn)定性及胃腸粘膜吸收效果。首先使用甘氨膽酸鹽對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行膜穩(wěn)定性修飾，通過(guò)對(duì)膽固醇、脫氧膽酸鹽、?；悄懰猁}等的對(duì)照實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，甘氨膽酸鹽具有更好的修飾效果，能夠使脂質(zhì)體在胃腸道內(nèi)的作用時(shí)間延長(zhǎng)，不易被胃腸道膽酸鹽及酶降解，有效的降低了包載物質(zhì)被破壞。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是研制一種膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體，提高藥物溶解度、改善藥物溶出度，同時(shí)通過(guò)對(duì)脂質(zhì)體表面進(jìn)行修飾，提高了維生素脂質(zhì)體在胃腸道的穩(wěn)定性，增加了腸道滯留時(shí)間、延長(zhǎng)藥物釋放時(shí)間、提高藥物口服生物利用度。

本發(fā)明所研制的一種膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體加入凍干保護(hù)劑蔗糖、海藻糖等后進(jìn)行凍干，得到的固體粉末利于脂質(zhì)體的保存和運(yùn)輸。并且得到的凍干劑可進(jìn)一步制成片劑、膠囊劑等口服劑型。

本發(fā)明所述的膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體，按質(zhì)量份數(shù)計(jì)算，由取4份維生素d3，4～40份磷脂，4～16份甘氨膽酸鹽，1～4份陽(yáng)離子材料pei-la組成，粒徑為81～156nm。

所述的磷脂可以是以下的任何一種磷脂或多種磷脂復(fù)合物，例如天然磷脂和人工合成磷脂，天然磷脂包括蛋黃卵磷脂、大豆磷脂，人工合成磷脂包括氫化大豆磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰無(wú)水乙醇胺；

所述的膽酸鹽為甘氨膽酸鈉，甘氨膽酸鈉水合物，甘氨脫氧膽酸鈉等中的一種或一種以上的混合物以及其任何比例的混合物；

本發(fā)明制備的凍干劑包括但不限于葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，甘露醇，透明質(zhì)酸中的一種或幾種組合，凍干保護(hù)劑與制劑的質(zhì)量百分比為5％-20％。

本發(fā)明所述的膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟：

1)按質(zhì)量份計(jì)算，取4～16份甘氨膽酸鹽，加入4200～5400份磷酸緩沖液（ph=6.8）中，超聲5～20min使其分散，在50℃下恒溫水浴，作為水相；

2)取4份維生素d3，1～4份陽(yáng)離子材料pei-la和4～40份磷脂，加入450～620份無(wú)水乙醇，超聲5～20min使其溶解，然后勻速注入到水相中，維持50～70℃攪拌20～40分鐘；

3)將上述步驟得到的混懸液置于超聲儀中冰浴超聲5min，靜置后得到維生素d3脂質(zhì)體混懸液，將制得的脂質(zhì)體加入凍干保護(hù)劑溶解后分裝進(jìn)容器，凍干即得。

將本發(fā)明制備的所研制的凍干制劑粉末，通過(guò)加入適宜的輔料，如加入填充劑、粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑和包囊材料等制成片劑、膠囊劑等口服劑型。

本發(fā)明所研制的凍干制劑的填充劑包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、糊精等單糖多聚體，蔗糖、乳糖、甘露醇和山梨醇等糖醇類(lèi)，以及二水硫酸鈣和磷酸氫鈣等無(wú)機(jī)鹽類(lèi)。

本發(fā)明所研制的凍干制劑的粘合劑包括但不限于淀粉、預(yù)膠化淀粉、甲基纖維素、羥丙纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚維酮、明膠、聚乙二醇類(lèi)、聚乙烯醇、蔗糖、葡萄糖等。

本發(fā)明所研制的凍干制劑的崩解劑包括但不限于低取代羥丙纖維素、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、干淀粉、羧甲基淀粉鈉、海藻酸、海藻酸鈉、泡騰崩解劑等。

本發(fā)明所研制的凍干制劑的潤(rùn)滑劑包括但不限于硬脂酸鎂和硬脂酸鈣等硬脂酸鹽、滑石粉、微粉硅膠、氫化植物油、聚乙二醇類(lèi)、十二烷基硫酸鈉等。

本發(fā)明所研制的凍干制劑的包囊材料包括但不限于阿拉伯膠、聚乳酸、纖維素類(lèi)、硬脂酸等。

本發(fā)明所使用的陽(yáng)離子材料聚乙烯亞胺-亞油酰聚合物細(xì)胞毒性低，其兩親性部分嵌入到脂質(zhì)體脂雙層中，使脂質(zhì)體表面帶有正電荷，而胃腸道上皮細(xì)胞表面呈負(fù)電位，這使得該脂質(zhì)體能夠與腸上皮細(xì)胞形成靜電吸附，增強(qiáng)其粘附能力，延長(zhǎng)作用時(shí)間。

本發(fā)明制備的甘氨膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子脂質(zhì)體，是將藥物夾嵌于脂質(zhì)雙層膜中制成的納米級(jí)給藥系統(tǒng)，制備成凍干制劑，方便脂質(zhì)體的運(yùn)輸和儲(chǔ)存。與普通的直接給藥系統(tǒng)相比，不僅具有控釋藥物釋放、延長(zhǎng)藥物與腸道的作用時(shí)間及增強(qiáng)藥物在腸上皮細(xì)胞的吸收，從而提高生物利用度的作用，還避免了藥物降解或泄露。因此，開(kāi)發(fā)一種膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3脂質(zhì)體這種創(chuàng)新劑型，將成為解決口服維生素d3難以穿透胃腸道生物屏障、生物利用度不佳等問(wèn)題的一個(gè)新途徑，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

本發(fā)明的積極效果在于：

通過(guò)使用甘氨膽酸鹽修飾的維生素d3脂質(zhì)體，使其具有粘膜粘附作用，可以提高制劑在腸道的滯留時(shí)間，同時(shí)進(jìn)入消化系統(tǒng)后免受胃液，膽汁等的破壞，并被有效運(yùn)載到吸收部位；而更為重要的是，本發(fā)明所使用的陽(yáng)離子材料的兩親性部分嵌入到脂質(zhì)體脂雙層中，使脂質(zhì)體表面帶有正電荷，而胃腸道上皮細(xì)胞表面呈負(fù)電位，這使得該脂質(zhì)體能夠與腸上皮細(xì)胞形成靜電吸附，增強(qiáng)其粘附能力，延長(zhǎng)作用時(shí)間，進(jìn)而增強(qiáng)包載藥物的脂質(zhì)體透過(guò)腸上皮細(xì)胞，因此可以增強(qiáng)維生素d3的口服吸收效果。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明凍干制劑復(fù)溶后粒徑圖。

具體實(shí)施方式：

下面將通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，下述該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)

明，而對(duì)本發(fā)明沒(méi)有任何限制。

實(shí)施例1

稱(chēng)取大豆磷脂123.75mg,陽(yáng)離子材料pei-la5.63mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢瑁鳛樗幬锵?；精密稱(chēng)取56.25mg甘氨膽酸鈉于27ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲5min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例2

精密稱(chēng)取蛋黃卵磷脂123.75mg,陽(yáng)離子材料pei-la5.63mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢瑁鳛樗幬锵?；精密稱(chēng)取22.50mg甘氨膽酸鈉于30ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲10min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例3

精密稱(chēng)取大豆磷脂123.75mg,陽(yáng)離子材料pei-la5.63mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢?，作為藥物相；精密稱(chēng)取90mg甘氨膽酸鈉于24ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲15min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例4

精密稱(chēng)取大豆磷脂225.00mg,陽(yáng)離子材料pei-la5.63mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢?，作為藥物相；精密稱(chēng)取56.25mg甘氨膽酸鈉于24ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲5min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例5

精密稱(chēng)取大豆磷脂22.5mg,陽(yáng)離子材料pei-la14.06mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢?，作為藥物相；精密稱(chēng)取22.50mg甘氨膽酸鈉于27ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲10min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例6

精密稱(chēng)取大豆磷脂22.5mg,陽(yáng)離子材料pei-la14.06mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢?，作為藥物相；精密稱(chēng)取90.00mg甘氨膽酸鈉于27ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲5min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例7

精密稱(chēng)取大豆磷脂123.75mg,陽(yáng)離子材料pei-la14.06mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢?，作為藥物相；精密稱(chēng)取56.25mg甘氨膽酸鈉于27ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲5min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)施例8

精密稱(chēng)取大豆磷脂225.00mg,陽(yáng)離子材料pei-la14.06mg,維生素d322.5mg并加入3ml的無(wú)水乙醇，超聲10min，使之充分溶解,接著在60℃的水浴條件用磁力攪拌儀恒溫?cái)嚢瑁鳛樗幬锵?；精密稱(chēng)取22.50mg甘氨膽酸鈉于27ml磷酸緩沖液(ph6.8)，超聲10min使之完全溶解，作為水相。將藥物相快速加入到水相磷酸緩沖液(ph6.8)的圓底燒瓶中,然后于65℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇濃縮至7.5ml；然后置于超聲儀中冰浴超聲5min，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子維生素d3口服脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制備的制劑中，-70℃預(yù)凍4h，冷凍干燥42h，即得膽酸鹽修飾的陽(yáng)離子口服維生素d3脂質(zhì)體。

實(shí)驗(yàn)例1

實(shí)施例8制備的凍干制劑復(fù)溶后粒徑圖（見(jiàn)圖1、），可見(jiàn)復(fù)溶平均粒徑為130.5nm，pdi值為0.233。

實(shí)驗(yàn)例2

取三批制備的凍干制劑在溫度40℃及相對(duì)濕度75%條件下放置三個(gè)月各指標(biāo)（表1），三批凍干制劑外觀(guān)無(wú)明顯變化，復(fù)溶后仍得到澄清透明的有乳光的脂質(zhì)體混懸液。其粒徑和粒度分布均略有上升，維生素d3包封率略有下降，含水量略有上升，但各個(gè)指標(biāo)的變化均不顯著，表明該凍干制劑在加速實(shí)驗(yàn)條件下，具有良好的貯存穩(wěn)定性。

實(shí)驗(yàn)例3

健康比格犬12只，犬齡12個(gè)月左右，體重10kg±2kg，分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組6只。對(duì)照組給予市售鈣爾奇d3(含元素鈣600mgvd3=125u），實(shí)驗(yàn)組給予與對(duì)照組同等劑量維生素d3的脂質(zhì)體凍干制劑，分別于0,0.083,0.25,0.5,1,2,4,8,12,24,48h取靜脈血，低溫離心后去上層血清后-80℃保存。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(lc-ms/ms)檢測(cè)血清25-（oh）d水平。計(jì)算該制劑對(duì)市售產(chǎn)品的相對(duì)口服生物利用度。

與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組中tmax顯著增大（p<0.05）,t1/2和mrt0-∞也均大于對(duì)照組，表明本發(fā)明制備的制劑能夠延緩達(dá)峰時(shí)間，降低了維生素d3在胃腸道的吸收速率，并顯著降低了藥物在血漿中的消除速率。而實(shí)驗(yàn)組的auc0-∞則顯著大于對(duì)照組（比值為3.64），表明該制劑顯著增加了維生素在胃腸道的吸收，提高了其口服生物利用度。

雖然以上描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，這僅僅是舉例說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍是由所附權(quán)利要求書(shū)限定的，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不背離本發(fā)明的原理和實(shí)質(zhì)的前提下，可以對(duì)這些實(shí)施方式做出多種變更或修改，這些變更和修改均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。